Rgd三肽在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途
【專利摘要】本發明請求保護RGD三肽在制備預防或治療阿爾茨海默癥藥物中的用途，屬于醫藥領域。本發明RGD三肽動物給藥量明確，而且可以制成片劑、微球劑、粉狀劑、口服液、注射液，RGD三肽用于治療阿爾茨海默癥時，可以單獨用藥，也可以與其他作用機制不同的阿爾茨海默癥藥物聯合用藥，其中RGD三肽與漢防己甲素、雷公藤甲素組成的藥物組合物用于阿爾茨海默癥的治療時，不僅能夠降低藥物毒副作用，而且可以取得協同治療的效果，藥理實驗證實，RGD三肽能有效的抑制Aβ1-42聚集和防止Aβ1-42單聚體的低聚化的現象，顯著抑制β淀粉樣蛋白的沉積，其用于阿爾茨海默癥預防或治療療效確切，副作用小，因此具有廣闊的醫學應用前景。
【專利說明】RGD三肽在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥領域，涉及一種已知藥物的新用途，具體的說涉及R⑶三肽在制 備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 阿爾茨海默病（Alzheimer's disease, AD)是一種以短期記憶丟失、持續性認知能 力減退和行為紊亂為特征的神經系統退行性疾病。阿爾茨海默病影響了全球龐大的人口， 給人們的生活帶來極大的痛苦。現在，AD的確切發病機制尚不明確，初步認為是老化、遺傳 和環境多種因素的共同結果。目前也有很多種學說想證實AD的確切發病機制，其中最為廣 泛接受的是以聚合和原纖維形成的β淀粉樣蛋白（Αβ)肽為生物標志物的淀粉樣蛋白假 說。Αβ是一種由38至42個氨基酸殘基組成的短肽，來自于淀粉樣前體蛋白（APP)的水 解。而AD患者的大腦中有大量的Ai^_ 42。通過對AD患者的觀察發現，Αβ在神經組織中 的聚集和沉積與神經細胞的死亡和認知功能減退有關。因此，Αβ是對AD進行干預治療的 潛在靶點。并且已經有很多的研究以Αβ為靶點尋找不同的藥物。
[0003] 以Αβ為靶點尋找不同的藥物是近年來的熱門話題，據文獻老年癡呆癥（AD)發病 的Αβ假說及相關藥物研究進展(安徽教育學院學報，2007-5,第25卷第3期）詳細的說明 了干擾Aβ形成和沉積的藥物和以Aβ為靶點的阻止老年斑形成的藥物可在多個途徑起到 作用：（1)可減少Αβ前體蛋白的合成，在轉錄和翻譯的水平上阻止APP的合成；（2)減少 Αβ的生成，調節腦組織a、i3分泌酶的活性；（3)由于Αβ聚集是其神經毒性作用的前提， 該過程涉及Αβ由a-螺旋向-β-片層結構的轉化，而這一過程與分子中特異膚段有關；
[4] 拮抗A β參與的炎癥反應。即使提出了很多新的合成分子作為抑制A ?^_42聚積的潛在 藥物，但是這些分子的作用機制尚未完全闡明。中國專利CN101346396B公開了預防和治療 阿爾茨海默癥的G蛋白偶聯受體拮抗劑及其應用，該拮抗劑產生毒素，有嚴重的副作用，效 果不明顯，不利于大規模的推廣應用。
[0004] 隨著藥物研究結果的不明朗，針對Αβ的肽類抑制物的研究進展開始備受關注， 很多的多肽片段被認為可以結合到Αβ聚合體的中央疏水核心從而防止Αβ的沉積。多種 短肽也被證明是治療AD的有效分子，例如作為抗氧化劑的谷胱甘肽。另有證據表明，WMDF 和Ac-AVVIA對AD有療效。此外，研究表明諸如KLVFF和LPFFD的多肽和肽類分子對AD的 發病進程有較強的抑制特性。存在一種二十四肽，能夠抗廣泛的AD相關的細胞毒作用，包 括在體外試驗中暴露在Αβ的環境中，表現出抗細胞死亡活性。
[0005] 第四軍醫大學唐都醫院神經內科發表了一篇關于A β 2Q_29短肽阻斷ΑροΕ/Α β結合 并減少Αβ 纖維化及其神經毒性的效應作用（Chin J Clin Neurosci 2009. 17(1). 1飛） 中公開了利用硫磺素-T(Th-T)熒光分析和透射電鏡法證實了人工合成的Αβ 2(|_29短肽無 細胞毒性作用，能夠競爭性地與Αρ〇Ε4結合，從而阻斷對A β i_42與Αρ〇Ε4結合，減少Αρ〇Ε4 對A β i_42纖維化的促進作用及其神經毒性作用，說明A β 2(|_29短肽將能夠成為抑制A β i_42/ Ap〇E4結合的新型阻斷劑，為探索防止AD新的治療方法提供有效的實驗基礎，但其效果尚 進一步的研究。
[0006] 三肽是經三個氨基酸脫水縮合而成，利于體內吸收，無副作用的優點，三肽異亮氨 酸-脯氨酸-脯氨酸（IPP)和纈氨酸-脯氨酸-脯氨酸（VPP)對臨界高血壓有一定的治療 作用。不同種類的三肽具有不同的藥效作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp, 簡稱R⑶三肽）三肽在哺乳動物體內易降解并且易于吸收的優點，利于藥物的發揮。
【發明內容】
[0007] -半乳糖所致小鼠阿爾茨海默癥模型具有很好的治療或預防作用。本發明的RGD 三肽為口服制劑，其動物給藥量為l〇〇mg/kg · cT500mg/kg · d，優選為50mg/kg · cT500mg/ kg · d，更優選為 lOOmg/kg · d?500mg/kg · d，進一步優選為 lOOmg/kg · d?300mg/kg · d。
[0008] 本發明的目的之二是提供一種含有R⑶三肽的藥物組合物在制備治療和預防阿 爾茨海默癥藥物中的應用，本發明的藥物組合物包含R⑶三肽、漢防己甲素和/或雷公藤甲 素，所述藥物組合物中R⑶三肽：漢防己甲素：雷公藤甲素的重量比為（1-500) :(0. 1-5): (0· 1-5)。
[0009] 本發明的目的之三是公開含有R⑶三肽并能夠實現上述藥物用途的藥物制劑。以 上所述的藥物用途中，發明人通過試驗將其制備成了制成片劑、微球劑、粉狀劑、口服液和 注射液。其中片劑含有兩種以上如下輔料：淀粉、糊精、低取代羥丙基纖維素、硬脂酸鎂、微 晶纖維素、羥丙基纖維素、淀粉漿乳糖、甘露醇、微粉硅膠、交聯羧甲基纖維素鈉和交聯聚乙 烯吡咯烷酮；所述微球劑含有如下輔料：明膠、硫酸鈉、甲醛溶液。所述RGD三肽利于哺乳動 物體內降解并易于吸收，有利于藥效的發揮，所述RGD三肽藥物的口服制劑中每一制劑單 位中含有RGD三肽的含量為0. lmg-200mg。
[0010] 與現有技術相比，本發明的優點在于： (1) R⑶三肽在哺乳動物體內易降解并且易于吸收，有利于藥效的發揮； (2) RGD三肽與A β H2結合的肽-A β H2復合物穩定，并且RGD三肽能穩定A β H2的 α -螺旋、螺旋結構和抑制β -折疊結構的形成，能有效的抑制A β i_42的聚集和防止A β n 單聚體的低聚化的現象； (3) RGD三肽與其它作用機制并對老年癡呆癥起到治療作用的藥物聯用時，其藥物作用 機制互補，其與漢防己甲素和雷公藤甲素聯用可以起到對老年癡呆癥預防或治療的協同作 用，可以改善老年癡呆癥患者的運動機能和治療效果。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011] 圖1為R⑶三肽與A β i_42的硫磺素 T試驗結果示意圖： 圖2為RGD三肽與A β i_42的圓二色譜試驗結果示意圖： 圖3為RGD三肽與A β H2的誘射電子顯微鏡（TEM)試驗結果示意圖。
【具體實施方式】
[0012] 下面采用具體實施例進一步說明本發明的內容。
[0013] 以下內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬【技術領域】的普通技術人員來說，在 不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的 保護范圍。
[0014] 實驗例1、一種預防或治療阿爾茨海默癥的RGD三肽的硫磺素 T試驗： 將A β卜42溶解在PH7. 4,濃度為0· Olmol/L的磷酸鹽緩沖劑中配成50 μ mol/L的混合 溶液，該混合溶液中A β卜42和肽的初始濃度為50 μ mol/L，直到最終濃度為2. 5 μ mol/L時， 放置在37°C孵育48 h，接著加入ThT (5μπι〇1/1溶解于50 mmol/L甘氨酸-NaOH溶液中， PH8. 50)檢測450 nm和485 nm的熒光性。每個樣品測量3次，記錄熒光強度。
[0015] 結合圖1所示，實施例1結果表明：硫磺素 T可以迅速地與Αβ i_42的聚合纖維結 合，激發出一個新的波長為450nm的光，并表現為波長為482nm的光明顯增強，而RGD三肽 與A β i_42共培養的RGD三肽-A β i_42復合物的硫磺素 T熒光強度會減少，這種熒光技術可 用于檢測R⑶三肽對A β i_42聚合或分解的調節能力。如圖1所示，相較于白藜蘆醇，R⑶三 肽的濃度為2. 5 μ mol/L表現出對A β i_42聚合體更好的抑制效果，表明RGD三肽是A β i_42聚 合體的抑制物。
[0016] 實驗例2、一種預防或治療阿爾茨海默癥的R⑶三肽的圓二色譜試驗： 將濃度為50 μ mol/L的Αβ i_42溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，并在實驗組加入濃度為 50 μ mol/L的RGD三肽，接著放置37°C下孵育48 h，該混合溶液中A β i_42和RGD三肽的最 終濃度為5 μ mol/L，使用Imm厚度的容器皿，將A β卜42單體和RGD三肽-A β卜42復合物樣品 分別防止圓二色譜儀中檢測結構，光譜在25°C，波長為190-260 nm，波寬0. 5nm時被記錄。
[0017] 結合圖2所示，實施例2結果表明：圓二色譜表明RGD三肽-A β復合物中β折疊 結構會減少，如圖2所示，圓二色譜檢測A β i_42單獨時發現在217 nm附近有一條暗帶，表明 存在β-折疊結構，當檢測RGD三肽-A β復合物時發現217nm附近的暗條紋顯著減輕，則 表明RGD三肽可以減少β -折疊結構的形成，從而抑制A β i_42單體的聚合。
[0018] 實驗例3、一種預防或治療阿爾茨海默癥的RGD三狀的誘射電子顯微鏡（TEM)試 驗： 用磷酸緩沖液（PBS，pH7. 4)將A β i_42樣品溶解成lmg/ml的濃度，然后放置在濃度為 25 μ mol/L的R⑶三肽實驗組和空白對照組，直到混合溶液的最終濃度為25 μ mol/L時共孵 育48 h，將5μ1的樣品點樣于300孔Formvar-carbon的銅網，加入1%的甲酸雙氧鈾染色 lmin，放在空氣中烘干，再置于電鏡下觀察，檢測A β i_42和RGD三肽-A β i_42復合物的結構。
[0019] 結合圖3所示，實施例3結果表明：如圖3的電鏡圖所示，從A^_42單體，圖中可以 觀察到高密度長線狀的A β i_42纖維，纖維聚集成平行束狀，束與束之間又互相交叉；然而， 從RGD三肽-A β i_42復合物圖中只看到少量短線性纖維以及無定型聚合物，短的A β i_42纖維 束隨機互相交聯，從而形成了不規則的聚合物；說明R⑶三肽可以抑制A β i_42單體的聚合。
[0020] 實施例4、RGD三肽片劑制備
【權利要求】
1. RGD三肽在制備預防或治療阿爾茨海默癥藥物中的用途。
2. 如權利要求1所述的藥物用途，其特征在于，RGD三肽的動物給藥量為lmg/ kg · d?500mg/kg · d〇
3. 如權利要求1所述的藥物用途，其特征在于，R⑶三肽的動物給藥量為50mg/ kg · d?500mg/kg · d〇
4. 如權利要求1所述的藥物用途，其特征在于，R⑶三肽的動物給藥量為lOOmg/ kg · d?500mg/kg · d〇
5. 如權利要求2所述的藥物用途，其特征在于，所述的動物給藥量為lOOmg/ kg · cT300mg/kg · d。
6. 如權利要求2-3任一所述的藥物用途，其特征在于，所述的R⑶三肽制成片劑、微球 齊U、粉狀劑、口服液、注射液。
7. 如權利要求1-4任一所述的藥物用途，其特征在于，所述藥物的口服制劑中每一制 劑單位中含有RGD三肽的含量為0. lmg-200mg。
8. -種含有R⑶三肽的藥物組合物，其特征在于，它含有漢防己甲素。
9. 如權利要求8所述的含有RGD三肽的藥物組合物，其特征在于，它還含有雷公藤甲 素。
10. 如權利要求9所述的含有RGD三肽的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中 RGD三肽：漢防己甲素：雷公藤甲素的重量比為（1-500) :(0. 1-5) :(0. 1-5)。
【文檔編號】A61P25/28GK104258372SQ201410497303
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月25日 優先權日:2014年9月25日
【發明者】顧懷宇, 凌楚雯, 林睿邦, 黃嘉琦, 段松偉, 林潤軒 申請人:中山大學