用于治療周圍血管疾病的組合物和方法
【專利摘要】本發明涉及用于治療周圍血管疾病(PVD)的組合物和方法。特別地，本發明提供了基于使用血管緊張素(1-7)肽或其功能性等價物、類似物或衍生物，血管緊張素(1-7)受體激動劑，ACE2和/或ACE2活化劑的用于治療嚴重肢體缺血及相關疾病、病癥或病況的組合物和方法。
【專利說明】用于治療周圍血管疾病的組合物和方法
[0001] 相關申請的奪叉引用
[0002] 本申請要求2012年2月10日提交的美國臨時專利申請序號61/597,223和2012 年10月30日提交的美國臨時專利申請序號61/720, 301的優先權，這兩項申請的全部內容 均通過引用并入本申請。
[0003] 序列表
[0004] 本說明書涉及于2013年2月7日以文件名為"Sequence_Listing"的ASCII, txt 的電子形式提交的序列表。該.txt文件于2013年1月31日生成，大小為39KB。所述序列 表的全部內容通過引用并入本申請。
[0005] 背景
[0006] 周圍血管疾病（PVD)通常的特征為心臟或腦以外的血管部分或完全阻塞，周圍血 管疾病可能由動脈粥樣硬化、炎癥過程引起，結果導致狹窄、栓塞或血栓形成，以及其他疾 病。周圍動脈疾病（PAD)是PVD的一種形式，其中存在流向各種內臟和/或肢體的動脈血 供部分或完全阻塞。PAD的風險因素包括血液膽固醇升高、糖尿病、吸煙、高血壓、缺乏運動 和肥胖。據信在50歲以上的人士中約有5%患有PAD。PAD的癥狀取決于動脈阻塞的位置 和程度。PAD最常見的癥狀是間歇性跛行，表現為在行走時出現疼痛（通常在小腿）而在休 息時疼痛消失。隨著時間的推移，PAD的嚴重程度增加，運動持續較短時間后就出現癥狀。 當PAD變得更加嚴重時，癥狀可以包括夜間疼痛和痙攣，足部或腳趾疼痛或刺痛，當將腿部 抬高時疼痛加重并且當將腿部垂下（例如在床沿外）時疼痛消失，以及潰瘍不愈合。PAD最 終會達到嚴重肢體缺血（CLI)階段，其特征通常為皮膚生瘡（sore)不愈合、潰瘍、壞疽和/ 或四肢感染。在很多情況下，可能需要截肢。
[0007] PVD(例如PAD)可以通過改變生活方式、藥物、血管成形術和相關療法或手術治 療。盡管這些療法緩解癥狀，并且甚至可以改善生存，但是其均不能逆轉疾病過程并且直接 修復持久損傷。血管生成（angiogenesis)受損是缺血性疾病的特征之一。治療性血管生 成的最確定的靶點是VEGF及其受體。然而，緩解缺血的臨床試驗是令人失望的。因此，對 PVD (例如PAD如CLI)或與受損的血管生成相關的其他疾病、病癥或病況的治療仍是主要的 尚未被滿足的醫療需求。
[0008] 發明概沭
[0009] 除了其他以外，本發明提供了一種改進的和更有效的治療周圍血管疾病（PVD)如 嚴重肢體缺血（CLI)以及與血管生成受損相關的其他疾病、病癥或病況的基于血管緊張素 (1-7)肽或其功能等價物、類似物或衍生物，血管緊張素（1-7)受體激動劑，ACE2和/或 ACE2活化劑的療法。本發明部分地基于預料不到的發現，該發現是在動物后肢缺血模型 中給予稱為血管緊張素（1-7)的短的七氨基酸肽能夠有效地恢復血流，改善肢體功能和減 少缺血性截肢。這一發現特別令人驚訝，因為在本發明之前，據報道血管緊張素（1-7)通 過減少血管內皮生長因子-A而具有顯著的抗血管生成活性，血管內皮生長因子-A是一 種主要的促血管生成蛋白（參見，Soto-Pantoja D.R?等，"Angiotensin-(1-7) inhibits tumor angiogenesis in human lung cancer xenografts with a reduction in vascular endothelial growth factor,"（血管緊張素（1-7)通過減少血管內皮生長因子在人肺癌 移植瘤中抑制腫瘤血管生成）Mol. Cancer Ther., 2009 ;8 (6): 1676-83)。然而，如在下述實 施例章節中所詳細描述的，本申請發明人成功地證明了在動物后肢缺血模型中給予與天然 存在的血管緊張素（1-7)相同的具有7個氨基酸的血管緊張素肽能夠有效地恢復血流，從 而改善肢體功能，減少組織壞死和缺血性截肢。因此，與此前的報道相反，本發明提供了一 種基于血管緊張素的療法，所述療法能夠用于刺激治療性的血管生成以及治療嚴重肢體缺 血和與血管生成受損相關的其他疾病、病癥或病況。
[0010] 因此，在一個方面，本發明提供了一種用于治療周圍血管疾病的方法，所述方法包 括如下步驟：向患有周圍血管疾病的個體給予包含血管緊張素（1-7)肽的藥物組合物，所 述周圍血管疾病的特征為流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流被部分或完全阻塞， 其中所述血管緊張素（1-7)肽以治療有效量給予，以使得周圍血管疾病的至少一種癥狀或 特征在強度、嚴重程度或頻率上降低或推遲發作。如本申請所使用的，術語"血管緊張素 (1-7)肽"指天然存在的血管緊張素（1-7)和天然存在的血管緊張素（1-7)的任意功能性 等價物、類似物或衍生物。如本申請所使用的，"肽"和"多肽"是可以互換使用的術語，指通 過肽鍵鍵合在一起的兩個或更多個氨基酸。如本申請所使用的，術語"肽"和"多肽"包含 線形肽和環肽。
[0011] 在各種實施方式中，所述血管緊張素（1-7)肽包含天然存在的血管緊張素（1-7) 氨基酸序列 Aspi-ArgiValS-TyrklleiHise-ProYSEQ ID N0:1)。在一些實施方式中，所述 血管緊張素（1-7)肽是天然存在的血管緊張素（1-7)的功能性等價物。在某些實施方式中， 所述功能性等價物是線形肽。
[0012] 在一些實施方式中，線形肽含有分別包含在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現 的7個氨基酸中的至少4、5或6個氨基酸的序列，在其中所述至少4、5或6個氨基酸分別 維持其在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現的相對位置，并且各線形肽還具有促血管生 成活性。在各種實施方式中，所述至少4、5或6個氨基酸分別還保持其在天然存在的血管 緊張素（1-7)中出現的相對間距。
[0013] 在一些實施方式中，所述線形肽含有4-25個氨基酸（例如4-20、4-15、4-14、4-13、 4-12、4-11、4-10、4-9、4-8、4-7 個氨基酸）。
[0014] 在某些實施方式中，所述線形肽是所述天然存在的血管緊張素（1-7)的片段。在 各種實施方式中，所述線形肽含有在天然存在的血管緊張素（1-7)中的氨基酸取代、缺失 和/或插入。在某些實施方式中，所述線形肽具有氨基酸序列Aspi-Arg^NleS-Tyi^-Ile 5-!! is6-Pro7(SEQ ID N0:4)或氛基酸序列AspLArgS-Val^-Sei^-IleS-Hise-CysYSEQ ID N0:5)。
[0015] 在各種實施方式中，所述功能性等價物是環肽。在某些實施方式中，所述環肽包含 在氨基酸之間的連接。在一些實施方式中，所述連接位于與天然存在的血管緊張素（1-7) 中的Tyr 4和Pro7的位置對應的殘基上。在某些實施方式中，所述連接是硫醚橋。在各種實 施方式中，所述環肽包含以其他方式（otherwise)與天然存在的血管緊張素（1-7)氨基酸 序列AspLArf-ValS-TyrklleiHise-ProYSEQ ID N0:1)相同的氨基酸序列，或者所述環肽 包含正亮氨酸（Nle)取代天然存在的血管緊張素（1-7)中Val3的位置。在一些實施方式 中，所述環肽是具有下式結構的4, 7-環化血管緊張素（1-7):
[0016]
【權利要求】
1. 一種治療周圍血管疾病的方法，所述方法包括如下步驟 向患有周圍血管疾病的個體給予包含血管緊張素（1-7)肽的藥物組合物，所述周圍血 管疾病的特征為流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流被部分或完全阻塞，其中所述 血管緊張素（1-7)肽以治療有效量給予，以使得周圍血管疾病的至少一種癥狀或特征在強 度、嚴重程度或頻率上降低或推遲發作。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)肽包含天然存在的血管緊 張素（1_7)氛基酸序列 Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile 5-His6-Pro7(SEQ ID NO: 1)。
3. 根據權利要求1所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)肽是天然存在的血管緊張 素（1-7)的功能性等價物。
4. 根據權利要求3所述的方法，其中所述功能性等價物是線形肽。
5. 根據權利要求4所述的方法，其中所述線形肽包含含有天然存在的血管緊張素 (1-7)中出現的7個氨基酸中的至少4個氨基酸的序列， 其中所述至少4個氨基酸保持其在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現的相對位置， 而且其中所述線形肽具有促血管生成活性。
6. 根據權利要求4所述的方法，其中所述線形肽包含含有天然存在的血管緊張素 (1-7)中出現的7個氨基酸中的至少5個氨基酸的序列， 其中所述至少5個氨基酸保持其在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現的相對位置， 而且其中所述線形肽具有促血管生成活性。
7. 根據權利要求4所述的方法，其中所述線形肽包含含有天然存在的血管緊張素 (1-7)中出現的7個氨基酸中的至少6個氨基酸的序列， 其中所述至少6個氨基酸保持其在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現的相對位置， 而且其中所述線形肽具有促血管生成活性。
8. 根據權利要求5-7中任意一項所述的方法，其中所述至少4、5或6個氨基酸分別進 一步保持其在天然存在的血管緊張素（1-7)中出現的相對間距。
9. 根據權利要求4-8中任意一項所述的方法，其中所述線形肽包含4-25個氨基酸。
10. 根據權利要求4-9中任意一項所述的方法，其中所述線形肽是天然存在的血管緊 張素（1_7)的片段。
11. 根據權利要求4-9中任意一項所述的方法，其中所述線形肽包含在天然存在的血 管緊張素（1-7)中的氨基酸取代、缺失和/或插入。
12. 根據權利要求11所述的方法，其中所述線形肽具有氨基酸序列Asp1-Arg2-Nle 3-Ty T4-Ile5-His6-Pro7(SEQ ID N0:4)〇
13. 根據權利要求11所述的方法，其中所述線形肽具有氨基酸序列Asp1-Arg2-Val 3-Se T4-Ile5-His6-Cys 7(SEQ ID N0:5)〇
14. 根據權利要求3所述的方法，其中所述功能性等價物是環肽。
15. 根據權利要求14所述的方法，其中所述環肽包含在氨基酸之間的連接。
16. 根據權利要求15所述的方法，其中所述連接位于與天然存在的血管緊張素（1-7) 中的Tyr4和Pro 7的位置對應的殘基上。
17. 根據權利要求15或16所述的方法，其中所述連接是硫醚橋。
18. 根據權利要求14-17中任意一項所述的方法，其中所述環肽包含以其他方式與天 然存在的血管緊張素（1-7)氨基酸序列 Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile 5-His6-Pro7 (SEQ ID NO: I) 相同的氨基酸序列。
19. 根據權利要求14-17中任意一項所述的方法，其中所述環肽包含正亮氨酸（Nle)取 代天然存在的血管緊張素（1-7)中Val 3的位置。
20. 根據權利要求19所述的方法，其中所述環肽是具有下式結構的4, 7-環化血管緊張 素（1_7):
21. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)肽包含一種 或多種化學修飾以增加蛋白酶抗性、血清穩定性和/或生物利用度。
22. 根據權利要求21所述的方法，其中所述一種或多種化學修飾包含聚乙二醇化。
23. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述心臟和腦以外的一種或多種組 織包括個體的一個或多個肢體。
24. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述周圍血管疾病是周圍動脈疾病。
25. 根據權利要求23所述的方法，其中所述周圍動脈疾病是嚴重肢體缺血。
26. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述周圍血管疾病是急性缺血。
27. 根據權利要求1-25中任意一項所述的方法，其中所述周圍血管疾病是慢性缺血。
28. 根據權利要求1-25中任意一項所述的方法，其中所述周圍血管疾病是糖尿病性血 管病。
29. 根據權利要求28所述的方法，其中所述糖尿病性血管病是腎病。
30. 根據權利要求28所述的方法，其中所述糖尿病性血管病是神經病。
31. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)在心臟和腦 以外的一種或多種組織中誘導和/或增加血管生成和/或血管化。
32. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)在心臟和腦 以外的一種或多種組織中減少和/或推遲細胞死亡。
33. 根據權利要求32所述的方法，其中所述細胞死亡是凋亡。
34. 根據權利要求32所述的方法，其中所述細胞死亡是壞死。
35. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)在心臟和腦 以外的一種或多種組織中增加和/或增強細胞存活。
36. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述治療有效量的血管緊張素 (1-7)足以使流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流的部分或完全阻塞減少。
37. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述治療有效量的血管緊張素 (1-7)足以在心臟和腦以外的一種或多種組織中減少或推遲組織損傷。
38. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述治療有效量的血管緊張素足以 改善心臟和腦以外的一種或多種組織的功能。
39. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)通過胃腸外 給藥。
40. 根據權利要求39所述的方法，其中所述胃腸外給藥選自靜脈內、皮內、吸入、透皮 (局部）、皮下和/或透粘膜給藥。
41. 根據權利要求1-38中任意一項所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)通過口服 給藥。
42. 根據權利要求41所述的方法，其中所述組合物還包含環糊精。
43. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，其中所述血管緊張素（1-7)每兩個月、每 個月、每三周、每兩周、每周、每日給藥或以可變間隔給藥。
44. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，所述方法還包括聯合給予促血管生成劑 和血管緊張素（1-7)。
45. 根據前述任意一項權利要求所述的方法，所述方法還包括在心臟和腦以外的一種 或多種組織進行血管或血管內操作。
46. -種治療周圍血管疾病的方法，所述方法包括如下步驟 向患有周圍血管疾病的個體給予包含血管緊張素轉化酶2 (ACE2)的藥物組合物，所述 周圍血管疾病的特征為流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流被部分或完全阻塞。
47. -種治療周圍血管疾病的方法，所述方法包括如下步驟 向患有周圍血管疾病的個體給予包含血管緊張素轉化酶2(ACE2)活化劑的藥物組合 物，所述周圍血管疾病的特征為流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流被部分或完全 阻塞， 其中所述ACE2的活化劑是三氮脒（DIZE)和/或1-[(2_二甲基氨基）乙基氨 基]-4-(羥基甲基）-7- [ (4-甲基苯基）磺酰氧基]-9H-氧雜蒽-9-酮（XNT)。
48. -種治療周圍血管疾病的方法，所述方法包括如下步驟 向患有周圍血管疾病的個體給予包含血管緊張素（1-7)受體激動劑的藥物組合物，所 述周圍血管疾病的特征為流向心臟和腦以外的一種或多種組織的血流被部分或完全阻塞， 其中所述血管緊張素（1-7)受體激動劑具有下式結構
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【文檔編號】A61K45/00GK104394878SQ201380019053
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年2月7日 優先權日:2012年2月10日
【發明者】R·弗蘭克林 申請人:塔瑞克斯制藥有限公司