一種視網膜黃斑變性的動物模型的制作方法
【專利摘要】本發明屬于醫療評價、檢測【技術領域】，具體涉及一種用于篩選光動力治療視網膜黃斑變性藥物的動物模型。該動物模型是雄性雞的雞冠，由于雞冠的組織病理結構特點與視網膜黃斑變性組織病理結構特點十分相似，故可用于光動力治療視網膜黃斑變性藥物的篩選，具有重要的實用價值和理論研究價值。
【專利說明】一種視網膜黃斑變性的動物模型
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫療評價、檢測【技術領域】，具體涉及一種用于篩選光動力治療視網膜黃斑變性藥物的動物模型。
【背景技術】
[0002]視網膜黃斑變性(Retinal Macular Degeneration)是視網膜色素上皮細胞變性造成的一種不可逆性視力下降或喪失的疾病(Pradeep S.Prasad at al., Maturitas,66(1):46-50，2010)。主要表現為視網膜色素上皮細胞對視細胞外界盤膜吞噬消化功能下降，使未被消化的盤膜殘余小體潴留于基底部細胞原槳中，并向細胞外排出，形成玻璃膜疣，因此繼發病理改變后，導致黃斑變性發生。本病大多發生于45歲以上，其患病率隨年齡增長而增高，是一種嚴重威脅老年人視功能的眼底病變(Bressler匪at al., Surv0phthalmol32(6):375-413,1988)。
[0003]視網膜黃斑變性是國際眼科界公認的最難治療的眼病之一。分為年齡相關性黃斑變性和少年黃斑變性兩種，尤其以滲出性年齡相關性黃斑變性最為嚴重，是當前老年人致盲的重要疾病，發生原因主要是異常的新生血管在黃斑部的視網膜下生長，稱為脈絡膜新生血管(Choroidal Neovascularization, CNV),引起視網膜出血、水腫及視網膜組織的破壞，最終導致癥痕形成，從而視力喪失(Ursula Schmidt-Erfurth at al., Progress inRetinal and Eye Research.28(2) =145-154,2009) ?其治療方法主要包括激光光凝術治療、光動力治療(Photodynamic Therapy，PDT)、經瞳孔溫熱療法、藥物治療、基因治療和手術治療等。目前為止各種治療手段都存在一定的局限性，但其中PDT被認為是較安全、有效的方法(Ursula Schmidt-Erfurth and Tayyaba Hasan, Current Research, 45 (3):195-214,2000)。
[0004]目前，CNV動物模型的建立方法主要有激光誘導CNV模型、血管生長因子誘導CNV模型及利用基因方法誘導CNV模型等(Mark E.Pennesi at al., Molecular Aspects ofMedicine33:487-509, 2012)。由于這些方法存在對操作技術要求高、CNV生成率低及生長周期長、成本高等缺點，嚴重制約了光動力抗視網膜黃斑變性新藥的研究開發，急需一種操作簡便、周期短、成本低、重現性好的視網膜黃斑變性動物模型，來彌補這些方法的不足。
[0005] CNV 又稱視網膜下新生血管(Subretinal Neovaseularization, SRNV),起源于脈絡膜血管，位于視網膜色素上皮間隙或神經上皮下間隙。CNV呈一膜樣結構，光鏡下新生血管主要由單層色素上皮、上面覆蓋的纖維基質(主要是纖維組織和膠原)和散在的一些血管組成。CNV膜上的細胞成分主要有色素上皮細胞、類成纖維細胞及一些血管內皮細胞(Green WR at al., Thel992Lorenz E.Zimmerman Lecture.0phthalmology,100(10):1519-1535)。雞冠在60年代末已被國外學者用作毛細血管瘤動物模型(A Orenstein aial., Lasers Surg Med, 10(4):334-343,1990)。雞冠皮膚由表皮層、真皮乳頭層、乳頭下真皮淺層和真皮深層組成。表皮層含有角質層和5~6層細胞，包括基底細胞層；真皮乳頭層含有大量擴張的毛細管網，管壁由單層血管內皮細胞構成，血運豐富；乳頭下真皮淺層呈網狀，較疏松，有粘液，間有少量微血管；真皮深層含有較粗大的膠原纖維、小動脈和小靜脈血管，及少量脂肪細胞。這些特點與CNV的組織病理結構特點十分相似，因此，在理論上具有將雞冠作為光動力治療視網膜黃斑變性藥物篩選模型的基礎。
【發明內容】
[0006]針對上述現有建立視網膜黃斑變性動物模型方法的不足，本發明提供了一種視網膜黃斑變性的動物模型，彌補了目前常用模型存在的對操作技術要求高、CNV生成率低及生長周期長、成本高等不足，可用于光動力治療視網膜黃斑變性藥物的篩選。
[0007]所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型是:雄性雞的雞冠。
[0008]所述的雄性雞為:萊亨雞、羅曼雞。
[0009]所述的視網膜黃斑變性為:年齡相關性視網膜黃斑變性。
[0010]所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型，可用于光動力治療視網膜黃斑變性藥物的篩選。
[0011]本發明的一種視網膜黃斑變性的動物模型,在使用維替泊芬(Verteporfin)(迄今為止國際上用于年齡相關性視網膜黃斑變性治療的唯一光敏劑新藥)后，其對雞冠的PDT效應與對傳統方法誘導的CNV模型的療效是相一致的。表明該模型可較好地用于篩選光動力治療視網膜黃斑變性的藥物，且具有天然形成、周期短、重現性好、成本低、對操作技術要求低等優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1 Vert印orfin、ZWL3對雞冠的PDT效應對比圖
[0013]圖2 Verteporfin-PDT, ZWL3-PDT 治療 CNV 前后療效對比圖
【具體實施方式】
[0014][實施例1]
[0015]Verteporfin對雞冠的PDT效應與Verteporfin對氪激光誘導的CNV模型療效的對比
[0016]1.Verteporfin對雞冠的PDT效應的觀察
[0017]受試動物:萊亨雞，雄性，24只，隨機分為4組(空白對照組、單純Verteporfin組，單純激光組，Verteporfin-PDT組),每組6只。
[0018]受試藥物:Verteporfin
[0019]實驗方法:
[0020]空白對照組不作任何處理；
[0021]單純Verteporfin 組，Verteporfin 以劑量 0.585mg/kg (相當于人 0.25mg/kg)翅根靜脈推注，不照光。
[0022]單純激光組，以速眠新(0.2ml/kg)麻醉，標記照光區，固定雞冠，直接照光。
[0023]Verteporfin-PDT組，以速眠新(0.2ml/kg)麻醉,標記照光區，固定雞冠,避光條件下以0.585mg/kg(相當于人0.25mg/kg)翅根靜脈推注Verteporfin,注射完畢即刻照光。
[0024] 單純激光組和Verkporfin-PDT組均用630nm激光治療儀進行照射，能量密度為90J/cm2，光斑直徑為1.5cm，不照光處雙層紅黑布適當遮蓋。
[0025]效應觀察和評價:
[0026]所有實驗組于第Id、第3d、第7d、第14d，第28d進行肉眼觀察并照相，Verteporfin-PDT組根據肉眼觀察結果評定PDT效應等級。
[0027]所有實驗組于第3d在雞冠照射區域中心取材，做病理切片行HE染色。P組根據病理切片光鏡下評定PDT效應等級。
[0028]PDT效應分級標準:
[0029]大體PDT效應分級標準見表1，組織病理PDT效應分級標準見表2.[0030]表1PDT效應分級(大體)
[0031]
【權利要求】
1.一種視網膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:動物模型為雄性雞的雞冠。
2.根據權利要求1所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的雄性雞是萊亨雞。
3.根據權利要求1所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的雄性雞是羅曼雞。
4.根據權利要求1所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的視網膜黃斑變性是年齡相關性視網膜黃斑變性。
5.根據權利要求1所述的一種視網膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:可用于篩選光動力治療視網膜黃斑變性的藥物。
【文檔編號】A61K49/00GK103948925SQ201410192630
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月8日 優先權日:2014年5月8日
【發明者】陳志龍, 張莉君, 陳聃燁, 嚴懿嘉 申請人:陳志龍