一種硒蛋白s激動劑多肽及其制備方法、應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及預防或治療腦卒中的多肽化合物。硒蛋白S激動劑多肽1，其特征在于：其序列為GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD。所述多肽1的制備方法，步驟包括（1）煎煮，（2）酶解，（3）蛋白質分離，（4）半制備RP-HPLC分離純化，（5）凍干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶酶解。所述的蛋白質分離采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。硒蛋白S激動劑多肽1在預防或治療腦卒中中的應用。本發明中的硒蛋白S激動劑多肽1可以靶向促進硒蛋白S表達，提高腦組織中硒蛋白S的含量，達到預防或治療腦卒中的作用，且安全性好。
【專利說明】-種硒蛋白S激動劑多肽及其制備方法、應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用于預防或治療腦卒中的多肽提取物。
【背景技術】：
[0002] 腦卒中已繼心臟病和癌癥成為人類第三大死亡原因，也是全球成人致殘的主要原 因之一。現階段，治療腦卒中的方法多為藥物治療。多采用尿激酶，華法林和阿斯平林等抗 凝血藥物治療，或采用活血化瘀的中藥治療，但往往因劑量不當反而引起腦出血，給治療帶 來更大的危害。
[0003] 近幾年關于缺血性腦卒中的研究已逐漸發現炎癥反應對卒中后腦組織損傷具有 重要影響，腦缺血后持續發展的炎癥可加重缺血損傷，所以抗炎治療的研究逐漸受到重視 并廣泛開展。硒蛋白S是一種新發現的內質網和細胞膜駐留硒蛋白。以往的研究結果揭示 硒蛋白S可以保護細胞拮抗氧化損傷及內質網應激誘導的細胞凋亡；參與脂蛋白代謝、精 子發育過程、炎癥反應及將錯誤折疊蛋白從內質網腔逆向轉移到細胞質中然后降解的過程 (即內質網相關蛋白降解）。曾有報道，硒蛋白S基因多態性與糖尿病、冠狀動脈心臟病或 先兆子癇等疾病密切相關。最新的研究發現，硒蛋白S與腦卒中密切相關。有實驗證實體 外培養的星形膠質細胞受到缺血損害時，硒蛋白S的表達增加，并且可以減輕星形膠質的 缺血損傷，進而在疾病的發生發展中起到預防或治療腦卒中的作用。
[0004] 茶葉中除了富含硒以外，還富含具有硒蛋白S激動劑作用的多肽，但是過去的技 術有限，沒有從茶葉中提取制備硒蛋白S激動劑多肽的報道。
【發明內容】
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[0005] 本發明目的是針對現有預防或治療腦卒中藥物的特點，設計一種從茶葉中天然提 取的多肽提取物，能有效治療或預防腦卒中。
[0006] 技術方案
[0007] 硒蛋白S激動劑多肽1，其特征在于：其序列為GGADRAAAAVEroVVVKRQERGD。所述 多肽1的制備方法，步驟包括⑴煎煮，⑵酶解，⑶蛋白質分離，⑷半制備RP-HPLC分 離純化，（5)凍干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶酶解。所述的蛋白質分離采 用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。硒蛋白S激動劑多肽1在預防或治療腦卒中中的應用。
[0008] 有益結果：
[0009] 本發明中的硒蛋白S激動劑多肽1可以靶向促進硒蛋白S表達，提高腦組織中硒 蛋白S的含量，達到預防或治療腦卒中的作用，且安全性好。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1
[0011] 多肽的化學合成方法
[0012] 將茶葉加水煎煮2h后，冷卻至室溫；加入1 %木瓜蛋白酶和0. 5%堿性蛋白酶酶解 4h ;采用大孔樹脂按照分子量分離蛋白質，再用半制備RP-HPLC分離純化，得到的產物凍干 后，即為硒蛋白S激動劑多肽1。應用上述方法提取的激動劑多肽1，經過質譜鑒定，序列為 GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD，該序列為全新序列。也可以委托上海生工合成。
[0013] 實施例2
[0014] 硒蛋白S激動劑多肽1的體外細胞凋亡的測定
[0015] 本實驗研究了硒蛋白S激動劑多肽1抑制大鼠腦星形膠質細胞凋亡的作用。當細 胞用lOymol/LTNF-a處理后，經TUNEL染色后發現與培養基對照組相比出現了很多綠色 亮點，說明體系中存在凋亡的細胞。當20iimol/L硒蛋白S激動劑多肽1與TNF-a共孵 育后，鏡檢看到比單純加TNF-a的對照組較少的綠色亮點。對拍攝照片進行計數并統計 后，發現用l〇ymol/LTNF-a處理的細胞凋亡率約為66. 3%，而20iimol/L激動劑多肽1 與TNF-a共同處理的細胞凋亡率減少到31.3% (p〈0. 05)。并且只用20 iimol/L激動劑多 肽1處理的細胞的凋亡情況與培養基對照組并無明顯差別，說明激動劑多肽1顯著減少了 TNF-a誘導的細胞凋亡，但此濃度的激動劑多肽1自身對細胞沒有毒性作用。
[0016] 實施例3
[0017] 硒蛋白S激動劑多肽1治療大鼠腦卒中模型的作用
[0018] 雄性8周齡的SD大鼠40只，隨機分為4組，建立MCAO的模型，分別在造模同時給 予藥物干預，分別為：A組為空白對照組：生理鹽水；B組為模型對照組：造模+生理鹽水；C 組為藥物干預組：造模+硒蛋白S激動劑多肽I(10mg/kg/d);D為陽性藥干預組：造模+尿 激酶（l〇mg/kg)。連續10天。（1)觀察大鼠局部腦缺血再灌注后梗死體積的大小；（2)采 用神經行為學評分，觀察MCAO動物的康復情況；（3)檢測腦組織中硒蛋白S的含量。
[0019] 結果：治療性給予多肽1組的腦卒中模型大鼠與模型組相比，腦卒中面積減少 (P〈0. 01)，神經行為學評分降低（P〈0. 05)，腦組織中硒蛋白S的含量升高（P〈0. 01)，與模型 對照組比較差異均有統計學意義（見表1)。
[0020] 表1硒蛋白S激動劑多肽1對治療大鼠腦卒中模型的作用
【權利要求】
1. 一種硒蛋白S激動劑多肽，其特征在于：其序列為GGADRAAAAVEroVVVKRQERGD。
2. -種權利要求1所述多肽的制備方法，其特征在于：步驟包括（1)煎煮，（2)酶解， (3)蛋白質分離，（4)半制備RP-HPLC分離純化，（5)凍干。
3. 根據權利要求2所述的多肽的制備方法，其特征在于：步驟（2)中所述的酶解采用木 瓜蛋白酶和堿性蛋白酶酶解。
4. 根據權利要求2所述的多肽的制備方法，其特征在于：所述的蛋白質分離采用大孔 樹脂、葡聚糖凝膠。
5. 根據權利要求1所述的多肽在制備預防或治療腦卒中藥物中的應用。
【文檔編號】A61K38/16GK104262474SQ201410509728
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月28日 優先權日:2014年9月28日
【發明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司