三萜皂苷組份的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種三萜皂苷組份的制備方法，其工藝包括提取、脫色和反相色譜純化，以桔梗、柴胡、商陸及苦瓜四種藥材作為；根據其所包含三萜皂苷結構上糖配基的個數多少，在提取時分別采用水提醇沉和脫脂后醇提的方法；三萜皂苷的糖配基數目在五個以上時，宜采用水提醇沉的工藝，如桔梗；當糖配基的數目在五個及以下范圍時宜采用石油醚脫脂后乙醇回流提取的工藝，如柴胡、商陸、苦瓜；提取液再經活性炭回流脫色和反相色譜純化得到三萜皂苷組份。本發明的制備工藝通用性好、易操作、成本低、適合工業化生產。
【專利說明】三萜皂苷組份的制備方法
【【技術領域】】
[0001]本發明屬于醫藥【技術領域】，涉及一種從不同中藥材(桔梗、柴胡、商陸、苦瓜)中提取分離三萜皂苷組份的方法，特別涉及一種依次用活性炭脫色、反相色譜分離制備三萜皂苷組份的方法。
【【背景技術】】
[0002]三萜皂苷是由三萜皂苷元連接糖、糖醛酸及其他有機酸組成的一類化合物。常見的組成三萜皂苷的糖有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等，糖醛酸有葡萄糖醛酸等。三萜皂苷根據母核結構主要分為四環三萜皂苷和五環三萜皂苷。四環三萜皂苷母核結構包括達瑪烷型、葫蘆烷型、甘遂烷型、羊毛脂烷型和環阿屯烷型。五環三萜皂苷母核結構包括齊墩果烷型、烏蘇烷型、羽扇豆烷型和何帕烷型。其中主要以達瑪烷型、葫蘆烷型和齊墩果烷型為主。三萜皂苷主要存在于雙子葉植物，同時也有少數存在于單子葉植物中，在豆科、五加科、桔梗科、遠志科、葫蘆科、毛茛科、石竹科、傘形科、鼠李科和報春花科等植物中分布較多。本專利涉及到的桔梗、柴胡、商陸、苦瓜四種藥材分別屬于桔梗科、傘形科、商陸科和葫蘆科。三萜皂苷具有多種重要的生物活性和廣泛的藥理作用，如:抗癌、抗炎、抗過敏、治療白血病、抗病毒、降血糖及防治心腦血管疾病等。三萜皂苷目前已成為天然產物研究中最活躍和進展最快的領域。
[0003]近年來對三萜皂苷的研究主要集中于分離分析、結構鑒定和藥理活性等方面。在分離分析方面，針對三萜皂苷的提取方法應用最多的仍是傳統溶劑提取法，主要涉及到的溶劑為水、醇及一定比例的醇水混合溶劑。提取方式主要是煎煮、回流和超聲輔助提取，其他提取方法也在三萜皂苷的提取中有所應用，如微波輔助提取法、超臨界流體萃取法，以及針對一些酸堿性突出的三萜皂苷的酸堿提取法等。三萜皂苷的分離純化方面，涉及到的方法主要包括溶劑萃取法，如使 用正丁醇萃取三萜皂苷或是使用石油醚等弱極性萃取除去雜質等，大孔吸附樹脂柱色譜、柱層析色譜等。通常涉及到的方法僅是針對某種特定藥材中的三萜皂苷，通用性不強。三萜皂苷雖然分布在各科植物中，結構豐富，但在色譜上的分離行為比較類似，因此，可以針對三萜皂苷建立一種通用性強的，高效分離方法。
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【發明內容】
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[0004]本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種簡單方便的適用于多種藥材的三萜皂苷組分的制備方法。
[0005]本發明的目的是通過以下技術方案實現的:
[0006]一種三萜皂苷類組分的制備方法，其具體步驟為:
[0007](I)水提醇沉:由于桔梗藥材中所含的三萜皂苷糖配基數目較多，采用水提醇沉的方法；將桔梗藥材粉碎后加水煎煮兩次，合并兩次提取液，將提取液旋蒸濃縮后加入乙醇至含醇質量分數為75%，充分攪拌后靜置，過濾，取濾液；
[0008]所述的提取步驟是加入8~12倍量水提取兩次，每次0.5~1.5小時；[0009]所述的靜置條件為:在O~4°C下靜置,靜置時間為18~26小時；
[0010](2)除脂提取:由于柴胡、商陸、苦瓜含三萜皂苷的糖配基數目較少，采用脫酯醇提的方法；將柴胡、商陸、苦瓜藥材粉碎后加石油醚超聲，得除脂后藥渣，將除脂后藥渣加乙醇提取，得提取液；
[0011]所述的除脂步驟是加入8~12倍量石油醚超聲0.5~1.5小時；
[0012]所述的提取步驟是加入8~12倍量乙醇提取0.5~2小時；
[0013](3)活性炭脫色:將醇沉后桔梗提取液濾液和柴胡、商陸、苦瓜提取液的醇體積百分數調整到85~98%范圍后，加活性炭脫色；
[0014]所述的活性炭為藥用型活性炭，購于上海活性炭廠有限公司的藥用型活性炭；
[0015]所述的活性炭的量為調整好的醇體積百分數為85~98%的溶液體積的0.1~
0.5% ；
[0016](4)反相色譜純化:將脫色后的濾液旋蒸除去乙醇，使用反相色譜除去非皂苷物質，上樣量與填料的質量比為1: 10~1: 5，首先用體積分數為10~30%的甲醇水溶液洗去強極性物質，再用體積分數為60~100%甲醇水溶液洗脫三萜皂苷部分，最后用甲醇洗脫保留在反相填料上的弱極性物質從而保證填料的循環使用；每次洗脫體積為3~6個柱體積，收集合并有效 洗脫液，減壓濃縮得三萜皂苷組份。
[0017]所述的上樣量為過活性炭后得到的液體旋蒸凍干后得到的固體的量；
[0018]所述的填料為反相色譜填料；
[0019]所述的強極性物質為在反相色譜上保留很弱的一部分物質，需要較小濃度的有機溶劑即可洗脫下來；
[0020]所述的弱極性物質為在反相色譜上保留很強，需要很大濃度有機溶劑才可洗脫下來；
[0021 ] 所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m ;
[0022]所述的三萜皂苷組份主要為相應中藥材中所包含的大部分三萜皂苷化合物；
[0023]與現有技術相比，本發明的積極效果是:
[0024](I)本發明旨在根據三萜皂苷結構特點和色譜保留特性制定一種通用性強的高效分離純化方法用于制備高純度三萜皂苷組分。
[0025](2)本發明涉及到的三萜皂苷工藝以反相色譜純化為核心，在提取和前處理方面充分考慮了與反相色譜工藝的配合和銜接，提高反相色譜純化的效率和填料的循環反復使用。
[0026](3)方法簡單易行，操作簡便:本發明涉及的制備三萜皂苷組分的方法，儀器自動化程度高，操作方便簡單，可適用于大規模生產。
【【具體實施方式】】
[0027]以下提供本發明一種三萜皂苷組份的制備方法的【具體實施方式】。
[0028]實施例1
[0029]桔梗藥材100g，粉碎后加10倍量水煎煮2次，每次I小時，合并提取液旋蒸至IOOmL,向提取液中加入乙醇至乙醇濃度為80%，邊滴加邊攪拌，滴加完成后在4°C下靜置過夜約24小時。沉淀完全后，抽濾得濾液，活性炭的用量按濾液體積的0.2%計算，加入1.35g活性炭，在80°C下回流30分鐘，趁熱抽濾得濾液。將濾液旋蒸除去乙醇后加水至140mL溶解，使用20g的反相色譜柱處理4次。先用10%甲醇洗脫5倍柱體積，將大部分強極性雜質除去,然后再用60%甲醇洗脫5倍柱體積，對桔梗三萜皂苷組分進行洗脫并收集凍干，得0.90g三萜皂苷組分。最后用甲醇再洗脫3倍柱體積，洗脫保留在反相填料上的殘留雜質，保證柱子的重復使用。
[0030]實施例2
[0031]柴胡藥材100g，粉碎后加8倍量石油醚超聲I小時除脂，抽濾得藥渣。藥渣加10倍量乙醇回流I小時得醇提液，根據醇提液體積加入0.2%用量的活性炭1.58g，回流30分鐘，抽濾得濾液，旋蒸除去乙醇后加水至50mL溶解，使用20g的反相柱色譜處理3次。先用10%甲醇洗脫4倍柱體積，將大部分強極性雜質去除，然后再用70%甲醇洗脫5倍柱體積，對柴胡中三萜皂苷組分進行洗脫并收集凍干得1.24g三萜皂苷組分。最后用甲醇再洗脫3倍柱體積，洗脫保留在反相填料上的殘留雜質，保證柱子的重復使用。
[0032]實施例3 [0033]商陸藥材100g，粉碎后加8倍量石油醚超聲I小時除脂，抽濾得藥渣。藥渣加10倍量乙醇回流I小時得醇提液，根據醇提液體積加入0.2%用量的活性炭1.50g,回流30分鐘，抽濾得濾液。將濾液旋蒸除去乙醇，加水至55mL溶解。使用20g的反相色譜柱處理3次。先用30%甲醇洗脫5倍柱體積，將大部分強極性雜質去除，然后用60%甲醇洗脫5倍柱體積，對商陸中三萜皂苷組分進行洗脫并收集凍干得0.41g三萜皂苷組分。最后用甲醇再洗脫5倍柱體積，洗脫保留在反相填料上的殘留雜質，保證柱子的重復使用。
[0034]實施例4
[0035]苦瓜藥材100g，粉碎后加8倍量石油醚超聲I小時除脂，抽濾得藥渣。藥渣加10倍量乙醇回流I小時得醇提液。根據醇提液體積加入0.2%用量的活性炭為1.57g，回流30分鐘，抽濾得濾液，旋蒸除去乙醇加水至55mL溶解。使用20g的反相柱色譜處理3次。先用30%甲醇洗脫5倍柱體積，將大部分強極性雜質去除，然后用100%甲醇洗脫5倍柱體積，對苦瓜三萜皂苷組分進行洗脫并收集凍干得1.39g三萜皂苷組分。
[0036]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，其具體步驟為: (1)水提醇沉:由于桔梗藥材中所含的三萜皂苷糖配基數目較多，采用水提醇沉的方法；將桔梗藥材粉碎后加水煎煮兩次，合并兩次提取液，將提取液旋蒸濃縮后加入乙醇至含醇質量分數為75%，充分攪拌后靜置，過濾，取濾液； (2)除脂提取:由于柴胡、商陸、苦瓜含三萜皂苷的糖配基數目較少，采用脫酯醇提的方法；將柴胡、商陸、苦瓜藥材粉碎后加石油醚超聲，得除脂后藥渣，將除脂后藥渣加乙醇提取，得提取液； (3)活性炭脫色:將醇沉后桔梗提取液濾液和柴胡、商陸、苦瓜提取液的醇體積百分數調整到85~98%范圍后，加活性炭脫色； (4)反相色譜純化:將脫色后的濾液旋蒸除去乙醇，使用反相色譜除去非皂苷物質，上樣量與填料的質量比為1: 10~1: 5，首先用體積分數為10~30%的甲醇水溶液洗去強極性物質，再用體積分數為60~100%甲醇水溶液洗脫三萜皂苷部分，最后用甲醇洗脫保留在反相填料上的弱極性物質從而保證填料的循環使用；每次洗脫體積為3~6個柱體積，收集合并有效洗脫液，減壓濃縮得三萜皂苷組份。
2.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(I)中，所述的提取步驟是加入8~12倍量水提取兩次，每次0.5~1.5小時。
3.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(1)中，所述 的靜置條件為:在O~4°C下靜置,靜置時間為18~26小時。
4.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的除脂步驟是加入8~12倍量石油醚超聲0.5~1.5小時。
5.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的提取步驟是加入8~12倍量乙醇提取0.5~2小時。
6.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的活性炭為藥用型活性炭。
7.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的活性炭的量為調整好的醇體積百分數為85~98%的溶液體積的0.1~0.5%。
8.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的填料為反相色譜填料。
9.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中,所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m。
10.如權利要求1所述的一種三萜皂苷類組分的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的三萜皂苷組份主要為相應中藥材中所包含的大部分三萜皂苷化合物。
【文檔編號】A61K36/42GK103690587SQ201310699840
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月18日 優先權日:2013年12月18日
【發明者】邢倩倩, 李振宇, 金郁, 傅青, 李志東 申請人:華東理工大學