黑莓籽有效成分的新應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于植物提取物應用【技術領域】，具體涉及一種黑莓籽有效成分的新應用。應用涉及在制備保肝、護肝保健品或藥物上的應用及在抗氧化方面的應用。本發明從黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，研究證實了其對四氯化碳誘導的小鼠急性肝損傷具有一定保護作用，同時增強急性肝損傷小鼠機體的抗氧化功能，保護機體免受自由基的進一步傷害。
【專利說明】黑莓籽有效成分的新應用
[0001]【技術領域】
本發明屬于植物提取物應用【技術領域】，具體涉及一種黑莓籽有效成分的新應用。
[0002]【背景技術】
黑莓{Rubus spp.Blackberry)屬于薔薇科(Rasaceae)懸鉤子屬聚合果類植物,其果實具有很高的營養價值和藥用價值，具有改善人體新陳代謝、清除自由基、延緩衰老、增強免疫力等功能，特別具有降低膽固醇含量、防治心臟疾病、抗癌(降低化療引起的毒副作用)和抗血栓的功效。
[0003]黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工產品的副產物，含有豐富的多酚類化合物，多年來被大量遺棄，造成資源的大量浪費。近幾年，技術人員從黑莓籽中提取了黑莓籽油。
[0004]研究表明，黑莓籽油含有較高的不飽和脂肪酸，如棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸等，能夠提供給人體基本的脂肪酸，而且這些脂肪酸不能通過任何已知的化學途徑合成，必須從食物中獲取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H2O2誘導的小鼠紅細胞氧化溶血和VC- FeSO4體系誘導的小鼠肝組織丙二醛生成及VC-FeSO4體系誘導的小鼠肝線粒體腫脹的作用，與其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相關；此外，還發現黑莓籽經脫脂后的主要有效成分為原花青素，是由單體黃烷-3-醇以不同聚合度連接而成的多酚類化合物，具有高效的清除自由基的能力，具有治療動脈硬化、消炎防腫、抗突變和預防癌癥等廣泛用途。未見對黑莓籽 治療急性肝損傷作用的報道。
[0005]
【發明內容】
本發明為了擴大黑莓籽的應用領域，通過腹腔注射CCl4油溶液誘導小鼠急性肝損傷，測定血清中GPT和GOT的活力，評價其保肝護肝作用，測定肝臟勻漿液中SOD的活力和MDA的水平，評價其體內抗氧化作用，為合理開發和利用黑莓籽資源提供科學依據，提供了黑莓籽在保肝護肝、抗氧化方面的新應用。
[0006]本發明為實現上述目的，采用以下技術方案:
黑莓籽有效成分在制備保肝、護肝保健品或藥物上的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0007]黑莓籽有效成分在抗氧化方面的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0008]黑莓籽有效成分(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油)采用以下方法制得，黑莓籽用石油醚冷浸脫脂，脫脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油；脫脂后的黑莓籽殘渣用乙醇(65-80V9O冷浸，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0009]為了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前將黑莓籽粉碎。
[0010]石油醚冷浸脫脂時，重復4-5次，每次3-4d，合并提取液；每次石油醚的用量是黑莓籽質量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0011]乙醇冷浸時，重復2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液；每次乙醇的用量是黑莓籽殘渣質量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0012]本發明從黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，并采用腹腔注射四氯化碳誘導急性肝損傷小鼠模型，首次研究黑莓籽對四氯化碳誘導急性肝損傷小鼠的影響，研究證實了這些有效部位均具有不同程度的降低血清中GPT和GOT的活力，其對四氯化碳誘導的小鼠急性肝損傷具有一定保護作用；能通過不同程度地降低急性肝損傷小鼠肝臟勻漿液中MDA的含量，升高SOD水平，增強急性肝損傷小鼠機體的抗氧化功能，保護機體免受自由基的進一步傷害，推測其可能是黑莓籽保肝護肝的作用機制之一。
[0013]【具體實施方式】 實施例1
黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷浸脫脂，重復4次，每次4d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145.04g ；脫脂后的黑莓籽殘渣341g用2800mL乙醇(70V%)冷浸，重復3次，每次3d，合并乙醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2.34g、乙酸乙酯萃取物5.46g和正丁醇萃取物
13.42g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0014]實施例2
黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用5000mL石油醚冷浸脫脂，重復5次，每次3d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.50g ；脫脂后的黑莓籽殘渣332g用3000mL乙醇(65V%)冷浸，重復2次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2.02g、乙酸乙酯萃取物5.1Og和正丁醇萃取物
14.28g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0015]實施例3
黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4500mL石油醚冷浸脫脂，重復4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.26g ；
脫脂后的黑莓籽殘渣335g用3300mL乙醇(80V%)冷浸，重復3次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2.26g、乙酸乙酯萃取物5.54g和正丁醇萃取物12.94g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0016]效果實驗黑莓籽不同部位對四氯化碳誘導的急性肝損傷小鼠的影響
實驗原料:將實施例1-3制得的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油分別混合作為四種實驗原料。
[0017]實驗動物:昆明種小鼠，體重22 土 2 g，SPF級，由山東魯抗醫藥股份有限公司質檢中心動物實驗室提供，生產許可證號:SCXD魯20080002。
[0018] 實驗試劑:谷草轉氨酶(GOT)試劑盒(20140115)、谷丙轉氨酶(GPT)試劑盒(20140217)、丙二醛(MDA)試劑盒(20131214)、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(20131214)均購于南京建成生物工程研究所；聯苯雙酯(120314，浙江萬邦藥業股份有限公司)；四氯化碳(分析純，開封化學試劑總廠);橄欖油(上海衛輝化學試劑廠);考馬斯亮藍G250 (20050115，上海化學試劑公司分裝廠)；牛清蛋白(20100526，北京奧博星生物技術有限責任公司)；其它試劑均為分析純。
[0019]實驗儀器:LRH-150恒溫培養箱；DELTA 320型pH計；Multiskan MK3酶標儀；電子天平；旋轉蒸發儀；UV-2000型紫外可見分光光度計；CS-H1型混合器；各規格的微量移液器及槍頭等。
[0020]實驗方法與結果
1、實驗方法
動物分組和造模方法:取健康昆明小鼠(4~6周齡，體重22±2 g) 150只，隨機分為15組，每組IO只，分別為黑莓籽石油醚部位高、中、低劑量組(800、400、200mg/kg )，黑莓籽乙酸乙酯部位高、中、低劑量組(400、200、100mg/kg)，黑莓籽正丁醇部位高、中、低劑量組(600、300、150mg/kg)，黑莓籽油高、中、低劑量組(1000、500、250mg/kg)，聯苯雙酯陽性對照組(75 mg/kg)，模型組和空白組。模型組和空白組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na )水溶液，其它試驗組用0.5%CMC-Na水溶液分別配制成相應濃度的溶液，灌胃給藥，I次/天，連續給藥8天。于末次給藥2 h后對小鼠進行造模(即按照0.1 mL/10g小鼠體重腹腔注射
0.4V%四氯化碳橄欖油溶液，空白組除外)。禁食不禁水16 h后，摘除小鼠眼球取血并分離出血清，檢測血清中GPT和GOT的活力。快速分離肝臟，制備10%和1%的肝臟組織勻漿液，離心取上清液，0-3°C保存，測定MDA的含量和SOD的活力，利用考馬斯亮藍除蛋白。
[0021]2、實驗結果如下
表1黑莓籽不同部位對急性肝損傷小鼠血清中GPT和GOT活力的影響(
'Ζ±.5,/7 = 10)
【權利要求】
1.黑莓籽有效成分在制備保肝、護肝保健品或藥物上的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
2.黑莓籽有效成分在抗氧化方面的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
【文檔編號】A61K36/73GK103908503SQ201410137714
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月8日 優先權日:2014年4月8日
【發明者】張偉, 康文藝, 尹震花 申請人:黃河科技學院