光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途
【專利摘要】本發明涉及醫藥【技術領域】，光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的新用途。體外實驗表明，光甘草定對真菌感染有較好的治療效果，并能使抗真菌藥物氟康唑恢復對耐藥真菌的作用，因此光甘草定可用作抗真菌藥物的增效劑。本發明為光甘草定開辟了新的用途，將其用于抗真菌藥物的增效劑，不僅為真菌治療提供了新的候選藥物，而且提高了現有藥物的抗真菌作用，在臨床真菌耐藥性日趨普遍、耐藥程度日趨嚴重的情況下，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，降低了抗真菌藥物的用藥劑量，從而為患者節省了醫療費用，減少藥物的毒副作用。
【專利說明】光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥【技術領域】，具體涉及一種光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途。
【背景技術】
[0002]光甘草定是光果甘草中的異黃烷類成分之一。現代藥理研究顯示，光甘草定具有抗菌、抗氧化、降血脂和降壓等藥理作用，雖然亦有光甘草定體外抗真菌作用的報道，但未見光甘草定作為抗真菌藥物增效劑，與抗真菌唑類藥物聯合使用治療真菌病的報道。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途。體外細胞實驗表明，當抗真菌藥物氟康唑和光甘草定合用時，能明顯降低抗真菌藥物的用藥劑量，并增強對耐藥真菌的抑制作用，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用。因此可將光甘草定用作抗真菌藥物的增效劑。
本發明提出一種光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，其中:所述光甘草定為光果甘草中的異黃烷類成分，抗真菌藥物為唑類藥物。
[0004]本發明中，所述真菌包括I)敏感菌株:敏感白色念珠菌(SC5314)，近平滑念珠菌(22019)，新生隱球菌32609 ;2)耐藥菌株:耐藥白色念珠菌(103)，耐藥熱帶念珠菌
本發明中，所述耐藥菌株是對氟康唑耐受，敏感菌株是對氟康唑敏感。
[0005]本發明為光甘草定開辟了新的用途，將其用于制備抗真菌藥物的增效劑，不僅為真菌治療提供了新的候選藥物，而且提高了現有藥物的抗真菌作用，在臨床真菌耐藥性日趨普遍、耐藥程度日趨嚴重的情況下，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，降低了抗真菌藥物的用藥劑量，從而為患者節省了醫療費用，減少藥物的毒副作用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0006]圖1為不同濃度的光甘草定單用或與氟康唑合用時，對耐藥白念珠菌的抑菌圈圖。A平板為光甘草定單用(濃度為64，32，16，8mg)對耐藥白念珠菌103的抑菌圈；B平板為光甘草定(濃度為64，32，16，8mg)與氟康唑(FLC，濃度為64mg/ml)合用對耐藥白念珠菌103的抑菌圈；(:平板為光甘草定(濃度為64，32，16，8mg)與氟康唑(FLC，濃度為8mg)合用對耐藥白念珠菌103的抑菌圈。
[0007]圖2為不同濃度的光甘草定單用或與氟康唑合用時，分別對敏感白念珠菌，熱帶念珠菌和新生隱球菌的抑菌圈圖。第一行的平板為光甘草定單用(濃度為64，32，16，8mg)分別對敏感白念珠菌(C aJ^ica/75.),熱帶念珠菌{C.tropical is)和新生隱球菌{C.neoformans)的抑菌圈；第二行的平板為光甘草定(濃度為64, 32,16,8mg)與氟康唑(FLC,濃度為8mg)合用分別對敏感白念珠菌(C a76ica/?5.),熱帶念珠菌(C iropicaJis)和新生隱球菌iC.neoformans)的抑菌圈。
【具體實施方式】
[0008]以下所列實施例，僅為幫助本領域技術人員更全面理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
[0009]實施例1.光甘草定與氟康唑聯合對不同臨床真菌株的作用材料和方法
1.試藥:
光甘草定:購于上海融禾醫藥科技發展有限公司，純度>98%。
[0010]氟康唑:sigma公司，批號 460M4707V。
[0011]二甲亞砜:上海世儀生物科技有限公司。
[0012]各試藥置于_20°C保存。實驗前，將藥物取出置于35°C溫箱融化，充分混勻，分別進行藥效學檢驗。
[0013]2.菌株:
臨床株:1)白念珠菌分別為SC5314 I株和25株臨床耐藥白念菌分離株；2)熱帶念珠菌2718，1株；3)新生隱球菌，I株。菌株均由上海長海醫院真菌室提供，分別采自長海醫院不同科室臨床樣本，并經形態學和生化學鑒定。
[0014]所有實驗用菌株均于沙堡葡萄糖瓊脂培養基(SDA)劃板活化，白念珠菌、熱帶念珠菌、新生隱球菌等球狀菌于30°C培養2周后，分別挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所得單克隆置SDA斜面，用上述方法培養后于4°C保存備用。
[0015]3.培養液:
I) RPMI 1640液體培養液:
RPMI1640 (Gibco BRL)10 g, NaHCO3 2.0 g，嗎啡啉丙磺酸(Sigma) 34.5 g(0.165 Μ),加三蒸水900 ml溶解，I N NaOH調pH至7.0 (25°C )，三蒸水定容至1000 ml，0.22Mm微孔濾膜過濾除菌，分裝后于4°C保存備用。
[0016]2)沙堡葡萄糖瓊脂固體培養基(SDA):
蛋白胨10 g，葡萄糖40 g，瓊脂18 g，加三蒸水900 ml溶解，加入2 mg/ml氯霉素水溶液50 ml，調整pH至7.0，以三蒸水定容至1000 ml，高壓滅菌(121°C，15min)后于4°C保存備用。
[0017]3 ) YEro 培養液:
酵母浸膏10 g，蛋白胨20 g,葡萄糖20 g,加三蒸水900 ml溶解,加入2 mg/ml氯霉素水溶液50 ml，三蒸水定容至1000 1111，高壓滅菌(1211:，151^11)后于41:保存備用。
[0018]4.儀器設備:
Multiskan MK3型酶標檢測儀(芬蘭Labsystems產品)；
隔水式電熱恒溫培養箱(上海躍進醫療器械廠);
THZ - 82A臺式恒溫振蕩器(上海躍進醫療器械廠)；
Sff-CT-1F型超凈化工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司)；
5.光甘草定和氟康唑貯備液:
將光甘草定和氟康唑用DMSO溶解，配成濃度6.4mg/ml，于_20°C保存備用。
[0019]6.菌液制備:實驗前，用接種圈從4°C保存的SDA培養基上分別挑取白念珠菌、熱帶念珠菌、新生隱球菌各球狀菌少量，分別接種至I ml YEPD培養液，于3(TC，200 rpm振蕩培養，活化16h，使真菌處于指數生長期后期。然后將各菌液分別加至I mlYEro培養液中，用上述方法再次活化，培養16 h，用血細胞計數板計數，以RPMI 1640培養液分別調整各菌液濃度至IXlO3 ~5X103CFU/ml。
[0020]7.藥敏板制備:
各菌株分別取無菌96孔板一塊，于每排I號孔加RPMI 1640液體培養基100μΙ作空白對照；3~12號孔各加上述新鮮配制的菌液100μΙ ；2號孔加菌液198μ1 ；12號孔不含藥物，只加菌液100μΙ作陽性生長對照。在每排的2號孔加母液濃度為0.5g/ml的光甘草定或氟康唑各2μ1。
[0021]對2~11號孔進行10級倍比稀釋，使各孔的最終光甘草定藥物濃度分別為64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25 和 0.125Pg/ml，氟康唑的藥物濃度分別為 64、32、16、8、4、2、1、
0.5,0.25、0.125Pg/ml。各孔中DMSO含量均低于1%?將各藥敏板于30°C恒溫箱培養。
[0022]8.MIC8。值判定:
在30°C恒溫箱中，念珠菌培養24 h,新生隱球菌培養72h,用酶標分析儀于630 nm測各孔OD值。與陽性對照孔比，以OD值下降80%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC8tl(真菌生長80 %被抑制時的藥物濃度)。當藥物的MIC8tl值超過測定濃度范圍時，按以下方法進行統計:如以氟康唑為例，MIC8tl值高于最高濃度64Pg/ml時，計為“>64Pg/ml ” ； MIC8tl值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區別，均計為“≤0.125Pg/ml”。
[0023]上述實驗均平行操作2到3次，當MIC8tl值能準確重復或只差一個濃度時才被接受，并以較高濃度作為MIC8tl值；當MIC8q值相差兩個濃度以上時，則需重新實驗，直到符合要求為止。
[0024]實驗結果見表1
表1光甘草定與氟康唑聯合對25株耐藥白念珠菌的MIC8tl值(μ g/ml)
【權利要求】
1.光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于所述光甘草定為光果甘草中的異黃烷類成分，抗真菌藥物為唑類藥物。
2.根據權利要求1所述的光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的抗真菌藥物增效劑所涉及的真菌為敏感菌株或耐藥菌株。
3.根據權利要求2所述的光甘草定用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的耐藥菌株是對氟康唑耐受，敏感菌株是對氟康唑敏感。
【文檔編號】A61K31/352GK104127413SQ201410350860
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月23日 優先權日:2014年7月23日
【發明者】安毛毛, 劉偉, 慎慧, 李立平, 張石群, 陳思敏 申請人:同濟大學