一種氧化ldl抑制劑的制作方法

一種氧化ldl抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種氧化LDL抑制劑，所述抑制劑可(i)與氧化LDL特異性結合、(ii)抑制氧化LDL的生理活性、以及(iii)抑制氧化LDL進入到細胞內。本發明所涉及的氧化LDL抑制劑的有效成分為Del-1蛋白質。Del-1蛋白質由一些氨基酸序列組成，例如，序列編號1所示的氨基酸序列。
【專利說明】一種氧化LDL抑制劑

【技術領域】
[0001] 本發明涉及氧化低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein, LDL)抑制劑領域，該 抑制劑可（i)與氧化LDL特異性結合、（ii)抑制氧化LDL進入到細胞內、以及（iii)抑制 氧化LDL依賴性的細胞反應。本發明所涉及的氧化LDL抑制劑，靶向作用于氧化LDL，并抑 制氧化LDL與其受體的相互作用。

【背景技術】
[0002] 已知，低密度脂蛋白經氧化所生成的氧化LDL，會促進動脈硬化的進展，通過降低 血液中氧化LDL的量，可起到抗動脈硬化作用。例如，公開了一種動脈硬化預防劑，按照干 燥重量換算，其以含有低于重量的95%的原花青素的松樹皮提取物為有效成分（例如，參 考專利文獻1)。松樹皮提取物能有效地抑制血管中脂類的氧化，因此，服用松樹皮提取物， 可降低血液中氧化LDL的含量。
[0003] 另一方面，有關氧化LDL促進動脈硬化進展的作用，被認為是由于氧化LDL通 過凝集素樣氧化 LDL 受體（LOX-l:Lectin_like oxidized low density lipoprotein rec印tori)進入到血管內皮細胞中而產生的。L0X-1已被鑒定為血管內皮細胞的氧化LDL 受體，但是，目前我們所了解到的是，L0X-1是一種促進炎癥、動脈硬化、血栓、心肌梗死、導 管治療后的血管再狹窄的心血管疾病的因子。總而言之，通過抑制氧化LDL與L0X-1的結 合、以及氧化LDL進入到血管內皮細胞，也可獲得抗動脈硬化的效果。
[0004] 現有技術中，含有這類L0X-1抑制作用的預防劑，是一種含有以鳳尾蕨科鳳尾草 植物提取物為有效成分的、具有L0X-1對抗作用的組成物（例如，參考專利文獻2)，或者是 含有以蜜柑科植物提取物為有效成分的、具有L0X-1對抗作用的動脈硬化抑制劑（例如，參 考專利文獻3)，或者是具有L0X-1對抗作用的、以三聚體以上的原花青素為有效成分的凝 集素樣氧化型LDL受體抑制藥物（例如，參考專利文獻4)等。
[0005] 但是，現有技術中，發展型內皮蛋白質1 (developmental endothelial locus-1， 以下稱"Del-1"）是在血管內皮細胞或巨噬細胞中表達、分泌的蛋白質中的一種。Del-1具 有以下幾個特點。
[0006] (1)Del-Ι在腦或肺組織中高度表達（例如，參考非專利文獻1)。
[0007] (2)Del-Ι通過Del-Ι的C末端的Cl、C2結構域與磷脂酰絲氨酸（PS)相結合，促 進巨噬細胞吞食凋亡細胞（例如，參考非專利文獻2)。
[0008] (3) Del-Ι會促進血管新生（例如，參考非專利文獻3)。
[0009] (4) Del-Ι抑制白細胞與內皮細胞的黏合（抗炎作用）（例如，參考非專利文獻1)。
[0010] (5)可通過損傷血管或低氧狀態誘導Del-ι的表達（例如，參考非專利文獻4)。
[0011] 早期摶術f獻
[0012] 專利文獻
[0013] 【專利文獻1】日本專利公開公告"專利公開2005-23032號公報（
【公開日】：2005年 1月27日）"
[0014] 【專利文獻2】日本專利公開公告"專利公開2007-297381號公報（
【公開日】：2007 年11月15日）"
[0015] 【專利文獻3】日本專利公開公告"專利公開2007-320956號公報（
【公開日】：2007 年12月13日）"
[0016] 【專利文獻4】日本專利公開公告"專利公開2011-6326號公報（
【公開日】：2011年 1月13日）"
[0017] 非專利文獻
[0018] 【非專利文獻 1 】Choi EY et al. Del-1, an endogenous leukocyte-endothelial adhesion inhibitor, limits inflammatory cell recruitment. Science 2008, Vol. 322, n o. 5904，pll01-1104。
[0019] 【非專利文獻 2】Hanayama R et al· Expression of developmental endothelial locus-lin a subset of macrophages for engulfment of apoptotic cells.The Journal of imuunology 2004, vol. 172, no. 6, p3876-3882〇
[0020] 【非專利文獻 3】Penta K et al· Dellinduces integrin signaling and angiogenesis by ligation of alphaVbeta3. JBiol. Chem., 1999, Vol. 274, no. 16,plll01-11109。
[0021] 【非專利文獻 4】Rezaee M et al· Dellmediates VSMC adhesion，migration，and proliferation through interaction with integrin alpha(v)beta(3). Am J Physiol Hert Circ Physiol 2002,vol.282,no. 5,pl924_1932。
[0022] 【非專利文獻5】Scheurer SB et al· Modulation of gene expression by hypoxia in human umbilical cord vein endothelial cells:A transcriptomic and proteomic study. Proteomics 2004, vol. 4, no. 9, pl737_1760〇
[0023] 【非專利文獻 6】Steinbrecher UP. Receptors for oxidized low density lipoprotein. Biochim Biophys Acta. 1999, vol. 436, no. 3, p279_298。


【發明內容】

[0024] 眾所周知，氧化LDL進入到細胞內時，不僅僅是通過L0X-1進行，而且還會通過一 種稱為清道夫受體的一組氧化LDL受體進行（參考非專利文獻6)。除L0X-1以外的氧化 LDL受體，還存在以下幾種，例如清道夫受體A(scavenger receptor-A 1/11，SR-A)、CD36、 B 族 I 型清道夫受體（scavenger receptor class B type I，SR_BI)等。
[0025] 專利文獻2-4中所記載的藥物，為抑制L0X-1的藥物，因此，這種藥物對于通過 L0X-1攝取氧化LDL的細胞是有效的，但是，未必對通過其他氧化LDL受體攝取氧化LDL的 細胞有效。因此，僅僅依靠專利文獻2-4中所記載的藥物，有時未必是一種有效治療動脈硬 化的方法。
[0026] 為了解決上述問題，需要分別準備抑制各種氧化LDL受體的抵抗體、或者是準備 一種能夠有效抑制全部氧化LDL受體的單一性抵抗體。但是，這類抵抗體目前尚未被發現。 [0027] 因此，本發明所要解決的問題在于提供一種氧化LDL抑制劑，該氧化LDL抑制劑， 并不是以氧化LDL受體為靶向物，而是以氧化LDL本身為目標起作用，進而抑制氧化LDL受 體與氧化LDL的結合。
[0028] 本發明的發明人等，為了得到所述的抑制劑，進行了各種深入研究，最終發現血管 內皮細胞或巨噬細胞中分泌的蛋白質Del-Ι，這種蛋白質具有以下特性，即可（i)與氧化 LDL特異性結合、（ii)抑制氧化LDL進入到細胞內、以及（iii)可抑制氧化LDL依賴性的細 胞反應，至此本發明完成。也就是說，本發明包括以下幾個發明。
[0029] 本發明所涉及的氧化LDL抑制劑，其有效成分中含有Del-1 (Developmental endothelial locus-1)蛋白質。
[0030] 本發明所涉及的氧化LDL抑制劑中，所述Del-1蛋白質，可以是
[0031] (a)由序列編號1所示氨基酸序列組成的蛋白質，或者
[0032] (b)由新的氨基酸序列組成的、且具有氧化LDL抑制活性的蛋白質，該新的氨基酸 序列由序列編號1所示氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失、插入、或添加 而獲得。
[0033] 而且，本發明也包括，含有所述本發明涉及的氧化LDL抑制劑的藥學組成物。
[0034] 本發明中得到的氧化LDL抑制劑，并不是如以前所知的藥物一樣，以氧化LDL受體 為靶向物，而是以氧化LDL本身為目標進行結合，進而抑制氧化LDL進入到細胞內。因此， 發明人認為，本發明中得到的氧化LDL抑制劑，可以抑制所有的通過氧化LDL受體攝取氧化 LDL的細胞。所以，本發明中得到的氧化LDL抑制劑，將有可能成為有效治療或預防因氧化 LDL引起的動脈硬化性疾病等的藥物。
[0035] 而且，更為讓大家驚嘆的是，本發明中得到的氧化LDL抑制劑，可抑制氧化LDL依 賴性細胞反應（例如，NF- κ B以及SRF的激活）。
[0036] 本發明中得到的氧化LDL抑制劑中所含有的有效成分Del-Ι，有關其存在上述作 用的情況，人們此前對其一概不知，這種新型作用是由本發明的
【發明者】新發現的。因此，即 使是同行技術人員也無法輕易地完成本發明，而且，本發明所起到的效果，也是同行技術人 員所無法預想得到的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖1表示Del-Ι的結構以及氨基酸序列。
[0038] 圖2中（a)表示對ELISA檢測Del-Ι與LDL或氧化LDL結合的原理進行說明的概 念圖，圖2中（b)表示對結合LDL或氧化LDL后的Del-Ι進行ELISA檢測的結果。
[0039] 圖3表示對Del-Ι影響LDL受體表達細胞或L0X-1表達細胞攝取氧化LDL或LDL 進行評價的結果，圖3中（a)表示在不存在Del-Ι的條件下，對LDL受體表達細胞攝取Dil 標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像；圖3中（b)表示在Del-1存在條件下（30 μ g/ml)，對 LDL受體表達細胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像；圖3中（c)表示在不存在 Del-Ι的條件下，對L0X-1表達細胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像；圖3中（d) 表示在Del-1存在條件下（30 μ g/ml)，對L0X-1表達細胞攝取Dil標記氧化LDL的細胞的 熒光顯微鏡圖像；圖3中（e)表示對LDL受體表達細胞，在Del-Ι不存在或存在（30 μ g/ml) 條件下，攝取Dil標記LDL的細胞的熒光強度、以及對L0X-1表達細胞，在Del-1不存在或 存在（30 μ g/ml)條件下，攝取Dil標記氧化LDL的細胞的熒光強度。
[0040] 圖4表示Del-Ι是否可以抑制各種氧化LDL受體表達細胞（L0X-1表達細胞、SR-A 表達細胞、⑶36表達細胞、SR-ΒΙ表達細胞）攝取氧化LDL的研究結果。
[0041] 圖5表示Del-ι是否可以抑制內源性表達氧化LDL受體的人血管內皮細胞 (HUVEC)以及巨噬細胞（分化誘導為巨噬細胞的THP-1)攝取氧化LDL的研究結果，圖5中 (a)表示采用人血管內皮細胞（HUVEC)時的熒光顯微鏡圖像以及圖表，圖5中（b)表示采用 巨噬細胞（分化誘導為巨噬細胞的THP-1)時的熒光顯微鏡圖像以及圖表。
[0042] 圖6表示對Del-Ι抑制氧化LDL依賴性細胞反應（NF- κ B以及SRF的激活）的效 果進行評價的結果，圖6中（a)表示對NF- κ B激活的研究結果，圖6中（b)表示對SRF激 活的研究結果。
[0043] 圖7中的（a)以及（b)，表示使24周齡的野生型小鼠（圖中以"WT"表示）自由攝 取高脂肪飼料20周，其主動脈根部的脂質染色圖像（oil Red 0染色圖像），（c)以及（d) 表示24周齡的Del-1過度表達小鼠（圖中以"Del-1-Tg"表示）的主動脈根部的脂質染色 圖像（oil Red 0染色圖像），（e)表示對主動脈根部所觀察到的脂質沉降面積進行定量測 定后的結果。

【具體實施方式】
[0044] 以下，將對本發明進行詳細闡述，但本發明的范圍并不僅僅局限于這些說明，除了 以下示例以外，在不影響本發明主旨的范圍內，也可通過其他方式進行適當變更而得到本 發明。另外，本說明書中所記載的全部已公開文獻，在本說明書中將作為參考進行引用。
[0045] [本發明中得到的氧化LDL抑制劑]
[0046] 本發明中得到的氧化LDL抑制劑，以含有Del-1 (developmental endothelial locus-1)蛋白質為有效成分。
[0047] 已知，此處的"Del-1"是在人血管內皮細胞或巨噬細胞中表達、分泌的蛋白質（例 如，參考非專利文獻2)。圖1表示Del-Ι的結構及其氨基酸序列。Del-Ι也被稱為"Homo sapiens EGF-like repeats and discoidin I-like domains3(EDIL3)，'，其氨基酸序列以 及核苷酸序列，在基因數據庫（Genbank)中以登錄號：NM005711進行了公開。序列編號1表 示Del-Ι的氨基酸序列、序列編號2表示其核苷酸序列。
[0048] Del-Ι是由480個氨基酸組成的蛋白質，從N末端開始分為S、E1、E2、E3、C1、C2結 構域。"S"表不 Signal peptide、"E"表不 EGF-like domain、"C"表不 factor5/8C-terminal domain。尤其是，Del-1在C末端的Cl、C2結構域與磷脂酰絲氨酸（PS)結合，促進巨噬細 胞對凋亡細胞的吞食（例如，參考非專利文獻2)。已知Del-Ι具有促進血管新生的作用 (例如，參考非專利文獻3)、以及抗炎癥作用（例如，參考非專利文獻1)。另外，在Del-Ι的 E2中存在由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸組成的RGD序列（RGD肽）。在多種構成細胞矩陣 (ECM)的蛋白質中，RGD序列是一種通用的氨基酸序列，與細胞黏合緊密相關。
[0049] 本發明的
【發明者】等，發現了 Del-Ι的新型作用，S卩（i)可與氧化LDL特異性結合、 (ii)可抑制氧化LDL進入到細胞內、以及（iii)可抑制氧化LDL依賴性的細胞反應，最終完 成了有效成分中含Del-Ι的氧化LDL抑制劑的發明。
[0050] 此處，本發明中的"Del-Ι蛋白質"，不僅僅是指（a)由序列編號1所示的氨基酸 序列所組成的Del-Ι，而且指（b)由新的氨基酸序列組成的、且具有氧化LDL抑制活性的 Del-Ι的突變體，該新的氨基酸序列由序列編號1所示氨基酸序列，經過一個或多個氨基酸 殘基的取代、缺失、插入、或添加而獲得。在此值得說明的是，只要"Del-Ι蛋白質"具有氧化 LDL抑制活性，就也包括上述（a)以及（b)所示的蛋白質。另外，"Del-1蛋白質"并不僅限于 序列編號1所示的人源Del-Ι，也包括其他哺乳動物源的Del-Ι。例如，猴源Del-1 (Genbank 登錄號：NM001132845 等）、牛源 Del-1 (Genbank 登錄號：XM618255)、豬源 Del-1 (Genbank 登錄號：XM003123766)、雞源 Del-1 (Genbank 登錄號：XM424906)、大鼠源 Del-1 (Genbank 登 錄號：XM002728994)、小鼠源Del-1 (Genbank登錄號：NM001037987)等，皆可適用于本發明。 而且，"Del-1蛋白質"中具有序列編號1所示氨基酸序列以外的其他氨基酸序列，且也包 括與"Del-Ι"具有相同活性的Del-Ι樣蛋白質。總而言之，除非本說明書中有特殊說明，則 "Del-Ι"就是指由序列編號1所示氨基酸組成的蛋白質，"Del-Ι蛋白質"也表示Del-Ι、人 源以外的Del-1、Del-Ι突變體、Del-Ι部分蛋白質、以及Del-Ι樣蛋白質。
[0051] 此處所述"經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失、插入、或添加"，是指根據定 位誘發突變方法等已公開的突變體多肽制作方法，對多個（優選10個以下、更優選7個以 下、最優選5個以下）可進行取代、缺失、插入或添加的氨基酸，進行取代、缺失、插入、或添 加操作。這種蛋白質突變體，并不僅局限于，具有通過已公開的突變體多肽制作方法人為導 入的突變的蛋白質，也可以是天然存在的、將突變蛋白質進行單離精制操作后的物質。
[0052] 在此值得說明的是，本發明中的Del-Ι蛋白質，也可包括附加的多肽。附加的多 肽，可列舉以下幾種，例如，His或Myc、Flag等表位標記多肽。
[0053] 另外，本發明中的Del-Ι蛋白質，也可以是將編碼Del-Ι蛋白質的多核苷酸（稱為 "Del-Ι基因"）導入到宿主細胞，然后在細胞內表達該蛋白質的狀態；也可以是從細胞、組 織等中進行單離精制的情況。另外，Del-Ι蛋白質也可以是化學合成的物質。
[0054] 此處所述"具有氧化LDL抑制活性"，是指Del-Ι的突變體具有（i)與氧化LDL特 異性結合、（ii)抑制氧化LDL進入到細胞內、以及（iii)抑制氧化LDL依賴性的細胞反應 的作用。有關Del-Ι的突變體是否具有氧化LDL抑制活性，可根據實施例中所記載的方法 進行確認。
[0055] 具體而言，如果可以根據實施例1所記載的方法，可以確認Del-Ι的突變體與氧化 LDL特異性結合的話，則可判斷所述（i)與氧化LDL特異性結合的事實。另外，如果根據實 施例2所記載的方法，在Del-Ι突變體存在條件下氧化LDL對細胞內的進入，較Del-Ι突變 體不存在條件下明顯減少的話，則可判斷Del-Ι突變體（ii)抑制氧化LDL進入到細胞內的 事實。另外，如果根據實施例3所記載的方法，Del-Ι突變體存在條件下的NF-κ B以及SRF 信號，較Del-Ι突變體非存在條件下明顯減少的話，則可判斷Del-Ι突變體（iii)抑制氧化 LDL依賴性的細胞反應的事實。在此值得說明的是，有關Del-Ι突變體存在條件下的數據， 對于Del-Ι突變體不存在條件下的數據而言是否存在顯著減少的情況，可通過以下進行判 斷，例如，實施Student t檢驗，如果前者數據較后者數據存在顯著減少的話（危險率5%以 下），則可判斷"顯著減少"。
[0056] 因此，同行業技術人員將能夠理解記載在說明書中的"（b)由新的氨基酸序列組 成的、且具有氧化LDL抑制活性的Del-Ι的突變體，該新的氨基酸序列由序列編號1所示氨 基酸序列，經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失、插入、或添加而獲得"。此外，同行業技 術人員無需進行過多的實驗，即可根據本說明書的記載得到Del-Ι的突變體。
[0057] 本發明中得到的氧化LDL抑制劑中所含有的Del-Ι蛋白質的量，無特別限制，只要 是充分的能使氧化LDL抑制活性奏效的量即可，可考慮到Del-Ι蛋白質的精煉度、劑型或攝 取方法等，適當的進行決定。例如，在本發明中，為了能更為充分地發揮氧化LDL抑制活性， Del-Ι蛋白質的含有率，優選為氧化LDL抑制劑的50% (w/w)以上、更優選80% (w/w)以 上、最優選100% (w/w)。
[0058] [本發明中得到的藥學組成物]
[0059] 本申請發明的藥學組成物，含有所述本發明中得到的氧化LDL抑制劑。本發明中 得到的藥學組成物，可抑制氧化LDL進入到細胞內，且也可抑制氧化LDL依賴性細胞反應， 因此，可以預見該藥學組成物在治療或預防氧化LDL引起的各種疾病、尤其是動脈硬化性 疾病方面，起到一定的效果。
[0060] 本發明中得到的藥學組成物，在不影響氧化LDL抑制活性的前提下，也可以添加 藥學上允許的、氧化LDL抑制劑以外的其他成分（例如，藥學上可接受的載體等）。
[0061] 此處，將對所述"藥學上可接受的載體"進行如下說明。本說明書中"藥學上可接 受的載體"（以下，只稱為"載體"），是指在生產藥品、或農藥（如獸藥）時，以輔助處方為 目的而采用的物質，該物質不影響有效成分。而且，在接受本發明所涉及的藥學組成物的個 體中，應該是無毒性的、且載體本身也不會誘導有害抗體的產生。
[0062] 所述載體，采用可作為藥劑材料使用的各種有機或無機載體物質，可根據后述的 藥學組成物的給藥形式以及劑型，進行適當選擇。例如，可配合固體制劑中的賦形劑、潤滑 齊IJ、結合劑、崩解劑等；液體制劑中的溶劑、溶解輔助劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖劑、舒緩劑等； 防腐劑；抗氧化劑；穩定劑；調味劑等，但本發明不僅僅限于此。
[0063] 所述"賦形劑"可以為以下物質，例如，乳糖、白糖、D-甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、 赤蘚糖醇、淀粉、結晶纖維素等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即 可。
[0064] 所述潤滑劑可以為以下物質，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、石蠟、滑石、膠態硅石等， 但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0065] 所述"結合劑"可以為以下物質，例如，α-淀粉、甲基纖維素、結晶纖維素、白糖、 D-甘露糖醇、海藻糖、糊精、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯比咯烷酮等，但無特 殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0066] 所述"崩解劑"可以為以下物質，例如，淀粉、羥甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、 羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉納等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中 通常可采用的物質即可。
[0067] 所述"溶劑"可以為以下物質，例如，注射用水、酒精、丙二醇、聚乙二醇、香油、玉米 油、三辛酸甘油酯等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0068] 所述"溶解輔助劑"可以為以下物質，例如，聚乙二醇、丙二醇、D-甘露糖醇、海藻 糖、苯甲酸芐酯、乙醇、三氨基甲烷、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等，但無特殊限定， 只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0069] 所述"懸浮劑"可以為以下物質，例如，硬脂、月桂基硫酸鈉、月桂胺基丙酸、卵磷 月旨、苯扎氯銨、芐索氯銨、單硬脂酸甘油酯等界面活性劑，或者聚乙烯醇、聚乙烯比咯烷酮、 羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分 子等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0070] 所述"等滲劑"可以為以下物質，例如，氯化鈉、甘油、D-甘露糖醇等，但無特殊限 定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0071] 所述"緩沖劑"可以為以下物質，例如，磷酸鹽、醋酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等的緩沖 液等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0072] 所述"舒緩劑"可以為以下物質，例如，苯甲醇等，但無特殊限定，只要是在制藥領 域中通常可采用的物質即可。
[0073] 所述"防腐劑"可以為以下物質，例如，對羥基苯甲酸酯類、丙酮氯仿、苯甲醇、苯乙 醇、脫氫乙酸、山梨酸等，但無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0074] 所述"抗氧化劑"可以為以下物質，例如，亞硫酸鹽、抗壞血酸等，但無特殊限定，只 要是在制藥領域中通常可采用的物質即可。
[0075] 另外，所述穩定劑、調味劑，無特殊限定，只要是在制藥領域中通常可采用的物質 即可。
[0076] 本發明所涉及的藥學組成物，其給藥形式可以是口服給藥，也可以是非口服的、靜 脈內、直腸內或皮下給藥，可根據制劑形態選擇適當的給藥途徑。其中，從方便給藥的觀點 來看，本發明所涉及的組成物，優選口服給藥。在此值得說明的是，本說明書中，上述"非口 服"是指包括腦室內、靜脈內、肌肉內、腹腔內、胸骨內、皮下以及關節內注射、以及注入給藥 的形式。
[0077] 對本發明所涉及的藥學組成物進行口服給藥時，相關藥學組成物（以下，也稱為 "口服劑"）的劑型，可以是以下幾種劑型，例如，粉劑、顆粒劑、片劑、微脂粒、膠囊劑（包括 軟膠囊、微膠囊）、散劑等固體制劑、或糖漿劑等的液體制劑。
[0078] 所述"液體制劑"的載體，可采用以下物質，例如，水；甘油、乙二醇、聚乙二醇等有 機溶劑；這些有機溶劑與水的混合物等，在制藥領域按照通常所采用的方法即可制得。另 外，所述液體制劑，也可包括溶解輔助制劑、緩沖劑、等滲劑、穩定劑等。
[0079] 所述"固體制劑"的載體，可采用以下物質，例如，賦形劑、潤滑劑、結合劑、崩解劑、 穩定劑、調味劑等，在制藥領域按照通常所采用的方法即可制得。
[0080] 配制所述口服劑時，根據使用目的，也可進一步配合潤滑劑、流動促進劑、著色劑、 香料等。
[0081] 另外，對本發明所涉及的藥學組成物進行非口服給藥時，相關藥學組成物（以下， 也稱為"非口服劑"）的劑型，可以是以下幾種劑型，例如，注射劑、栓劑、丸劑、點滴劑等。相 關非口服劑，可以按照制藥領域已公開的方法，將本發明所涉及的藥學組成物，溶解或懸浮 到稀釋劑（例如，注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、香油、花生油、玉 米油、丙二醇、聚乙二醇等）中，根據使用目的，進一步添加殺菌劑、穩定劑、等滲劑、舒緩劑 等進行配制。
[0082]另外，作為本發明所涉及的藥學組成物的具體實施形式之一，在制藥領域也可按 照通常所采用的技術，制成緩釋制劑。
[0083] 本發明所涉及的藥學組成物，可單獨給藥，也可聯用其他藥劑進行給藥。本發明對 聯用給藥的方法并無限定，可以是以下幾種方法，例如，可以作為與其他藥物的混合物進行 給藥，也可作為單獨的藥物與其他藥物同時或并行給藥，或者也可隨時間的推移進行給藥。
[0084] 另外，本發明所涉及的藥學組成物，其每天的給藥次數無特殊限定。只要是本發明 中得到的氧化LDL抑制劑的給藥量，在每天所需的給藥量的范圍之內，可以一天給藥一次， 也可分多次給藥。
[0085] 在此值得說明的是，本發明中得到的藥學組成物，不僅可對人體給藥，也可應用于 人類以外的其他哺乳類動物（例如，小鼠、大鼠、家兔、犬、貓、牛、馬、豬、以及猴子等），這對 于同行業技術人員而言，應該很容易理解。
[0086] 本發明中得到的藥學組成物中氧化LDL抑制劑（或Del-Ι蛋白質）的量無特別限 制，只要是充分地能使氧化LDL抑制活性奏效的量即可，可考慮到Del-Ι蛋白質的精煉度、 劑型或攝取方法、或攝取對象者的性別、年齡、體重、健康情況等因素，適當的進行決定。 [0087] 為了得到氧化LDL抑制活性的效果，可以使本發明中得到的藥學組成物中所含 Del-Ι蛋白質的量如下，例如，以干燥重量計，成人每天攝取量10?3000mg、優選150? lOOOmg。
[0088] 以下將結合實施例，對本發明的實施方式進一步詳細說明。當然，本發明并不僅限 于以下實施例，有關細節可能會有各種各樣的實施方式，這就不用再說了。
[0089] 實施例
[0090] [實施例 1]通過 ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay :酶聯免疫吸附測 定法）評價Del-Ι與氧化LDL的結合
[0091](方法）
[0092] (1) Del-1
[0093] 實驗中所使用的人源Del-1，從R&D公司購入。該Del-1是在C末端添加 His標記 后的重組蛋白，經CH0細胞表達、精制而得。
[0094] (2)配制 LDL
[0095] 通過將健康者的血液采集到添加有ACD (acid-citrate-dextrose)緩沖液的采血 管內，從該血液中分離回收血漿。向所得到的血漿中加入溴化鉀，將比重調整至1. 019后， 在58000轉/每分鐘（rpm)條件下離心分離20小時。回收下層，通過溴化鉀將比重調整至 1. 063后，在58000轉/每分鐘（rpm)條件下離心分離20小時。超離心機米用Beckman公 司生產的L-80。
[0096] 米用透析膜（Slid-A-Lyzer Dialysis CassetteslOK MWC0、Pierce 公司生產）， 將PBS(-)作為外液，對所回收到的上層進行透析（更換外液4次），得到精制的人LDL。
[0097] (3)配制氧化LDL
[0098] 采用BCA蛋白測定儀（BCA Protein Assay Kit,Pierce公司生產），對精制人LDL 的蛋白質量進行測定，通過PBS(-)調整濃度至3mg/ml，向該溶液中加入硫酸銅，調整濃度 至7. 5μΜ，然后，在37°〇、5%0)2的培養箱內培養16小時。接著，以含2mM EDTA的0. 15M 氯化鈉溶液作為透析外液，對該溶液進行透析（更換外液4次），作為人氧化LDL。在此值 得說明的是，在表示實施例結果的圖中，有時會將氧化LDL表述為"oxLDL"。
[0099] (4) ELISA
[0100] 在384孔微孔板（Greiner公司生產）中，將抗ΑροΒ抗體（Bindingsite公司生 產）固相化，通過25% Block Ace封閉液（大日本住友制藥株式會社生產）進行封閉后，結 合氧化LDL或LDL。用PBS(-)洗凈微孔板2次后，添加經溶液（10mM HEPES，150mM NaCl， pH7. 4)稀釋的Del-1，室溫下使之反應1小時，通過抗His抗體（Invitrogen公司生產）檢 測已結合的Del-Ι。圖2 (a)表示利用ELISA檢測Del-Ι與LDL或氧化LDL結合的原理進行 說明的概念圖。
[0101](結果）
[0102] 圖2 (b)表示通過ELISA對結合LDL或氧化LDL后的Del-Ι進行檢測的結果。
[0103] 根據圖2(b)，可確認到Del-Ι在1μ g/ml、3y g/ml、10y g/ml的濃度下與氧化LDL 特異性結合。另一方面，未觀察到Del-1對LDL的特異性結合。
[0104] [實施例2]評價Del-Ι對氧化LDL進入細胞的抑制效果
[0105] (方法）
[0106] (1)制作 Dil 標記 LDL 或 Dil 標記氧化 LDL(Dil-oxLDL)
[0107] 采用含2mM EDTA的0. 15M氯化鈉溶液，稀釋人LDL或人氧化LDL，調整至lmg/ml。 分別向該溶液中添加 Dil (D282, Invitrogen公司生產）調整最終濃度至0. 3mg/ml、添加低 脂蛋白血清（Lipoprotein deficient serum, Sigma公司生產）調整最終濃度至5mg/ml，在 37°C條件下使之反應18小時。Dil采用懸浮在DMS0中的濃度為30 μ g/ml的溶液。
[0108] 反應后，通過氯化鈉以及溴化鉀將比重調整至1. 15,然后，在58000轉/每分鐘 (rpm)條件下離心分離處理20小時。米用透析膜（Slid-A-Lyzer Dialysis CassetteslOK MWC0)，將含2mM EDTA的0. 15M氯化鈉溶液作為透析外液，對所回收的上層進行透析（更換 外液4次），得到Dil標記LDL或Dil標記氧化LDL。在此值得說明的是，在表示實施例結 果的圖中，有時會分別以"Dil-LDL"以及"Dil-oxLDL"來表述Dil標記LDL以及Dil標記 氧化LDL。
[0109] (2)各種受體表達細胞
[0110] 采用含10% FBS的DMEM培養基（GIBC0公司），在37°C、5% C02的條件下，對培養 48小時后的各種細胞應用在本實施例中。各種受體表達細胞，以如下方式制作。
[0111] 采用Lipofectamin2000 (Invitrogen)，向C0S7細胞中導入各種氧化LDL受體的表 達載體或LDL受體表達載體。有關各種氧化LDL受體的表達載體或LDL受體表達載體的詳 細信息，如下所述。
[0112] 通過在人cDNA程序庫中，克隆人L0X-lcDNA(Genbank登錄號：NM002543)、人SR-A cDNA(Genbank 登錄號：NM002445)、人 CD36cDNA(Genbank 登錄號：NM000072)、人 SR-BI cDNA(Genbank 登錄號：NM005505)以及人 LDLR cDNA(Genbank 登錄號：NM000527)，來制作 L0X-1 表達載體（pcDNA6. 2-human L0X-1-V5)、SR-A 表達載體（pcDNA6. 2-human SR-A-V5)、 CD36 表達載體（pcDNA6. 2-human CD36-V5)、SR-BI 表達載體（pcDNA6. 2-human SR-BI-V5)、 以及LDL受體（LDLR)表達載體，然后將它們分別插入到哺乳動物表達載體pcDNA6. 2/V5/ GW/D_T0P0(Invitrogen公司生產）中，制作各種受體表達載體。在此值得說明的是，各種受 體的C末端側添加有V5標記。
[0113] (3)HUVEC(Human umbilical vein endothelial cells :正常人胳靜脈內皮細胞）
[0114] 人臍靜脈內皮細胞（HUVECs)是從L0NZA公司購入。培養時采用EGM-2培養基 (L0NZA公司生產），在37°C、5% C02條件下進行培養。實驗中采用繼代次數為7次以下的 細胞。
[0115] (4)THP-1 (人單核細胞白血病細胞株）
[0116] 采用RPMI1940培養基（GIBC0公司生產），該培養基包括含有20 μ Μ 10 % FBS的2-Mercaptoethanol，在37 °C、5 % C02條件下進行培養。實驗時，在ΙΟΟηΜ PMA(Phorboll2Myristatel3Acetate)存在條件下培養72小時，采用被分化誘導為巨噬細 胞樣的細胞。
[0117] (5)細胞攝取氧化LDL或LDL的試驗
[0118] 通過無血清DMEM培養基，洗凈接種在384孔微孔板（Greiner公司生產）上的各 種細胞后，加入Del-Ι與Dil標記LDL或Dil標記氧化LDL的混合液，在37°C、5% C02條件 下使其反應。通過INCell Analyzer 1000 (GE healthcare公司生產），對被攝取到細胞中 的Dil標記LDL或Dil標記氧化LDL的突光信號，進行檢測、定量評價。
[0119] (結果）
[0120] 就Del-Ι對LDL受體表達細胞或L0X-1表達細胞攝取氧化LDL或LDL的影響進 行了評價，圖3表示其評價結果。圖3 (a)表示在Del-Ι不存在條件下，對LDL受體表達細 胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像；圖3(b)表示在Del-Ι存在條件下（30 μ g/ ml)，對LDL受體表達細胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像。另外圖3(c)表示 在Del-Ι不存在條件下，對L0X-1表達細胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光顯微鏡圖像；圖 3 (d)表示在Del-Ι存在條件下（30 μ g/ml)，對L0X-1表達細胞攝取Dil標記氧化LDL的細 胞的熒光顯微鏡圖像。
[0121] 另外圖3(e)表示在Del-Ι不存在或存在（30 μ g/ml)條件下，對LDL受體表達細 胞攝取Dil標記LDL的細胞的熒光強度，以及在Del-Ι非存在或存在（30 μ g/ml)條件下， 對L0X-1表達細胞攝取Dil標記氧化LDL的細胞的熒光強度。在圖3(e)中，在Del-Ι存在 (30 μ g/ml)下攝取Dil標記LDL(或Dil標記氧化LDL)時的熒光強度，以對Del-Ι不存在 下攝取Dil標記LDL(或Dil標記氧化LDL)時的熒光強（100)度的相對值來表示。
[0122] 觀察Del-Ι對表達氧化LDL受體L0X-1的細胞攝取氧化LDL的影響時，發現Del-1 在30 μ g/ml的濃度下，抑制了 90 %以上的L0X-1表達細胞對氧化LDL的攝取（根據Student t檢驗的顯著差異檢驗，危險率5%以下時存在顯著差異）。而另一方面，Del-1未抑制LDL 受體表達細胞（LDLR表達細胞）對LDL的攝取。
[0123] 另外，圖4表不Del_l是否可以抑制各種氧化LDL受:體表達細胞（L0X-1表達細胞、 SR-A表達細胞、⑶36表達細胞、SR-ΒΙ表達細胞）攝取氧化LDL的研究結果。
[0124] 根據圖4可知，Del-Ι不僅對表達L0X-1的細胞，而且對表達其他氧化LDL受體 SR-A、⑶36、SR-BI的細胞，也可抑制其對氧化LDL的攝取。因此，認為Del-Ι并不是以氧化 LDL為靶向物，來抑制細胞攝取氧化LDL的，而是以氧化LDL本身為靶向物，來抑制細胞攝取 的。
[0125] 其次，圖5表示Del-Ι是否可以抑制內源性表達氧化LDL受體的人血管內皮細胞 (HUVEC)以及巨噬細胞（分化誘導為巨噬細胞的THP-1)攝取氧化LDL的研究結果。圖5(a) 表示采用人血管內皮細胞（HUVEC)時的結果，圖5(b)表示采用巨噬細胞（分化誘導為巨噬 細胞的THP-1)時的結果。圖5(a)以及圖5(b)中的照片為熒光顯微鏡圖像，記載"+Del-1 30 μ g/ml"的照片，為Del-1存在（30 μ g/ml)條件下攝取氧化LDL時的熒光顯微鏡圖像， 未記載"+Del-130 μ g/ml"的照片，為Del-Ι不存在條件下攝取氧化LDL時的熒光顯微鏡圖 像。
[0126] 根據圖5可知，通過基因導入，Del-Ι不僅僅可以抑制強制性表達氧化LDL受體的 細胞（參考圖4)，而且還可抑制內源性表達氧化LDL受體的人血管內皮細胞（HUVEC)以及 巨噬細胞（分化誘導為巨噬細胞的THP-1)對氧化LDL的攝取。
[0127] 在此值得說明的是，在圖5所示的實驗中，采用了 BSA作為Del-Ι的對照，但是，未 觀察到BSA的攝取抑制作用（參考圖5中記載BSA的部分）。圖5中記載BSA的部分顯示， 使BSA濃度保持在30 μ g/ml下，攝取氧化LDL時的Dil標記氧化LDL的攝取量。
[0128] [實施例3]評價Del-Ι對氧化LDL依賴性細胞反應的抑制效果
[0129] (方法）
[0130] (1)為了研究氧化LDL引起的細胞反應，采用了 TetOn hL0X-l-V5-His/HA-Flag hATl/CHO 細胞（稱 "L0X-1-AT1/CH0 細胞"）。
[0131] L0X-1-AT1/CH0細胞以如下方式進行制作。將人LOX-lcDNA(Genbank登錄號： NM002543)編入到表達載體pTRE2hyg(Clontech公司生產）中，制作h L0X-1表達載體 (pTRE2hyg-hL0X-l)。采用 Lipofectamin2000 將 pTRE2hyg-hL0X-l 對 CH0 細胞進行基因導 入。為了得到穩定表達株，在lOOyg/ml的G418(Calbiochem公司生產）以及400yg/ml 的hygromycin B (和光純藥株式會社生產）存在條件下進行培養，將因藥物選擇而剩余的 細胞進行克隆后用于了實驗中。
[0132] 對上述所得到的 Tet0n-hL0X-l-V5His 細胞，采用 Lipofectamin2000 共轉 染 pTRE2hyg-HA_Flag-hATl 與 pSV2bsr (Funakoshi 公司生產）。為了 得到穩定表達 株，在 hygromycin B(和光純藥株式會社生產）400yg/ml 與 blasticidin SlOOyg/ ml (Funakoshi公司生產）存在條件下進行培養，將因藥物選擇而剩余的細胞進行克隆后用 于了實驗中。
[0133] 對上述所得到的 L0X-1-AT1/CH0 細胞，采用含 10 % FBS、100 μ g/ml 的 G418、 400 μ g/ml 的潮霉素 B (hygromycin B)、以及 10 μ g/ml 的殺稻癌菌素 S (blasticidin S)的 F12培養基（GIBC0公司），在37°C、5% C02條件下進行培養。
[0134] (2)熒光素酶檢測
[0135] 在對氧化LDL引起的細胞反應進行評價時，采用了熒光素酶檢測。同行業技術人 員對通過氧化LDL激活NF-κ B以及SRF的情況，都充分了解（例如，參考"Circulation Research. 2011 ； 108:797-807, Myocardin-Related Transcription Factor A Mediates OxLDL-Induced Endothelial Injury"）。將突光素酶報告載體pGFI-NFk B或pGFl-SRF(均 為System Biosciences公司生產）與pRL_CMV(Promega公司生產）混合后，采用 Lipofectamin LTX(invitrogen公司生產），對L0X-1-AT1/CH0細胞進行基因導入。基因導 入16小時后，更換為含0. 1 % FBS以及300ng/ml的多西環素（doxycycline)的F12培養 基，在5% C02條件下培養24小時。
[0136] 用PBS(-)洗凈細胞后,添加含0· 1% FBS和100ng/ml的多西環素（doxycycline) 的200 μ 1/well的F12培養基。在Del-1存在或不存在條件下添加氧化LDL，在0. 5% C02 培養箱內使其反應20小時。
[0137] 進行突光素酶檢測時，采用雙突光酶報告測定系統（Dual-Luciferase Reporter Assay System, Promega公司生產）。具體而言，是將反應后的細胞用PBS (-)洗凈1次后， 通過Passive lysis buffer回收細胞，溶解，在lOOOOrpm下離心處理2分鐘后，取上清作 為樣本。采用光度計Centro LB960(Berthold公司生產），測定發光強度，計算出熒光蟲熒 光素酶/海螢突光素酶（firefly luciferase/Cypridina luciferase)的值。將未添加氧 化LDL條件下的發光強度作為1，將各發光強度進行圖表化（參考圖6)。
[0138] (結果）
[0139] 根據圖6可知，在11?-1-六1'1/010細胞中，〇61-1(1(^8/1111以及3(^8/1111的濃度） 顯著抑制了氧化LDL引起的NF-κ B以及SRF的激活。此時，未觀察到BSA的抑制作用。圖 6所示數據已進行顯著差異檢驗（Student t檢驗），危險率不足5 %時存在顯著差異的情 況，在圖6中附有標記；危險率不足1%時存在顯著差異的情況，在圖6中附有"**"標 記。
[0140] 因此，確認到了 Del-Ι可抑制氧化LDL依賴性細胞反應的情況。
[0141] [實施例4]評價Del-Ι的動脈硬化抑制效果
[0142] (方法）
[0143] (1)制作Del-Ι高表達小鼠
[0144] Del-Ι高表達小鼠（稱"Del-1-Tg小鼠"）以如下方式進行制作。
[0145] 通過人腦cDNA克隆人Del-Ι基因（序列編號2)，插入到哺乳動物表達載 體 pcDNA6. 2/V5/GW/D-T0P0(Invitorogen 公司生產）中，制作人 Del-Ι 表達載體 pcDNA6. 2-hDel-l。
[0146] Del-1-Tg 小鼠的制作，通過 Gordon 等的方法（1980. Proc. Nalt. Acad. Sci. 77:7380-7384)的改良版方法實施。也就是說，用限制酶（MfeI、SmaI)處理人Del-1表 達載體（pcDNA6. 2-hDel-l)，配制含CMV啟動子與Del-Ι基因的DNA片段。將該DNA片段顯 微注射到C57BL/6JJcl原核階段胚胎的雄性原核中。麻醉狀態下將該DNA注入胚胎，移植 到假妊娠雌性小鼠（ICR小鼠）的輸卵管內，使其自然分娩，得到第一代（Founder)小鼠幼 崽（Del-1-Tg 小鼠）。
[0147] (2)脂質染色
[0148] 使24周齡的Del-Ι高表達小鼠（稱為"Del-1-Tg小鼠"）以及野生型小鼠，自由 攝取高脂肪飼料（商品名：Atherogenic Rodoent Diet (型號：D12336)、Research Diets 公 司生產）20周。對這些小鼠進行解剖，從各個體中切除主動脈，通過oil Red 0染色液（和 光純藥工業株式會社生產），對主動脈中的脂質進行染色。具體操作如下。
[0149] 對進行20周高脂肪飲食負荷的小鼠，在異氟醚吸入麻醉狀態下，進行開腹以及開 胸，并使用生理鹽水（大塚制藥生產）灌注主動脈，然后，從小鼠體內切除主動脈。對離體 主動脈，在生理鹽水中用手將周邊組織剝離，然后，采用4% (v/v)多聚甲醛-PBS進行固定。 通過60% (v/v)異丙醇洗凈以及平衡已固定的主動脈后，使用oil Red 0染色液（和光純 藥工業株式會社生產），對沉降到主動脈上的脂質進行染色。然后，使用60% (v/v)異丙醇 進行脫色。
[0150] 對染色后的組織，進行光學顯微鏡觀察。
[0151] (結果）
[0152] 結果如圖7所不。圖7 (a)以及（b)為自由攝取20周商脂肪詞料后的、24周齡野 生型小鼠（圖中以"WT"表示）的主動脈根部的脂質染色圖像（oil Red 0染色圖像）。另 夕卜。圖7(c)以及⑷為24周齡的Del-Ι過度表達小鼠（圖中以"Del-1-Tg"表示）的主 動脈根部的脂質染色圖像（oil Red 0染色圖像）。圖7(a)_(d)中，用箭頭表示陽性染色部 位。另外，圖7(e)表示在主動脈根部中所觀察到的脂質沉降面積的定量結果。
[0153] 通過圖7,可見Del-1-Tg小鼠中的脂質沉降現象明顯少于野生型小鼠 （p <0.001)。因此，可確認到通過在小鼠中過度表達Del-1，可抑制動脈硬化的進展。也就是 說，通過在藥理學上采用Del-Ι蛋白質，存在抑制動脈硬化等循環系統疾病的可能性。
[0154] 從上述闡述，發明人認為，本發明可（i)與氧化LDL特異性結合、（ii)抑制氧化 LDL進入到細胞內、以及（iii)抑制氧化LDL依賴性的細胞反應。因此，本發明中得到的氧 化LDL抑制劑，將有可能成為有效治療或預防因氧化LDL引起的動脈硬化性疾病等的藥物。
[0155] 故，本發明可應用于某些工業領域，例如，醫療以及醫藥品相關工業。
[0001] 序到表 <ι!σ:媲，)·行政法人N:/iW壞器病巧究中 CEMTE1) ^ ? ?,0> f:lV4it Ι·ΠΙ ?Φ：，Μ;?:1 ((hnHxi'c! ] oH-dsMss i y I ? [>upru： i1 ? -- Innih'U'r) <130； \i：VMM <!50> JF 2012-027793 <131； 2012-02-10 <160> 2 <170> Patentln version 3.5 <2i0> 1 <2il> -ISO <2I2> PRT <213> 人36 (Horao sapiens) <400：；- 1 Me t Λ rg Ser Vh I A ! a Vh I T rp L e u I.e ：i Vn 1 G 1 >· leu Sv r Leπ G 1 y 15 10 15 Val Fro Gin Fhe Gly Lys Giy Asp lie €ys Asp Pro Asn Pro Cys Glu 20 25 30 Asn G]y G1y lie Cys Leu Pro Gly Leu Ala Asp Gif Ser Phe Ser Cys 35 40 45 G1 is Cys Pro Asp Gly F h e I h r Asp F r o ：\ s n Lys Ser Ser a I V a i G1 u 50 55 60 Val Ala Ser Asp Glu Glu Gly Pro Thr Ser A La Gly Pro Cys Thr Pro 65 70 75 80 As n Pro Cys His Λ s n Giy l·: i y 11r C y s G ? n lie S e r G]u Λ]a 1 y r Λ rg 85 30 95 G1 j Asp Thr Phe He Gly Ijr Val Cys Lys Cys Pro Arg Gly Phe Asn too 105 m
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【權利要求】
1. 一種氧化LDL抑制劑，其特征在于，所述氧化LDL抑制劑的有效成分為Del-ι蛋白 質。
2. 根據權利要求1所述的氧化LDL抑制劑，其特征在于，所述Del-Ι蛋白質是， (a) 由序列編號1所示氨基酸序列組成的蛋白質，或者 (b) 由新的氨基酸序列組成的、且具有氧化LDL抑制活性的蛋白質，所述新的氨基酸序 列是由序列編號1所示氨基酸序列，經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失、插入、或添 加而獲得。
3. -種藥學組成物，其特征在于，所述藥學組成物包含如權利要求1或2所述的氧化 LDL抑制劑。
【文檔編號】A61P43/00GK104105498SQ201380008513
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年2月7日 優先權日:2012年2月10日
【發明者】沢村達也, 垣野明美 申請人:獨立行政法人國立循環器病研究中心