抑制免疫球蛋白k輕鏈基因增強子蛋白多肽及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領域，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白，具有減輕急性炎癥反應對機體破壞的多肽。其序列為MQISEPEITPEY是全新的序列，它們可以在體內試驗中增加內毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】抑制免疫球蛋白K輕鏈基因增強子蛋白多肽及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽及其應用，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白、具有減輕急性炎癥反應對機體破壞的多肽。
【背景技術】
[0002]膿毒血癥(s^sis) —直是一個嚴重的醫(yī)學問題。早期膿毒血癥不經(jīng)過及時有效治療可進展為重癥膿毒血癥和膿毒血癥性休克，兩者死亡率分別為20%~30%和40%~70%。醫(yī)學界一直在研究有效的治療手段，如早期對癥治療、激活蛋白C、皮質激素治療等。近年來隨著醫(yī)學研究的深入，對膿毒血癥的認識和治療取得了很大進展。其中，免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白(IKB-Ci)在內毒素休克中扮演著重要角色。
[0003]IKB 蛋白家族成員有 IKB a (MAD-3，pp40)、IKB 3、IKB y /pl05、IKB 8 /plOO、IKB e、Bcl_3以及果蠅屬的Cactus等。其家族結構特點是均有多個約33個氨基酸的重復序列，稱為崐SWI6/錨蛋白重復序列，主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用。IKB蛋白主要有以下三個部分構成:1.與蛋白降解有關的N-末端區(qū)；2.能與NF-k B相互作用的內部區(qū)(區(qū)內含有錨蛋白重復序列ANK)(家族共有結構)主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用；
3.稱為PEST的C 一端區(qū)，主要參與“囚禁"NF-K B在細胞漿中。IKBs家族參與兩個信號通路:NF- K B和Toll-like Receptor信號通路。NF- k B的激活必須通過兩個步驟:①IKB從NF-k B復合體中解離并降解，暴露NF-K B的核定位序列；②NF-K B發(fā)生核易位，并與特異的K B序列結合。 [0004]因此，IKB通過介導這兩條通路，從而調控前炎癥性細胞因子、細胞表面受體、轉錄因子、粘附分子等的生成。最終產(chǎn)生抗炎的作用。因而成為治療中性粒細胞為主的炎癥反應的主要靶點。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽抑制劑問世，用于治療膿毒血癥。
【發(fā)明內容】
[0005]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，對急性炎癥具有很好的療效。
[0006]技術方案
免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，其特征在于其序列為MQISEPEITPEY。
[0007]免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽在治療急性炎癥藥物中的應用。
[0008]有益效果
利用固相合成法化學合成免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白活力。在內毒素休克模型實驗中成功的增加了小鼠的生存率。單核巨噬細胞表達腫瘤壞死因子釋放酶，這種酶可切割并釋放腫瘤壞死因子，腫瘤壞死因子是炎癥反應的核心細胞因子，有加重炎癥反應的作用。我們發(fā)現(xiàn)的多肽抑制劑可以抑制腫瘤壞死因子釋放酶的酶活力，從而減輕了炎癥反應，保護機體并減輕炎癥的破壞作用。
[0009]本發(fā)明涉及多肽由吉爾生化(上海)有限公司合成。
【具體實施方式】
[0010]實施例1
多肽抑制劑體外祀點酶:腫瘤壞死因子釋放酶(均購于sigma公司)的IC50值。
[0011]腫瘤壞死因子釋放酶的活力是通過切割熒光產(chǎn)生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 檢測的(激發(fā)波長=320 nm,發(fā)射波長=405 nm)。反應在37° C下100沿反應體系中進行。反應開始時向反應體系中加4 W基質金屬蛋白酶-3存儲液(I ng/W)底物的終濃度為10剛。測得的IC50值為39.91 u mol。
[0012]實施例2
用內毒素休克模型檢測多肽的體內活力
在建立內毒素休克模型之前，我們首先測定了 LPS (E.coli 0111:B4)小白鼠的LD50為50呢每只小鼠，在實驗中我們采用了 100呢每只小鼠，這樣，對照組的小鼠可全部死亡。用Regas印in2做了一個陽性對照實驗。對照組小鼠注射100 I^g LPS，而Regasepin2實驗組的小鼠在注射LPS 5分鐘之后,每只小鼠再注射0.7 mg的多肽。通過制作Kaplan-Meier生存曲線發(fā)現(xiàn)Regasepin2可有效的保護注射了 100 Mg的小鼠,提高了生存率。成功地在小白鼠上建 立內毒素休克模型之后，用該模型檢測MQISEPEITPEY的體內活力。對照組小鼠(12只)注射100 I^g LPS,而多肽抑制劑組小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射0.7 mg多肽抑制劑。用Kaplan-Meier生存曲線分析，多肽MQISEPEITPEY可有效地保護小白鼠，提聞內毒素休克小鼠的生存率。
【權利要求】
1.免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，其特征在于其序列為MQISEPEITPEY。
2.免疫球蛋白 K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽在治療急性炎癥藥物中的應用。
【文檔編號】A61K38/10GK103755788SQ201310748607
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月31日 優(yōu)先權日:2013年12月31日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:羅瑞雪