用于引產的包含硫酸化的葡糖胺聚糖的聯合治療的制作方法

用于引產的包含硫酸化的葡糖胺聚糖的聯合治療的制作方法
【專利摘要】本發明涉及某些硫酸化的葡糖胺聚糖用于引產的用途。硫酸化的葡糖胺聚糖具有降低的抗凝血活性并且用于與能夠促進宮頸成熟或者促進子宮的子宮肌層收縮的治療一起的聯合治療。
【專利說明】用于引產的包含硫酸化的葡糖胺聚糖的聯合治療

【技術領域】
[0001] 本發明涉及某些硫酸化的葡糖胺聚糖用于引起婦女分娩的用途。

【背景技術】
[0002] 在產科學，由于延遲妊娠，例如超過41-42周妊娠時間，或者由于眾多醫學并 發癥，例如先兆子癇、糖尿病、原發性高血壓（essential hypertonia)和宮內發育遲緩 (IUGR)而需要引產是常見的臨床表現。
[0003] 在引產中，作為宮頸細胞外基質（ECM)的不充分重塑（remodeling)的結果，宮頸 經常是未成熟的。具有低濃度硫酸乙酰肝素的子宮ECM的不充分重塑與難產相關聯。在已 確定的分娩期間正常的宮頸成熟和1至l〇cm的宮頸打開意味著具有導致膠原和蛋白聚糖 濃度降低的炎癥反應的宮頸ECM的完全重建（reconstruction)。如果該過程過早啟動，在 宮頸成熟中的干擾導致早產。另一方面，不充分的宮頸成熟可以導致具有高頻率滯產的過 期分娩，因此導致機器分娩。因此，宮頸成熟和子宮肌層收縮是兩個過程，其必須協調以完 成正常分娩。
[0004] 分娩可以多種方式誘導。引產方法的非限制性例子為物理刺激過程；催產素、前列 腺素 E或其衍生物的施用，例如米索前列醇和地諾前列酮（dinoproston);使羊膜囊破裂； 擴張宮頸，施用宮頸內氣球和使用宮頸內的弗利導管（提供前列腺素從蛻膜和宮頸的內源 性釋放）。還可以使用這些引產方法的組合。雖然施用這些試劑或方法引產是常見作法，然 而事實上經受引產的婦女遭受頻繁的難產發生率，包括分娩停止（labor arrest)、延長的 分娩潛伏期和緩慢的分娩過程（滯產）。另外據估算局部應用前列腺素 E2之后，不良宮頸 的婦女中15-20%的引產干預會失敗。盡管存在這些事實，很少有過努力開發新的藥物旨在 改善引產和其后的事件直至分娩。在建立可靠和安全的治療方面的失敗導致了越來越多的 剖腹廣手術和手術分婉。
[0005] 在 Acta Obstetricia et Gynecologica. 2010 ;89:147 - 150)中報道了已經發現 達肝素鈉（一種低分子量肝素（LMWH))改善分娩過程，由此降低分娩時間，并且其提示在分 娩中達肝素鈉增加誘導催產素的子宮平滑肌收縮并且還刺激從取自宮頸的活檢培育的宮 頸細胞中細胞因子的釋放。雖然達肝素鈉通常看來對分娩過程產生陽性結果，但是由于其 抗凝血作用導致的出現風險它在臨床上是不可行的。
[0006] W0 03055499教導具有100BP單位/mg或更少的抗凝血活性的硫酸化的葡糖胺聚 糖（例如肝素）通常能夠有效預防性啟動或治愈性治療宮頸和子宮平滑肌以在婦女中建立 有效的分娩。在該文獻中提示硫酸化的葡糖胺聚糖可以和催產素聯合用于低內源性催產素 水平情況下的子宮平滑肌的啟動。然而，該文獻沒有提示當要求直接治療功效的并發癥出 現時，硫酸化的葡糖胺聚糖可用于直接干預治療。
[0007] 需要一種試劑，其可以用作現有治療的支持以在被選擇直接干預治療進入分娩的 婦女中引產。因此，將需要提供一種快速起效的治療，其既可以有助于建立不成熟宮頸的宮 頸成熟過程，也可以促進子宮的子宮肌層的收縮，從而避免或消除與難產相關的任何并發 癥。


【發明內容】

[0008] 在描述本發明之前，還應了解本文所用的術語僅為了描述特定實施方案的目的而 使用，并不旨在限定，因為本發明的范圍僅由所附權利要求書及其等同方式進行限定。
[0009] 必須指出的是，除非上下文另有明確規定，如在本說明書和所附權利要求書中使 用的，單數形式"一（a) "，"一（an)"和"該（the)"包括復數指代。
[0010] 此外，在適用的情況下，術語"約"用于表示一個給定值的+/_2%的偏差，優選數值 的+/-5%的偏差，最優選數值的+/-10%的偏差。
[0011] 在本發明的文本中，"引產"通常定義為一種干預，其直接或間接啟動分娩從子宮 的子宮肌層收縮（子宮收縮）至導致分娩和孩子誕生過程的完成。引產的原因包括，但不 限于，延遲妊娠，例如超過41-42周妊娠時間或者醫學并發癥，例如先兆子癇、糖尿病、原發 性高血壓和宮內發育遲緩（IUGR)。除了眾多很好實踐的方法，通常通過施用前列腺素，例如 地諾前列酮和通過施用催產素觸發引產。
[0012] 在本發明的文本中，術語"引產"涉及治療，其中從施用中要求直接應答效應。在分 娩情況下，要求該施用直接導致宮頸成熟的啟動或子宮收縮的促進或刺激中的至少一種。 換言之，本發明不指向預防性治療，其中在被選擇引產之前，婦女可以接受治療以預防或抵 消延遲的分娩。
[0013] 術語"被選擇引產"是指由于臨床原因，如"引產"列出的，或者由于人道主義原因 進入分娩的已經被選擇的產婦，并且直接干預施用治療將誘導分娩，所述治療在施用之后 觸發直接或間接導致分娩啟動的過程。在本發明的文本中，導致分娩啟動的過程可以包括 宮頸成熟的啟動或促進或子宮的子宮肌層收縮的促進或刺激中的至少一種。
[0014] 如描述本發明的文本中所使用的術語"難產（dystocia)"或"難產（labor dystocia) "為涵蓋數種病況的上位術語，包括分娩停止、延長的分娩潛伏期和緩慢的分娩 過程（滯產）。難產特別常見于引產之后并且相比于多經產產婦在初產婦中更頻繁。
[0015] 術語"聯合治療（combination treatment) " 或"聯合治療（treatment in combination) "在文中被定義為采用如本文描述和要求保護的化學修飾的肝素或硫酸乙酰 肝素的治療和另一種對完成引產有效的治療。另一種治療為有效促進宮頸成熟或子宮的子 宮肌層收縮的不同治療。另一種治療可以包括施用能夠促進宮頸成熟或子宮的子宮肌層收 縮的試劑，或者它可以包括有創治療和無創治療，其例如可以觸發有助于引產的前列腺素 的內源性釋放。熟練的產科醫生知曉許多這類的治療。聯合治療可以包括采用如本文描述 和要求保護的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素的治療與另一種治療附屬地、同時地或連續 地進行。其還可以指如本發明描述的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素被施用作對另一種用 于引產的治療的追加治療。在這方面，當聯合治療為追加治療時，化學修飾的肝素或硫酸乙 酰肝素的施用在觸發另一種治療之后的任何時間被添加至另一種用于引產的治療中。
[0016] 具有低抗凝血作用（例如抗因子Xa活性200IU/mg以下）的硫酸化的葡糖胺聚糖 在本文中被公開用于引產。
[0017] 葡糖胺聚糖為硫酸化的葡糖胺聚糖，其選自硫酸乙酰肝素、解聚的硫酸乙酰肝素、 硫酸皮膚素、解聚的硫酸皮膚素、肝素、解聚的肝素（低分子量肝素）、硫酸軟骨素和解聚的 硫酸軟骨素。
[0018] 硫酸化的葡糖胺聚糖為硫酸乙酰肝素、肝素、硫酸皮膚素和硫酸軟骨素，其由交替 的己糖胺和糖醛酸殘基構成。D-葡萄糖醛酸（GlcA)和其C-5差向異構體L-艾杜糖醛酸 (IdoA)的存在和己糖胺和糖醒酸（uronosyl)殘基的特異性硫酸化賦予了聚合物極大的結 構差異。此結構由重復的二糖構建，所述二糖包含從無或極少至接近100 %的含艾杜糖醛酸 的二糖。含GlcA-和IdoA-N-己糖胺的二糖組建（organization)可以從長嵌段至交替的 二糖模式變化。硫酸化的變化和艾杜糖醛酸硫酸鹽的程度產生眾多生物活性。有不同的定 義明確的硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、硫酸乙酰肝素和解聚肝素的多糖。
[0019] 硫酸軟骨素是硫酸化線性多糖，其由交替的葡糖醛酸和N-乙酰-半乳糖胺殘基組 成，后者在4或6位被硫酸化。它們可以由牛氣管軟骨或鼻軟骨制備。硫酸軟骨素對于細 胞外基質的組建很重要，其產生間質的膨脹壓力并參與中性粒細胞的募集。
[0020] 硫酸皮膚素是硫酸化線性多糖，其由交替的糖醛酸和N-乙酰-半乳糖胺殘基組 成。糖醛酸是D-GlcA或L-IdoA并且所述二糖可以分別在半乳糖胺和IdoA的4和6和2 位上被硫酸化。硫酸皮膚素可以從豬皮膚或腸粘膜和牛肺制備，其具有生物學活性，例如細 胞外基質的組建、與細胞因子相互作用、抗凝血活性和中性粒細胞的募集。
[0021] 硫酸乙酰肝素，具有葡糖胺和糖醛酸作為重復二糖，且由主要以分隔方式排列的 N-乙酰化和N-硫酸化二糖組成，其在細胞表面和細胞外基質中具有廣泛分布。其與肝素 相比通常較少硫酸化且具有較低的艾杜糖醛酸含量并且具有更加多變的結構。硫酸乙酰肝 素和蛋白質之間的相互作用牽涉多種生理過程，例如細胞粘附、細胞增殖、酶調節、細胞因 子作用、病毒入侵和抗凝血特性。硫酸乙酰肝素具有依賴于特定抗凝血五糖存在的抗凝血 活性，然而明顯不如肝素。硫酸乙酰肝素是線性多糖，可以如Fransson等人，Structural studies on heparan sulphates，Eur.J.Biochem. 106,59-69(1980)所述，從豬的腸粘膜或 從牛肺，使用氯化十六烷基吡啶部分和隨后的鹽提取物從肝素支鏈部分制備。
[0022] 肝素是天然存在的葡糖胺聚糖，其是一種有效的抗凝血劑，并已經作為優選的預 防和治療血栓栓塞性疾病的藥物用于臨床60余年。肝素治療的主要潛在副作用是其抗凝 血特性引起的出血并發癥。肝素是高度多分散性的并由分子量范圍在5至40kDa(平均大 約在15至18kDa)的多糖異質群體組成。低分子量肝素或解聚肝素是線性寡糖，主要由交 替的N-硫酸化葡糖胺和IdoA殘基組成，并且常包含抗凝血五糖。它們可以通過特異性化 學裂解由肝素制備。它們的主要臨床功能是抑制因子Xa，產生抗血栓形成作用。已提出 其具有抗轉移（antimetastatic)性質。Fragmini? (Pfizer,美國）是通過受控的肝素解 聚獲得的低分子量肝素的例子，其由于因子Xa的抑制而具有抗血栓形成作用。具有選擇 性抗凝血活性的肝素片段及其制備方法描述于美國專利號4, 303, 651中。根據歐洲藥典 (PharmEur)，肝素如果被稱為低分子量肝素（低分子質量肝素）應當具有不在70IU(國際 單位）/mg以下的抗因子Xa活性并且M w在8000Da以下。肝素、低分子量肝素和其它肝素 衍生物的抗凝血活性通常以它們通過抗凝血酶增強凝血因子Xa和因子Ila的抑制的能力 被測量。測量抗因子Xa-和抗因子Ila活性的方法對技術人員而言是已知的，還描述于藥 典中，例如歐洲藥典（Pharm Eur)和美國藥典（USP)。通過例如選擇性高碘酸鹽氧化（見例 如 FranssonLA 和 Lewis W, Relationship between anticoagulant activity of heparin and susceptibility, to periodate oxidation, FEBS Lett. 1979, 97:119-23 ;Lindahl 等 人，Proc Natl Acad Sci USA, 1980 ;77(11) :6551-6555)和技術人員已知的其它手段可以 取消抗凝血活性。
[0023] 在一方面，本發明涉及化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10IU/mg以下的 抗因子II活性、l〇IU/mg以下的抗因子Xa活性，其包含：
[0024] (i)基本上不含調節抗凝血作用的化學完整的糖序列的多糖鏈；和
[0025] (ii)對應于1.2至12kDa之間的分子量的多糖鏈，所述多糖鏈具有根據（式I)的 主要出現的二糖，

【權利要求】
1. 一種化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10iu/mg以下的抗因子II活性、10IU/ mg以下的抗因子Xa活性，其包含： (i) 基本上不含調節抗凝血作用的化學完整的糖序列的多糖鏈；和 (ii) 對應于1.2至12kDa之間的分子量的多糖鏈，所述多糖鏈具有根據（式I)的主要 出現的二糖， 其中，
η是2至20的整數 其在與能夠促進宮頸成熟或促進子宮肌層收縮的治療聯合用于引起婦女分娩中的用 途。
2. 根據權利要求1所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其與能夠促進具有 不成熟宮頸的婦女中的宮頸成熟的試劑聯合治療。
3. 根據權利要求2所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述促進宮頸 成熟的治療包括施用前列腺素。
4. 根據權利要求3所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述前列腺素 選自地諾前列酮（PGE2)和米索前列醇。
5. 根據權利要求1至4中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其與 能夠促進子宮的子宮肌層收縮的試劑聯合治療。
6. 根據權利要求5所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述婦女具有 成熟的宮頸，但是缺乏子宮肌層收縮。
7. 根據權利要求5或6所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述能夠 促進子宮肌層收縮的試劑為催產素。
8. 根據權利要求1至7中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其具 有從約4. 6至6. 9kDa的平均分子量（Mw)。
9. 根據權利要求1至8中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中 所述主要出現的多糖鏈具有分子量為3. 6至7. 2kDa的6至12個二糖單元。
10. 根據權利要求1至9中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中 所述多糖鏈的至少70%具有3kDa以上的分子量。
11. 根據權利要求1至10中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 具有根據下表的多糖分布及其對應的以重量累積％表示的分子質量：
ο
12. 根據權利要求1至11中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 中所述多糖包含具有如式I所示的還原末端殘基的糖鏈。
13. 根據權利要求1至12中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 包含修飾的葡糖胺，所述修飾的葡糖胺信號存在于 1H-NMR光譜的5. 0至6. 5ppm之間，其強 度（比例％)相比于來自于天然肝素的5. 42ppm處的信號在4%以下。
14. 根據權利要求13所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述修飾的 葡糖胺信號存在于1H-NMR光譜的5. 95ppm和6. 15ppm處。
15. 根據權利要求12至14中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 中所述葡糖胺總量的1%以下是被修飾的。
16. 根據權利要求13至15中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 中所述修飾的葡糖胺包含非還原性末端不飽和的葡糖胺。
17. 根據權利要求1至16中任一項所述的用途的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素，其 基本上不含有完整的非硫酸化的艾杜糖醛酸和/或葡萄糖醛酸。
18. -種婦女中引產的方法，其包括施用有效量的化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素與 能夠促進宮頸成熟或促進子宮的子宮肌層收縮的治療聯合，所述化學修飾的肝素或硫酸乙 酰肝素具有l〇IU/mg以下的抗因子II活性、10IU/mg以下的抗因子Xa活性，且包含： (i) 基本上不含調節抗凝血作用的化學完整的糖序列的多糖鏈；和 (ii) 對應于1. 2至12kDa之間的分子量的多糖鏈，所述多糖鏈具有根據（式I)的主要 出現的二糖， 其中，
η是2至20的整數。
19. 化學修飾的肝素或硫酸乙酰肝素在制備藥物中的用途，所述化學修飾的肝素或硫 酸乙酰肝素具有l〇IU/mg以下的抗因子II活性、10IU/mg以下的抗因子Xa活性，且包含： (i) 基本上不含調節抗凝血作用的化學完整的糖序列的多糖鏈；和 (ii) 對應于1.2至12kDa之間的分子量的多糖鏈，所述多糖鏈具有根據（式I)的主要 出現的二糖， 其中，
η是2至20的整數 所述藥物用于與能夠促進宮頸成熟或促進子宮的子宮肌層收縮的治療聯合使用。
20.根據權利要求19所述的用途，其中所述藥物用作能夠促進宮頸成熟或者促進子宮 的子宮肌層收縮的治療的追加治療。
【文檔編號】A61K38/11GK104203256SQ201380016550
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2013年3月25日 優先權日:2012年3月26日
【發明者】G·埃克曼-奧德貝格, A·M·馬爾姆斯特倫 申請人:迪樂方有限責任公司