一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于中獸藥【技術領域】，公開了一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物及其制備方法。該藥物包括以下質量配比的原料藥：紫錐菊30～50份，黃芪30～45份，黃芩10～25份，金銀花10～25份，連翹5～15份。該藥物用于防治禽新城疫、法氏囊病，能有效抑制畜禽細菌、病毒性疾病蔓延和擴散，適用于禽新城疫、傳染性法氏囊病預防及治療，兼有藥物與營養劑雙重功能，可作為免疫增強劑和促進劑，增強畜禽機體免疫力，提高防病抗病力。
【專利說明】一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于中獸藥【技術領域】，具體涉及一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物及其制備方法。
【背景技術】
[0002]新城疫(newcastle disease, ND)是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。雛雞最易感染，成雞易感性較低，病雞是本病的主要傳染源，病毒可經消化道、呼吸道，也可經眼結膜、受傷的皮膚和泄殖腔黏膜侵入機體。臨床以高熱、呼吸困難、下痢、神經紊亂、黏膜和漿膜出血為特征。雞發病多呈急性、亞急性和慢性經過，具有很高的發病率和病死率，是危害養禽業的一種主要傳染病。
[0003]目前，雞新城疫病的防治存在如下問題:一是病源因素復雜，潛伏期2~15天或更長，有病毒、細菌、支原體等混合感染，單純靠疫苗不能有效預防。二是由于抗生素和化學抗菌藥物的大量使用，病原微生物產生了廣泛的耐藥性，使治療效果不斷下降，臨床又不得不加大劑量并延長給藥時間，大幅度提高了治療難度與成本；三是金剛烷胺、病毒唑等抗病毒藥物廣泛禁用，臨床難以找到比較對癥的特效藥，速發型病雞死亡率高，有幸存活下來的雞，出現陣發性痙攣，肌肉震顫，頸部扭轉，角弓反張等神經癥狀，食用價值明顯降低，甚至被淘汰。四是血清治療也有一定危險，有可能帶來其他疾病的發生。由于中藥的成分較復雜，使得病原對某一單一成分不產生耐藥性，其作用廣泛，相對安全，因此中藥的應用具有重要意義。
[0004]目前，也有采用中藥防治禽新城疫病的報道。但尚存在下列問題:一是目前治療新城疫病的中藥以內服或拌料散劑劑型為主，不能混飲給藥，現代集約化飼養場使用不便；二是多數停留在經驗方水平，未進行規范的臨床試驗，不能從現代傳染病學角度證明其有效性；三是未從現代藥理學角度闡明其作用機理。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物及其制備方法，用于防治禽新城疫、法氏囊病，能有效抑制畜禽細菌、病毒性疾病蔓延和擴散，適用于禽新城疫、傳染性法氏囊病預防及治療，兼有藥物與營養劑雙重功能，可作為免疫增強劑和促進劑，增強畜禽機體免疫力，提高防病抗病力。
[0006]為了達到上述問題，本發明是通過以下技術方案予以實現。
[0007]技術方案一:
[0008]一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，其特征在于，包括以下質量配比的原料藥:
[0009]紫錐菊30~50份，黃芪30~40份，黃芩16~20份，金銀花15~20份，連翹8~12份，采用水提柱分離醇洗脫法制備有效成分。
[0010]進一步地，所述原料藥的質量配比為:紫錐菊30~50份，黃芪30~40份，黃芩16~20份，金銀花15~20份，連翹8~12份。
[0011 ] 更進一步地，所述的原料藥的質量配比為:紫錐菊40份，黃芪40份，黃芩17.5份，金銀花17.5份，連翹10份。
[0012]技術方案二:
[0013]一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0014](I)以質量份數計，稱取紫錐菊30~50份，黃芪30~40份，黃芩16~20份，金銀花15~20份，連翹8~12份；粉碎后過60目篩，以1:12 (m/v)的料液比于80°C下回流水提取3次，每次為2h，收集提取液； [0015](2)合并提取液，濾過，濃縮后，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的體積濃度30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.16~1.22的黃褐色流浸膏；
[0016](3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖I~2份、白色淀維粉4~5份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，再將酸性顆粒和堿性顆粒混合均勻，整粒，得到獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物。
[0017]與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果:
[0018](I)本發明提供的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病，能有效抑制畜禽細菌、病毒性疾病蔓延和擴散，適用于禽新城疫、傳染性法氏囊病的預防及治療，兼有藥物與營養劑雙重功能，可作為免疫增強劑和促進劑，增強畜禽機體免疫力，提高防病抗病力。與抗生素及其他藥物治療禽新城疫病產生藥物殘留、產生的耐藥性相比，安全性顯著提升、效果確切；其推廣應用，可有效降低禽肉、蛋產品中藥物殘留的風險。
[0019](2)本發明提供的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物的制備方法，精選紫錐菊、黃芪、黃芪、金銀花及連翹中藥材，采用提取分離技術，結合現代化泡騰顆粒制劑技術，制備而成獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物(簡稱紫芪泡騰顆粒)。提前喂服本發明藥物可顯著降低新城疫發病率，其保護率達89.6% ;新城疫病雞服用24h后，臨床癥狀基本消失，治療組療效極顯著優于感染組。
[0020](3)本發明提供獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，為純中藥泡騰顆粒藥物，用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病，可混飼或混飲給藥，與傳統的中藥散劑相比，具有使用方便、作用迅速、生物利用度高等特點。
[0021](4)本發明獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物的制備方法，首次分離純化得到5%紫錐菊菊苣酸、85%高含量黃芪多糖有效活性成分，并運用現代制劑緩釋控釋技術，添加泡騰輔藥成分，制備出的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物為紫錐菊黃芪多糖緩釋控釋泡騰顆粒。
[0022](5)本發明有效的建立了紫芪泡騰顆粒的工藝篩選模型和質量控制檢測體系，獲得工藝穩定、質量可控的中獸藥新制劑。[0023](6)本發明在傳統中獸藥制劑的基礎上，優選對畜禽免疫力及呼吸道疾病療效顯著的中藥材，利用藥物緩釋控釋技術，開發出獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，為中獸藥現代化和綠色養殖提供便利。
【具體實施方式】
[0024]本發明提供的一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，采用具有清熱解毒、宣肺平喘、燥濕止痢、提升免疫力的中藥組方，采用水提柱分離醇洗脫法，在高效提取有效成分的同時，減少纖維素、鞣質、色素等無效成分對成品溶解性能的影響；最后制成溶解性好、便于混飲給藥的泡騰顆粒藥物。下面結合具體的組方及其制備過程，進一步闡明本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。
[0025]實施例1
[0026]本實施例的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，由下述質量配比的原料藥制成:紫錐菊40份，黃芪40份，黃芩17.5份，金銀花17.5份，連翹10份。
[0027]具體操作步驟:
[0028](I)按照質量配比，將紫錐菊、黃芪、黃芩、金銀花和連翹5味中藥飲片，混合均勻，加入總質量12倍的水常壓下煎煮提取2小時，收集煎煮提取的煎液，然后再加入同樣質量的水再煎煮提取2次，收集提取液。
[0029](2)合并提取液，濾過，濃縮，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的體積濃度30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.19的流浸膏，產品為黃褐色。
[0030](3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖2份、白色淀維粉4份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中`加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，將兩種干顆粒混合均勻，整粒(干顆粒水分< 2%)，得到用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物。
[0031]實施例2
[0032]本實施例的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，由下述質量配比的原料藥制成:紫錐菊45份，黃芪45份，黃芩20份，金銀花20份，連翹12份。
[0033]具體操作步驟:
[0034](I)按照質量配比，將紫錐菊、黃芪、黃芩、金銀花和連翹5味中藥材粉碎后，混合均勻，加入總質量10倍的水常壓下煎煮提取2小時，收集煎煮提取的煎液，然后再加入同樣質量的水再煎煮提取2次，收集提取液。
[0035](2)合并提取液，濾過，濃縮，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的體積比30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.20的流浸膏，產品為黃褐色流浸膏。
[0036](3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖2份、白色淀維粉5份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，將兩種干顆粒混合均勻，整粒(干顆粒水分< 2%)，得到用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物。
[0037]實施例3
[0038]本實施例的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，由下述質量配比的原料藥制成:紫錐菊32份，黃芪45份，黃芩10份，金銀花20份，連翹15份。
[0039]具體操作步驟:
[0040](I)按照質量配比，將紫錐菊、黃芪、黃芩、金銀花和連翹5味中藥材粉碎后，混合均勻，加入總質量12倍的水常壓下煎煮提取1.5小時，收集煎煮提取的煎液，然后再加入同樣質量的水再煎煮提取2次，收集提取液。
[0041](2)合并提取液，濾過，濃縮，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.18的浸膏，產品為黃褐色流浸膏。
[0042](3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖1份、白色淀維粉5份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，將兩種干顆粒混合均勻，整粒(干顆粒水分< 2%)，得到用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病的獸用抗 病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物。
[0043]實施例4
[0044]本實施例的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物藥物，由下述質量配比的原料藥制成:紫錐菊48份，黃芪40份，黃芩12份，金銀花25份，連翹8份。
[0045](I)按照質量配比，將紫錐菊、黃芪、黃芩、金銀花和連翹5味中藥材粉碎后，混合均勻，加入總質量12倍的水常壓下煎煮提取2.5小時，收集煎煮提取的煎液，然后再加入同樣質量的水再煎煮提取2次，收集提取液。
[0046](2)合并提取液，濾過，濃縮，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的體積濃度30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.21的流浸膏，產品為黃褐色流浸膏。
[0047](3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖1份、白色淀維粉4份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，將兩種干顆粒混合均勻，整粒(干顆粒水分< 2%)，得到用于防治禽新城疫、傳染性法氏囊病的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物。
[0048]本發明獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物(紫芪泡騰顆粒藥物)可用于動物免疫抑制、免疫缺陷及病毒性感染疾病，適用于禽新城疫病預防及治療，兼有藥物與營養劑雙重功能，可作為免疫增強劑和促進劑，增強畜禽機體免疫力，提高防病抗病力。由于紫錐菊含有豐富的菊苣酸、多酚，咖啡酸衍生物和多糖，提高非特異性T細胞的活性，產生干擾素，促進淋巴細胞的分泌，通過增加粒細胞與白細胞的數目而發揮作用，提高單核細胞與中性病毒的趨藥性而產生溶菌作用，能有效抑制畜禽細菌、病毒性疾病蔓延和擴散，具有較強的抗菌抗病毒作用。黃芪含豐富黃芪多糖、皂甙類、黃酮類、氨基酸類有效成分，其中黃芪多糖可作為免疫促進劑或調節劑，同時具有抗病毒、抗腫瘤、抗應激、抗氧化等作用，可在獸藥、畜牧養殖中廣泛應用。
[0049]以下通過臨床動物試驗來說明本發明的有益效果，通過實驗對制劑穩定性、安全性進行考察。
[0050]試驗I本發明藥物體外抗肉雞新城疫病毒試驗
[0051]1實驗方法
[0052]1.1 材料
[0053]雞胚:9~11d低免疫雞胚，購自西安畜牧公司；種毒:雞新城疫病毒株，由西北農林科技大學禽病教研室保存。
[0054]1.2試驗藥物
[0055]紫芪泡騰顆粒(按實施例1法制備，自制)；芪貞增免顆粒(市售)；芪板青顆粒(市售);
[0056]1.3藥物細胞毒性測定(MTT法)
[0057]雞胚成纖維細胞(CEF)制備:選擇9-10日齡發育良好的SPF胚，用5%的碘棉消毒蛋殼氣室部位，再用酒精棉脫碘。無菌取出雞胚，放入滅菌的玻璃皿內，用PH7.2的PBS沖洗一次，去頭，四肢和內臟。再用PH7.2的PBS沖洗兩次。用鑷子捏成小塊(2-3mm3)，用PH7.2的PBS沖洗兩次。雞胚約加4ml0.25%胰酶溶液，38°C消化30min，期間15min輕搖一次。期間配制細胞培養液，組成為:MEM培養基、2%雙抗、7.5%碳酸氫鈉加入2%、6%牛血清、3%谷氨酰胺加入1%。消化結束，棄掉胰酶消化液，用PH7.2的PBS沖洗兩次，再用細胞生長液沖洗一次。加入適量的細胞生長液，用刻度吸管反復吹打(使細胞充分分散)。將細胞分散液倒入帶6~8層紗布的100ml燒杯中(過濾之前先用少許細胞培養液潤濕紗布)，加入適量培養液(40ml/胚)，過濾。按上述方法操作重慮一遍。計數,每Iml濾液中約含活細胞100萬-150萬個，分裝，置于37°C含5%C02 ( 二氧化碳)培養箱中培養24~48h。
[0058]待上述制備雞胚成纖維細胞(CEF)長滿單層時，傾棄培養液，加入胰酶消化，傳至96孔無菌細胞培養板中，每孔加入100 μ L0置于5%C02(二氧化碳)培養箱中培養24h~48h，使細胞生長成單層備用。將藥物用細胞培養液連續對倍稀釋(原液1:5、1:10U:20,1:40……1:640)。稀釋后再把不同濃度的藥物加入棄去上清液的細胞培養孔中，每孔100 μ L，每個濃度重復4孔，同時設立細胞對照孔(不加藥，只加培養液)，再每孔補加100 μ L細胞培養液，置37°C，5%C02培養箱內培養。培養48h后，棄培養液上清，每孔加入含5mg/mL噻唑藍(MTT)的細胞培養基(DMEM)培養液20uL，繼續培養lh，棄MTT上清，每孔加入溶解液二甲基亞砜(DMSO) 150uL，振蕩5~10分鐘，待結晶完全溶解后，置酶標儀570nm處測定OD值(0D值為每孔在570nm處與630nm處吸光度的差值)，參考波長為630nm，并根據公式計算細胞存活率，找出藥物對細胞的最大無毒濃度范圍。
[0059]細胞存活率(%)=試驗孔的OD值/對照孔的OD值X 100
[0060]1.4細胞半數感染量(TCID5tl)測定
[0061]將培養成單層的細胞傳至96孔細胞培養板上，置于5%C02孵箱中培養24h。將病毒液用維持液(含2%小牛血清的MEM營養液)10倍連續稀釋(ΙΟ—1…10_8)。將培養成單層的CEF各孔的培養液棄去，每孔洗滌2次，各孔加入不同濃度的病毒液100 μ L，37°C吸附1.5h，各孔再補加100 μ L維持液(含2%犢牛血清的MEM營養液)，每個濃度4個重復，設正常細胞對照孔。逐日觀察各孔細胞病變(CPE)，連續觀察7d，記錄CPE情況。
[0062]1.5抗雞新城疫病毒(NDV)藥效測定
[0063]1.5.1 預防組
[0064]棄去96孔細胞培養板上已長滿的CEF上清液，試驗選用最大無毒濃度(TDO)藥液，用維持液倍比稀釋7個濃度，取每個濃度藥液100 μ L作用lh，每孔再加入10TCID50 (細胞半數感染量)的NDV100 μ L，吸附1.5h，每個濃度4個重復。并設立細胞對照、病毒對照。置于37°C，5%C02培養箱中培養48h后，棄上清液，用MTT法測定細胞OD值，判定不出現細胞病變的藥物最高稀釋倍數。
[0065]1.5.2 治療組
[0066]棄去單層CEF細胞上清液后，每孔加入IOTCID5tl的NDV100 μ L，吸附1.5h，棄去病毒液。已感染病毒的細胞孔內加入無毒范圍內各稀釋度藥物100 μ L，每個濃度4個重復。各孔補加0.1mL維持液。置于371:，5%0)2培養箱中培養。其他同上。通過OD值計算出抑
制指數:
[0067]
【權利要求】
1.一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，其特征在于，包括以下質量配比的原料藥:紫錐菊30~50份，黃芪30~45份，黃芩10~25份，金銀花10~25份，連翹5~15份。
2.如權利要求1所述的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，其特征在于，紫錐菊30~50份，黃芪30~40份，黃芩16~20份，金銀花15~20份，連翹8~12份。
3.如權利要求1所述的獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物，其特征在于，紫錐菊40份，黃芪40份，黃芩15份，金銀花15份，連翹10份。
4.一種獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: Cl)以質量份數計，稱取紫錐菊30~50份，黃芪30~40份，黃芩16~20份，金銀花15~20份，連翹8~12份；粉碎后過60目篩，以1:12 (m/v)的料液比于80°C下回流水提取3次，每次為2h，收集提取液； (2)合并提取液，濾過，濃縮后，采用AB-8樹脂吸附分離，以4BV/h上柱吸附，先用5BV去離子水以2BV/h洗去雜質，再用6BV的體積濃度30%乙醇以2BV/h上柱進行解吸，得到高含量紫芪洗脫液，洗脫液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.16~1.22的黃褐色流浸膏； (3)再以質量份數計，稱取無水葡萄糖I~2份、白色淀維粉4~5份，依次與流浸膏充分混合均勻后，分成等量兩部分，一部分中加入枸櫞酸濕法或噴霧干燥法制粒制成酸性顆粒，干燥備用；另一部分中加入弱堿性材料碳酸氫鈉濕法或噴霧干燥法制粒制成堿性顆粒，干燥備用；最后，再將酸性顆粒和堿性顆粒混合均勻，整粒，得到獸用抗病毒中藥紫芪泡騰顆粒藥 物。
【文檔編號】A61P31/14GK103768157SQ201410007194
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月6日 優先權日:2014年1月6日
【發明者】洪濤, 杜航空, 常宏宇 申請人:陜西冠嘉高科生物技術有限公司