從獨活中制備蛇床子素的方法
【專利摘要】本發明涉及一種從獨活中制備蛇床子素的方法，該方法包括以下步驟：⑴將干燥后的獨活經粉碎、過篩，得到獨活粉；⑵在獨活粉中加入含纖維素酶的醋酸-醋酸鈉緩沖液進行酶解，得到酶解液；⑶酶解液中加入乙醇溶液，經超聲提取、離心后，得到上清液；⑷上清液經膜分離過濾后，得到樣品原液；⑸樣品原液直接過大孔吸附樹脂，先用水洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為15~50%的乙醇洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為60~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液B；⑹將洗脫液B回收乙醇后，經濃縮、干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。本發明簡便、效率高。
【專利說明】從獨活中制備蛇床子素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種蛇床子素的提取方法，尤其涉及從獨活中制備蛇床子素的方法。【背景技術】
[0002]獨活為傘形科植物重齒毛當歸(Angelica pubescens Maxim, f)的干燥根具有祛風除濕、通痹止痛之功效，〃用于風寒濕痹，腰膝疼痛，少陰伏風頭痛等病癥"，目前為臨床常用藥，并被收載入我國藥典。現代藥理研究表明，獨活具有廣泛的藥理作用，其不僅具有鎮靜、催眠、鎮痛、抗炎等用于治療風濕性關節炎的顯著性作用，其對于心血管系統及激素、抗腫瘤等作用在近代的藥理研究中亦日益顯示出其獨特的優勢。獨活中成分復雜，包括香豆素、揮發油、萜類、有機酸等。蛇床子素是獨活中含量很高的一類成分，同時也是主要成分，因其分布較廣且量比較大，因而近年來對它的研究開展越來越多。
[0003]根據文獻報道表明，蛇床子素具有的鎮靜、鎮痛、抗炎、抗超敏反應等與獨活藥材的作用如出一轍，種種跡象表明蛇床子素不僅僅是獨活中含量最高的成分，多項藥理研究也表明它也是獨活部分藥理作用的主要成分。
[0004]關于獨活中蛇床子素的提取制備工藝研究，國內還未見有專利申請。文獻報道中蛇床子素的提取一般采用傳統的乙醇回流法，該方法簡操作時間長，提取效率低，且使用大量有機溶劑，易燃、易爆、成本高，制得的獨活提取物中殘留有機溶劑對人體健康無益。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種簡便、高效率的從獨活中制備蛇床子素的方法。
[0006]為解決上述問題，本發明所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟: ⑴將干燥后的獨活經粉碎、過30-100目篩，得到獨活粉；
⑵在所述獨活粉中加入其質量的5~15倍、含29TlO%纖維素酶的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為35~55 °C的條件下酶解50~70 min，得到酶解液；
⑶所述酶解液中加入體積分數為30-65%的乙醇溶液，在提取溫度為5(T65°C的條件下超聲提取2~3次，每次3(T60 min，合并提取液，離心后，得到上清液；所述獨活粉與所述乙醇溶液的料液比為0.02、.06 g/mL ；
⑷所述上清液經膜分離過濾后，得到樣品原液；
(5)所述樣品原液直接過大孔吸附樹脂，先用水洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為15飛0%的乙醇洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為60-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液B ;所述原液量為所述大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的1109^135% ；
(6)將洗脫液B回收乙醇后，經濃縮、干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
[0007]所述步驟⑵中醋酸-醋酸鈉緩沖液的pH值為4.0-7.0。
[0008]所述步驟⑷中的膜分離采用截留分子量為100(T60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜。[0009]所述步驟(5)中大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱高比為1:6~1:12。
[0010]所述步驟(5)中乙醇的流速為1.2^3.0 BV/h ο
[0011]所述步驟(6)中濃縮的條件是指真空度為-0.06MPa~-0.1MPa，溫度為40~55°C。
[0012]所述步驟(6)中干燥的條件是指溫度為55°C~70°C。
[0013]本發明與現有技術相比具有以下優點:
1、本發明采用纖維素酶解和超聲提取法兩種技術聯用，其中纖維素酶可去除無活性的纖維素、淀粉和膠質等，分解細胞壁成分，利于蛇床子素的溶出；超聲波的空化作用加速植物有效成分的溶出，另外其產生的機械振動、乳化、破碎和催化效應等也會加速有效成分的擴散釋放。因此，可以達到優勢互補，有效破壞獨活表皮細胞壁生物作用，使獨活中的蛇床子素有效地溶出而不破壞其結構。經高效液相色譜法(HPLC)測定，采用本發明方法所得的獨活提取物中蛇床子素含量為8%~25%，而純化前獨活中蛇床子素含量小于0.1%(參見圖1、圖2)。
[0014]2、本發明與現有技術相比，產品中蛇床子素的含量大為提高，生產成本低廉，工藝路線簡單，適合工業化生產應用，可進一步促進獨活提取物作為藥物、保健品等多功能產品的產業化開發。
[0015]3、本發明生產成本低廉，工藝路線簡單，所用提取溶劑的毒性較小，提取周期短，效率高，適合工業化生產應用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]下面結合附圖對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細的說明。
[0017]圖1為純化前獨活中蛇床子素提取物的高效液相色譜圖。
[0018]圖2為本發明所得的獨活蛇床子素提取物的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0019]實施例1 從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟:
⑴將干燥后的獨活經粉碎、過40目篩，得到獨活粉。
[0020]⑵在獨活粉中加入其質量的5倍、含3%纖維素酶的pH值為4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為40°C的條件下酶解55 min，得到酶解液。
[0021]⑶酶解液中加入體積分數為35%的乙醇溶液，在提取溫度為55°C的條件下超聲提取2次，每次40 min,合并提取液，離心后，得到上清液。
[0022]其中:獨活粉與乙醇溶液的料液比為0.03 g/mL。
[0023]⑷上清液經截留分子量為1000KD的聚砜膜或聚醚砜膜進行膜分離過濾后，得到樣品原液。
[0024](5)樣品原液直接過X-8大孔吸附樹脂，先用4倍柱床體積的水以2 BV/h的流速洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為20%的乙醇以1.5 BV/h的流速洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為65%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脫，收集洗脫液B。
[0025]其中:原液量為大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的110% ;大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱高比為1:6。
[0026](6)將洗脫液B回收乙醇，在真空度為-0.06MPa、溫度為40°C的條件下濃縮后，在溫度為55°C下干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
[0027]實施例2從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟:
⑴將干燥后的獨活經粉碎、過50目篩，得到獨活粉。
[0028]⑵在獨活粉中加入其質量的10倍、含5%纖維素酶的pH值為5.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為45°C的條件下酶解60 min，得到酶解液。
[0029]⑶酶解液中加入體積分數為45%的乙醇溶液，在提取溫度為60°C的條件下超聲提取3次，每次50 min，合并提取液，離心后，得到上清液。
[0030]其中:獨活粉與乙醇溶液的料液比為0.04 g/mL。
[0031]⑷上清液經截留分子量為30000KD的聚砜膜或聚醚砜膜進行膜分離過濾后，得到樣品原液。
[0032](5)樣品原液直接過X-8大孔吸附樹脂，先用4倍柱床體積的水以2 BV/h的流速洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為40%的乙醇以1.5 BV/h的流速洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為70%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脫，收集洗脫液B。
[0033]其中:原液量為大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的135% ;大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱聞比為1:12。
[0034](6)將洗脫液B回收乙醇，在真空度為-0.1MPa、溫度為55°C的條件下濃縮后，在溫度為70°C下干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
[0035]實施例3從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟:
⑴將干燥后的獨活經粉碎、過60目篩，得到獨活粉。
[0036]⑵在獨活粉中加入其質量的15倍、含5%纖維素酶的pH值為6.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為50°C的條件下酶解65 min，得到酶解液。
[0037]⑶酶解液中加入體積分數為50%的乙醇溶液，在提取溫度為65°C的條件下超聲提取2次，每次55 min，合并提取液，離心后，得到上清液。
[0038]其中:獨活粉與乙醇溶液的料液比為0.05 g/mL。
[0039]⑷上清液經截留分子量為60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜進行膜分離過濾后，得到樣品原液。
[0040](5)樣品原液直接過X-8大孔吸附樹脂，先用4倍柱床體積的水以2 BV/h的流速洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為50%的乙醇以1.5BV/h的流速洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為75%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脫，收集洗脫液B。
[0041]其中:原液量為大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的125% ;大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱聞比為1:10。
[0042](6)將洗脫液B回收乙醇，在真空度為-0.07MPa、溫度為45°C的條件下濃縮后，在溫度為60°C下干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
[0043]實施例4從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟:
⑴將干燥后的獨活經粉碎、過30目篩，得到獨活粉。
[0044]⑵在獨活粉中加入其質量的12倍、含2%纖維素酶的pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為35°C的條件下酶解70 min，得到酶解液。
[0045]⑶酶解液中加入體積分數為30%的乙醇溶液，在提取溫度為50°C的條件下超聲提取2次，每次60 min,合并提取液，離心后，得到上清液。[0046]其中:獨活粉與乙醇溶液的料液比為0.02 g/mL。
[0047]⑷上清液經截留分子量為10000KD的聚砜膜或聚醚砜膜進行膜分離過濾后，得到樣品原液。
[0048](5)樣品原液直接過大孔吸附樹脂，先用水洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為15%的乙醇以3.0 BV/h的流速洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為60%的乙醇以3.0BV/h的流速洗脫，收集洗脫液B。
[0049]其中:原液量為大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的120% ;大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱聞比為1:8。
[0050](6)將洗脫液B回收乙醇，在真空度為-0.08MPa、溫度為42°C的條件下濃縮后，在溫度為65°C下干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
[0051]實施例5從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟:
⑴將干燥后的獨活經粉碎、過100目篩，得到獨活粉。
[0052]⑵在獨活粉中加入其質量的8倍、含10%纖維素酶的pH值為7.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為55°C的條件下酶解50 min，得到酶解液。
[0053]⑶酶解液中加入體積分數為65%的乙醇溶液，在提取溫度為65°C的條件下超聲提取3次，每次30 min，合并提取液，離心后，得到上清液。
[0054]其中:獨活粉與乙醇溶液的料液比為0.06 g/mL。
[0055]⑷上清液經截留分子量為30000KD的聚砜膜或聚醚砜膜進行膜分離過濾后，得到樣品原液。
[0056](5)樣品原液直接過大孔吸附樹脂，先用水洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為45%的乙醇以1.2 BV/h的流速洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為80%的乙醇以1.2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液B。
[0057]其中:原液量為大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的130% ;大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱聞比為1:10。
[0058](6)將洗脫液B回收乙醇，在 真空度為-0.09MPa、溫度為52°C的條件下濃縮后，在溫度為68°C下干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
【權利要求】
1.從獨活中制備蛇床子素的方法，包括以下步驟: ⑴將干燥后的獨活經粉碎、過30-100目篩，得到獨活粉； ⑵在所述獨活粉中加入其質量的5~15倍、含29TlO%纖維素酶的醋酸-醋酸鈉緩沖液，在溫度為35~55 °C的條件下酶解50~70 min，得到酶解液； ⑶所述酶解液中加入體積分數為30-65%的乙醇溶液，在提取溫度為5(T65°C的條件下超聲提取2~3次，每次3(T60 min，合并提取液，離心后，得到上清液；所述獨活粉與所述乙醇溶液的料液比為0.02~0.06 g/mL ； ⑷所述上清液經膜分離過濾后，得到樣品原液； (5)所述樣品原液直接過大孔吸附樹脂，先用水洗至接近無色，棄去水洗液，再用體積濃度為15飛0%的乙醇洗脫，棄去洗脫液A，繼以體積濃度為60-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液B ;所述原液量為所述大孔吸附樹脂對蛇床子素靜態飽和吸附量的1109^135% ； (6)將洗脫液B回收乙醇后，經濃縮、干燥至恒重，即得暗紅色含蛇床子素的獨活提取物。
2.如權利要求1所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟⑵中醋酸-醋酸鈉緩沖液的PH值為4.0-7.0。
3.如權利要求1所 述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟⑷中的膜分離采用截留分子量為100(T60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜。
4.如權利要求1所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟(5)中大孔吸附樹脂的塔柱徑和柱高比為1:6~1:12。
5.如權利要求1所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟(5)中乙醇的流速為1.2^3.0 BV/h。
6.如權利要求1所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟(6)中濃縮的條件是指真空度為-0.06MPa~-0.1MPa，溫度為4(T55°C。
7.如權利要求1所述的從獨活中制備蛇床子素的方法，其特征在于:所述步驟(6)中干燥的條件是指溫度為55°C~70°C。
【文檔編號】A61K36/232GK103893228SQ201410110402
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年3月24日 優先權日:2014年3月24日
【發明者】李雪虎, 梁劍平, 陸錫宏, 趙美榮, 姚海潮, 辛志君, 周翔 申請人:中國科學院近代物理研究所