一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法與應用，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成：黃柏1～100、赤芍1～100。本發明還公開了上述藥物的制備方法。本發明藥物組合物可以應用于制備治療阿爾茨海默病的藥物。
【專利說明】一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥【技術領域】，特別涉及一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]阿爾茨海默病(Alzheimer Disease, AD)是一種起病隱匿的進行性發展的神經系統退行性疾病。臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現為特征，病因迄今未明。65歲以前發病者，稱早老性癡呆；65歲以后發病者稱老年性癡呆。
[0003]全世界有2430萬人患有癡呆癥，且每年新增460萬新病例，幾乎每7秒鐘就有一人患上癡呆癥。全世界65歲及以上的老年人口有2 / 3生活在發展中國家，幾乎同樣比例的阿爾茨海默病患者也在發展中國家，并仍在快速增長。我國是世界上老年人口基數最大的國家，也是阿爾茨海默病患者基數最多的國家。據估計，我國已有600~700萬阿爾茨海默病患者，且在65歲及以上老齡人口中每年以5~7%的速度在增長。老年性癡呆是繼腫瘤、心臟病、腦血管病之后引起老年人死亡的第四大病因。因此，尋找治療阿爾茨海默病癥的有效藥物，已成為醫藥領域的研究熱點之一。本病目前尚無能夠有效逆轉疾病進展的藥物，主要是以改善患者的癡呆癥狀和提高日常生活能力為主，且副作用較多。中藥由于其臨床應用的整體觀念及毒副作用小等潛在優勢 ，在老年性癡呆癥的臨床防治中得到廣泛的應用。
[0004]阿爾茨海默病主要表現為記憶喪失、認知功能障礙和行為障礙，并伴有一些精神病癥狀。AD的主要病理學變化為老年斑(Senile Plaque, SP)形成，神經原纖維纏結(Neurofibrillary Tangles, NFT)及神經細胞減少等。該病的發生機理有各種學說，其中一個主要的學說是淀粉樣肽假說:凝聚肽淀粉樣β蛋白(Αβ)在腦實質的沉積啟動病理級聯，導致神經原纖維纏結(NFT)形成，神經元丟失和癡呆表現。Αβ是淀粉樣蛋白前體(β-ΑΡΡ)通過某種降解途徑產生的，由39~42個氨基酸殘基組成，其活性片段主要在第25~35個氨基酸殘基(GSNKGA1-1GLM)。Αβ具有神經營養和神經毒性的雙重生物活性，其在腦內沉積與AD形成密切相關，有研究提示A β沉積是AD患者出現最早的神經病理學改變。研究表明，Αβ可能通過以下幾條途徑引起神經元變性:①影響跨膜離子轉運，如Ca2+通道開放，細胞內Ca2+濃度升高；②激活神經元的凋亡過程；③增加和放大各種傷害性刺激，如興奮性毒素、自由基等的細胞損傷效應。
[0005]目前研究認為，癡呆與大腦皮質和皮質下神經細胞的退化有關，準確的病因學尚無結論。病理生理學研究發現，阿爾茨海默病癥患者大腦的新皮質、海馬區、基底核和藍斑核等部位的神經元大量丟失，同時伴有5-羥色胺(5-ΗΤ)、去甲腎上腺素、生長抑素釋放因子等多種神經遞質在腦內濃度減小，特別是乙酰膽堿的減少，從而導致一系列認知和記憶等功能障礙。
[0006]赤茍為毛茛科植物茍藥Paeonia lactiflora Pal1.或川赤茍Paeonia veichiiLynch的干燥根，味苦，性微寒，歸肝經。功能清熱涼血，散瘀止痛；主治熱入營血，溫毒發斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經閉痛經，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。現代藥理研究表明，赤芍具有多種藥理功能，主要作用于心血管系統，另外還具有抗腫瘤、抗內毒素等作用。化學研究發現赤芍中化合物種類較多，其藥效成分主要是以芍藥苷為主的單萜及其苷類成分、沒食子酸及其衍生物等。研究表明芍藥苷可通過活化腺苷Al受體來抑制神經細胞營養不良，從而降低MTPT誘導帕金森病小鼠的毒性；芍藥苷還可改善6-羥基多巴胺誘導的神經損傷，但對多巴胺D2受體無直接作用，可作為治療帕金森病的一種潛在的非多巴胺能制劑。
[0007]黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodendron chinense Schneid.的干燥樹皮。黃柏味苦、性寒，歸腎、膀胱經。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效。臨床上用于治療濕熱瀉痢、黃疸尿赤、帶下陰癢、熱淋澀痛、腳氣痿甓、骨蒸勞熱，盜汗，遺精，瘡瘍腫毒，濕疹濕瘡。關于黃柏的藥理作用已有大量的研究報道，歸納起來有如下幾個方面:抗細菌、真菌、病毒及其他病原微生物的作用；抗心律失常、降血壓等對心血管系統的作用；對消化系統有抗消化道潰瘍、收縮或舒張腸管、促進胰腺分泌等作用；并有中樞神經系統抑制作用，抑制細胞免疫反應的作用，降血糖作用等。黃柏的這些藥理作用的活性成分除提取物、總生物堿外，還包括了小檗堿、黃柏堿、木蘭堿、巴馬汀、藥根堿、黃柏酮、黃柏內酯等單體化合物。其中主要活性成分為小檗堿。
[0008]目前報道的以黃柏、赤芍配伍應用，多用于治療急性重型肝炎、前列腺炎和痢疾等疾病，未見有治療阿爾茨海默病的相關報道。
[0009]本發明提供的藥物組合物具有協同的藥理作用，較之每個單味藥材單獨給藥具有顯著的優勢。
【發明內容】
[0010]本發明的目的是提供一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物；
`[0011]本發明的另一目的是提供該藥物組合物的制備方法；
[0012]本發明的再一個目的是提供該藥物組合物在制備治療阿爾茨海默病的藥物中的應用。
[0013]本發明的目的是通過以下方式實現的:
[0014]一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成的:黃柏I~100、赤芍I~100。
[0015]上述該藥物組合物優選由以下重量份的原料藥組成:黃柏1、赤芍100。
[0016]上述該藥物組合物優選由以下重量份的原料藥組成:黃柏50、赤芍50。
[0017]上述該藥物組合物優選由以下重量份的原料藥組成:黃柏100、赤芍I。
[0018]上述該藥物組合物制備方法為以下方法中的任意一種:
[0019]a.黃柏、赤芍，加8~10倍量50~95%乙醇浸泡I~3小時，加熱回流提取I~4次，每次I~3小時，過濾或離心，合并提取液即為醇提取液，減壓濃縮后上大孔樹脂純化處理，真空干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑；
[0020]b.黃柏、赤芍，加入3~10倍量石油醚，沸程60~90°C回流I~3小時，脫脂后，抽濾、風干，加入3~10倍量50~95%乙醇回流I~3小時，抽濾，濾渣加入10~20倍量蒸餾水75~90°C提取I~3次，每次I~5小時，合并提取液，過濾，離心，旋轉蒸發濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑；
[0021]c.黃柏、赤芍加8~15倍水，浸泡0.5~2小時，提取I~4次，每次I~3小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑。
[0022]上述的制備方法，優選的技術方案為: [0023]a.黃柏、赤芍，加10倍量75%乙醇浸泡2小時，加熱回流提取2次，每次2小時，過濾或離心，合并兩次提取液即為醇提取液，減壓濃縮后上D-101大孔樹脂純化處理，真空干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑；
[0024]b.黃柏、赤芍，加入5倍量石油醚，沸程60~90°C回流2小時，脫脂后，抽濾、風干，加入5倍量95%乙醇回流2小時，抽濾。濾渣加入20倍量蒸餾水80°C提取2次，每次4小時，合并提取液，過濾，離心，旋轉蒸發濃縮，干燥，粉碎成細粉；加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑；
[0025]c.黃柏、赤芍加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉；加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑。
[0026]本發明的應用中，所述藥物組合物制劑劑型為口服制劑或注射劑，為使上述劑型能夠實現，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、抗氧劑、抑菌劑等，填充劑包括:淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括:淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素納等，潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括:水、乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素，明膠溶液、蔗糖溶液、聚乙烯比咯烷酮等，甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括:甜味劑及各種香精，防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等，增溶劑包括:吐溫-80、羥丙基-β-環糊精、膽汁、羥基磺酸鈉等，助溶劑包括:苯甲酸鈉、水楊酸鈉、枸櫞酸鈉、對氨基苯甲酸鈉、尿素、菸酰胺，異菸酰胺、葡甲胺與葡萄糖等，乳化劑包括:普流羅尼、司盤-80、卵磷脂及豆磷等，抗氧劑包括:亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、硫脲、維生素C、叔丁基對羥基茴香醚、二丁基苯酚、沒食子酸丙酯等，抑菌劑包括:苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲酚等。
[0027]為了更好地理解本發明，發明人對本發明提供的技術方案進行了實驗研究，用來證明本發明的技術效果，下述實驗用于進一步說明本發明的技術效果，但不限制本發明。
[0028]實驗1:本發明藥物組合物對A β 25-35所致SH-SY5Y細胞損傷的保護作用
[0029]1、藥物、材料與方法
[0030]1.1 藥物[0031]藥物A:黃柏10g、赤芍1000g，加10倍量75%乙醇浸泡2小時，加熱回流提取2次，每次2小時，過濾或離心，合并兩次提取液即為醇提取液，減壓濃縮后上D-101大孔樹脂純化處理，真空干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制；
[0032]藥物B:黃柏50g、赤芍50g，加入5倍量石油醚，沸程60~90°C回流2小時，脫脂后，抽濾、風干，加入5倍量95%乙醇回流2小時，抽濾。濾渣加入20倍量蒸餾水80°C提取2次，每次4小時，合并提取液，過濾，離心，旋轉蒸發濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制；
[0033]藥物C:黃柏1000g、赤芍IOgJP 10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制；
[0034]藥物D (黃柏):黃柏500g，加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制:
[0035]藥物E (赤芍):赤芍500g，加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制；
[0036]藥物F(黃柏+赤芍+遠志):黃柏、赤芍、遠志各500g，加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，實驗前臨時配制；
[0037]藥物G(黃柏+赤芍+丹參):黃柏、赤芍、丹參各500g，加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉，即得，以DMSO配制藥物母液，再以無血清培養基稀釋到所需濃度，`實驗前臨時配制。
[0038]1.2 材料
[0039]SH-SY5Y細胞系，南京凱基生物科技發展有限公司；RPMI_1640，南京凱基生物科技發展有限公司；小牛血清，浙江天杭生物科技有限公司；DMS0，國藥集團化學試劑有限公司；Αβ 25-35，sigma公司；姜黃素，南京澤朗醫藥科技有限公司；CCK_8，碧云天生物技術研究所。
[0040]1.3 方法
[0041](I)細胞培養
[0042]細胞傳代接種于培養瓶中，于37°C、5% CO2、飽和濕度的培養箱中培養，當培養瓶中的細胞基本長滿后(細胞保持在對數生長期)，棄去培養液，加入適量PBS溶液輕輕蕩洗，棄去，然后加入0.25%胰蛋白酶溶液0.5ml消化2~3分鐘，加入完全培養基2ml終止胰酶的作用，將細胞轉入玻璃離心管中，lOOOr，離心4min，棄去上清，加入完全培養基，小心吹打成單細胞。細胞自動計數儀計數，按照4父104個/ mL，每孔100 μ L接種于96孔細胞培養板中，邊緣孔加100 μ L無菌水，繼續于37°C、5% CO2培養箱中培養18~20小時后進行給藥試驗。
[0043](2)分組及給藥
[0044]實驗設空白對照組(加入100 μ L的空白培養基)、DMSO組(加入100 μ L含I /1000DMS0的空白培養基)、模型組(加入100 μ L含I / 1000DMSO的空白培養基)、陽性對照組(加入100 μ L含10 μ M姜黃素的空白培養基，DMSO含量在I / 1000)和樣品組(加入IOOyL含特定濃度樣品的空白培養基，DMSO含量在I / 1000)。每組設5個復孔。藥物作用4h后，空白對照組和DMSO組加入100 μ L無血清空白培養基，模型組、陽性藥組、樣品組分別加入IOOyL含20μ MA β 25-35的空白培養基(終濃度為10 μ M)，板中終體積為200 μ L，繼續孵育48h。
[0045](3)細胞活力測定
[0046]A β 25-35損傷細胞48h后，棄掉板中所有液體，PBS洗板一次，各孔加入100 μ L的CCK-8溶液(用無血清1640培養基將CCK-8母液稀釋10倍)，放入細胞培養箱中培養2h后，于酶標儀450nm處測定吸光值。
[0047]2、結果處理及分析
[0048]各實驗組細胞存活率=實驗組/ DMSO組X 100%
[0049]模型組細胞損傷率=1-模型組/ DMSO組X 100 %
[0050]給藥組細胞保護率=(給藥組-模型組)/ (DMS0組-模型組)X100%
[0051 ] 2.1組合物對A β 25-35致SH-SY5Y細胞損傷的保護作用
[0052]結果顯示，Αβ 25-35作用48h后，模型組的細胞存活率為56%，與溶劑對照組(DMSC^i)比較有顯著差異(Ρ<0.01);藥物A—G組與A (6 25-35共同作用48h后，細胞保護率明顯增加，與模型組比較有顯著性差異(?〈0.01)，其中藥物么、8、(:組作用較強，(保護率分別為 104%,104%,96% )。
[0053]表1組合物對A β 25-35致S H-SY5Y細胞損傷的保護作用(X±S )
[0054]
【權利要求】
1.一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成的:黃柏1~100、赤芍1~100。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成的:黃柏1、赤芍100。
3.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成的:黃柏50、赤芍50。
4.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料藥組成的:黃柏100、赤芍1。
5.根據權利要求1~4中任一權利要求所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物的制備方法為以下方法中的任意一種: a.黃柏、赤芍，加8~10倍量50~95%乙醇浸泡1~3小時，加熱回流提取1~4次，每次1~3小時，過濾或離心，合并提取液即為醇提取液，減壓濃縮后上大孔樹脂純化處理，真空干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑； b.黃柏、赤芍，加入3~10倍量石油醚，沸程60~90°C回流1~3小時，脫脂后，抽濾、風干，加入3~10倍量50~95%乙醇回流1~3小時，抽濾，濾渣加入10~20倍量蒸餾水75~90°C提取1~3次，每次1~5小時，合并提取液，過濾，離心，旋轉蒸發濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑； c.黃柏、赤芍加8~15倍水，浸泡0.5~2小時，提取1~4次，每次1~3小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉；加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑。
6.根據權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物的制備方法為以下方法中的任意一種: a.黃柏、赤芍，加10倍量75%乙醇浸泡2小時，加熱回流提取2次，每次2小時，過濾或離心，合并兩次提取液即為醇提取液，減壓濃縮后上D-101大孔樹脂純化處理，真空干燥，粉碎成細粉，加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑； b.黃柏、赤芍，加入5倍量石油醚，沸程60~90°C回流2小時，脫脂后，抽濾、風干，加入5倍量95%乙醇回流2小時，抽濾，濾渣加入20倍量蒸餾水80°C提取2次，每次4小時，合并提取液，過濾，離心，旋轉蒸發濃縮，干燥，粉碎成細粉；加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑； c.黃柏、赤芍加10倍水，浸泡2小時，提取2次，每次2小時，提取液濃縮，干燥，粉碎成細粉；加入中藥制劑中的常規藥用輔料，采用藥劑學中常規的制藥方法，制成所需中藥制劑。
7.根據權利要求5~6中任意一項所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于采用藥劑學中常規的制藥方法制備成口服制劑或注射劑。
8.根據權利要求1~4中任一權利要求所述的藥物組合物，其特征在于該組合物在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/756GK103768222SQ201410043397
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月24日 優先權日:2014年1月24日
【發明者】蕭偉, 王振中, 費洪強, 李娜, 曹亮, 孫林, 劉文君, 孟兆青, 丁崗, 王躍生, 徐海娟 申請人:江蘇康緣藥業股份有限公司