植物乳桿菌klds1001及其在抑制口腔變異鏈球菌中的用途
【專利摘要】植物乳桿菌KLDS1001及其在抑制口腔變異鏈球菌中的用途，屬于微生物【技術領域】。本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院中科院微生物研究所，保藏編號為：CGMCC?No.9066，保藏日期為2014年04月16日，分類命名為植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)，其對口腔變異鏈球菌具有抑制作用，可以作為口腔保健品，如：口香糖，保健藥品的一種添加成分，用于口腔保健；可以作為口腔清潔產品的成分之一，添加到牙膏、漱口水當中，用于口腔清潔和減少口腔中變異鏈球菌的數量；開發益生菌療法用于預防和治療齲齒等口腔疾病。
【專利說明】植物乳桿菌KLDS1001及其在抑制口腔變異鏈球菌中的用 途
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物【技術領域】，涉及一株具有潛在口腔益生功能的植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)及其應用。
【背景技術】
[0002] 發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum)Y29對口腔變異鏈球菌具有一定的抑制 作用；對口腔內溶菌酶和過氧化氫具有一定的耐受性，能夠適應口腔環境。但是，沒有關于 菌株的產酸能力和致齲能力的相關分析，菌株能夠產生胞外多糖，具有一定的齒表面粘附 能力，是潛在的致齲菌。
[0003] 植物乳桿菌H0-69具有較弱的齒表面粘附能力，對口腔粘膜的粘附能力較強，非 酸抑菌物質對變異鏈球菌具有抑菌作用并具有廣譜的抑菌效果。但是，缺少對于菌株應用 安全性的評價，沒有對抗藥性，引起粘膜感染的特性進行研究。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一株對口腔變異鏈球菌具有抑制作用的植物乳桿菌 KLDS1001及其應用。
[0005] 本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院中科院微生物研究所，其菌種保 藏編號為：CGMCC No. 9066,保藏日期為2014年04月16日，菌種的分類命名為植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)。KLDS1001為革蘭氏陽性短桿菌，成對或成鏈狀排列。于MRS 平板培養后，菌落呈白色，圓形，枕狀光滑，邊緣整齊。其菌體和菌落形態特征如圖1-3所 /_J、1 〇
[0006] 本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001對變異鏈球菌的抑菌圈直徑為 19. 47±0. 50mm，與國內和國際上的研究相比抑菌活性較好。通過測定植物乳桿菌KLDS1001 對變異鏈球菌在玻璃試管表面形成菌膜的影響，比較直觀的發現，菌株可以有效的降低變 異鏈球菌在菌膜當中的數量。從以上體外實驗的結果來看，菌株能夠有效的抑制變異鏈球 菌的生長并減少口腔菌斑中變異鏈球菌的數量。與傳統益生菌株LGG相比，本發明提供的 植物乳桿菌KLDS1001抑菌能力較強，抑制變異鏈球菌菌膜形成的能力相近。
[0007] 本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001能夠在pH為3-5的條件下保持良好的生長狀 態，在pH為2的條件下培養lh后保持4. 79±0. 491ogcfu的活菌數，說明菌株能夠較好的 適應由于進食引起的口腔內pH的變化；菌株在過氧化氫濃度為ImM/L的條件下生長良好， 在5mM/L的條件下培養6h后，存活的菌數為3. 29±0. 071ogcfu對口腔內和口腔清潔用品 中的過氧化氫具有較強的耐受性，能夠較好的適應口腔環境。
[0008] 作為新的口腔益生菌，乳酸菌在應用的過程中可能具有以下危害：（1)由于具有 較強的產酸能力而具有一定的致病性；(2)可能攜帶耐藥性基因，存在耐藥性基因水平轉 移的危害；（3)可能引起口腔粘膜的感染。植物乳桿菌KLDS1001培養72h分解羥磷灰石產 生鈣的量為〇. 29±0. 02μ g/mL，僅具有輕微的降解能力，此降解量與傳統益生菌LGG相似 (0. 27±0. 01 μ g/mL)，說明菌株分解牙釉質導致齲齒的能力弱。菌株不具有溶血性，不能引 起口腔內粘膜的感染。菌株對萬古霉素、克林霉素和鏈霉素具有耐藥性。
[0009] 本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001可以作為口腔保健品，如：口香糖，保健藥品 的一種添加成分，用于口腔保健；可以作為口腔清潔產品的成分之一，添加到牙膏、漱口水 當中，用于口腔清潔和減少口腔中變異鏈球菌的數量；開發益生菌療法用于預防和治療齲 齒等口腔疾病。
[0010] 保藏信息：
[0011] 保藏單位全稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；
[0012] 保藏單位簡稱：CGMCC ;
[0013] 保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院中科院微生物研究所；
[0014] 保藏日期：2014年04月16日；
[0015] 保藏編號：CGMCC No. 9066。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1為KLDS1001菌落形態；
[0017] 圖2為KLDS1001菌落于高倍顯微鏡下觀察形態；
[0018] 圖3為KLDS1001革蘭氏染色后菌體形態；
[0019] 圖4為菌株KLDS1001與LGG對變異鏈球菌菌膜形成的影響，菌株KLDS1001與LGG 能夠有效的抑制變異鏈球菌菌膜形成，并且篩選菌株和益生菌LGG具有相似的抑菌能力；
[0020] 圖5為菌株KLDS1001、LGG和變異鏈球菌對羥磷灰石的降解能力，菌株KLDS1001 與LGG均具有較弱的羥磷灰石降解能力；
[0021] 圖6為不同pH對菌株KLDS1001生長的影響；
[0022] 圖7為不同濃度的過氧化氫對菌株KLDS1001生長的影響，菌株KLDS1. 0659在低 pH與過氧化氫存在的條件下培養一段時間，均能保持一定存活菌數，對環境的抵抗能力較 強。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合附圖對本發明的技術方案作進一步的說明，但并不局限于此，凡是對本 發明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋 在本發明的保護范圍中。
[0024] 本發明提供的植物乳桿菌KLDS1001是從新疆酸乳中分離得到的，其分離方法 如下：取一定量新疆自然發酵的酸奶樣品，在脫脂乳培養基中進行富集，劃線于MRS平板 (pH6. 5)中，37°C培養24h，挑取圓形，白色乳白色的特征菌落進行革蘭氏染色，挑取革蘭氏 陽性桿菌的菌體進行分純。純化后的菌株進行吲哚試驗、硝酸鹽還原試驗、過氧化氫酶試 驗、產硫化氫試驗，將試驗均為陰性反應的菌株初步鑒定為乳桿菌屬。然后采用糖發酵實驗 和16s rDNA的方法對菌株進行種水平的鑒定。
[0025] 本發明中的植物乳桿菌KLDS1001的生理生化鑒定結果見表1 :
[0026] 表 1
[0027]
【權利要求】
1. 植物乳桿菌KLDS1001，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌 種保藏編號為：CGMCC No. 9066。
2. 如權利要求1所述植物乳桿菌KLDS1001在抑制口腔變異鏈球菌中的用途。
【文檔編號】A61K35/74GK104140937SQ201410225304
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年5月24日 優先權日:2014年5月24日
【發明者】孟祥晨, 彭悅, 朱文婕, 李艾黎 申請人:東北農業大學