一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物及其制備工藝和應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物及其制備工藝和應用，屬于中藥材提取【技術領域】，所述的中藥提取物為毛葉白粉藤水提物。本發明所述中藥提取物按如下方法制備而成：將毛葉白粉藤原料置于提取容器中，先后用濃度為90%-95%（v/v）乙醇、70%-75%（v/v）乙醇各回流提取1-3次，棄掉醇提液，所得藥渣加水煎煮1-4次，過濾得水提液，濃縮成稠膏，干燥，粉碎，得毛葉白粉藤水提物。本發明涉及的中藥提取物由單一的中草藥制備而成，其不僅可以抑制腫瘤細胞增殖，而且可以誘導腫瘤細胞凋亡。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥材提取【技術領域】，涉及一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物及其 制備工藝和應用。 一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物及其制備工藝和應用
【背景技術】
[0002] 目前，對于癌癥的治療盡管結合了外科手術，化學療法，及放射性療法，但是其治 愈率還是很低的。化學療法的低成功率原因在于當前的化學療法是以迅速分化的腫瘤細胞 為靶子的。這種方法對潛伏的或者生長緩慢的腫瘤細胞是低效率的。這種療法還影響迅速 分化的正常細胞，引起有害的副作用。
[0003] 近些年出現了一種治療癌癥的新方法，該方法以最近剛被發現的生物學現象"細 胞凋亡"為基礎，細胞凋亡又被稱為"細胞的程序化死亡"或者"細胞自殺"（Tomei等人， "細胞凋亡"：細胞死亡的分子基礎。冷泉港實驗室出版社，1991)。與細胞損傷導致的細胞 死亡相比，細胞凋亡是基因介導的細胞主動自毀過程并且為生物學上有意義的功能服務。 最近有這樣一種觀點認為，癌癥是由不充分的細胞凋亡引起的（Cope，F.O and Wille，J. j, "Apoptosis" ：The molecular Basis of CellDeath，冷泉港實驗室出版社，pp61, 1991)。 這種觀點為癌癥治療開創了一種新的思路--腫瘤細胞可以通過激勵細胞凋亡被殺死。以 正常發展中的諸過程為基礎，細胞凋亡的調諧作用是一種控制腫瘤細胞增殖的潛在機制。 恢復腫瘤細胞中的細胞凋亡機制是一種值得嘗試的方法，因為至少在理論上它將導致細胞 自殺死亡。
[0004] 中藥材毛葉白粉藤為葡萄科植物毛葉白粉藤的藤莖。目前，該藥材被用于跌打損 傷、扭傷。風濕關節疼痛、骨折、癰瘡腫毒。等疾病，尚無文獻報道毛葉白粉藤或其提取物具 有誘導腫瘤細胞凋亡的功效。
【發明內容】
[0005] 基于細胞的程序化死亡的研究，本發明的目的在于提供一種誘導腫瘤細胞凋亡的 中藥提取物及其制備工藝和應用。
[0006] 為了實現本能發明的目的，發明人通過大量試驗研究并不懈探索，最終獲得了如 下技術方案： 一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物，所述的中藥提取物為毛葉白粉藤水提物。
[0007] 本發明所述中藥提取物的制備工藝，該工藝包括如下步驟：將毛葉白粉藤原料置 于提取容器中，先后用濃度為90%-95% (v/v)乙醇、70%-75% (v/v)乙醇各回流提取1-3次， 棄掉醇提液，所得藥渣加水煎煮1-4次，過濾得水提液，濃縮成稠膏，干燥，粉碎，得毛葉白 粉藤水提物。
[0008] 在上述誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物的制備工藝中，優選每次乙醇回流提取的 時間為l_3h ;優選每次藥渣加水煎煮的時間為l_2h。
[0009] 本發明所述誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物，其中每次乙醇回流提取的時間為 3-5h ;每次藥渣加水煎煮的時間為1-2. 5h。
[0010] 細胞增殖過度和細胞凋亡異常是腫瘤發生的生物學基礎。因此，如何誘導細胞進 入凋亡是腫瘤治療取得成功的關鍵。本發明人通過實驗研究表明，毛葉白粉藤水提物不僅 可以抑制人喉癌ifep2細胞增殖，而且可以誘導該細胞進入凋亡。因此，本發明的另一個目 的在于提供一種制藥用途，即：上述的毛葉白粉藤水提物在制備抑制腫瘤細胞增殖的藥物 中的應用；或者，上述的毛葉白粉藤水提物在制備誘導腫瘤細胞凋亡的藥物中的應用。進一 步優選地：上述的毛葉白粉藤水提物在制備抑制人喉癌ifep2細胞增殖的藥物中的應用；或 者，上述的毛葉白粉藤水提物在制備誘導人喉癌ifep2細胞凋亡的藥物中的應用。
[0011] 與現有技術相比，本發明涉及的中藥提取物由單一的中草藥制備而成，其不僅可 以抑制腫瘤細胞增殖，而且可以誘導腫瘤細胞凋亡。另外，該提取物來源于天然植物，因此 毒副作用低，屬于"綠色治療藥物"的范疇，可望被開發成抗腫瘤的一線用藥。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012] 圖1不同濃度毛葉白粉藤水提物對Ifep2細胞增殖的抑制率曲線圖。
【具體實施方式】
[0013] 以下是本發明毛葉白粉藤水提物干粉的制備實施例和效果試驗例，對本發明做進 一步說明。但是，本發明的保護范圍并不受限于以下實施例，凡是基于本發明上述內容所實 現的技術均屬于本發明的范圍。
[0014] 實施例1毛葉白粉藤水提物干粉的制備 毛葉白粉藤干品lkg，粉碎，置回流提取裝置中，先后用濃度為95% (v/v)乙醇12L、70% (v/v)乙醇10L各回流提取2次，每次2h，棄掉醇提液，所得藥渣加水15L，煎煮2次，每次 2h，合并兩次水提液，濾過，濃縮成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細粉，過100目篩，得毛葉白粉藤 水提物干粉。
[0015] 實施例2毛葉白粉藤水提物抑制腫瘤細胞生長的試驗研究 取實施例1制備的毛葉白粉藤水提物干粉，分別將其干粉溶于含10%胎牛血清的1640 完全培養液，使水提物濃度分別為150、200、250、300、400、500、600μ g/mL備用。人喉癌 Η印2細胞株，用含10%胎牛血清的1640完全培養液于37°C恒溫、5% C02、95%飽和濕度條 件下培養，取對數生長期的ifep2細胞，以每孔1 X 104個接種于96孔板，每孔200 μ L。過夜 培養后棄上清，將配置好的不同濃度（150、200、250、300、400、500、600μ g/mL)的毛葉白粉 藤水提物溶液分別加入培養板，并設置空白對照組（只加含10%胎牛血清的1640完全培養 液），每孔20(^1^，分別培養24、48、72 11。結束前411每孔加入511^/1111^1'1'溶液2(^匕培 養結束后棄上清，每孔加二甲基亞砜（DMSOWOOyL，避光輕微振蕩lOmin。于酶標儀490nm 波長處測定各孔的吸光度A，并按下式計算抑制率：抑制率) = [1-(A實驗組/ A陰性對 照）]X 100%，實驗重復3次。試驗結果參見圖1。
[0016] 根據圖 1 可以看出，MTT 結果顯示 150、200、250、300、400、500、600μ g / mL 的毛 葉白粉藤水提物在不同程度上均能抑制ifep2細胞的增殖，其抑制作用隨濃度增加、時間的 延長而加強，呈劑量和時間依賴性。
[0017] 實施例3毛葉白粉藤水提物誘導腫瘤細胞凋亡的試驗研究 人喉癌Η印2細胞株，用含10%胎牛血清的1640完全培養液于37°C恒溫、5% C02、95% 飽和濕度條件下培養。取對數生長期的ifep2細胞，以2X 105 /孔接種于鋪有蓋玻片的6孔 板中，用不同濃度（150、250、300μ g/mL)的毛葉白粉藤水提物(實施例1制備)及0. 5μ g/mL 阿霉素分別處理48h，并設置陰性對照組。培養結束后棄上清，細胞爬片用PBS洗滌三次，于 10 μ g/mL的Hoechst 33258染色液中避光孵育10 min，取出細胞爬片用PBS洗滌3次，于熒 光顯微鏡下觀察。
[0018] Hoechst 33258熒光染色后，未經藥物處理的陰性對照組細胞呈彌漫性均勻熒光， 且熒光較弱。在各用藥組中，ifep2細胞在形態學上發生明顯改變，核固縮呈致密的顆粒狀 強熒光，尤其是毛葉白粉藤水提物高劑量組出現凋亡的典型形態學變化，可見清晰的凋亡 小體。
【權利要求】
1. 一種誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物，其特征在于：所述的中藥提取物為毛葉白粉 藤水提物。
2. -種制備如權利要求1所述誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物的工藝，其特征在于 所述工藝包括以下步驟：將毛葉白粉藤原料置于提取容器中，先后用濃度為90%-95%v/v乙 醇、70%-75%v/v乙醇各回流提取1-3次，棄掉醇提液，所得藥渣加水煎煮1-4次，過濾得水提 液，濃縮成稠膏，干燥，粉碎，得毛葉白粉藤水提物。
3. 根據權利要求2所述制備誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物的工藝，其特征在于：每 次乙醇回流提取的時間為l-3h。
4. 根據權利要求2所述制備誘導腫瘤細胞凋亡的中藥提取物的工藝，其特征在于：每 次藥渣加水煎煮的時間為l_2h。
5. 權利要求1所述的毛葉白粉藤水提物在制備抑制腫瘤細胞增殖的藥物中的應用。
6. 權利要求1所述的毛葉白粉藤水提物在制備誘導腫瘤細胞凋亡的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK104055948SQ201410336819
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月16日 優先權日:2014年7月16日
【發明者】董燕子 申請人:崔新明