一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法
【專利摘要】本發明涉及食用菌有效成份提取【技術領域】，尤其涉及一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，包括提取液準備步驟、超聲輔助堿液提取步驟、殘渣酶解步驟、乙酸乙酯萃取多酚步驟、超濾脫鹽后提取多糖步驟。本發明將輔助萃取、酶解、膜過濾等操作有機結合，同時提取多糖和多酚，簡化了生產工藝，安全可靠，產率高，較好的保留了金針菇子實體中多糖和多酚成分的生理和藥理活性，具有較大的經濟價值。
【專利說明】一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及食用菌有效成份提取【技術領域】，尤其涉及一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法。
【背景技術】
[0002]金針燕(Flammulina velutipes)又名樸燕,冬燕,隸屬真菌門,擔子菌綱,傘菌目，口蘑科，金針菌屬。金針菇營養極為豐富，有增智菇和“一休菇”等美稱，是世界上著名的食用菌，目前已發展成為第三大食用菌。金針菇清嫩爽口，鮮美味香，營養豐富，是一道極為高檔的佳肴，具有較高的營養價值。文獻報道，金針菇中含較高的蛋白質、碳水化合物和粗纖維、而脂肪含量較低，是一種不可多得的高營養食品。
[0003]金針菇含有多種活性成分，包括多糖，蛋白質、多酚類物質、揮發性成分(主要是一些不飽和酸)、氨基酸、纖維素、維生素、微量元素等，其中最主要的成份為多糖，它具有免疫調節、抗感染、抗疲勞、輔助改善記憶的功能，還具有保肝作用。在多糖的開發利用中，分離提取成本占總成本的50%左右，是獲得終產品的關鍵步驟，它不僅影響著產品的得率，還與終產品的活性、終產品的經濟價值密切相關。
[0004]金針菇多糖的提取方法主要有熱水浸提，酶法，超聲和酸堿提法等。以往食用菌多糖一般都采用酶解提取的方法，但是這種方法生產成本較高，條件要求比較苛刻，而且，從金針菇中提取多糖，提取率低，而其余大部分的多糖都滯留在殘渣中，作為動物飼料或廢棄物，造成了很大的資源浪費。目前有關金針菇多糖提取方法提取時間長，提取率很低，提取的效果極不理想。
[0005]此外，研究發現在金針菇子實體中，不僅含有較多的多糖成分，而且還有較多的多酚成分(五倍子酸、原兒茶酚、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸和槲皮素)，這些多酚成分具有抗氧化、抗衰老、抗癌，預防心血管疾病等生理和藥理活性。然而卻未見關于同時提取金針菇多糖和多酚的技術方案的報道。
【發明內容】
[0006]本發明針對現有技術中從金針菇提取多糖時，提取率低、不能同時制備多酚成分導致浪費等缺陷，提供了一種從食藥用菌金針菇中同時提取多糖和多酚的方法。
[0007]為了解決上述技術問題，本發明通過下述技術方案得以解決:
[0008]一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，包括如下步驟:
[0009]步驟(1):將金針菇干粉與質量分數為0.5%~2%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:10~1:30混合；
[0010]步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理10~30分鐘，6000轉/分鐘離心處理10分鐘，分離得到上清液I和沉淀物；
[0011]步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物8~12倍重量的去離子水，混合均勻，調PH值為4~6，加入占混合液重量0.1%~0.5%的纖維素酶，45~55°C下酶解20~50分鐘，酶解液離心，分離得上清液II和沉淀物；
[0012]步驟(4):合并步驟(2)獲得的上清液I和步驟(3)獲得的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮干燥獲得金針菇多酚；
[0013]步驟(5):步驟(4)萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至6~8，超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖。
[0014]堿液的使用更有利于超聲能量的傳遞，超聲和堿液的結合能夠很大程度上破壞金針菇的結構，使多糖和多酚的提取更為有效；纖維素酶能水解金針菇的細胞壁，有利于多酚和多糖從金針菇細胞內釋放。多酚萃取中，添加NaCl固體至飽和狀態，不僅改變了多酚在水相中的溶解度，而且改變了水相的密度，有利于萃取的完成，提高了萃取效率。多糖濃縮提取前，首先超濾脫除多糖溶液中的鹽，然后濃縮和制備同時進行，避免鹽份混入終產品中，產品純度高，同時也極大的提高了生產效率。
[0015]作為優選，步驟(1)之前，金針菇干粉經過超微粉碎處理。干燥金針菇經過超微粉碎，粒度小，比表面積大，與堿液的接觸面積大，更有利于超聲能量傳遞至金針菇細胞，有利于超聲破碎細胞，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。
[0016]作為優選，步驟(2)中，超聲處理頻率為100~500Hz，超聲處理功率為100~1000ff0 100~500Hz，100~1000W的超聲條件，能較好的破壞金針菇細胞結構，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。
[0017]作為優選，步驟(3)中，加入醋酸調節pH值。
[0018]作為優選，步驟(3)中，酶解液離心轉速6000轉/分，離心時間10分鐘。
[0019]作為優選，步驟(5)中，超濾膜截留分子量為6000D。截留分子量為6000D，較好的脫除水相中的鹽分，避免多糖終產品混合鹽分，產品純度高；此外，超濾脫鹽后，濃縮和多糖制備同時進行，提聞了生廣效率。
[0020]本發明由于采用了以上技術方案，具有顯著的技術效果:
[0021]1、金針菇先超微粉碎，更有利于多糖和多酚的提取
[0022]2、堿液的使用更有利于超聲能量的傳遞，超聲和堿液的結合能夠很大程度上破壞金針菇的結構，使多糖和多酚的提取更為有效，同時更有利于纖維素酶的處理。
[0023]3、在萃取金針菇多酚時，NaCl固體的添加，不僅改變了多酚在水相中的溶解度，而且改變了水相的密度，利于萃取的完成，提高了萃取效率。
[0024]4、采用超濾步驟，脫除多糖溶液的鹽分，后續處理中，濃縮和制備同時進行，大大提聞了提取效率。
[0025]5、采用此方法同時提取金針菇中的多糖和多酚，產品純度高，產量高，提取出的多糖具有抗腫瘤和免疫活性，提取出的多酚具有較強的抗氧化活性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0026]圖1是從金針菇中同時提取多糖和多酚的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0027]下面結合附圖與實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0028]纖維素酶:160000U/g，湖州禮來生物科技有限公司[0029]實施例1
[0030]一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，如圖1所示，包括如下步驟:
[0031]步驟(1):超微粉碎金針菇干粉后，將金針菇干粉與質量分數為0.5%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:20混合；
[0032]步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理，處理條件為200Hz，800W，10分鐘，處理液6000轉/分離心10分鐘，分離得到上清液I和沉淀物；
[0033]步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去離子水，混合均勻，調pH值為4，加入占混合液重量0.1%的纖維素酶，45°C下酶解20分鐘，酶解液6000轉/分離心10分鐘，分離得上清液II和沉淀物；
[0034]步驟(4):合并步驟(2)中的上清液I和步驟(3)中的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入占上清液50%的乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮干燥獲得金針菇多酚，多酚得率為1.06%;
[0035]步驟(5):步驟(4)萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至6，采用截留分子量6000D的超濾膜超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖，多糖得率為13.85%。
[0036]實施例2 [0037]一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，如圖1所示，包括如下步驟:
[0038]步驟(1):超微粉碎金針菇干粉后，將金針菇干粉與質量分數為1%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:30混合；
[0039]步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理，處理條件為400Hz，200W，20分鐘，處理液6000轉/分離心10分鐘，分離得到上清液I和沉淀物；
[0040]步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物8倍重量的去離子水，混合均勻，調pH值為4.5，加入占混合液重量0.3%的纖維素酶，50°C下酶解30分鐘，酶解液6000轉/分離心10分鐘，分離得上清液II和沉淀物；
[0041]步驟(4):合并步驟(2)中的上清液I和步驟(3)中的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入占上清液50%體積的乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮干燥獲得金針菇多酚，多酚得率為1.28% ；
[0042]步驟(5):步驟(4)萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至7，采用截留分子量6000D的超濾膜超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖，多糖得率為15.10%。
[0043]實施例3
[0044]一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，如圖1所示，包括如下步驟:
[0045]步驟(1):超微粉碎金針菇干粉后，將金針菇干粉與質量分數為1.5%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:25混合；
[0046]步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理，處理條件為100Hz，1000W，25分鐘，處理液6000轉/分離心10分鐘，分離得到上清液I和沉淀物；
[0047]步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物12倍重量的去離子水，混合均勻，調pH值為5，加入占混合液重量0.4%的纖維素酶，50°C下酶解40分鐘，酶解液6000轉/分離心10分鐘，分離得上清液II和沉淀物；
[0048]步驟(4):合并步驟(2)中的上清液I和步驟(3)中的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入占上清液50%體積的乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮干燥獲得金針菇多酚，多酚得率為1.35% ；
[0049]步驟(5):步驟(4)萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至7，采用截留分子量6000D的超濾膜超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖，多糖得率為14.52%。
[0050]實施例4
[0051]一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，如圖1所示，包括如下步驟:
[0052]步驟(1):超微粉碎金針菇干粉后，將金針菇干粉與質量分數為2%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:10混合；
[0053]步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理，處理條件為500Hz，100W，30分鐘，處理液離心6000轉/分離心10分鐘，分離得到上清液I和沉淀物；
[0054]步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去離子水，混合均勻，調pH值為6，加入占混合液重量0.5%的纖維素酶，55°C下酶解50分鐘，酶解液6000轉/分離心10分鐘，分離得上清液II和沉淀物；
[0055]步驟(4):合并步驟(2)中的上清液I和步驟(3)中的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入占上清液50%體積的乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮干燥獲得金針菇多酚，多酚得率為1.54% ；
[0056]步驟(5):步驟(4) 萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至7，采用截留分子量6000D的超濾膜超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖，多糖得率為16.23%。
[0057]總之，以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應屬本發明專利的涵蓋范圍。
【權利要求】
1.一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟(1):將金針菇干粉與質量分數為0.5%~2%的氫氧化鈉溶液按照質量比1:10~I: 30混合； 步驟(2):將步驟(1)中的混合液超聲處理10~30分鐘，離心，分離得到上清液I和沉淀物； 步驟(3):向步驟(2)的沉淀物中，加入沉淀物重量8~12倍的去離子水，混合均勻，調pH值至4~6，加入占混合液重量0.1%~0.5%的纖維素酶，45~55°C下酶解20~50分鐘，酶解液離心，分離得上清液II和沉淀物； 步驟(4):合并步驟(2)中獲得的上清液I和步驟(3)中獲得的上清液II，加入氯化鈉固體至飽和，加入乙酸乙酯進行萃取，分液，上層液經減壓濃縮，干燥獲得金針菇多酚； 步驟(5):步驟(4)萃取后，分液獲得的下層液，調節pH值至6~8，超濾脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得金針菇多糖。
2.根據權利要求1所述的一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步驟(1)之前，金針菇干粉經過超微粉碎處理。
3.根據權利要求1所述的一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步驟(2)中，超聲處理頻率為100~500Hz，超聲處理功率為100~1000W。
4.根據權利要求1所述 的一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步驟(3)中，采用醋酸調節pH值。
5.根據權利要求1所述的一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步驟(3)中，酶解液離心轉速6000轉/分，離心時間10分鐘。
6.根據權利要求1所述的一種從金針菇中同時提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步驟(5)中，超濾膜截留分子量為6000D。
【文檔編號】A61K36/06GK103788229SQ201410056357
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年2月19日 優先權日:2014年2月19日
【發明者】張作法, 范雷法, 呂國英, 苗立祥, 潘慧娟 申請人:浙江省農業科學院