離心力和剪切力應答蛋白1（recs1）在治療心肌肥厚中的功能及應用的制作方法

離心力和剪切力應答蛋白1（recs1）在治療心肌肥厚中的功能及應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種離心力和剪切力應答蛋白1（RECS1）在治療心肌肥厚中的功能及應用，屬于基因的功能與應用領域。本發明以RECS1基因敲除小鼠和心臟特異性RECS1轉基因小鼠為實驗對象，通過主動脈弓縮窄手術模擬心肌肥厚疾病模型研究RECS1基因的表達與心肌肥厚之間的關系，結果表明RECS1基因敲除顯著促進了心肌肥厚、纖維化，惡化心功能；RECS1基因過表達顯著抑制了心肌肥厚及其纖維化，改善心功能，即RECS1基因具有能夠保護心臟功能和抑制心肌肥厚的作用。基于RECS1基因的作用，RECS1可用于制備保護心臟功能和/或預防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物，為心肌肥厚的治療提供了一條有效的新途徑。
【專利說明】離心力和剪切力應答蛋白1 (RECS1)在治療心肌肥厚中的功能及應用
[0001]

【技術領域】
[0002]本發明屬于基因的功能與應用領域，特別涉及一種離心力和剪切力應答蛋白I(RECSl)在治療心肌肥厚中的功能和應用，具體是在制備預防、緩解和/或治療心肌肥厚藥物中的應用。

【背景技術】
[0003]心血管系統疾病是目前世界的頭號殺手之一，在我國目前心血管系統疾病的發生率已提高至各種主要疾病的首位。心肌肥厚在當今社會中十分普遍，心肌肥厚是持續性壓力或者容量負荷過重引起的適應性變化，是猝死、心肌梗死、充血性心力衰竭的獨立危險因素，能增加住院率和死亡率。心肌肥厚由多種因素調節，且是一種復雜的動態過程。研究表明持續的壓力和/或容量負荷過度，可增加室壁應力，導致心肌肥厚。其特征大體可見心臟重量明顯增加、心室結構改變；細胞水平上可見，心肌細胞長度和/或寬度增大，肌節數量增加、排列紊亂，膠原含量增加，纖維組織過度增生，細胞排列紊亂松散；分子水平上，轉化生長因子-β (TGF-β)、血管緊張素II (Angll)、內皮素、兒茶酚胺等各種胞外刺激信號可激活信號轉導，誘導胚胎型基因的表達，從而促使細胞發生肥大表型變化，最終導致心肌細胞肥大。左室肥厚是公認的心血管疾病死亡率的危險因素，如果未經治療，其可以導致收縮和舒張功能不全并最終導致心力衰竭。然而，現有的研究并不能完全詮釋心肌肥厚的發生機制。因此，尋找抑制心肌肥厚的特異性分子，對于進一步闡述心肌肥厚的發生發展機制，具有重大的理論意義，可為臨床防治心肌肥厚提供新靶點和新策略。
[0004]RECSI (responsive to centrifugal force and shear stress gene I)是血液剪切力應答蛋白，屬于Bax抑制子-1 (B1-1)家族的新成員，即Tmbiml (transmembrane Baxinhibitor motif-containing protein I)。B1-1家族是一組具有抗細胞凋亡等生物功能的多次跨膜小分子蛋白，主要包括B1-1、Lifeguard、GAAP (高爾基發病蛋白質)和RECSl等。層流剪切應力使RECSl的表達增高，以保持血管系統的穩定狀態，避免血管長期暴露于血流應力和各種生物活性物質而造成的損傷。Nojima實驗室最早報道血液剪應力誘導RECSl的轉錄表達，并克隆得到RECSl的cDNA和氨基酸序列【I】。人RECSl是I個有311個氨基酸的7次跨膜蛋白，與Lifeguard和谷氨酸結合蛋白具有很高的同源性。在心肌肥厚過程中，一般伴隨著炎癥和心肌細胞的凋亡，NF-kB信號通路主要作為介導炎性反應的細胞內信號轉導通路。研究證實NF-K B的激活是心肌細胞肥大所必需的，最近的研究提示NF- K B信號通路可能在心肌肥厚的發生發展中起著重要作用【2，3】；Fas基因是備受關注的促凋亡基因，劉繼東等發現自發性高血壓大鼠早期心肌肥厚時心肌Fas表達已經升高，可能參與后期心衰的發生【4】。有報道表明穩定表達RECSl的小鼠成纖維細胞對TNFR2特異的激動性抗體表現出一定的耐受性，顯示RECSl可能參與TNF- α信號的調控【5】。RECSl結合TNFRl，并抑制過量表達TNFRl誘導的核轉錄因子_ κ B (NF- κ B)活化【6】，從而負調控TNF-α信號。RECSl基因敲除的小鼠年老時易患主動脈囊性中層壞死并表現有大動脈擴張癥，表明RECSl可能參與調控血管的發育重塑。免疫組化分析發現，RECSl基因敲除的小鼠主動脈基質金屬蛋白酶-9 (MMP-9)的表達水平明顯提高【7，8】。近期的研究結果顯示，RECSl可減少細胞表面Fas的表達，從而保護Fas配體(FasL)誘導的凋亡【9】。因此推測，RECSl可能在心肌肥厚中起到重要作用，為心肌肥厚引起的心臟疾病的治療研究提供的新的思路。
[0005]【參考文獻】
1、H.Yoshisue，K.Suzuki, A.Kawabatal，Atherosclerosis 162，323 (Jun，2002).2、Freund C， Schmidt-Ullrich R， Baurand A， et al.Requirement of nuclearfactor-NF-κ B in ang1tensin II and isoproterenol-1nduced cardiac hypertrophyin viv0.Circulat1n, 2005， 111(18):2319-2325.3、YoungDj Popovic ZBj Jones WKj et al.Blockade of NF—kappa B usingI kappa B alpha dominant-negative mice amel1rates cardiac hypertrophy inmyotrophin-overexpressed transgenic mice.J Mol B1l, 2008，381 (3):559-568.4、劉繼東，鹿克風，張欣等。自發性1?血壓大鼠心肌fas基因表達與左室肥厚關系探討。高血壓雜志，2003.5、蔡慈峰，吳明江，廖志勇.中國生物化學與分子生物學報26，36(Jan, 2010)
6、廖志勇.中國生物化學與分子生物學報27，412(May, 2011).7、ZhaoH，Ito A, Sakai N，Matsuzawa Y，Yamashita S，Nojima H.RECSlis a negative regulator of matrix metalloproteinase-9 product1n and agedRECSl knockout mice are prone to aortic dilat1n.Circulat1n Journal.2006;70(5):615-24.8 λ Zhao Hj Ito A，Kimura SHj Yabuta N，Sakai N，Ikawa M，Okabe M，MatsuzawaYj Yamashita S，Nojima H.RECSl deficiency in mice induces susceptibility tocystic medial degenerat1n.Genes Genet Syst.2006; 81 (I):41-50.9、Shukla S，Fujita K，Xiao Q，Liao Z，Garfield S，Srinivasula SM.A shearstress responsive gene product PP1201 protects against Fas—mediated apoptosisby reducing Fas express1n on the cell surface.Apoptosis.2011;16(2):162-73。


【發明內容】

[0006]為解決上述現有技術的缺陷和不足，本發明的目的在于確定RECSl的表達和心肌肥厚的相互關系，提供一種RECSl在篩選保護心臟功能和/或預防、緩解和/治療心肌肥厚的藥物中的應用，提供一個用于保護心臟功能和/或預防、緩解和/或治療心肌肥厚的靶基因RECSl的新用途。
[0007]本發明的目的通過下述技術方案實現:
本發明通過試驗確定RECSl表達與心肌肥厚之間的關系:
URECSl基因敲除顯著促進了心肌肥厚、纖維化，惡化心功能
本發明選用野生型小鼠、RECSl基因敲除小鼠進行試驗，并將每種小鼠分成假手術組和手術組，每組10只小鼠。手術組給予主動脈弓縮窄手術，假手術組不予主動脈弓縮窄，然后通過對假手術組和手術組的各組小鼠進行心心臟心肌肥厚、纖維化及心功能的測定，研究RECSl基因敲除對主動脈弓縮窄誘導的心肌肥厚的影響。結果表明敲除RECSl基因所致的RECSl缺陷顯著惡化心肌肥厚、纖維化及心功能(圖1、圖2、圖3、圖7)。
[0008]2、RECSl基因過表達顯著抑制了心肌肥厚及其纖維化，改善心功能
本發明選用心臟特異性RECSl轉基因小鼠和非轉基因小鼠進行試驗，并將每種小鼠分成假手術組和手術組，每組10只小鼠。手術組給予主動脈弓縮窄手術，假手術組不予主動脈弓縮窄，然后通過對假手術組和手術組的各組小鼠進行心心臟心肌肥厚、纖維化及心功能的測定，研究RECSl基因過表達對主動脈弓縮窄誘導的心肌肥厚的影響。結果表明過表達RECSl基因顯著抑制心肌肥厚及纖維化，保護心功能(圖4、圖5、圖6、圖8)。
[0009]由以上結果可知RECSl基因缺陷顯著促進了心肌肥厚、纖維化，惡化心功能，RECSl基因過表達顯著抑制了心肌肥厚、纖維化，保護心功能。因此RECSl基因具有保護心功能和抑制心肌肥厚及纖維化的作用，特別是RECSl基因能夠抑制主動脈弓縮窄引起的心肌肥厚相關疾病發生的作用。
[0010]一種RECSl在心肌肥厚中的功能，主要體現在RECSl基因具有保護心功能和抑制心肌肥厚的作用，特別是RECSl基因能夠抑制主動脈弓縮窄引起的心肌肥厚發生的作用。
[0011]針對RECSl的上述功能，提供一種RECSl的應用，主要體現為RECSl在保護心臟和治療心肌肥厚中的應用，特別是RECSl在制備保護心臟功能和/或預防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物中的應用。
[0012]一種保護心臟功能的藥物，包含RECSl。
[0013]一種預防、緩解和/治療心肌肥厚的藥物，包含RECS1。
[0014]本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果:
(I)本發明發現RECSl基因的新功能，即RECSl基因具有能夠保護心臟功能和抑制心肌肥厚的作用。
[0015](2)基于RECSl在保護心臟功能和抑制心肌肥厚疾病中的作用，其可以用于制備保護心臟功能和/或預防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是WT和RECSl-KO小鼠AB模型4周后HW/BW、LW/BW及HW/TL的統計柱狀圖，結果顯示 RECSl 敲除顯著促進 HW/BW、LW/BW 及 HW/TL (*:p < 0.05 vs WT Sham 組，#:p
<0.05 vs WT AB 組)。
[0017]圖2是WT和RECSl-KO小鼠AB模型4周后心臟組織HE染色及心肌細胞橫截面積統計柱狀圖，結果顯示RECSl敲除顯著促進心肌細胞肥大(*:p < 0.05 vs WT Sham組，#:P < 0.05 vs WT AB 組)。
[0018]圖3是WT和RECSl-KO小鼠AB模型4周后心臟組織天狼星紅染色圖，結果顯示RECSl敲除顯著促進心臟的纖維化。
[0019]圖4是NTG和TG小鼠AB模型4周后HW/BW、LW/BW及HW/TL的統計柱狀圖，結果顯示 RECSl 過表達會抑制 HW/BW、LW/BW 及 HW/TL (*:p < 0.05 vs NTG Sham 組，#:p < 0.05vs NTG AB 組)。
[0020]圖5是NTG和TG小鼠AB模型4周后心臟組織HE染色及心肌細胞橫截面積統計柱狀圖，結果顯示RECSl過表達會抑制心肌細胞肥大(*:p < 0.05 vs NTG Sham組，#:p
<0.05 vs NTG AB 組)。
[0021]圖6是NTG和TG小鼠AB模型4周后心臟組織天狼星紅染色圖，結果顯示RECSl過表達會抑制心臟的纖維化。
[0022]圖7是WT和RECSl-KO小鼠AB模型4周后超聲檢測心功能結果統計柱狀圖，結果顯示RECSl敲除顯著惡化心功能；其中，LVEDD為左室舒張末期內徑、LVESD為左室收縮末期內徑、EF為射血分數、FS為短軸縮短率(*:p < 0.05 vs WT Sham組，#:p < 0.05 vs WTAB 組)。
[0023]圖8是NTG和TG小鼠AB模型4周后超聲檢測心功能結果統計柱狀圖，結果顯示RECSl過表達顯著保護心功能；其中，LVEDD為左室舒張末期內徑、LVESD為左室收縮末期內徑、EF為射血分數、FS為短軸縮短率(*:p < 0.05 vs NTG Sham組，#:p < 0.05 vs NTGAB 組)。

【具體實施方式】
[0024]下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。
[0025]實驗用動物及飼養
實驗動物:選用8-10周齡、體重在23.5-27.5g，雄性，心臟特異性Cre小鼠(a -MHC-Cre (命名 WT)，背景為 C57BL/6，購自 Jackson Laboratory，貨號 005650)、RECSl基因敲除小鼠(RECS1-K0，購自日本RIKEN公司，貨號:RIKEN01772)、心臟特異性RECSl轉基因小鼠(TG，心臟特異性RECSl轉基因小鼠由武漢大學心血管病研究所李紅良教授實驗室構建)及非轉基因小鼠(NTG，同齡同窩對照非轉基因小鼠)為實驗對象。
[0026]心臟特異性RECSl轉基因小鼠的構建:
用引物(上游引物:GTTGTCGACGCCACCATGTCCAATCCCAGTGCCCC ;下游引物:GCCAAGCTTAGTCTCTACTTCCTACGAGC)擴增小鼠 RECSl 全長基因(NCBI，Gene ID -.69660,NM_027154)，把擴增的RECSl全長基因連接于心肌肌球蛋白重鏈(a -MHC)啟動子下游，將構建的序列通過顯微注射構造成受精胚胎(C57BL/6J背景)，得到心臟特異性RECSl轉基因老鼠。(上述的轉基因小鼠參照下述文獻制備:Jiang DS, Bian ZY, Zhang Y, Zhang SM,Liu Y，Zhang R et al.Role of interferon regulatory factor 4 in the regulat1nof pathological cardiac hypertrophy.Hypertens1n 2013; 61:1193-1202.)
飼養環境:所有實驗小鼠均飼養在武漢大學心血管病研究所SPF級實驗動物中心。SRF級大小鼠飼料購自北京華阜康生物科技有限公司。飼養條件:室溫在22-24°C之間，濕度在40-70%之間，明暗交替照明時間為12h，自由飲水攝食。
[0027]實施例1心肌肥厚(AB)模型獲得
1.實驗動物分組:雄性背景C57BL/6野生型小鼠(WT)、RECSl基因敲除小鼠(RECS1-K0)及心臟特異性RECSl轉基因小鼠(TG)和非轉基因小鼠(NTG)，通過主動脈縮窄術建立心肌肥厚模型。隨機分為8組，分組如下:C57BL/6背景野生型小鼠假手術組(WT Sham)及AB術組(WT AB)、RECSl基因敲除小鼠假手術組(RECS1-K0 Sham)及AB術組(RECS1-KO AB)、非轉基因小鼠假手術組(NTG Sham)及AB術組(NTG AB)、心臟特異性RECSl轉基因小鼠假手術組(TG Sham)及AB術組(TG AB)。
[0028]2.心肌肥厚模型采用主動脈弓縮窄手術，模型操作流程:
2.1術前準備
(I)麻醉:先給小鼠稱重，按照90mg/kg體重計算所需麻藥(3%戊巴比妥鈉)量，通過腹腔注射，并記錄注射時間點。夾尾、夾趾無明顯反應且小鼠狀態良好為麻醉成功標準(一般注射后約1min無明顯反應，以麻醉后約50min小鼠夾趾有反應,麻醉后30min左右為最佳手術時間)。
[0029](2)術區準備:將小鼠左胸部、左側胸部及左前肢腋下的皮膚去毛。剃毛后用濕紗布擦拭術區去除鼠毛，以不影響手術視野為宜。
[0030](3)氣管插管:用橡皮筋將小鼠上門齒固定于V形板斜面上，并迅速將氣管插管經聲門準確插入氣管內，隨后右側臥位置于加熱墊上(加熱墊需提前預熱)，然后將氣管插管與呼吸機連接，固定小鼠。若小鼠的胸廓起伏與呼吸機頻率一致，說明氣管插管成功。
[0031]2.2主動脈弓降支結扎術
取右側臥位，小鼠左前肢置于右前肢上方，并用醫用膠帶將兩前肢固定。右胸部下方墊入棉簽，抬高胸廓，依次用碘酒及體積分數為75%酒精對手術區域皮膚消毒。左手持眼科鑷將左胸部皮膚捏起，右手持眼科剪剪開皮膚約1cm，依次分離肌肉及軟組織，于第2-3肋水平打開胸腔，用棉簽稍撥開左肺，游離主動脈弓降支，將7-0手術縫線穿過血管，并在血管上方平行放置一段26G (25.0-27.5g小鼠)或者27G (23.5-25.0g)注射器針頭，將血管及針頭一起結扎好，再抽出針頭即可達到相應程度的血管縮窄。結扎完畢后依次縫合，關閉胸腔，用注射器從縫口處插入胸腔并抽出Icc氣體以恢復胸腔內負壓，拔出注射器后迅速縫合皮膚切口。假手術組(Sham)在游離出主動脈降支后只穿線不結扎，其余步驟同心肌肥厚(AB)模型組。
[0032]2.3術后護理
主動脈弓降支結扎術后，待小鼠出現自主呼吸、夾趾出現強烈反應，拔出氣管插管，并將小鼠放入裝有高壓滅菌過的墊料、飼料和飲用水的飼養籠內，于飼養室繼續飼養觀察。RECSl基因敲除小鼠及野生型小鼠術后4周、非轉基因小鼠及心臟特異性RECSl轉基因小鼠術后4周分別進行各項指標的檢測。
[0033]實施例2小鼠心肌肥厚(AB)模型心肌肥厚及纖維化檢測
1.取材
(I)前期工作:預先準備裝有20mL的體積分數10%甲醛的尿杯，并貼好標簽(小鼠編號、組別、手術類型及取材日期)。將倒滿質量分數10% KCl溶液的培養皿置于取材處。打開分析天平，調零備用。再稱重處死小鼠。
[0034](2)取材:眼科彎鑷夾住心耳下方的血管蒂，剪下心臟，迅速置于質量分數10% KCl溶液中。待心臟停跳在舒張期后，置于滅菌紗布上，輕輕擠壓心腔內液體，蘸干表面液體后，稱重并記錄，將心臟放入相應的尿杯中，固定48h后用于病理學檢測。
[0035](3)相關測量及計算:取出小鼠肺臟，修剪后濾紙吸干，稱重并記錄。剪開小鼠后肢脛骨處皮膚，測量并記錄脛骨長度。計算心重與體重的比值(HW/BW)，肺重與體重的比值(Lff/Bff)以及心重與脛骨長度的比值(HW/TL)。
[0036]2.病理學檢測
2.1制備石臘標本切片
主要操作程序包括修剪心臟一包埋框處理一流水沖洗一脫水一透明一浸蠟一包埋一切片一攤片一晾干或烘烤后備用。
[0037]2.2蘇木精-伊紅(HE)染色
主要步驟為:55 °C烘烤30min — 二甲苯5min，3次一100%酒精Imin — 95%酒精Imin — 70%酒精Imin —雙蒸水Imin —蘇木素溶液(珠海貝索，BA-4021) 5min —水洗Imin — 1%鹽酸酒精(取3mL濃鹽酸與297mL 70%酒精充分混合均勻)l_3s —水洗Imin — Scott液(碳酸氫鈉0.35g,七水硫酸鎂2g,兩者溶于10mL蒸懼水)Imin —水洗Imin —伊紅溶液(珠海貝索，BA-4024) 3_5min —蒸懼水洗去浮色一70%酒精Is — 95%酒精Is — 100%酒精30s，3次一二甲苯2min，3次一趁二甲苯未干立即封片一通風櫥內吹干，顯微鏡拍照。
[0038]HE染色圖片統計:每張圖片選擇3個以上邊界清楚，核大致位于中央的細胞，用Image-Pro Plus 6.0軟件圈細胞面積。
[0039]2.3天狼星紅(PSR)染色
主要步驟為:55 V烘烤30min — 二甲苯2min，3次一100%酒精Imin — 95%酒精Imin — 70%酒精Imin —流水沖洗1min —雙蒸水Imin —質量分數0.2%磷鑰酸2min — 0.1%天狼猩紅苦味酸溶液滴于組織上,濕盒中染色90min —去除殘液一0.0lN鹽酸4s — 70%酒精I次一90%酒精I次一100%酒精30s，3次一二甲苯2min，3次一趁二甲苯未干立即蓋玻片封片,顯微鏡拍照。
[0040]心肌組織由心肌細胞和間質組織組成，心臟是一終末分化器官，心肌細胞失去增殖能力，各種生理或病理性刺激引起的心肌細胞反應，只能是單個細胞的體積增大而不能在數量上增殖。因此，在心肌肥厚的病理生理過程中，主要表現為心肌細胞體積增大，肌節數量增多，細胞排列紊亂，心臟間質改變包括心肌成纖維細胞的增殖與轉化，膠原纖維密度增加，膠原分泌增加，膠原比例平衡失調等。
[0041]WT和RECSl-KO小鼠AB模型后的表型結果見圖1、圖2、圖3。Sham (假手術)組中WT小鼠和RECSl-KO小鼠的HW/BW、LW/BW及HW/TL之間的差異均無統計學意義；WT小鼠AB術后 4 周的 HW/BW、LW/BW、HW/TL 高于其 Sham 組；AB 術后 4 周，RECSl-KO 小鼠的 HW/BW、LW/BW及HW/TL均較WT小鼠升高(圖1)。HE染色切片可觀察到=Sham組心臟無明顯差異，AB組較Sham組的心臟均增大，RECSl-KO小鼠的心臟明顯大于WT組小鼠；Sham組心肌肌原纖維細胞排列整齊、致密，形態完整，胞核及核仁結構清晰；AB組肌絲排列紊亂、松散，心肌細胞體積明顯增大，形態不規整，胞核深染、增大、畸形，核仁模糊，RECSl-KO組則比WT組細胞肥大明顯，差異有統計學意義(圖2)。PSR染色后，發現AB組心室心肌間質膠原含量較Sham組增加，動脈血管周圍膠原增加更為明顯，膠原增粗，排列紊亂成網絡狀；AB術后RECSl-KO小鼠膠原含量及血管周圍膠原含量大于WT組小鼠(圖3)。以上結果說明經AB模型后，小鼠發生明顯的心肌肥厚，RECSl-KO小鼠的心肌肥厚程度大于WT小鼠。
[0042]圖4、圖5、圖6是NTG和RECSl-TG小鼠AB模型后的表型結果。同樣NTG小鼠AB術后4周的HW/BW、LW/BW及HW/TL高于其Sham組；AB術后4周TG小鼠的HW/BW、LW/BW及HW/TL增大的程度明顯小于NTG小鼠(圖4)。心臟表型，AB組較Sham組的心臟均增大，且AB術后TG小鼠心臟增大的程度遠小于NTG小鼠。HE染色切片可觀察到:TG小鼠AB術后心肌細胞橫截面積大于Sham組，顯著小于NTG小鼠AB組(圖5)。PSR染色可見，TG小鼠AB術后心肌間質膠原含量及血管周圍膠原含量均小于NTG小鼠AB組(圖6)。以上結果說明經AB模型后，小鼠發生明顯的心肌肥厚，RECSl-TG小鼠的心肌肥厚程度小于NTG小鼠。
[0043]實施例3心肌肥厚(AB)模型小鼠超聲檢測心功能 I前期準備
(O麻醉機準備:先連接氧氣瓶和麻醉機上的進氣接口，再擰開麻醉機上加藥口密封蓋，迅速加入異氟烷至安全刻度后擰緊密封蓋。擰開氧氣瓶上總閥門，調整流量控制閥的旋鈕，出氣壓力維持在0.2-0.3mPa。
[0044](2)待測小鼠準備:待檢測小鼠用異氟烷迅速麻醉后，左胸前區剃毛，將處理好的小鼠頭部伸入麻醉劑導管套頭內，以1.5-2.0%異氟烷維持小鼠穩定的麻醉狀態。
[0045]2心功能檢測
小鼠取左側臥位或仰臥位，并在剃毛區均勻涂抹超聲耦合劑(天津成信公司)。采用高頻超聲診斷儀，頻率為15MHz，選取標準左心室乳頭肌短軸切面，測量左室舒張末期內徑(LVEDD)、左室收縮末期內徑(LVESD)、射血分數(EF)及短軸縮短率(FS)。
[0046]本實施例運用M型超聲心動圖檢測評價心肌肥厚和心功能。圖7是WT和RECSl-KO小鼠AB模型后心功能檢測結果圖。與WT Sham組相比，WT小鼠AB術后4周表現出心功能減弱和心肌肥厚，主要表現為心肌肥厚的指標LVEDD、LVESD均不同程度的增加，而反映心功能的指標EF、FS則下降。AB術后4周，RECSl-KO小鼠心肌肥厚的指標增大的程度及反映心功能的指標下降的程度比WT小鼠明顯。說明RECSl-KO小鼠的心功能更顯著惡化、心肌肥厚程度更嚴重，這些結果均與RECSl-KO小鼠心肌肥厚更為顯著的結果一致。
[0047]圖8是NTG和RECSl-TG小鼠AB模型后的超聲檢測結果。與NTG Sham組相比，NTG小鼠AB術后4周表現出心功能減弱和心肌肥厚。主要表現為心肌肥厚的指標LVEDD、LVESD增大，而反映心功能的指標EF、FS則下降。AB術后4周，與NTG小鼠相比，TG小鼠心肌肥厚的指標增大的程度及反反映心功能的指標下降的程度則小于NTG組。這些結果與TG小鼠心肌肥厚被抑制的結果一致。
[0048]由以上結果可知，在主動脈弓縮窄引起的心肌肥厚疾病模型中，RECSl基因缺陷顯著促進了心肌肥厚、纖維化，惡化心功能，RECSl基因過表達顯著抑制了心肌肥厚、纖維化，保護心功能。因此RECSl基因具有保護心功能和抑制心肌肥厚及纖維化的作用，特別是RECSl基因能夠抑制主動脈弓縮窄引起的心肌肥厚相關疾病發生的作用。
[0049]上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.RECSl在制備保護心臟功能的藥物中的應用。
2.一種保護心臟功能的藥物，其特征在于:包含RECS1。
3.RECSl在制備預防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物中的應用。
4.一種預防、緩解和/治療心肌肥厚的藥物，其特征在于:包含RECSl。
【文檔編號】A61P9/00GK104174011SQ201410379192
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月1日 優先權日:2014年8月1日
【發明者】李紅良, 趙輝, 蔣曦, 張曉東 申請人:武漢大學