一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白楤木提取物的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白楤木提取物的制備方法，將長白楤木干燥的芽或葉或根粉末加入8-10倍（V/W）量的70%（V/V）乙醇于60℃浸提2-3h，過濾，濾渣再分別用8倍（V/W）量與6倍（V/W）量的70%（V/V）乙醇于60℃浸提2h各一次，合并三次濾液，回收乙醇至無醇味，按上樣液與樹脂用量為2.5：1（V/V）的比例，以AB-8大孔吸附樹脂進行吸附，先以3倍柱體積量的50%（V/V）乙醇洗脫除雜，然后以3倍柱體積量的70%（V/V）乙醇洗脫，收集70%（V/V）乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮經真空干燥，得到長白楤木提取物，該提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性。
【專利說明】一種抑制C1-葡萄糖苷酶活性的長白锪木提取物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥產品研究開發【技術領域】，特別是涉及一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物的制備方法。
【背景技術】
[0002]長白樹JfAraliacon tinen talisKi tagawa又名草本龍芽、草本刺老鴉(朝語意譯)，具有食用、保健及醫藥等眾多功能，是稀有的高檔珍貴野生植物。其春季長出的芽可以食用，具有很好的食味和獨特的清香，介于刺老鴉和香椿芽之間。其根或根皮可入藥，具祛風燥濕、解熱鎮痛、疏風活血、利尿解毒、鎮驚補虛等功能，而其葉繁盛，可作觀賞植物。
[0003]α -葡萄糖苷酶存在于小腸刷狀緣膜的近腔上皮細胞內，主要作用是使淀粉、糊精、麥芽糖和蔗糖等降解為單糖。α-糖苷酶抑制劑是目前研究較多的糖尿病口服降糖藥物，作用在小腸粘膜刷狀緣，可通過延緩碳水化合物在腸道的消化和吸收，抑制餐后血糖水平的升高，同時在一定程度上能降低空腹血糖，對糖尿病特別是2型糖尿病的預防和治療具有積極作用。研究表明，該酶抑制劑不僅可防治糖尿病、肥胖癥，還具有抗腫瘤和AIDS病毒的作用，因此研究α -葡萄糖苷酶抑制作用，具有重要的臨床意義。
[0004]篩選α -葡萄糖苷酶抑制劑大多以4-硝基苯-a _D_吡喃葡萄糖苷(PNPG)為底物，測定α-葡萄糖苷酶抑制活性。目前關于長白惚木對于α-葡萄糖苷酶的抑制活性及該提取物的制備工藝尚無報道，研制一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物，并以臨床應用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)為對照，評價該提取物對α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可為更好地開發利用長白惚木在防治糖尿病、肥胖癥、抗腫瘤和AIDS病毒方面提供依據和廣闊的應用前景。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物的制備方法，研制一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物，并以臨床應用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)為對照，評價該提取物對α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可為更好地開發利用長白惚木在防治糖尿病、肥胖癥、抗腫瘤和AIDS病毒方面提供依據和廣闊的應用前景。
[0006]本發明提供的抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物的制備方法如下:
(1)將長白惚木干燥的芽或葉或根的粉末加入8-10倍(V/W)量的70%(V/V)乙醇于60°C浸提2-3h，過濾，濾渣再分別用8倍(V/W)量與6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次濾液；
(2)將步驟(1)所得濾液回收乙醇至無醇味，按上樣液與樹脂用量為2.5:1 (V/V)的比例，以AB-8大孔吸附樹脂進行吸附，以3倍柱體積量的50% (V/V)乙醇洗脫除雜，然后以3倍柱體積量的70% (V/V)乙醇洗脫，收集70% (V/V)乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮經真空干燥，得到長白惚木提取物。[0007]本發明的積極效果:提供了一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物，并以臨床應用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)為對照，評價該提取物對α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可為更好地開發利用長白惚木在防治糖尿病、肥胖癥、抗腫瘤和AIDS病毒方面提供依據和廣闊的應用前景。工藝操作簡單、提取物活性高。
【具體實施方式】
[0008]實施例1
(1)將長白惚木芽或葉或根自然陰干，粉碎后過40目篩，取100g粉末加入10倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h，過濾，濾渣再分別用8倍(V/W)量與6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次濾液； (2)將步驟(1)所得濾液回收乙醇至無醇味，按上樣液與樹脂用量為2.5:1 (V/V)的比例，吸附流速為lmL.min-1,以AB-8大孔吸附樹脂進行吸附；以3倍柱體積量的50% (V/V)乙醇洗脫除雜，然后以3倍柱體積量的70% (V/V)乙醇洗脫，收集70% (V/V)乙醇洗脫液，洗脫流速均設置為lmLiirT1 ;將70% (V/V)乙醇洗脫液回收乙醇并濃縮經真空干燥，得到長白惚木提取物。
[0009]實施例2
(1)將長白惚木芽或葉或根自然陰干，粉碎后過40目篩，取100g粉末加入8倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提3h，過濾，濾渣再分別用8倍(V/W)量與6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次濾液；
(2)將步驟(1)所得濾液回收乙醇至無醇味，按上樣液與樹脂用量為2.5:1 (V/V)的比例，吸附流速為lmL.min-1,以AB-8大孔吸附樹脂進行吸附；以3倍柱體積量的50% (V/V)乙醇洗脫除雜，然后以3倍柱體積量的70% (V/V)乙醇洗脫，收集70% (V/V)乙醇洗脫液，洗脫流速均設置為lmL -min-1 ;將70% (V/V)乙醇洗脫液回收乙醇并濃縮經真空干燥，得到長白惚木提取物。
[0010]長白惚木提取物抑制α -葡萄糖苷酶活性的測定
1.實驗材料與試劑
長白惚木，沈陽農業大學園藝學院實驗基地提供。
[0011]對-硝基苯酚(ΡΝΡ，購自上海國藥化學試劑公司)；4_硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)、阿卡波糖(Acarbose)、α -葡萄糖苷酶均購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；其他均為國產分析純，水為雙蒸水。
[0012]2.α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定方法
2.1標準曲線的制作
用 0.lmol.1 磷酸緩沖液(pH 6.8)配置 150 μ mol.L_1PNP,稀釋成 100，75，50，30，15,0 μ mol.I71。分別取7種不同濃度的ΡΝΡ溶液各lmL,加入lmol.L_1Na2C03溶液2mL,混勻，在400nm下測定吸光度A，繪制標準曲線。
[0013]2.2酶標準活性的測定
反應體系[磷酸緩沖液(pH 6.8) ,0.lmol ?L'0.5mL ；PNPG, 5 mmol *^,0.4mL ;酶液，
0.lmL]在37°C溫育20min后，加入lmol溶液2mL終止反應，混勻，以不加酶液為
空白(緩沖液體積相應增加)，在400nm下測定吸光度A。[0014]2.3長白惚木提取物對α _葡萄糖苷酶抑制活性的測定
除反應體系中分別加入不同濃度的長白惚木提取物溶液和Acarbose溶液0.lmL外(緩沖液體積相應減少)，其他按照2.2項下進行，測定400 nm下吸光度A。
[0015]2.4酶活性抑制率的計算
1個α-葡萄糖苷酶活力單位(U)定義為:ρΗ 6.8，37°〇時1 min釋放1 μ mol ΡΝΡ的酶量。則酶活性抑制率(%)為:
[酶標準活性(U)-抑制劑作用下酶活性(U) ]/酶標準活性(U) X 100 %
3.長白惚木提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性測定結果表1長白惚木提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性的測定結果
【權利要求】
1.一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的長白惚木提取物的制備方法，其特征在于步驟如下:(1)將長白惚木干燥的芽或葉或根粉末加入8-10倍(V/W)量的70%(V/V)乙醇于60°C浸提2-3h，過濾，濾渣再分別用8倍(V/W)量與6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次濾液；(2)將步驟(1)所得濾液回收乙醇至無醇味，按上樣液與樹脂用量為2.5:1 (V/V)的比例，以AB-8大孔吸附樹脂進行吸附，以3倍柱體積量的50% (V/V)乙醇洗脫除雜，然后以3倍柱體積量的70% (V/V)乙醇洗脫，收集70% (V/V)乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮經真空干燥，得到長白惚木提取物。
【文檔編號】A61P35/00GK103720732SQ201410002931
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2014年1月6日 優先權日:2014年1月6日
【發明者】馮穎, 李斌, 林麗麗, 張彬 申請人:沈陽農業大學