用于治療神經病變的含α-硫辛酸與和厚樸酚的組合物的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種含有α-硫辛酸或其鹽或其復合物與和厚樸酚的組合物，其中，基于和厚樸酚和硫辛酸的總質量，所述和厚樸酚的含量為1％-30％。
【專利說明】用于治療神經病變的含α-硫辛酸與和厚樸酚的組合物
[0001] 本發明涉及一種治療神經病變的組合物，尤其是治療周圍神經病變的疼痛感覺綜 合征的組合物。
[0002] 現已知有很多種組合物可用于對患有神經病變的患者給藥。
[0003] 具體地，已知含有α -硫辛酸的組合物對治療神經病變，尤其是獲得性周圍神經 病變具有良好的效果。事實上，α-硫辛酸加強了抗氧化屏障并通過提高谷胱甘肽的水平降 低氧化應激，提高神經傳導（nerve communication)速度，從而優化其功能，并最終發揮其 抵御神經敏感（nervous sensitivity)的正常化作用，同時緩解疼痛和感覺模糊（sensory turbidity)〇
[0004] 最近的體內研究證明，α-硫辛酸具有神經保護和心臟保護作用。
[0005] 已知含有膳食性α-硫辛酸的速釋或常規釋放組合物，其用于每天一次施用 300mg 或 600mg α -硫辛酸。
[0006] 據已出版的研究"α-硫辛酸口服治療改善糖尿病性多神經病變癥狀-悉尼 2 號試驗(Oral Treatment With a -Lipoic Acid Improves Symptomatic Diabetic Polyneuropathy-The SYDNEY 2trial)，'（Dan Ziegler 等，糖尿病護理（Diabetes Care), 2006年11約，29卷，11號，2365-2370頁），以及"硫辛酸和乙酰左旋肉毒堿治療椎間盤突 出引起的坐骨神經痛（Thioctic Acid and Acetyl-L-Carnitine in the Treatment of Sciatic Pain Caused by a Herniated Disc)，'(Memeo Antonio 和 Mario Loiero,臨床藥 品調查（Clin. Drug Investigation, 2008, 28卷，495-500頁）報道，對于治療糖尿病性多神 經病變和坐骨神經痛的癥狀，600mg日劑量的α-硫辛酸具有最佳的風險/收益比。根據第 一項研究，相對于600mg的日劑量，更高劑量的1200mg和1800mg均未顯示出改善糖尿病多 神經病變癥狀的更好反應。該研究還顯示隨著劑量增加的α-硫辛酸相關副作用，例如惡 心、嘔吐以及頭暈。
[0007] 已知厚樸（Magnolia)樹皮（一種獲自厚樸（Magnolia Officinalis)的植物派生 物，其屬于木蘭科）含有兩種酚類化合物，和厚樸酚與木蘭醇。厚樸樹皮被認為具有許多藥 理學特性，例如抗焦慮、抗炎、抗菌、抗氧化、抗血小板以及神經營養特性。
[0008] 據"和厚樸酚對胎兒大鼠皮層神經元培養的神經營養活性（Neurotrophic activity of honokiol on the cultures of fetal rat cortical neurons)，'（Y. Fukuyama, Nakade K. , Minoshima Y. , Yokoyama, A. , H. Zhai, Y. Mitsumoto, Bioorg. Med Chem. Lett 2002. 4月22日；12 (8) :1163-6)的描述，濃度為0. 1-10 μ M的和厚樸酚對于培 養的大鼠皮層神經元具有神經營養活性。在皮層神經元中，和厚樸酚能夠促進神經突的生 長。此外，還證實和厚樸酚能夠促進原代培養神經元的存活和發育。
[0009] 就和厚樸酚的神經營養活性而言，"木蘭科化合物的治療性應用 (Therapeutic applications of compounds in the magnolia family)，'（Lee YJ 等， Ther. 2011，130(2) :157-76)披露了其在大鼠中的有效劑量為0· Olg/kg和0· 25g/kg。目前 尚無研究披露對于人類的有效劑量。
[0010] US2006251608描述了治療皮膚衰老的制劑，其包含抗氧化劑、抗氧化的共促進劑 (co-promoter)、抗炎藥物、維生素、礦物質和膠原合成促進劑。但其沒未提及這些制劑對治 療神經病變的任何效果。提及了 α-硫辛酸與和厚樸酚在這些制劑中可作為抗氧化劑，但 并未專門描述這兩種化合物的組合。
[0011] 對于運動員來說，營養補充劑有利于提高肌肉質量、強度以及體力，除很多其它成 分外，所述營養補充劑還包含α-硫辛酸和含2%和厚樸酚的厚樸樹皮。而這些補充劑對神 經病變的治療效果并未經報道，且在這些補充劑中，和厚樸酚的含量極低。具體地，在已知 的這些補充劑中和厚樸酚和α -硫辛酸的比值為小于〇. 3%。
[0012] 因此，本發明的目的在于提供一種含有α-硫辛酸的組合物，其對神經性疼痛及 其癥狀具有更好的治療活性。所述目的由某種組合物和藥學或膳食制劑實現，所述組合物 的主要特征在第一項權利要求中具體描述，而權利要求9具體描述了所述藥學或膳食制劑 的特征。本發明組合物及制劑的其他特征在余下的權利要求中進行具體描述。
[0013] 本發明組合物包括α-硫辛酸或其鹽或其復合物、與和厚樸酚，其特征在于，基于 和厚樸酚與硫辛酸這兩種組分的總質量，和厚樸酚的含量為1% -30%。
[0014] 本發明組合物中含有的α-硫辛酸可為消旋體形式，例如，可以是R或s型兩種對 映體形式的混合物、和/或它們的鹽或復合物，或本發明組合物可僅含有生物活性的R對映 體形式，或其鹽或其復合物。
[0015] 事實上，本發明人意外地發現，當所述α-硫辛酸與和厚樸酚以特定比例聯用時， 由于存在協同效應，能夠提高α-硫辛酸對于神經病變和其相關疼痛綜合征的治療效果。
[0016] 具體地，本發明人進行的實驗顯示，在神經元的原代培養物中，施用本發明的 α-硫辛酸與和厚樸酚組合物能夠有效地促進神經突延伸以及細胞存活，然而，施用相似的 含有α -硫辛酸和含量為0到低于1 %的和厚樸酚組合物時，卻沒有顯著的促進神經突延伸 的作用。
[0017] 優選地，基于和厚樸酚和α -硫辛酸的總質量，本發明組合物中和厚樸酚的含量 為2% -15%，更優選地，為3% -10%。
[0018] 實際上，以上所示范圍是硫辛酸與和厚樸酚濃度的最佳比例，通過比較硫辛酸與 和厚樸酚聯用時的顯著性活性與單獨使用，證明了該這些比例下的兩種活性物質具有明顯 的協同效應。
[0019] 而α -硫辛酸的鹽或其復合物，例如，水溶性鹽（如R-硫辛酸鈉或鉀），和其它R 型對映體或RS消旋體的水溶性鹽均可用于本發明組合物。
[0020] 本發明組合物還優選含有其他活性成分，其與α -硫辛酸或其鹽或其復合物以及 和厚樸酚聯用，能夠形成特別有效的治療非糖尿病性和外周性神經病變的組合物。
[0021] 因此，本發明組合物優選包括亞麻酸或其鹽或其復合物，例如Υ亞麻酸的鈉 鹽。優選地，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總質量，本發明組合物中所述的 Υ-亞麻酸的含 量為2%-30%。更優選地，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總質量，本發明組合物中所述的 亞麻酸的含量為15% -25%。
[0022] 本發明組合物中優選還含有生理學可接受的硒來源。在本說明書以及權利要求 中，"生理學可接受的硒來源"指的是任何可吸收的硒來源，其可用于膳食或藥物組合物，例 如，與氨基酸形成復合物的硒鹽或硒。優選地，選自下組的化合物可用作生理學可接受的硒 來源：硒代甲硫氨酸、亞硒酸鈉、硒酸鈉和酵母硒。
[0023] 優選地，基于和厚樸酚和α -硫辛酸的總質量，本發明組合物中生理學可接受的 硒來源的質量適合提供0.0001 %-2%的硒量。更優選地，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總 質量，本發明組合物中生理學可接受的硒來源的質量適合提供〇. 0001% -〇. 1 %的硒量。
[0024] 本發明組合物優選還含有至少一種選自下組的組分：維生素 C、維生素 Ε和Β族維 生素，例如維生素 Β1、Β2、Β5、Β6和Β12。
[0025] 本發明組合物可制備成適于口服施用的任何劑型。具體地，在一方面，本發明涉及 一種口服施用的膳食或藥物組合物，其含有上述定義的組合物，形式可以為丸劑、片劑、膠 囊劑、咀嚼片劑、口香糖、片芯、口服混懸劑粉末、可重建的顆粒粉末（granular powder to be reconstituted)或口含粉末、口服混懸劑、糖楽。
[0026] 本發明組合物還可根據所需藥物制劑類型而含有賦形劑、芳香劑以及其他經批準 的食用物質。可用于制備片劑或膠囊劑的合適賦形劑為：例如馬鈴薯、小麥或玉米淀粉，尤 其是預凝膠淀粉、微晶纖維素、磷酸氫鈣、碳酸鈣、多元醇（如甘露醇、山梨醇）、麥芽糊精、 乳糖、膠體氧化硅、高分散二氧化硅、山崳酸甘油酯、丙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、交聯聚乙烯 吡咯烷酮、纖維素酯及醚（例如羧甲基纖維素、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素）、交聯焦糖 鈉、海藻酸鹽、角叉菜膠、硬脂酸鎂、硬脂酰富馬酸鈉、二氧化鈦、明膠、蔬菜油（例如大豆或 葵花油）、聚甘油油酸酯（poliglicerol oleate)、甘油、脂肪酸甘油三酯、卵磷脂。
[0027] 優選地，本發明制劑為片劑或膠囊劑的形式，其適于每日施用200mg-1300mg量的 α -硫辛酸，和2. 5mg-150mg量的和厚樸酚。
[0028] 較優選地，本發明制劑為片劑或膠囊劑的形式，其適于每日施用580mg-620mg量 的α-硫辛酸，和45mg-60mg量的和厚樸酚，或適于每日施用280mg-320mg量的α-硫辛酸， 和20mg-30mg量的和厚樸酚。
[0029] 更優選地，本發明制劑為片劑或膠囊劑的形式，其適于每日施用600mg量的α-硫 辛酸，和54mg量的和厚樸酚，或適于每日施用300mg量的α -硫辛酸，和27mg量的和厚樸 酚。
[0030] 在本說明書以及權利要求中，"適于每日施用"指的是每個膠囊或片劑含有所規定 的活性組分的總量，或含有相同量的一部分，例如通過多個膠囊或片劑施用該總量。例如， 含有約300mg的α -硫辛酸和15mg的和厚樸酚被認為適于每日施用600mg α -硫辛酸和 30mg和厚樸酚。
[0031] 本發明制劑中亞麻酸或其鹽或其復合物的含量為10mg-300mg。
[0032] 本發明的優選制劑適合每日施用580mg-620mg量的α -硫辛酸、45mg_60mg量的 和厚樸酚，和125mg-140mg量的γ亞麻酸，其為明膠軟膠囊形式。明膠軟膠囊形式的另一 優選的本發明制劑適于每日施用280mg-320mg量的硫辛酸、20mg-30mg量的和厚樸酚，和 60-70mg量的γ亞麻酸。
[0033] 本發明制劑中含有上述生物學可接受的硒來源，其含量提供1 μ g-90 μ g的硒量。
[0034] 本發明制劑優選含有維生素 C，其含量為20mg-1000mg。
[0035] 本發明制劑優選含有維生素E，其含量為lmg-100mg。
[0036] 本發明制劑優選含有維生素B1，其含量為lmg_5mg。
[0037] 本發明制劑優選含有維生素 B2,其含量為lmg_5mg。
[0038] 本發明制劑優選含有維生素 B5,其含量為lmg_20mg。
[0039] 本發明制劑優選含有維生素 B6,其含量為lmg_8mg。
[0040] 本發明制劑優選含有維生素 B12,其含量為0. 001mg-0. 020mg。
[0041] 本發明的優選制劑包括約600mg的α -硫辛酸，約54mg的和厚樸酚，約140mg的 亞麻酸，和約〇· llOmg的亞硒酸鈉。
[0042] 本發明的另一種優選制劑包括約300mg的硫辛酸，約27mg的和厚樸酚，約66mg的 Y -亞麻酸，和約0· 055mg的亞硒酸鈉。
[0043] 可通過施用類型以及其它實際考慮選擇本發明組合物的制備技術。
[0044] 本領域技術人員所知的任何用于制備含有低熔點活性成分片劑的技術均可以用 于制備本發明制劑，例如，在粉末混合后直接壓片、制粒后濕壓或干壓（如在流化床中）、 壓成顆粒或片芯。膠囊可如下制備：例如，通過將粉末、顆粒、小片或片芯灌裝入預成形的 外殼（體），然后加裝膠囊帽封閉；通過形成摻有合適增塑劑的可著色明膠片，同時用液體 (Sherer法）或固體（Accogel法）灌裝；通過在冷卻的油性溶液中，滴加含增塑劑的明膠 和可能的活性成分（如滴加法）。
[0045] 參考附圖，本領域技術人員可從以下實施例明白本發明組合物和制劑的優點，所 述附圖中：
[0046] -圖la顯示了在0.5% EtOH中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照 片；
[0047] -圖lb顯示了在0· 5% EtOH外加40ng πιΓ1的bFGF中培養7天后，大鼠皮層神經 元的原代細胞培養物照片；
[0048] -圖lc顯示了在0.5% EtOH外加含有99. 7% α-硫辛酸以及0.3%和厚樸酚的 10 μ Μ溶液中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0049] -圖Id顯示了在0.5% EtOH外加含有95. 5% α-硫辛酸以及4. 5%和厚樸酚的 10 μ Μ溶液中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0050] -圖le顯示了在0. 5% EtOH外加含有91% α -硫辛酸以及9%和厚樸酚的10 μ Μ 溶液中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0051] -圖If顯示了在0. 5%Et0H外加含有46% α -硫辛酸以及54%和厚樸酚的10μΜ 溶液中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0052] -圖Id顯示了在0.5%Et0H單獨外加 ΙΟμΜα-硫辛酸溶液中培養7天后，大鼠 皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0053] -圖lh顯示了在0. 5% EtOH單獨外加10 μ Μ和厚樸酚溶液中培養7天后，大鼠皮 層神經元的原代細胞培養物照片；
[0054] -圖2a顯示了在0. 5% EtOH中培養4天后，大鼠皮層神經元的原代培養物照片；
[0055] -圖2b顯示了在0. 5% EtOH外加含有99. 7% α -硫辛酸以及〇. 3%和厚樸酚的 10 μ Μ溶液中培養4天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0056] -圖2c顯示了在0. 5% EtOH外加含有91% α -硫辛酸以及9%和厚樸酚的10 μ Μ 溶液中培養4天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片；
[0057] -圖2d顯示了在0.5%Et0H外加含有46% α-硫辛酸以及54%和厚樸酚的10μΜ 溶液中培養7天后，大鼠皮層神經元的原代細胞培養物照片。
[0058] 材料和方法
[0059] 所用化合物的純度通過高效液相色譜（HPLC，單峰）、核磁共振（Η1和C 3)、以及高 分辨率質譜分析法測定。
[0060] 培養基是達爾伯克（氏）改性培養基（DMEM)、胎牛血清（FBS)，B27補充劑獲 自Gibco BRL (紐約，美國）。試劑TO98059 [2-2 (2-氨基-3-甲氧基苯基）-4H-1-苯 并吡喃-4-酮]、LY294002 [2-(4-嗎啉基）-8-苯基-1 (4H)-苯并吡喃-4酮]，以及 謂93[^[2-[^(4-氯代肉桂基）4-甲基氨甲基]苯基]4(2-羥乙基）-4-甲氧基苯磺酰 胺磷酸鹽]購自美國密蘇里州西格馬公司（Sigma，M0, USA)。人重組纖維母細胞生長因子 (bFGF)由美國紐約北方生物科技有限公司（Upstate Biotechnology Inc, NY, USA)供應。 其它所用的試劑均為市場上純度最高的試劑。
[0061] 實施例1形杰學
[0062] 根據"重組纖維母細胞生長因子及其修飾蛋白CS23對胎兒大鼠大腦不同部位 來源的原代培養神經兀存活的影響（Effects of recombinant human basic fibroblast growth factor and its modified protein CS23on survival of primary cultured neurons from various regions of fetal rat brain.)，'（Abe K 等，Jpn J Pharmacol 1990,53(2):221-7)中的描述，制備了 8份原代細胞培養物。所有操作均在無菌環境下進 行。
[0063] 自18天的大鼠胎兒（Japan SLC，Inc)大腦半球中分離出神經元細胞，并懸浮于 10% FBS/MEM，然后按9000個細胞cnT2接種在多聚-L-賴氨酸平板上。
[0064] 24小時后，培養基換成添加有B27的無血清培養基，特別用于神經元的生長（神經 基質培養基）。
[0065] 然后，取第一培養物（A)作為對照培養物。
[0066] 第二培養物（B)中加入了 40ng ml/1的bFGF。
[0067] 第三培養物（C)中加入了 99. 7wt%的α -硫辛酸和〇· 3wt%的和厚樸酚，至總濃 度為10 μ M。
[0068] 第四培養物（D)中加入了 95. 5wt%的α -硫辛酸和4. 5wt%的和厚樸酚，至總濃 度為10 μ M。
[0069] 第五培養物（Ε)中加入了 91wt%的α -硫辛酸和9wt%的和厚樸酚，至總濃度為 10 μ M。
[0070] 第六培養物（F)中加入了 46wt%的α -硫辛酸和54wt%的和厚樸酚，至總濃度為 10 μ M。
[0071] 第七培養物（G)中僅加入了 α -硫辛酸，至總濃度為?ο μ Μ。
[0072] 第八培養物（Η)中僅加入了和厚樸酚，至總濃度為10 μ Μ。
[0073] 孵育6天后，用4%的甲醛固定8份培養物中的細胞。
[0074] 然后，在顯微鏡水平下，評估8份培養物的神經突長度。根據"和厚樸酚在胎 鼠皮質神經元培養物中的神經營養活性（Neurotrophic activity of honokiol on the cultures of fetal rat cortical neurons)，'（Fukuyama Y 等，Bioorg. Med Chem. Lett 12,1163-66(2002))中描述的神經突長度的組化方法，對神經元進行微管結合蛋 白-2 (MAP2)的免疫組化染色。根據上述Y. Fukuyama等.（2002)中的方法，利用軟件程序 "Lumina Vision"和"Mac-SCOPE"測量和計算整個細胞體中最長的神經突長度。通過利用 "Lumina Vision"和"Mac-SCOPE"軟件（Yoshiyasu Fukuyama 等.2002)測量各神經兀的最 長神經突的長度，從而進行形態學分析。
[0075] 結果如表1所示，其中p表示顯著性差異，ns表示"非顯著"。
[0076] 表 1
[0077]
【權利要求】
1. 一種含有α-硫辛酸或其鹽或其復合物與和厚樸酚的組合物，其特征在于，基于和 厚樸酚和α-硫辛酸的總質量，所述和厚樸酚的含量為1% -30%。
2. 如上述權利要求所述的組合物，其特征在于，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總質量， 所述和厚樸酚的含量為2% -15%。
3. 如上述權利要求所述的組合物，其特征在于，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總質量， 所述和厚樸酚的含量為3% -10%。
4. 如上述任一權利要求所述的組合物，其特征在于，含有亞麻酸或其鹽或其復合 物。
5. 如上述權利要求所述的組合物，其特征在于，基于和厚樸酚和α-硫辛酸的總質量， 所述亞麻酸的含量為2%-30%。
6. 如權利要求3所述的組合物，其特征在于，還含有生理學可接受的硒來源。
7. 如上述任一權利要求所述的組合物，其特征在于，還含有選自下組的至少一種組分： 維生素 C、維生素 Ε、Β族維生素。
8. 如上述任一權利要求所述的組合物，用于治療外周神經病變。
9. 用于口服施用的膳食或藥學制劑，含有以上任一權利要求所述的組合物。
10. 如權利要求9所述的制劑，為片劑或膠囊形式，其適于每日施用200mg-1300mg量的 α -硫辛酸，和2. 5mg-150mg量的和厚樸酚。
11. 如權利要求10所述的制劑，為片劑或膠囊形式，其適于每日施用580mg-620mg量的 α -硫辛酸，和45mg-60mg量的和厚樸酚，或適于每日施用280mg-320mg量的α -硫辛酸，和 20mg-30mg量的和厚樸酚。
12. 如權利要求10所述的制劑，為明膠軟膠囊形式，其適于每日施用200mg-1300mg量 的α -硫辛酸，2. 5mg-150mg量的和厚樸酚，和10-300mg的γ -硫辛酸或其鹽或其復合物。
13. 如權利要求11所述的制劑，為明膠軟膠囊形式，其適于每日施用580mg-620mg量 的α-硫辛酸，45mg-60mg量的和厚樸酚，和125-140mg的γ-亞麻酸；或適于每日施用 280mg-320mg量的α -硫辛酸，20mg-30mg量的和厚樸酚，和60-70mg的γ -亞麻酸。
【文檔編號】A61K31/05GK104254329SQ201380020986
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年4月19日 優先權日:2012年4月20日
【發明者】C·特雷茲, F·特雷茲 申請人:吉勒拉皮公司