一種藥物組合物的新用途

一種藥物組合物的新用途
【專利摘要】本發明提供了含有下述重量配比的原料藥制備而成的藥物在制備治療酒精成癮或/和依賴的藥物中的用途：附子或烏頭3-10份,黃芪3-35份。本發明藥物組合物能有效的消除酒精成癮的心理與行為的“成癮記憶”，具有良好的戒除酒精成癮的作用，為臨床用藥提供了一種新的選擇。
【專利說明】一種藥物組合物的新用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藥物組合物的新用途。

【背景技術】
[0002] 酒精成癮是一種失控性的飲酒行為，主要表現為對獲得酒精的強烈渴求，強迫性 地飲酒，并且發展為酒精耐受和酒精依賴。與其它成癮性藥物所致疾病一樣，酒精成癮的核 心特征是戒斷后仍長期存在的復飲行為。
[0003] 對于酒精依賴患者來說，如何消除酒精的"成癮記憶"是從根本上實現治療和成功 的關鍵，由于患者往往存在對酒精的強烈渴望以及中毒癥狀的隱蔽性，在臨床上要完全實 現戒酒是非常困難的。目前針對酒精成癮患者的治療主要以藥物治療為主，美國FDA批準 上市的針對酒癮的藥物主要有戒酒硫、納曲酮和阿坎酸。這三種藥物在臨床使用中可能有 一定效果，但對于消除酒精成癮患者強烈的心理渴求、戒斷之后的復飲行為的發生并沒有 作用，并且戒酒硫臨床副作用大，納曲酮存在相關的肝損害、其確切的療效及機制仍需進一 步研究。總的來說，西醫對于酒精成癮患者戒酒的治療并沒有取得理想的進展。
[0004] 我國傳統中醫學，明確記載有使用中醫藥治療酒精性疾病的歷史至少上千年，形 成了一套自身完整的而又獨特的理論體系。認為酒為外在的濕熱之邪，過量飲酒之后，首 先損及脾胃，而脾又喜燥而惡濕，故濕濁內生從而阻滯中焦，脾土壅滯，近而肝絡不暢，體內 氣、血、痰、瘀等病理產物與濕熱相互瘀結，隨著病情的發展最后累及腎臟，成為"頑疾"。并 且傳統中醫學自古就有中草藥能解酒毒、戒毒的文獻記載。如在《神農本草經》中，就已記 載："葛根解諸毒"，唐·孫思邈《千金方》也有"葛根主解酒毒之說"，明代本草巨著《本草綱 目》中解酒藥的內容非常豐富，書中記載了解酒藥約計100種，廣泛分布于礦物藥、動物藥、 植物藥之中，至清代隨著一系列有關戒毒的專著問世，中醫藥戒毒應運而生至今已有200 多年的歷史，積累了寶貴的經驗，創立了一系列中醫戒毒方法，包括單純中醫辨證戒斷方 藥，中醫辨證加鴉片遞減戒毒方藥，洋金花戒毒等，確立了扶正祛邪、滋陰助陽、補益臟 腑、祛除煙毒、調暢氣血等總的治療原則。加之，中草藥自身的高效、低毒、價廉、多靶點等優 勢，因此，中醫藥治療酒精成癮具有一定的優勢。
[0005] 附子，功能主治：回陽救逆，補火助陽，逐風寒濕邪；黃芪的功能主治：補氣 固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌。目前已有將兩味藥物組合使用的報道，如申請號： 200410013941. 5 ;發明名稱：一種治療心動過緩的中藥，一種治療心動過緩的中藥，由40? 60%的黃芪和附子為原料加工得到的口服制劑。本發明經大鼠胺碘酮與心得安兩種慢性心 律模型的藥效學試驗證明，均可明顯升高這兩種模型心動過緩的心率。且長期服用安全、無 毒副作用。


【發明內容】

[0006] 本發明的技術方案是提供了 一種藥物組合物的新用途。
[0007] 本發明提供了含有下述重量配比的原料藥在制備治療酒精成癮或/和依賴的藥 物中的用途：附子或烏頭3-10份，黃芪3-35份。
[0008] 進一步優選地，所述的藥物是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑：
[0009] 附子或烏頭3-10份，黃芪3-35份。
[0010] 更進一步優選地，所述的原料藥重量配比為：附子或烏頭5-10份，黃芪10-35份。
[0011] 更進一步優選地，所述的原料藥重量配比為：附子或烏頭1〇份，黃芪35份。
[0012] 其中，所述的附子為生附子和/或制附子；所述的烏頭為川烏或草烏；所述的黃芪 為生黃芪和/或炙黃芪。
[0013] 所述的制劑是口服制劑。
[0014] 其中，所述的口服制劑是顆粒劑、散劑、丸劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑或口服液。
[0015] 所述的藥物的制備方法包括如下步驟：
[0016] a、稱取原料藥；
[0017] b、將原料藥直接打粉，或加水煎煮，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備 成藥學上常用的制劑。
[0018] 所述的藥物是治療長期飲酒導致脾胃濕熱，日久濕從寒化，損傷陽氣，形成的脾腎 陽虛之證的藥物。
[0019] 為了消除酒精成癮患者對于酒精強烈的精神渴求與戒斷之后的高復飲率，本發明 采用國際公認的研究藥物性成癮精神依賴的條件位置偏愛與行為依賴的行為敏化動物兩 種經典的動物模型，提供一種藥效良好、低毒、多靶點、價廉的治療酒精成癮的理想藥物組 合物，及其制備方法和用途。
[0020] 目前己公認"整體觀念"、"辨證施治"、"復方使用"、"復方配伍用藥如用兵"是中醫 最科學最有效的幾大優勢，其中"復方配伍用藥如用兵"是菲常科學的中醫藥原創理論。中 醫組方中并藥如行兵布陣那樣環環相扣的嚴密配伍，是其優于西藥配方的有效手段。中醫 方劑理論認為，每一方劑，不僅需要根據病因病機選擇合適的藥物妥善配伍，同時也應符合 組方的基本結構，即"君、臣、佐、使"的組方配伍，所謂"君、臣、佐、使"的組方配伍，就是其 建立在對疾病病機的全方位判斷基礎上的科學配比。中醫用方通過多環節、多靶點整合調 節的生物學機制，對酒精成癮及依賴這樣機制復雜難查、西醫療效、治療非常困難的疾患或 癥狀進行凋控，可以取得比西藥更好、更徹底的治療效果，而這種療效是建立在上述中醫傳 統原創理論的確切指導之上的，本發明組方遵循了這一原則。
[0021] 中醫學理論指導下，酒性濕，為辛溫燥烈之品，長期飲酒，易耗氣傷血，損陰及 陽，累及腎臟，命門火衰，其成癮機制的形成與脾、腎二臟的關系最為密切。酒為濕邪，脾喜 躁而惡濕，飲酒初期濕邪入里，脾土先傷，濕從寒化，則脾陽不升，臨床可見健忘、頭暈等癥。 同時脾胃又為氣血生化之源，為后天之本，腎藏先天之精，是生命本原，為先天之本，腎精 及其化生的人體陰陽之氣，賴脾氣運化的水谷之精及其化生的谷氣的不斷充養和培養，方 能充盛。脾虛水谷，寒濕困脾，清陽不升，不能滋養先天，病久可致腎臟失養，命門火衰，本虛 標實互見，氣、血、水俱病。成癮患者在后期臨床往往出現耳鳴心跳，肌肉關節、腰背部彌漫 性疼痛，四肢困倦、消瘦，便秘或腹瀉，早衰，陽痿，頭脹眩暈，失眠，胸悶，心悸，厭食厭水，嘔 噦，脈緩或弦滑，舌淡胖苔白等脾腎陽虛的臨床表現。
[0022] 本發明藥物由附子、黃芪兩味藥組成，其中君以附子功效溫補脾腎之陽，化寒祛 濕，直指酒精成癮之主癥，臣以黃芪益氣健脾，補脾腎氣血，兩藥合用共奏溫陽健脾之功。全 方制劑組方嚴謹，療效確切。本發明藥物組合物能有效的消除酒精成癮的心理與行為的"成 癮記憶"，具有良好的戒除酒精成癮的作用，為臨床用藥提供了一種新的選擇。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1各組小鼠適應期的自主活動測試基線，由圖可見，與正常對照組比較，中藥 組、酒精組、中藥+酒精組各組小鼠的自主活動基線并沒有統計學差異，P>〇. 05。
[0024] 圖2、經歷10天5次小鼠自主活動測試結果顯示：酒精組與鹽水相比，在5次測 試期間小鼠的自主活動次數明顯增加具有顯著統計學差異/P < 〇. 01.第4、5次測試期，小 鼠的自主活動次數高于前3次，#P〈0. 05 ;在第4、5次測試期，中藥+酒精組與鹽水對照組、 中藥組相比小鼠的自主活動次數增加明顯有統計學差異，AP〈〇.〇5 ;在第2、3、4、5測試期， 酒精模型組與中藥+酒精組相比小鼠的活動次數具有顯著統計學差異，TP〈〇. 01.
[0025] 圖3 :小鼠在激發階段（3-3)分別接受酒精（2.2g/kg)、中藥（1.8g/kg)、中藥+酒 精、鹽水的激發結果顯示：模型組酒精激發與鹽水激發相比小鼠自主活動增加差異性顯著 *P< 0.01，模型組酒精激發與中藥+酒精激發相比同樣具有顯著差異性AP〈0. 01，而在形 成期（3-4)中藥+酒精組在接受酒精激發后與鹽水組激發相比，小鼠的自主活動次數并沒 有增加，沒有統計學差異（P>〇. 05).
[0026] 圖4 :在小鼠行為敏化表達期，酒精組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水 組相比顯著升高ΓΡ〈〇. 01)，與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨 酸（GLU)水平明顯減少（#Ρ〈0. 01).三組在γ -氨基丁酸（GABA)的組間比較中，我們發現 與鹽水對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著fP〈0. 01)，而中藥干預組與酒精模型 組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放（#Ρ〈0. 01)。
[0027] 圖5、在小鼠行為敏化表達期酒精組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水組 相比仍顯著升高ΓΡ〈〇. 01)，與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨 酸（GLU)水平明顯減少（#Ρ〈0. 01).同樣的三組在γ -氨基丁酸（GABA)的組間比較中，我 們發現與鹽水對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著ΓΡ〈0. 01)，而中藥干預組與酒 精模型組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放（#Ρ〈0. 01)。
[0028] 圖6 :小鼠在黑色箱子停留時間為609. 97 士 4. 466 (S)，白色箱子停留時間為 365. 75 士 67. 686 (s) (Ρ〈0. 01).
[0029] 圖7 :經過10天5個訓練周期后，測試期結果顯示，中藥組在白色伴藥箱停留時間 為249. 58 士 20. 586S，鹽水組為268. 33. 士 41. 033S兩組相比沒有統計學差異（Ρ>0. 05). 而酒精組小鼠在測試期白色伴藥箱停留時間為546. 67 士 57. 917S，相對于生理鹽水組具有 顯著性差異ΓΡ〈〇.〇1).
[0030] 圖8 :中藥干預組與酒精組在3個測試期的均可以顯著抑制酒精誘導的小鼠 CPP 的形成ΓΡ〈〇. 05)，而到第3個測試階段顯示，中藥干預組對于酒精誘導的CPP形成具有 明顯的抑制作用（#Ρ〈〇.〇1)。
[0031] 圖9:各組小鼠適應期的自主活動測試基線，由圖可見，與正常對照組比較，中藥 組、酒精組、中藥+酒精組各組小鼠的自主活動基線并沒有統計學差異，Ρ>〇. 05。
[0032] 圖10、經歷10天5次小鼠自主活動測試結果顯示：酒精組與鹽水相比，在5次測 試期間小鼠的自主活動次數明顯增加具有顯著統計學差異/Ρ < 〇. 01.第4、5次測試期，小 鼠的自主活動次數高于前3次，#P〈0. 05 ;在第4、5次測試期，中藥+酒精組與鹽水對照組、 中藥組相比小鼠的自主活動次數增加明顯有統計學差異，AP〈〇.〇5 ;在第2、3、4、5測試期， 酒精模型組與中藥+酒精組相比小鼠的活動次數具有顯著統計學差異，TP〈〇. 01.
[0033] 圖11 :小鼠在激發階段（3-3)分別接受酒精（2.2g/kg)、中藥（1.8g/kg)、中藥+ 酒精、鹽水的激發結果顯示：模型組酒精激發與鹽水激發相比小鼠自主活動增加差異性顯 著乍< 0. 01，模型組酒精激發與中藥+酒精激發相比同樣具有顯著差異性AP〈0. 01，而在 形成期（3-4)中藥+酒精組在接受酒精激發后與鹽水組激發相比，小鼠的自主活動次數并 沒有增加，沒有統計學差異（P>〇. 05).
[0034] 圖12在小鼠行為敏化表達期，酒精組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水 組相比顯著升高ΓΡ〈〇. 01)，與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨 酸（GLU)水平明顯減少（#Ρ〈0. 01).三組在γ -氨基丁酸（GABA)的組間比較中，我們發現 與鹽水對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著fP〈0. 01)，而中藥干預組與酒精模型 組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放（#Ρ〈0. 01)。
[0035] 圖13、在小鼠行為敏化表達期酒精組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水 組相比仍顯著升高ΓΡ〈〇. 01)，與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷 氨酸（GLU)水平明顯減少（#Ρ〈0. 01).同樣的三組在γ -氨基丁酸（GABA)的組間比較中， 我們發現與鹽水對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著ΓΡ〈0. 01)，而中藥干預組與 酒精模型組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放（#Ρ〈0. 01)。
[0036] 圖14:小鼠在黑色箱子停留時間為589. 97 士 4. 466(S)，白色箱子停留時間為 265. 75 士 67. 686 (s) (P〈0. 01).
[0037] 圖15 :經過10天5個訓練周期后，測試期結果顯示，中藥組在白色伴藥箱停留時 間為249. 58 士 20. 586S，鹽水組為268. 33. 士 41. 033S兩組相比沒有統計學差異（P>0. 05). 而酒精組小鼠在測試期白色伴藥箱停留時間為553. 67 士 57. 917S，相對于生理鹽水組具有 顯著性差異ΓΡ〈〇.〇1).
[0038] 圖16、中藥干預組與酒精組在3個測試期均可以顯著抑制酒精誘導的小鼠CPP的 形成ΓΡ〈0. 05)，而到第3個測試階段顯示，中藥干預組對于酒精誘導的CPP形成具有明 顯的抑制作用（#Ρ〈〇.〇1)。

【具體實施方式】
[0039] 實施例1本發明藥物組合物的制備
[0040] 取附子l〇g，黃芪30g。各藥味按量稱取，摻與足量的凈水，文火煎煮附子lh以上 去麻，后入黃芪煎煮。收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，即得湯劑。
[0041] 本方中，附片用量稍大，取其溫陽化濕之功。
[0042] 實施例2本發明藥物組合物的制備
[0043] 取實施例1制備的湯劑，濃縮后，加適當淀粉、糊精混勻后制粒。
[0044] 實施例3本發明藥物組合物的制備
[0045] 取烏頭10g，黃芪30g。各藥味按量稱取，摻與適量的凈水，文火煎煮附子lh以上 去麻，后入黃芪煎煮。收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，濃縮后，干燥，力口 入適量糊精、可溶性淀粉制粒后，壓片，即得片劑。
[0046] 實施例4本發明藥物組合物的制備
[0047] 取附子10g，黃芪30g。各藥味按量稱取，先煎附子，文火煎煮lh去麻，后入黃芪煎 1小時，收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，濃縮后，干燥后，加適量微晶纖 維素，混勻后，裝膠囊，即得膠囊劑。
[0048] 實施例5本發明藥物組合物的制備
[0049] 取烏頭10g，黃芪30g。各藥味按量稱取，摻與足量的凈水，文火煎煮烏頭lh以上 去麻，后入黃芪煎煮。收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，即得湯劑。
[0050] 本方中，烏頭用量稍大，取其溫陽化濕之功。
[0051] 實施例6本發明藥物組合物的制備
[0052] 取實施例5制備的湯劑，濃縮后，加適當淀粉、糊精混勻后制粒。
[0053] 實施例7本發明藥物組合物的制備
[0054] 取烏頭10g，黃芪30g。各藥味按量稱取，摻與足量的凈水，文火煎煮烏頭lh以上 去麻，后入黃芪煎煮。收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，濃縮后，干燥，力口 入適量糊精、可溶性淀粉制粒后，壓片，即得片劑。
[0055] 實施例8本發明藥物組合物的制備
[0056] 取烏頭10g，黃芪30g。各藥味按量稱取，摻與足量的凈水，文火煎煮烏頭lh以上 去麻，后入黃芪煎煮。收集水煎液；藥渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，濃縮后，干燥后， 加適量微晶纖維素，混勻后，裝膠囊，即得膠囊劑。
[0057] 以下通過藥效學實驗證明本發明的有益效果。
[0058] 試驗例1本發明藥物對酒精成癮小鼠行為敏化動物模型和條件位置偏愛模型影 響的實驗研究。
[0059] 1.實驗材料
[0060] 1. 1實驗動物：3個月大雄性清潔級昆明株小鼠，進入實驗室的體重25?30g之 間。小鼠及飼料均由成都達碩動物實驗公司提供，動物合格證編號：SCXK(ll)2013-24。購 入后置于成都中醫藥大學中醫臟腑實驗室（國家二級）飼養。
[0061] 1. 2實驗藥物：實施例1方法所述的原料用量及方法制備，由成都中醫藥大學藥學 院中藥制劑研究室提供。批號：20130111 ;臨床擬定劑量為每日服用原生藥材40g，按成人 體重一般60kg計算，人用劑量為原生藥材0. 66g/kg體重。實驗室配成分別為5. 94g/kg/ d(相當于臨床擬定劑量的9倍）。給藥體積0. lml/10g體重。
[0062] 1. 3實驗器材：小鼠飼養裝置、灌胃針（成都中醫藥大學實驗室），小鼠腦組織切取 裝置及液氮儲存罐（成都里來生物科技有限公司），CPP-100條件位置偏好實驗儀、ZZ-6 自發活動測試儀（成都泰盟科技有限公司），計算機：型號：TFT185W80PS (冠捷顯示科技有 限公司）、酶標儀：型號：Multlskan Mk3 (賽默飛世爾儀器有限公司）、電子恒溫水浴鍋：型 號DZKW-4(北京中興偉業儀器有限公司）。
[0063] 1. 4實驗試劑：多巴胺（DA) ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科 技有限公司分裝，生產批號：E-30236。
[0064] 谷氨酸（GLU)ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科技有限公司分 裝，生產批號：E-30324。
[0065] Y -氨基丁酸（GABA) ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科技有限 公司分裝，生產批號：E-31033。
[0066] 2.實驗設計及方案
[0067] 2. 1行為敏化實驗
[0068] 2. 1. 1實驗裝置ZZ-6小鼠自發活動分析系統：2排X3個的六宮格自發活動箱（同 時測量六只小鼠自發活動、高分辨率的36個紅外陣列探頭裝置及PC機數據通訊采集分析 功能。材料為雙層鋁塑板，隔音隔光，具有通風裝置。由紅外探頭記錄動物活動狀況，計算 動物的自發活動次數。
[0069] 2. 1. 2實驗方法及實驗流程
[0070] 適應階段：在適應性喂養一周的同時，稱重所有的實驗小鼠，灌胃等量的生理鹽 水后立即放入自主活動測試儀中，使小鼠能夠適應測試的實驗環境，時間為15分鐘。第7 天適應后，所有的小鼠放入自主活動測試儀中測試小鼠的自主活動基線，隨后被隨機分為4 個大組。適應期的目的是讓KM小鼠適應測試裝置，排除環境、灌胃等因素對小鼠自主活動 的影響，并記錄它們正常的活動次數。
[0071] 形成階段：在測試自主活動基線后，小鼠在半小時之前灌胃中藥或者鹽水，隨后灌 胃（2. 2g/kg)的酒精或者生理鹽水，即形成鹽水組+鹽水組（S+S組，η = 40,中藥組+鹽水 組（z+s，η = 40)，鹽水組+酒精組（s+e，η = 40.)，中藥組+酒精組（z+e, η = 40)在酒精 或者生理鹽水灌胃5min后立即放入測試儀中測試15分鐘，實驗隔天進行一次，總共10天、 進行5次。在經歷48小時轉換期之后，激發階段開始。
[0072] 激發階段：每個實驗大組組，再次被組內隨機分成4個亞組。藥物激發階段小鼠分 別接受鹽水，酒精組、中藥組、中藥+酒精組的激發，5min后立即放入自主活動測試儀中，測 試15分鐘。測試完成后，將鹽水+鹽水+酒精組（η = 10)，鹽水+酒精組+酒精組（s+e+e， η = 10)小鼠，鹽水+酒精組+中藥組+酒精組（s+e+z+e, η = 10)小鼠，中藥組+酒精組 +酒精組（s+e+e，n= 10)小鼠，這4個亞組的小鼠立即斷頭處死，取腦組織，檢測中腦邊緣 腹側被蓋區（VTA)及其投射區伏隔核的（NAC)的多巴胺（DA)，海馬區、杏仁核區的谷氨酸 (GLU)，腹側被蓋區（VTA)和NAC區的γ-氨基丁酸（GABA)這3個神經遞質中藥干預前后 的變化。
[0073] 2. 2條件位置偏好實驗（CPP)
[0074] 2. 2. 1實驗裝置CPP-100條件位置偏愛測試儀：它通過將小鼠置于測試箱的灰色 觀察區域，然后觀察實驗動物在測試箱的三個（白色箱長X寬X高=280X210 X 210mm、 灰色箱長X寬X高=120X210X210mm、黑色箱長X寬X高=280X210X21mm)區域的 活動情況，從而得到實驗動物是喜好呆在暗色區域還是明色區域的定量結果數據，是用于 評價藥物的獎賞效應和尋找抗覓藥行為的有效依據。
[0075] 2. 2. 2實驗步驟本實驗采用偏性實驗程序。實驗分為預適應期、訓練期、表達測試 3個階段，在整個實驗過程中保證箱內光線、色調、氣味等環境條件的一致。
[0076] 預適應期（第_3?-1天），將小鼠放入CPP箱中，由中間箱放入，打開閘門讓其自 由穿梭15分鐘，每天一次，連續3天，并且每天灌胃生理鹽水，以消除實驗操作對小鼠的影 響，第3天記錄小鼠在黑、白、中間箱中停留的時間，記錄15min時間內小鼠在不同區域中停 留的時間，作為小鼠天然偏愛效應的指標，停留時間長的一側作為非伴藥箱，停留時間短 的一側作為伴藥箱。并且剔除對黑箱和白箱有明顯偏愛的小鼠（將在一側停留時間>650S 的剔除）。在本實驗條件下，小鼠天然偏愛黑色，故我們采用有偏性的實驗設計，選白箱為伴 藥箱，黑箱為非伴藥箱。
[0077] 形成期（第1?10天），每只小鼠每天接受一次訓練，酒精每隔一天給藥一次。具 體為，若第一天腹腔灌胃酒精（2. 2g/kg)或者中藥，放入伴藥箱訓練15分鐘，則第二天皮下 灌胃相同體積的生理鹽水（NS)，放入非伴藥箱訓練15分鐘。鹽水對照組均注射生理鹽水， 中藥復方在酒精灌胃之前半小時予以提前給藥。依次類推，5個訓練周期，形成4各組，即鹽 水組（s+s)、酒精對照組（e+s)、中藥組（z+s)、中藥干預組（z+e)。訓練時間固定為每天上 午的8點到9點之間。
[0078] 測試期（第11天），考慮訓練前期小鼠天然偏愛差異并不顯著，因此我們在第五 天訓練開始之后，每對酒精與生理鹽水訓練后為條件訓練期，故在每個條件訓練期后24小 時，分別在第6、8、10天測試CPP的表達。在第11天的測試階段，測試之前小鼠不給藥直接 放入中間箱打開隔板，測定15min內小鼠在伴藥箱和非伴藥箱的停留時間，測量小鼠 CPP獲 得的情況。
[0079] 2. 3觀察指標及檢測方法
[0080] 2. 3. 1采用ZZ-6小鼠自發活動測試儀測定行為敏化實驗小鼠實驗中的自發活動 次數。
[0081] 2. 3. 2采用CPP-100條件位置偏好測試儀測定CPP實驗組各組小鼠在伴藥箱和非 伴藥箱的停留時間。
[0082] 2. 3. 3采用ELISA分析法測定小鼠腦組織，檢測多巴胺、谷氨酸、γ -氨基丁酸的濃 度水平。
[0083] 3.統計學方法
[0084] 各組實驗數據均以表示，采用SPSS17. 0軟件進行統計分析，兩組比較采用 t檢驗；多組間比較采用One-Way AN0VA分析，然后用LSD法進行兩兩比較；行為敏化實驗 激發期多組間比較采用協方差分析方法。
[0085] 4.實驗結果
[0086] 4. 1行為敏化的實驗結果
[0087] 4. 1. 1實驗適應期各組小鼠的自主活動基線比較：如圖1所示為各組小鼠適應期 的自主活動測試基線，由圖可見，與正常對照組比較，中藥組、酒精組、中藥+酒精組各組 小鼠的自主活動基線并沒有統計學差異，P>〇. 05。
[0088] 4. 1. 2中藥復方本發明重復給藥對小鼠自主活動的影響：圖2所示為小鼠10 天5次測試期間，鹽水組，中藥組，酒精組（2. 2g/kg)，中藥+酒精組各組之間自主活動的 比較。重復測量方差分析的結果顯示交互作用時間X處理（F = 18.573, P〈0. 01，予以 Huynh-Feldt 法矯正），時間因素 （F = 40. 098, Ρ〈(λ 01，予以 Huynh-Feldt 法矯正），處理 因素（F= 198. 010，P〈0. 01)，各處理組之間隨著隨著測試天數的變化連趨勢有著顯著的差 異。Bonferroni posttests法進行多重比較的結果顯示，第4、5次測試小鼠總的自主活動 次數顯著高于前三組（P〈〇. 01)。中藥組與鹽水對照組之間小鼠的自主活動沒有統計學差異 (P>0. 05)，提示中藥復方本身對小鼠的自主活動并沒有影響。酒精模型組與鹽水組對照組 相比在5次測試期間小鼠的自主活動具有明顯的統計學差異（P〈0.01)，提示酒精組小鼠的 自主活動明顯高于鹽水對照組，酒精能夠引起小鼠的高活動性。在第1、2、3次測試結果顯 示，中藥+酒精組與鹽水組、中藥組相比小鼠的自主活動并沒有差異（P>〇. 05)，而在第4、5 次中藥+酒精組小鼠的活動次數高于鹽水對照組，中藥組（P〈〇. 05)。中藥+酒精組與酒精 模型組相比，在第2、3、4、5次測試期小鼠的自主活動次數明顯低于酒精模型組，提示在酒 精灌胃之前，予以中藥復方能夠減少酒精誘導的小鼠自主活動次數，即說明中藥復方對酒 精誘導的小鼠行為敏化的形成過程具有作用。
[0089] 4. 1. 3中藥復方本發明本身對小鼠行為敏化形成期與表達期的影響（圖3)
[0090] 4. 1. 3. 1中藥復方本發明本身對小鼠行為敏化形成與表達的影響。
[0091] 如圖3-1所示，中藥復方，分別接受酒精（2. 2g/kg)、中藥（1.8g/kg)、中藥+酒精 激發下各組小鼠的自主活動次數并沒有差異性（P>〇. 05)，提示中藥復方對小鼠行為敏化模 型形成與表達并沒有作用。
[0092] 4. 1. 3. 2酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型的建立。
[0093] 如圖3-2所示，酒精模型組接受酒精激發之后，與鹽水激發相比小鼠的自主活動 表現出差異性顯著（p〈0.01)，表明由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型已經建立。
[0094] 4. 1. 3. 3中藥復方本發明聯合酒精干預對小鼠行為敏化表達的影響。如圖3--3所 示：酒精模型組在接受中藥激發后，與鹽水激發組相比小鼠的自主活動次數并沒有統計學 差異（P>0. 05)，提示復方并不能影響酒精組小鼠行為敏化的表達。而在小鼠予以酒精激發 之前半小時，我們予以中藥復方提前灌胃，結果顯示與單純酒精激發組相比，中藥+酒精組 激發對小鼠行為敏化的表達具有顯著的抑制作用，兩組存在顯著差異性（P〈〇. 01)，提示中 藥復方與酒精聯合應用能夠顯著抑制酒精誘導的小鼠行為敏化的表達。
[0095] 4. 1. 3. 4中藥復方本發明聯合酒精干預對小鼠行為敏化形成的影響。
[0096] 如圖3-4所示，中藥+酒精組在接受酒精激發后與鹽水組激發相比，小鼠的自主活 動次數并沒有增加，沒有統計學差異（P>〇. 05)。提示在經過10天中藥與酒精聯合、重復給 藥后，中藥+酒精組小鼠沒有形成行為敏化，而接受相同劑量酒精灌胃后的小鼠在酒精激 發后（圖3-4)，顯示出顯著的小鼠行為敏化，證明中藥復方對小鼠的行為敏化的形成具有 抑制作用。
[0097] 4. 1.4中藥復方本發明對由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型形成期多巴胺 (DA)、谷氨酸（GLU)、γ-氨基丁酸（GABA)含量的變化（圖4)。在由酒精誘導的小鼠行為 敏化形成期，酒精行為敏化組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水組相比顯著升高 (P〈0. 01)。中藥復方干預組的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平與鹽水對照組相比并沒有差 異（P>0. 05)，而與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平 明顯減少（P〈〇. 01)。同樣的，在氨基丁酸（GABA)三組的組間比較中，我們發現，與鹽水 對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著（P〈0. 01)，而中藥干預組與酒精敏化模型組相 t匕，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放。
[0098] 4. 1.5本發明中藥復方對由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型表達期多巴胺 (DA)、谷氨酸（GLU)、γ-氨基丁酸（GABA)含量的變化（圖5)。在由酒精誘導的小鼠行為 敏化的表達期，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平與酒精模型組相比， 明顯減少（P〈〇.〇l)。同樣的，在氨基丁酸（GABA)三組的組間比較中，中藥干預組與酒 精敏化模型組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放。
[0099] 4. 2條件位置偏好實驗（CPP)的實驗結果
[0100] 4. 2. 1小鼠的天然偏好效應實驗（圖6):如圖6所示，小鼠在900S的預測試時間 中，在黑色盒子停留時間為609. 97 士 4. . 466S，365. 75 士 67. 686 (P〈0. 01)。結果提示，小 鼠對四周為黑色、底面為粗糙網狀盒子具有天然偏愛性，因此，我們采用有偏性的實驗設 計將白色盒子作為伴藥盒，黑色盒子作為非伴藥盒。
[0101] 4. 2. 2中藥復方本發明自身的位置偏愛及酒精誘導的小鼠 CPP的建立（圖7): 如圖7所示，經過10天5個訓練期后，測試期中藥組在白色伴藥箱停留時間為259. 58 士 20. 586S，鹽水組為268. 33. 士 41. 033S兩組相比沒有統計學差異（P>0. 05)，提示中藥復方 組自身對小鼠的天然位置偏愛選擇沒有影響。而酒精組小鼠在測試期白色伴藥箱停留時間 為546. 67 士 57. 917S，相對于生理鹽水組具有顯著性差異（P〈0. 01)，結果提示酒精（2. 2g/ kg)可以誘導小鼠條件位置性偏愛形成。
[0102] 4. 2. 3中藥復方本發明對酒精誘導小鼠 CPP形成期影響（圖8):如圖8所示，與酒 精組相比，中藥復方呈時程相關性抑制酒精誘導的小鼠條件位置偏愛的形成過程。中藥復 方在3個測試期的結果顯示均可以顯著抑制酒精誘導的小鼠 CPP的形成（P〈0. 05)，而到第 3個測試階段顯示，中藥對于酒精誘導的CPP形成具有明顯的抑制作用（P〈0. 01)。
[0103] 5.結論
[0104] 本發明復方不僅能降低酒精引起的小鼠高活動性，對酒精誘導的小鼠行為敏化的 形成和表達都有顯著抑制的作用，表明本發明復方能夠干預酒精成癮小鼠軀體依賴的形成 及戒酒之后發生的復飲行為。CPP實驗中，本發明復方具有防止酒精誘導的小鼠條件位置偏 好模型的形成，即能夠干預小鼠對于的精神依賴的形成。至為關鍵的是，本發明復方能夠減 少小鼠中腦邊緣獎賞系統DA、Glu神經遞質的釋放，增加抑制性神經遞質GBBA的傳遞，從而 奠定了本發明防治小鼠中樞神經系統的可塑性變化的神經生物學基礎，從而起到戒除酒精 成癮心理與行為依賴的作用，為中醫藥防治酒精成癮及酒精依賴提供新的治法和制劑。
[0105] 試驗例2本發明藥物對酒精成癮小鼠行為敏化動物模型和條件位置偏愛模型影 響的實驗研究。
[0106] 1.實驗材料
[0107] 1. 1實驗動物：3個月大雄性清潔級昆明株小鼠，進入實驗室的體重25?30g之 間。小鼠及飼料均由由成都達碩動物實驗公司提供，動物合格證編號：SCXK(11)2013-24。 購入后置于成都中醫藥大學中醫臟腑實驗室（國家二級）飼養。
[0108] 1. 2實驗藥物：實施例5所述的原料用量及方法制備，由成都中醫藥大學藥學院中 藥制劑研究室提供。批號：20130111 ;臨床擬定劑量為每日服用原生藥材40g，按成人體重 一般60kg計算，人用劑量為原生藥材0. 66g/kg體重。實驗室配成分別為5. 94g/kg/d(相 當于臨床擬定劑量的9倍）。給藥體積0. lml/10g體重。
[0109] 1. 3實驗器材：小鼠飼養裝置、灌胃針（成都中醫藥大學實驗室），小鼠腦組織切取 裝置及液氮儲存罐（成都里來生物科技有限公司），CPP-100條件位置偏好實驗儀、ZZ-6 自發活動測試儀（成都泰盟科技有限公司），計算機：型號：TFT185W80PS (冠捷顯示科技有 限公司）、酶標儀：型號：Multlskan Mk3 (賽默飛世爾儀器有限公司）、電子恒溫水浴鍋：型 號DZKW-4(北京中興偉業儀器有限公司）。
[0110] 1. 4實驗試劑：多巴胺（DA) ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科 技有限公司分裝，生產批號：E-30236。
[0111] 谷氨酸（GLU)ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科技有限公司分 裝，生產批號：E-30324。
[0112] 氨基丁酸（GABA) ELISA檢測試劑盒：Abeam公司生產，北京輝瑞生物科技有限 公司分裝，生產批號：E-31033。
[0113] 2.實驗設計及方案
[0114] 2.1行為敏化實驗
[0115] 2. 1. 1實驗裝置ZZ-6小鼠自發活動分析系統：2排X3個的六宮格自發活動箱（同 時測量六只小鼠自發活動、高分辨率的36個紅外陣列探頭裝置及PC機數據通訊采集分析 功能。材料為雙層鋁塑板，隔音隔光，具有通風裝置。由紅外探頭記錄動物活動狀況，計算 動物的自發活動次數。
[0116] 2. 1. 2實驗方法及實驗流程
[0117] 適應階段：在適應性喂養一周的同時，稱重所有的實驗小鼠，灌胃等量的生理鹽 水后立即放入自主活動測試儀中，使小鼠能夠適應測試的實驗環境，時間為15分鐘。第7 天適應后，所有的小鼠放入自主活動測試儀中測試小鼠的自主活動基線，隨后被隨機分為4 個大組。適應期的目的是讓KM小鼠適應測試裝置，排除環境、灌胃等因素對小鼠自主活動 的影響，并記錄它們正常的活動次數。
[0118] 形成階段：在測試自主活動基線后，小鼠在半小時之前灌胃中藥或者鹽水，隨后灌 胃（2. 2g/kg)的酒精或者生理鹽水，即形成鹽水組+鹽水組（s+s組，η = 40,中藥組+鹽水 組（Z+S，η = 40)，鹽水組+酒精組（s+e，η = 40.)，中藥組+酒精組（Ζ+Ε, Ν = 40)在酒精 或者生理鹽水灌胃5min后立即放入測試儀中測試15分鐘，實驗隔天進行一次，總共10天、 進行5次。在經歷48小時轉換期之后，激發階段開始。
[0119] 激發階段：每個實驗大組組，再次被組內隨機分成4個亞組。藥物激發階段小鼠分 別接受鹽水，酒精組、中藥組、中藥+酒精組的激發，5min后立即放入自主活動測試儀中，測 試15分鐘。測試完成后，將鹽水+鹽水+酒精組（η = 10)，鹽水+酒精組+酒精組（s+e+e， η = 10)小鼠，鹽水+酒精組+中藥組+酒精組（s+e+z+e, η = 10)小鼠，中藥組+酒精組 +酒精組（s+e+e，n= 10)小鼠，這4個亞組的小鼠立即斷頭處死，取腦組織，檢測中腦邊緣 腹側被蓋區（VTA)及其投射區伏隔核的（NAC)的多巴胺（DA)，海馬區、杏仁核區的谷氨酸 (GLU)，腹側被蓋區（VTA)和NAC區的γ-氨基丁酸（GABA)這3個神經遞質中藥干預前后 的變化。
[0120] 2. 2條件位置偏好實驗（CPP)
[0121] 2. 2. 1實驗裝置CPP-100條件位置偏愛測試儀：它通過將小鼠置于測試箱的灰色 觀察區域，然后觀察實驗動物在測試箱的三個（白色箱長X寬X高=280X210 X 210mm、 灰色箱長X寬X高=120X210X210mm、黑色箱長X寬X高=280X210X21mm)區域的 活動情況，從而得到實驗動物是喜好呆在暗色區域還是明色區域的定量結果數據，是用于 評價藥物的獎賞效應和尋找抗覓藥行為的有效依據。
[0122] 2. 2. 2實驗步驟本實驗采用偏性實驗程序。實驗分為預適應期、訓練期、表達測試 3個階段，在整個實驗過程中保證箱內光線、色調、氣味等環境條件的一致。
[0123] 預適應期（第-3?-1天），將小鼠放入CPP箱中，由中間箱放入，打開閘門讓其自 由穿梭15分鐘，每天一次，連續3天，并且每天灌胃生理鹽水，以消除實驗操作對小鼠的影 響，第3天記錄小鼠在黑、白、中間箱中停留的時間，記錄15min時間內小鼠在不同區域中停 留的時間，作為小鼠天然偏愛效應的指標，停留時間長的一側作為非伴藥箱，停留時間短 的一側作為伴藥箱。并且剔除對黑箱和白箱有明顯偏愛的小鼠（將在一側停留時間>650S 的剔除）。在本實驗條件下，小鼠天然偏愛黑色，故我們采用有偏性的實驗設計，選白箱為伴 藥箱，黑箱為非伴藥箱。
[0124] 形成期（第1?10天），每只小鼠每天接受一次訓練，酒精每隔一天給藥一次。具 體為，若第一天腹腔灌胃酒精（2. 2g/kg)或者中藥，放入伴藥箱訓練15分鐘，則第二天皮下 灌胃相同體積的生理鹽水（NS)，放入非伴藥箱訓練15分鐘。鹽水對照組均注射生理鹽水， 中藥復方在酒精灌胃之前半小時予以提前給藥。依次類推，5個訓練周期，形成4各組，即鹽 水組（s+s)、酒精對照組（e+s)、中藥組（z+s)、中藥干預組（z+e)。訓練時間固定為每天上 午的8點到9點之間。
[0125] 測試期（第11天），考慮訓練前期小鼠天然偏愛差異并不顯著，因此我們在第五 天訓練開始之后，每對酒精與生理鹽水訓練后為條件訓練期，故在每個條件訓練期后24小 時，分別在第6、8、10天測試CPP的表達。在第11天的測試階段，測試之前小鼠不給藥直接 放入中間箱打開隔板，測定15min內小鼠在伴藥箱和非伴藥箱的停留時間，測量小鼠 CPP獲 得的情況。
[0126] 2. 3觀察指標及檢測方法
[0127] 2. 3. 1采用ZZ-6小鼠自發活動測試儀測定行為敏化實驗小鼠實驗中的自發活動 次數。
[0128] 2. 3. 2采用CPP-100條件位置偏好測試儀測定CPP實驗組各組小鼠在伴藥箱和非 伴藥箱的停留時間。
[0129] 2. 3. 3采用ELISA分析法測定小鼠腦組織，檢測多巴胺、谷氨酸、氨基丁酸的濃 度水平。
[0130] 3.統計學方法
[0131] 各組實驗數據均以i士表示，采用SPSS17. 0軟件進行統計分析，兩組比較采用 t檢驗；多組間比較采用One-Way AN0VA分析，然后用LSD法進行兩兩比較；行為敏化實驗 激發期多組間比較采用協方差分析方法。
[0132] 4.實驗結果
[0133] 4. 1行為敏化的實驗結果
[0134] 4. 1. 1實驗適應期各組小鼠的自主活動基線比較：如圖9所示為各組小鼠適應期 的自主活動測試基線，由圖可見，與正常對照組比較，中藥組、酒精組、中藥+酒精組各組 小鼠的自主活動基線并沒有統計學差異，P>〇. 05。
[0135] 4. 1. 2中藥復方本發明重復給藥對小鼠自主活動的影響：圖10所示為小鼠10 天5次測試期間，鹽水組，中藥組，酒精組（2. 2g/kg)，中藥+酒精組各組之間自主活動的 比較。重復測量方差分析的結果顯示交互作用時間X處理（F= 19.473, P〈0. 01，予以 Huynh-Feldt法矯正），時間因素 （F = 4L 098, Ρ〈(λ 01，予以Huynh-Feldt法矯正），處理 因素（F= 198. 030，P〈0. 01)，各處理組之間隨著隨著測試天數的變化連趨勢有著顯著的差 異。Bonferroni posttests法進行多重比較的結果顯示，第4、5次測試小鼠總的自主活動 次數顯著高于前三組（P〈〇. 01)。中藥組與鹽水對照組之間小鼠的自主活動沒有統計學差異 (P>0. 05)，提示中藥復方本身對小鼠的自主活動并沒有影響。酒精模型組與鹽水組對照組 相比在5次測試期間小鼠的自主活動具有明顯的統計學差異（P〈0.01)，提示酒精組小鼠的 自主活動明顯高于鹽水對照組，酒精能夠引起小鼠的高活動性。在第1、2、3次測試結果顯 示，中藥+酒精組與鹽水組、中藥組相比小鼠的自主活動并沒有差異（P>〇. 05)，而在第4、5 次中藥+酒精組小鼠的活動次數高于鹽水對照組，中藥組（P〈〇. 05)。中藥+酒精組與酒精 模型組相比，在第2、3、4、5次測試期小鼠的自主活動次數明顯低于酒精模型組，提示在酒 精灌胃之前，予以中藥復方能夠減少酒精誘導的小鼠自主活動次數，即說明中藥復方對酒 精誘導的小鼠行為敏化的形成過程具有作用。
[0136] 4. 1. 3中藥復方本發明本身對小鼠行為敏化形成期與表達期的影響（圖11)
[0137] 4. 1. 3. 1中藥復方本發明本身對小鼠行為敏化形成與表達的影響。
[0138] 如圖11-1所示，中藥復方，分別接受酒精（2. 2g/kg)、中藥（1.8g/kg)、中藥+酒精 激發下各組小鼠的自主活動次數并沒有差異性（P>〇. 05)，提示中藥復方對小鼠行為敏化模 型形成與表達并沒有作用。
[0139] 4. 1. 3. 2酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型的建立。
[0140] 如圖11-2所示，酒精模型組接受酒精激發之后，與鹽水激發相比小鼠的自主活動 明顯增加表現出顯著的差異性（P〈〇. 01)，表明由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型已經建 立。
[0141] 4. 1. 3. 3中藥復方本發明聯合酒精干預對小鼠行為敏化表達的影響。如圖11-3所 示：酒精模型組在接受中藥激發后，與鹽水激發組相比小鼠的自主活動次數并沒有統計學 差異（P>0. 05)，提示復方并不能影響酒精組小鼠行為敏化的表達。而在小鼠予以酒精激發 之前半小時，我們予以中藥復方提前灌胃，結果顯示與單純酒精激發組相比，中藥+酒精組 激發對小鼠行為敏化的表達具有顯著的抑制作用，兩組存在顯著差異性（P〈〇. 01)，提示中 藥復方與酒精聯合應用能夠顯著抑制酒精誘導的小鼠行為敏化的表達。
[0142] 4. 1. 3. 4中藥復方本發明聯合酒精干預對小鼠行為敏化形成的影響。
[0143] 如圖11-4所示，中藥+酒精組在接受酒精激發后與鹽水組激發相比，小鼠的自主 活動次數并沒有增加，沒有統計學差異（P>〇. 05)。提示在經過10天中藥與酒精聯合、重復 給藥后，中藥+酒精組小鼠沒有形成行為敏化，而接受相同劑量酒精灌胃后的小鼠在酒精 激發后，顯示出顯著的小鼠行為敏化，證明中藥復方對小鼠的行為敏化的形成具有抑制作 用。
[0144] 4. 1.4中藥復方本發明對由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型形成期多巴胺 (DA)、谷氨酸（GLU)、γ -氨基丁酸（GABA)含量的變化（圖12)。在由酒精誘導的小鼠行為 敏化形成期，酒精行為敏化組小鼠多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)含量與鹽水組相比顯著升高 (P〈0. 01)。中藥復方干預組的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平與鹽水對照組相比并沒有差 異（P>0. 05)，而與酒精模型組相比，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平 明顯減少（P〈〇. 01)。同樣的，在氨基丁酸（GABA)三組的組間比較中，我們發現，與鹽水 對照組相比，酒精模型組（GABA)減少較顯著（P〈0. 01)，而中藥干預組與酒精敏化模型組相 t匕，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放。
[0145] 4. 1.4中藥復方本發明對由酒精誘導的小鼠行為敏化動物模型表達期多巴胺 (DA)、谷氨酸（GLU)、γ -氨基丁酸（GABA)含量的變化（圖13)。在由酒精誘導的小鼠行為 敏化的表達期，中藥復方干預組小鼠的多巴胺（DA)、谷氨酸（GLU)水平與酒精模型組相比， 明顯減少（P〈〇.〇l)。同樣的，在氨基丁酸（GABA)三組的組間比較中，中藥干預組與酒 精敏化模型組相比，能夠增加小鼠腦內（GABA)的釋放。
[0146] 4. 2條件位置偏好實驗（CPP)的實驗結果
[0147] 4. 2. 1小鼠的天然偏好效應實驗（圖14):如圖14所示，小鼠在900S的預測試時 間中，在黑色盒子停留時間為589. 97 士 4. 466S，386. 75 士 67. 686 (P〈0. 01)。結果提示， 小鼠對四周為黑色、底面為粗糙網狀盒子具有天然偏愛性，因此，我們采用有偏性的實驗 設計將白色盒子作為伴藥盒，黑色盒子作為非伴藥盒。
[0148] 4. 2. 2中藥復方本發明自身的位置偏愛及酒精誘導的小鼠 CPP的建立（圖15): 如圖15所示，經過10天5個訓練期后，測試期中藥組在白色伴藥箱停留時間為249. 58 士 20. 586S，鹽水組為268. 33. 士 41. 033S兩組相比沒有統計學差異（P>0. 05)，提示中藥復方 組自身對小鼠的天然位置偏愛選擇沒有影響。而酒精組小鼠在測試期白色伴藥箱停留時間 為533. 67 士 57. 917S，相對于生理鹽水組具有顯著性差異（P〈0. 01)，結果提示酒精（2. 2g/ kg)可以誘導小鼠條件位置性偏愛形成。
[0149] 4. 2. 3中藥復方本發明對酒精誘導小鼠 CPP形成期影響（圖16)如圖16所示，與 酒精組相比，中藥復方呈時程相關性抑制酒精誘導的小鼠條件位置偏愛的形成過程。中藥 復方在3個測試期的結果顯示均可以顯著抑制酒精誘導的小鼠 CPP的形成（P〈0. 05)，而到 第3個測試階段顯示，中藥對于酒精誘導的CPP形成具有明顯的抑制作用（P〈0. 01)。
[0150] 5.結論
[0151] 本發明復方不僅能降低酒精引起的小鼠高活動性，對酒精誘導的小鼠行為敏化的 形成和表達都有顯著抑制的作用，表明本發明復方能夠干預酒精成癮小鼠軀體依賴的形成 及戒酒之后發生的復飲行為。CPP實驗中，本發明復方具有防止酒精誘導的小鼠條件位置偏 好模型的形成，即能夠干預小鼠對于的精神依賴的形成。至為關鍵的是，本發明復方能夠減 少小鼠中腦邊緣獎賞系統DA、Glu神經遞質的釋放，增加抑制性神經遞質GBBA的傳遞，從而 奠定了本發明防治小鼠中樞神經系統的可塑性變化的神經生物學基礎，從而起到戒除酒精 成癮心理與行為依賴的作用，為中醫藥防治酒精成癮及酒精依賴提供新的治法和制劑。
【權利要求】
1. 含有下述重量配比的原料藥在制備治療酒精成癮或/和依賴的藥物中的用途：附子 或烏頭3-10份，黃芪3-35份。
2. 根據權利要求1所述的用途，其特征在于：所述的藥物是由下述重量配比的原料藥 制備而成的制劑： 附子或烏頭3-10份，黃芪3-35份。
3. 根據權利要求2所述的用途，其特征在于：所述的原料藥重量配比為：附子或烏頭 5-10份，黃芪10-35份。
4. 根據權利要求3所述的用途，其特征在于：所述的原料藥重量配比為：附子或烏頭 10份，黃芪35份。
5. 根據權利要求1-4任意一項所述的用途，其特征在于：所述的附子或烏頭為生附子 和/或制附子；所述的烏頭為川烏或草烏；所述的黃芪為生黃芪和/或炙黃芪。
6. 根據權利要求1-5任意一項所述的用途，其特征在于：所述的制劑是口服制劑。
7. 根據權利要求6所述的用途，其特征在于：所述的口服制劑是顆粒劑、散劑、丸劑、膠 囊劑、軟膠囊劑、片劑或口服液。
8. 根據權利要求1所述的用途，其特征在于：所述的藥物的制備方法包括如下步驟： a、 稱取原料藥； b、 將原料藥直接打粉，或加水煎煮，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥 學上常用的制劑。
9. 根據權利要求1所述的用途，其特征在于：所述的藥物是治療長期飲酒導致脾胃濕 熱，日久濕從寒化，損傷陽氣，形成的脾腎陽虛之證的藥物。
【文檔編號】A61K36/714GK104083461SQ201410363383
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月28日 優先權日:2014年7月28日
【發明者】扈曉宇, 林武, 扈曉剛 申請人:成都中醫藥大學附屬醫院