包含抗cd22抗體的免疫綴合物的制作方法
【專利摘要】本發明提供包含共價連接于奈莫柔比星衍生物的抗CD22抗體的免疫綴合物及其使用方法。
【專利說明】包含抗CD22抗體的免疫綴合物 發明領域
[0001] 本發明涉及包含抗⑶22抗體的免疫綴合物及其使用方法。
[0002] 背景
[0003] 如⑶19、⑶22及⑶52的B細胞抗原代表具有用于治療淋巴瘤的治療潛力的 目標（Grillo-Lopez A.J.等人，Curr Pharm Biotechnol，2:301_ll，（2001))。CD22 為一種僅在成熟分化階段表達在B細胞表面上的135-kDa B細胞限制性唾液酸糖蛋白 (sialoglycoprotein) (Dorke n，B.等人，J. Immunol. 136 :4470-4479 (1986))。CD22 在人類 中的主要形式為CD22P，其在細胞外域中含有7個免疫球蛋白超家族域（Wilson，G.L.等 人，J. Exp. Med. 173 :137-146 (1991))。一種變體形式C D22 a缺乏免疫球蛋白超家族域3和 4 (Stamenkovic，I?和 Seed，B.，Nature 345 :74-77 (1990))。已顯不人類 CD22 的配體結合 與免疫球蛋白超家族域1和2(又稱為表位1和2)相關（Engel，P.等人，J. Exp. M ed. 181 : 1581-1586,1995)〇
[0004] B細胞相關病癥包括但不限于惡性淋巴瘤（非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin' s Lymphoma)，NHL)、多發性骨髓瘤及慢性淋巴細胞性白血病（CLL，B細胞白血病（⑶5+B淋巴 細胞））。非霍奇金淋巴瘤（NHL)為一組主要起因于B淋巴細胞的異質癌癥，其占所有新近 診斷癌癥的約 4% (Jemal，A.等人，CA-Cancer J Clin，52 :23-47,(2002))。侵襲性 NHL 占 成人 NHL 的約 30-40% (Harris，N.L.等人，Hematol. J.l :53-66(2001))且包括彌漫性大 B 細胞淋巴瘤（DLBCL)、套細胞淋巴瘤（MCL)、外周T細胞淋巴瘤及間變性大細胞淋巴瘤。一 線組合化學療法治愈的侵襲性NHL患者少于半數，且大多數患者最終死于其疾病（Fisher， R. I. Semin. Oncol. 27 (增刊 12) :2-8 (2000))。
[0005] 在B細胞NHL中，在侵襲性群體及無痛性群體中，⑶22表達分別在91 %至99 % 的范圍內（Cesano，A.等人，Blood 100:350a(2002))。CD22可充當B細胞活化復合物的 組分（Sato，S.等人，Semin. Immunol. 10 :287-296 (1998))與粘著分子（Engel，Pl 等人， J. Immunol. 150 :4719-4732(1993))兩者。CD22缺乏小鼠的B細胞具有較短壽命及增強的 細胞凋亡，這表明此抗原在B細胞存活中具有作用（Otipoby，K. L等人，Nature (Lond) 384 : 634-637(1996))。在與其天然配體或抗體結合之后，CD22快速內化，從而在原代B細胞中 提供共刺激信號并且在贅生性B細胞中提供促細胞凋亡信號（Sato, S.等人，Immunity 5: 551-562(1996))。
[0006] 本領域中對靶向CD22以供診斷及治療CD22相關病狀，如癌癥的藥劑存在需要。本 發明滿足這個需要且提供其它益處。
[0007] 概述
[0008] 本發明提供抗CD22抗體及免疫綴合物及其使用方法。
[0009] 在一些實施方案中，提供一種包含共價連接于細胞毒性劑的結合⑶22的抗體的 免疫綴合物，其中所述抗體結合SEQ ID NO :28的氨基酸20至240內的表位。在一些實施 方案中，細胞毒性劑為奈莫柔比星（nemorubicin)衍生物。
[0010] 在一些實施方案中，抗體包含⑴包含氨基酸序列SEQ ID NO : 11的HVR-H3,（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :10的 HVR-H2。在一些實施方案中，抗體包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID N0:9的HVR-H1，（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO : 10的HVR-H2,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :11的 HVR-H3。在一些實施方案中，抗體包含：a) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO :9的HVR-H1，（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID N0:10的HVR-H2，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID N0:11的HVR-H3， (iv)包含選自SEQ ID NO : 12及15至22的氨基酸序列的HVR-Ll，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3 ;或b)⑴包含氨 基酸序列 SEQ ID NO :9 的 HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO :10 的 HVR-H2,（iii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO :11的HVR-H3,（iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO :15的HVR-L1， (V)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 13的HVR-L2,以及（vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 14的 HVR-L3。在一些實施方案中，抗體包含：a) (i)包含選自SEQ ID NO: 12及15至22的氨基酸 序列的HVR-L1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（iii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO :14的HVR-L3 ;或b)⑴包含氨基酸序列SEQ ID NO :15的HVR-L1，（ii)包含氨 基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3。 在一些實施方案中，抗體包含：a)與氨基酸序列SEQ ID NO :7具有至少95%序列同一性的 VH序列；或b)與氨基酸序列SEQ ID NO :8具有至少95%序列同一性的VL序列；或c)如 (a)中的VH序列及如（b)中的VL序列。在一些實施方案中，抗體包含具有氨基酸序列SEQ ID NO :7的VH序列。在一些實施方案中，抗體包含具有氨基酸序列SEQ ID NO :6的VL序 列或具有氨基酸序列SEQ ID NO :8的VL序列。在一些實施方案中，抗體為IgGl、IgG2a或 IgG2b抗體。
[0011] 在一些實施方案中，提供一種包含共價連接于細胞毒性劑的結合⑶22的抗體的 免疫綴合物，其中所述抗體包含（a)具有氨基酸序列SEQ ID NO :7的VH序列及具有氨基酸 序列SEQ ID NO :8的VL序列，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
[0012] 在一些實施方案中，免疫綴合物具有式Ab-(L-D) P，其中：(a) Ab為抗體；(b) L為接 頭；（c)D為細胞毒性劑；且（d) p在1-8的范圍內。
[0013] 在一些實施方案中，D為奈莫柔比星衍生物。在一些這類實施方案中，D具有選自 以下的結構：
[0014]
【權利要求】
1. 一種免疫綴合物，其包含共價連接于細胞毒性劑的結合CD22的抗體，其中所述抗體 結合SEQ ID NO ;28的氨基酸20至240內的表位，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星 衍生物。
2. 如權利要求1所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-冊，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3, W及（iii)包含氨基酸 序列 SEQ IDN0 ;10 的 HVR-肥。
3. 如權利要求1或2所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10的HVR-肥，W及（iii)包含氨基 酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-冊。
4. 如權利要求1所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含： a) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10的 HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-冊，（iv)包含選自SEQ ID NO ;12及 15至22的氨基酸序列的HVR-L1，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13的HVR-L2, W及（vi) 包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3 ;或 b) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10 的HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ; 11的HVR-冊，（iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;15的HVR-Ll，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13的HVR-L2, W及（vi)包含氨基酸序 列沈Q ID NO ;14 的 HVR-L3。
5. 如權利要求1至3中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含： a) (i)包含選自SEQ ID NO ;12及15至22的氨基酸序列的HVR-L1，（ii)包含氨基酸 序列 SEQ ID NO ;13 的 HVR-L2, W及（iii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO ;14 的 HVR-L3 ;或 b) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;15的HVR-L1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13 的HVR-L2, W及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3。
6. 如權利要求1至5中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含： a) 與氨基酸序列SEQ ID NO ;7具有至少95%序列同一性的VH序列；或 b) 與氨基酸序列SEQ ID NO ;8具有至少95 %序列同一性的化序列；或 C)如（a)中的VH序列及如化）中的化序列。
7. 如權利要求6所述的免疫綴合物，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO ;7的VH序列。
8. 如權利要求6所述的免疫綴合物，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO ;6的化序列 或具有氨基酸序列SEQ ID NO ;8的化序列。
9. 一種免疫綴合物，其包含共價連接于細胞毒性劑的結合CD22的抗體，其中所述抗體 包含（a)具有氨基酸序列SEQ ID NO ;7的VH序列及具有氨基酸序列SEQ ID NO ;8的化序 列，并且其中所述細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
10. 如權利要求1至9中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體為IgGl、IgG2a或 IgG化抗體。
11. 如權利要求1至10中任一項所述的免疫綴合物，其中所述免疫綴合物具有式 Ab-a-D)p，其中： (a) Ab為所述抗體； (b) L為接頭； (c) D為所述細胞毒性劑；并且 (d) p在1-8的范圍內。
12. 如權利要求11所述的免疫綴合物，其中D為奈莫柔比星衍生物。
13. 如權利要求12所述的免疫綴合物，其中D具有選自W下的結構：
14. 如權利要求11至13中任一項所述的免疫綴合物，其中所述接頭可由蛋白酶裂解。
15. 如權利要求14所述的免疫綴合物，其中所述接頭包含va^cit二膚或化e-高Lys 二膚。
16. 如權利要求11至13中任一項所述的免疫綴合物，其中所述接頭具有酸不穩定性。
17. 如權利要求16所述的免疫綴合物，其中所述接頭包括蹤。
18. 如權利要求12所述的免疫綴合物，其具有選自W下的式：
其中Ri和R2獨立地選自H及Ci-Ce焼基。
19. 如權利要求11至18中任一項所述的免疫綴合物，其中P在1-3的范圍內。
20. -種免疫綴合物，其具有選自W下的式：
其中Ab為抗體，其包含（i)包含氨基酸序列SEQ IDNO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸 序列SEQ ID NO ;10的HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO ;11的HVR-冊，（iv)包含 氨基酸序列SEQ IDN0;15的HVR-L1，（V)包含氨基酸序列SEQ ID N0;13的HVR-L2，W及 (vU包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3 ;并且其中P在1至3的范圍內。
21. 如權利要求20所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含VH序列SEQ ID NO ;7及化 序列 SEQ ID NO ;8。
22. 如權利要求21所述的免疫綴合物，其中所述抗體包含重鏈SEQ ID NO ;26及輕鏈
沈Q ID NO ; 23。
23. 如前述權利要求中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體為單克隆抗體。
24. 如前述權利要求中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體為人類抗體、人源化抗 體或嵌合抗體。
25. 如前述權利要求中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體為結合CD22的抗體片 段。
26. 如前述權利要求中任一項所述的免疫綴合物，其中所述抗體結合人類CD22。
27. 如權利要求26所述的免疫綴合物，其中人類CD22具有序列SEQ ID N0;28或SEQ ID NO ：29〇
28. -種藥物制劑，其包含如前述權利要求中任一項所述的免疫綴合物及藥學上可接 受的載體。
29. 如權利要求28所述的藥物制劑，其還包含另一治療劑。
30. -種治療患有CD22陽性癌癥的個體的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量 的如權利要求1至27中任一項所述的免疫綴合物。
31. 如權利要求30所述的方法，其中所述CD22陽性癌癥選自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵襲性NHL、復發性侵襲性NHL、復發性無痛性NHL、難治性NHL、難治性無痛性NHL、慢 性淋己細胞性白血病（化L)、小淋己細胞性淋己瘤、白血病、毛細胞白血病化化)、急性淋己 細胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套細胞淋己瘤。
32. 如權利要求31所述的方法，其還包括向所述個體施用另一治療劑。
33. 如權利要求32所述的方法，其中所述另一治療劑包含結合CD79b的抗體。
34. 如權利要求33所述的方法，其中所述另一治療劑為包含共價連接于細胞毒性劑的 結合CD79b的抗體的免疫綴合物。
35. -種抑制CD22陽性細胞增殖的方法，所述方法包括在容許如權利要求1至27中任 一項所述的免疫綴合物結合所述細胞的表面上的CD22的條件下使所述細胞暴露于所述免 疫綴合物，由此抑制所述細胞的增殖。
36. 如權利要求35所述的方法，其中所述細胞為費生性B細胞。
37. 如權利要求36所述的方法，其中所述細胞為淋己瘤細胞。
38. -種治療患有CD22陽性癌癥的個體的方法，其中所述CD22陽性癌癥對第一治療劑 具有抗性，所述方法包括向所述個體施用有效量的如權利要求1至27中任一項所述的免疫 綴合物。
39. 如權利要求38所述的方法，其中所述CD22陽性癌癥選自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵襲性NHL、復發性侵襲性NHL、復發性無痛性NHL、難治性NHL、難治性無痛性NHL、慢 性淋己細胞性白血病（化L)、小淋己細胞性淋己瘤、白血病、毛細胞白血病化化)、急性淋己 細胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套細胞淋己瘤。
40. 如權利要求38或39所述的方法，其中所述第一治療劑包含結合除CD22 W外的抗 原的第一抗體。
41. 如權利要求40所述的方法，其中所述第一治療劑為包含結合除CD22 W外的抗原的 第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫綴合物。
42. 如權利要求40或41所述的方法，其中所述第一抗體結合CD79b。
43. 如權利要求38或39所述的方法，其中所述第一治療劑包含結合CD22的第一抗體。
44. 如權利要求43所述的方法，其中所述第一治療劑為包含結合CD22的第一抗體及第 一細胞毒性劑的第一免疫綴合物。
45. 如權利要求41至44中任一項所述的方法，其中所述第一細胞毒性劑與如權利要求 1至27中任一項所述的免疫綴合物的細胞毒性劑不同。
46. 如權利要求45所述的方法，其中所述第一細胞毒性劑為MMAE。
47. 如權利要求46所述的方法，其中所述CD22陽性癌癥表達P-糖蛋白（P-gp)。
48. -種治療患有CD22陽性癌癥的個體的方法，其中所述CD22陽性癌癥表達P-gp，所 述方法包括向所述個體施用有效量的如權利要求1至27中任一項所述的免疫綴合物。
49. 如權利要求48所述的方法，其中所述CD22陽性癌癥選自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵襲性NHL、復發性侵襲性NHL、復發性無痛性NHL、難治性NHL、難治性無痛性NHL、慢 性淋己細胞性白血病（化L)、小淋己細胞性淋己瘤、白血病、毛細胞白血病化化)、急性淋己 細胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套細胞淋己瘤。
【文檔編號】A61K47/48GK104428007SQ201380036640
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年7月8日 優先權日:2012年7月9日
【發明者】P·波拉基斯, A·波爾森, S·D·斯潘塞, S-F·于, 鄭冰 申請人:基因泰克公司