一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于藥物制劑領域，涉及一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑及其制備方法。具體地，所述免疫調節劑多肽包含胸腺五肽、胸腺法新、胸腺素β4。該緩釋微球包括以微球總重量計，占微球重量0.1%—30%（w/w）的免疫調節劑多肽，和占微球重量60%—80%的分子量為5，000—200，000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0.1%—20%的藥學上可接受的其他輔料。本發明的緩釋微球平均粒徑為5—60μm，包封率大于90%。該緩釋微球緩釋期長達數天或數月，明顯減少用藥次數，提高了生物利用度，降低了藥物的毒副作用，有利于臨床治療。該產品生產工藝重現性好，可行性好。
【專利說明】一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及緩釋微球制劑【技術領域】，尤其涉及一種免疫調節劑多肽的緩釋微球制劑及制備方法。
【背景技術】
[0002]免疫調節劑是一種對正常的免疫功能不產生影響，但可增強已經低下的免疫功能，調節免疫反應的藥物。在低免疫應答的病例中，能增強各類抗原的皮膚遲發性變態反應；并增強淋巴細胞介質的產生。當吞噬細胞和T細胞功能低下時，免疫調節劑可使其恢復正常。在臨床上可用于治療復發性及慢性感染、腫瘤、類風濕疾病、病毒感染后的低應答性疾病等。常見的免疫調節劑有免疫促進劑，免疫抑制劑，免疫雙向調節劑。胸腺制劑是一種非特異性免疫調節制劑。
[0003]胸腺肽作為一種免疫調節劑，目前市場上主要有兩種胸腺肽應用較廣，分別是胸腺五肽和胸腺法新，胸腺素β 4是一種新型胸腺肽。
[0004]胸腺五肽是胸腺分泌物胸腺生成素II的有效部分，作用之一是誘導T細胞分化，可選擇性地誘導Thy-1-的前胸腺細胞轉化為Thy-1+的T細胞。胸腺五肽可用于惡性腫瘤病人經放化療后，免疫功能損傷者；乙型肝炎的治療；重大外科手術及嚴重感染；自身免疫性疾病,如類風濕性關節炎,紅斑狼瘡；II型糖尿病、更年期綜合征；年老體衰免疫功能低下者。
[0005]胸腺法新是人體內重要的免疫調節物質，可用于治療慢性乙型肝炎和增強免疫系統。同時還具有刺激血管內皮細胞遷移、促進血管生成和傷口愈合等功效，已用于乙型肝炎、丙型肝炎、惡性腫瘤以及免疫缺陷疾病等的臨床治療和研究。
[0006]胸腺素β 4是真核生物細胞中的一種主要的肌動蛋白螯合分子，廣泛分布于哺乳動物和其他脊椎動物的多種組織和有核細胞中。近年來胸腺素β4的應用主要在創傷愈合、腫瘤轉移、血管再生等方面。
[0007]目前已上市的胸腺五肽劑型為注射用胸腺五肽，肌肉注射或加入葡萄糖中靜脈點滴，每次I mg，每日或隔日一次，一般15日為一個療程，或者根據病情決定。另有IOmg規格，療程遵醫囑。臨床已上市的胸腺法新劑型為注射用胸腺法新，每瓶胸腺法新(1.6mg)以Iml注射用水溶解后立即皮下注射(不應作肌注或靜注)。治療慢性乙型肝炎的推薦劑量:每次1.6mg，每周2次，兩次相隔3-4天。連續給藥6個月(共52針)，其間不應間斷。作為免疫損害病者的疫苗免疫應答增強劑:每次1.6mg，每周2次，兩次相隔3-4天，連續4周(共8針)，第一針應在給疫苗后立即皮下注射。這些劑型均需要多次給藥，給藥麻煩，因此，開發一種新型制劑成為當前的重要課題。本發明的多肽緩釋制劑微球是近年來發展的新劑型，它是以高分子材料為載體制成的給藥系統，微球中的藥物分散或包埋在材料中而形成球狀實體。這類劑型的開發，對于發展緩釋與靶向給藥系統有重要的意義。而且本發明的制劑以緩釋微球形式給藥，有效延長了有效成分在體內作用時間，減少給藥次數和藥物耐受性， 提高病人的適應性，方便臨床使用和患者接受。另外，它還消除了普通注射劑多次給藥產生的體內藥物濃度峰谷現象，可獲得平穩長時間的有效濃度，降低了毒副作用，并且總給藥劑量減少。
【發明內容】
[0008]目前免疫調節劑胸腺肽類給藥劑型是注射用藥，給藥頻繁，以緩釋微球形式給藥，有效延長了有效成分在體內作用時間，減少給藥次數和藥物耐受性，提高病人的適應性，方便臨床使用和患者接受。另外，它還消除了普通注射劑多次給藥產生的體內藥物濃度峰谷現象，可獲得平穩長時間的有效濃度，降低了毒副作用，并且總給藥劑量減少。
[0009]本發明制備了一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征在于所述制劑含有以微球總重量計，占微球重量0.1% — 30%(w/w)的免疫調節劑多肽，和占微球重量60% — 80%的分子量為5，000— 200，000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0.1%—20%的藥學上可接受的其他輔料。本發明的緩釋微球平均粒徑為5 — 60 μ m，包封率大于90%。所述免疫調節劑多肽包括胸腺五肽、胸腺法新與胸腺素β4。所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料,可選自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)、聚羥丁酸(ΡΗΒ)、聚羥基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)、聚乳酸一聚乙二醇其中的一種或其混合物，優選聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)其中的一種或其混合物，分子量范圍均在5，000— 200，000道爾頓。所述的藥學上可接受的其他輔料包括明膠、甘油、乳化穩定劑及賦形劑，明膠用量范圍為0.1% — 5%，甘油用量范圍為0.1% — 5%，乳化穩定劑選自聚乙烯醇(PVA)，其用量范圍為0.1% — 5%，賦形劑選自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖中的一種或其混合物，其用量范圍為0.1% — 5%。
[0010]一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑的制備方法，其特征是采用復乳一液中干燥法，分兩步制備微球，具體方法如下:
第一步，首先將免疫調節劑多肽、明膠、甘油溶于純化水，得內水相；另將高分子材料溶于有機溶劑中，得油相；將油相和內水相置于攪拌器內，高速乳勻，形成W/0乳液；然后將W/O乳液加入到聚乙烯醇溶液中，高速乳勻，形成W/0/W復乳；
第二步，將w/0/w復乳加入純化水，室溫下磁力攪拌，除去有機溶劑，超速離心，收集所得微球，用蒸餾水洗滌多次后，再離心收集，加入賦形劑，冷凍干燥，即得一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑。
[0011 ] 所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙醚、丙酮、四氫呋喃等，優選二氯甲烷。
【具體實施方式】
[0012]下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。
[0013]實施例1
稱取IOg胸腺五肽、5g明膠、5g甘油溶于純化水，得內水相；稱取160g聚丙交酯溶于二氯甲烷中，得油相；將油相和內水相置于攪拌器內，室溫下置于乳化分散機上高速(30000rp m)乳勻30秒，形成W/0型乳液；配制濃度為5%的聚乙烯醇溶液50ml，然后將所得的W/0型乳劑轉移至50ml5%聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散機上以5000rpm的轉速，乳勻I分鐘，得W/0/W型復乳JfW/O/W復乳加入純化水中，室溫下磁力攪拌2小時，除去有機溶劑，超速離心，收集所得微球，用蒸餾水洗滌多次后，再離心收集，加入5g山梨醇，冷凍干燥，即得一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑。
[0014]精密稱取實施例1制備的載藥胸腺五肽緩釋微球Ig溶于ImL 二氯甲烷，分次加入30mL和20mL純化水提取藥物，渦旋萃取lmin，15000rpm離心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以純化水定容至10mL，進樣20μ 1，HPLC測定含量，繪制標準曲線，根據標準曲線計算得實施例1制備的載藥胸腺五肽緩釋微球中藥物含量，據此計算包封率是94.6%。
[0015]對實施例1制備的胸腺五肽緩釋微球制劑進行體外釋藥考察，方法如下:
精密稱取若干份實施例1制備的胸腺五肽緩釋微球，每份10mg，置于35個IOOmL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na2HPO4和0.1M的NaH2PO4的pH7.4的磷酸緩沖溶液，置于37°C恒溫水浴中，分別在第O小時、2小時、I天、4天、10天、16天、24天、30天、40天取出，離心，重新分散在二氯甲烷醋酸緩沖液(I: lv/v)，色譜柱為C18 50 X 2mm,流動相為1:1的含有0.1%三氟醋酸和含有1%三氟醋酸的50%乙腈混合溶液，流速1.0ml/min,在220nm處檢測，測定微球內殘余藥量，按照外標法計算累計釋放度，實施例1制備的胸腺五肽緩釋微球制劑的體外釋藥測定結果如表1所示:
表1實施例1制備的胸腺五肽緩釋微球制劑的體外釋藥實驗結果
【權利要求】
1.一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述制劑含有占微球重量0.1%—30% (w/w)的免疫調節劑多肽，占微球重量60% — 80%的分子量為5，000— 200，000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0% — 20%的藥學上可接受的其他輔料，所述緩釋微球平均粒徑為5 — 60 μ m，包封率大于90%。
2.根據權利要求1所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述免疫調節劑多肽包括胸腺五肽、胸腺法新與胸腺素β4。
3.根據權利要求1所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料,可選自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)、聚羥丁酸(ΡΗΒ)、聚羥基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)、聚乳酸一聚乙二醇其中的一種或其混合物。
4.根據權利要求3所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料,優選聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)其中的一種或其混合物。
5.根據權利要求4所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述的聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)分子量范圍均在5，000— 200，000道爾頓。
6.根據權利要求1所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑，其特征是:所述的藥學上可接受的其他輔料包括明膠、甘油、乳化穩定劑及賦形劑，明膠用量范圍為0.1% — 5%，甘油用量范圍為0.1% — 5%，乳化穩定劑選自聚乙烯醇(PVA)，其用量范圍為0.1% — 5%，賦形劑選自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖中的一種或其混合物，其用量范圍為0.1% — 5%。
7.根據權利要求1所述的免疫調節劑多肽緩釋微球制劑的制備方法，其特征是采用復乳一液中干燥法，分兩步制備微球，其特征是: 第一步，首先將免疫調節劑多肽、明膠、甘油溶于純化水，得內水相；另將高分子材料溶于有機溶劑中，得油相；將油相和內水相置于攪拌器內，高速乳勻，形成W/0乳液；然后將W/O乳液加入到聚乙烯醇溶液中，高速乳勻，形成W/0/W復乳； 第二步，將w/0/w復乳加入純化水中，室溫下磁力攪拌，除去有機溶劑，超速離心，收集所得微球，用蒸餾水洗滌多次后，再離心收集，加入賦形劑，冷凍干燥，即得一種免疫調節劑多肽緩釋微球制劑。
8.根據權利要求7所述的免疫調節多肽緩釋微球制劑制備方法，其特征是:所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙醚、丙酮、四氫呋喃等，優選二氯甲烷。
【文檔編號】A61K47/34GK103961320SQ201410218676
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月23日 優先權日:2014年5月23日
【發明者】邱煥杰, 廖夢春, 曹演威, 李云開, 舒遂智 申請人:深圳市健元醫藥科技有限公司