一種天然藏紅花素提取分離方法及其降血脂藥物的制備方法
【專利摘要】本發明具體涉及一種天然藏紅花素提取分離方法及其降血脂藥物的制備。其提取分離的方法是將梔子干果清洗去雜，經去離子水提取后過濾去渣，然后融合在線膜分離濃縮、大孔吸附樹脂層析純化，最后經低溫噴霧干燥制備藏紅花素,發明的關鍵是創制一種新的萃取劑，采用含一定助溶劑的水提取藏紅花素，提取率可達到95%以上；集成一種融合在線膜分離與濃縮、大孔吸附樹脂柱層析純化藏紅花素的工藝技術。本發明生產高純度藏紅花素的方法成本低，適合工業化擴大生產；復合的藥物制劑具有明顯的降血脂功效，無副作用，并且可以有效的預防心腦血管相關疾病，促進血液循環，是三高人群的首選保健藥品。
【專利說明】一種天然藏紅花素提取分離方法及其降血脂藥物的制備
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然產物提取及分離【技術領域】，同時涉及中藥制劑【技術領域】。發明涉及一種以桅子為原料制備高純度藏紅花素，以及一種具有降血脂功能的藏紅花素、銀杏葉提取物黃酮和葡萄籽提取物原花青素復合制劑的配方。
【背景技術】
[0002]桅子為茜草科植物屬，在我國分布廣泛，是衛生部頒布的首批藥食兩用資源。桅子具有護肝、利膽、降脂、止血、清熱、止瀉等功效。桅子中含有多種功效成分，主要是以桅子苷為主的環烯醚萜類，以桅子藏紅花素為主的類胡蘿卜素類和以綠原酸為主的酚酸類等物質。藏紅花素是自然界唯一的水溶性類胡蘿卜素類色素，無毒，安全性高，在人體內可以轉化為維生素A，具有一定的營養價值和保健功能，同時作為一種色調高，染色性好的天然色素，在食品輕化工領域具有廣泛應用和開發價值。臨床醫學表明，藏紅花素不僅可以增強肝臟的解毒功能、降低血中膽紅素、降低膽固醇，而且其作為胰脂酶抑制劑，在降血脂方面具有非常明顯的效果。銀杏葉提取物黃酮在調節血脂、改善胰島素抵抗方面已有30余年的歷史，而葡萄籽提取物原花青素能夠清除自由基，提高免疫力。將藏紅花素、銀杏葉提取物黃酮和葡萄籽提取物原花青素按照一定質量配比制成的降血脂藥物被醫學界所親睞。
[0003]桅子提取物藏紅花素的生產工藝有很多，目前國內外大多采用水滲鹿浸提法或有機溶劑(甲醇、乙醇、丙酮及含水有機溶劑等)法提取，結合大孔吸附樹脂法精制的工藝路線，如CN200910042702.5.CN200710008780.4。有機溶劑浸提法需要大量的浸提溶劑，生產成本高，回收率低，容易造成活性物質結構的改變和活性的下降，。水滲鹿浸提法萃取周期長，浸提率低，因此原料利用率和生產效率低。
[0004]發明專利CN200910307800.7中通過`由微濾(MF)、超濾(UF)、納濾(NF)、反滲透(RO)組成的膜系統分離純化藏紅花素，但是采用的水滲鹿浸提法延長了生產周期。發明專利CN201010190584.5中采用大孔吸附樹脂層析法對藏紅花素進行二次分離純化，消耗了過量的提取、洗脫溶劑，增加成本。目前還未見融合在線膜分離和大孔吸附樹脂柱層析純化集成的工藝技術，以制備高純度藏紅花素。
[0005]本發明目的首先在于研制一種加入高效萃取劑的水浸提法代替現有溶劑法，并結合在線膜分離和大孔吸附樹脂柱層析法高效制備高純度的藏紅花素。本發明的萃取劑及其提取、膜分離去雜、柱層析純化工藝具有工藝簡便、提取率高，產品質量好的顯著優點，適用于工廠擴大化生產。
[0006]本發明目的還在于利用上述生產的高純度藏紅花素，研制一種具有高效協同降血脂作用的復合制劑配方。將藏紅花素、銀杏葉提取物黃酮和葡萄籽提取物原花青素按照一定質量配比制成的降血脂藥物，充分利用三者在降血脂、抗氧化、調節膽固醇脂質代謝等方面的協同增效作用，復合的藥物制劑具有明顯的調節血脂功效，無副作用，并且可以有效的預防心腦血管相關疾病，促進血液循環，是三高人群的首選保健藥品。
【發明內容】
[0007]本發明要解決的主要技術問題是:
(1)提供一種加入助溶劑的去離子水浸提、膜過濾分離除雜結合大孔吸附樹脂層析法純化藏紅花素新工藝技術；
(2)提供一種具有降血脂功能的藏紅花素、銀杏葉提取物黃酮和葡萄籽提取物原花青素復合制劑的配方，該藥物降血脂效果明顯，無副作用。
[0008]本發明通過以下技術方案實現:
一種用于提取藏紅花素的高效萃取劑按w/w的成分和配比為:
烷基酚與環氧乙烷縮合物或吐溫-800.001~0.5
水補充至100
pH 值5.0 ~7.0
經多次優化的萃取劑按《/V的成分和配比為:
烷基酚與環氧乙烷縮合物或吐溫-800.01~0.05
水補充至100
pH 值4.5 ~6.5
所述的萃取劑從烷基酚與環氧乙烷縮合物或吐溫-80中選擇。
[0009]一種用于藏紅花素分離純化的膜分離系統按截留分子量或孔徑分:
微濾陶瓷膜0.1 μ m
微濾膜PP棉I~10 μ m
超濾膜10000~30000
一種天然藏紅花素提取分離的工藝，所述的工藝包括以下步驟:
(I)將桅子干果清洗去雜，粉碎過篩后，加入所述的萃取劑，該萃取劑從烷基酚與環氧乙烷縮合物或吐溫-80中選擇，添加量按w/w比例為0.001-0.5，并補充水至100。
[0010](2)按w/w，將干凈的桅子果按原料與浸提劑之比為1:10-50，投料浸提，浸提溫度40~60°C，處理I~5小時，浸提過程中間歇攪拌原料，控制降溫速度為I~10°C /小時，然后留取料液，再加入10~20倍于桅子果的萃取劑進行第二次提取，合并兩次料液；
(3)將步驟(2)得到的料液經過離心機過濾，去除200目以下的雜質，料液冷卻至30°C以下；
(4)將步驟(3)得到的濾液用微濾膜PP棉過濾，操作溫度25~35°C，壓力0.1~0.5Mpa ；
(5)將步驟(4)得到的濾液用超濾膜(UF)進一步過濾，操作溫度25~35°C，壓力0.05 ~0.1Mpa ；
(6)將步驟(5)得到的濾液流經大孔吸附樹脂層析柱X吸附，依次用去離子水去除多糖、蛋白質類等微量親水性雜質，得到洗脫液A ;用10~30%的低級醇沖洗樹脂柱，得到洗脫液B ;然后用35~90%的醇沖洗樹脂柱，得到洗脫液C ；
(7)將步驟(6)所述得到的洗脫液C在溫度40°C以下真空濃縮，回收溶劑，得到濃縮液
C；
(8)將步驟(7) 得到的濃縮液干燥；
(9)將步驟(8)得到的產品用反相高效液相色譜法定量分析藏紅花素(西紅花苷及類似物)，并用紫外分光光度計法定量測定總色價；
(10)將步驟(8)得到的粉末產品與銀杏葉提取物黃酮、葡萄籽提取物原花青素按照質量分數比，包括藏紅花素2~10份，銀杏葉提取物黃酮35~50份，葡萄籽提取物原花青素20~40份；
(11)將步驟(10)稱取好的組分，混合均勻，按照常規方法制成膠囊劑、片劑、散劑或顆粒劑。
[0011]所述的原料可以是桅子鮮果或經干燥的桅子果，以及桅子葉、桅子花、桅子樹枝或根等原料。
[0012]所述的工藝還包括從步驟(1)到步驟(6 )均在密閉容器內進行。
[0013]所述的工藝還包括:
(I)步驟(4)中的微濾包括孔徑為0.1~10 μ m的纖維素膜、陶瓷膜或PP棉。
[0014](2)步驟(5)中的超濾膜為截留分子量為10000道爾頓聚砜或聚丙烯超濾膜。
[0015](3)步驟(6)中的大孔吸附樹脂為弱極性或非極性樹脂。
[0016](4)步驟(6)中的低級醇為乙醇或者甲醇。
[0017](5)將步驟(6)得到的醇洗脫液在真空條件下濃縮。
[0018]所述的生產工藝采用冷凍干燥或低溫噴霧干燥或低溫真空帶式干燥將步驟(7)得到的濃縮液進行干燥。
[0019](6)將步驟(8)得到的粉末`與銀杏葉提取物黃酮、葡萄籽提取物原花青素，混勻，加入其它輔料制成膠囊劑、片劑、散劑或顆粒劑降血脂藥物。
[0020]更詳細的技術方案如下所述:
一、浸提:將洗凈的桅子果按原料與萃取劑之比為1:10~50(w/w)投料浸提罐中，浸提溫度40~60°C，提取時間I~5小時，浸提過程中每小時間歇攪拌原料3次，每次I~5分鐘，提取過程結束時，料液溫度控制在50°C以下，濾除料液。向殘余桅子果中加入10~20倍的萃取劑進行第二次提取，過程同上，合并兩次料液；
二、過濾:將步驟一得到的料液溫度降至30°C以下后，離心過濾，去除200目以下的雜質；得到的濾液經過孔徑為I~IOym的PP棉過濾，操作溫度25~35°C，壓力0.1~0.5Mpa ;得到的濾液再用截留分子量10000道爾頓的聚砜超濾膜(UF)進一步過濾，操作溫度 25 ~35°C，壓力 0.05 ~0.1Mpa ；
三、精制:經步驟二得到的料液泵入已再生好的大孔樹脂吸附柱X上，依次用I~5倍柱體積的去離子水過柱去除微量親水性雜質；然后用10~30%的低級醇沖洗樹脂柱X后；再用35-90%的醇溶液洗脫樹脂柱，收集該濃度醇洗脫液；
四、濃縮:醇洗脫液在40°C以下真空濃縮，回收溶劑得藏紅花素浸膏；
五、干燥:將步驟四藏紅花素濃縮液低溫噴霧干燥或真空冷凍干燥；
六、質檢:依照公認的檢驗方法和國標進行。
[0021]七、降血脂藥物配制:將步驟五干燥的粉末與銀杏葉提取物黃酮、葡萄籽提取物原花青素按照質量比(2~10):(35~50):(20~40)，混勻，加入其它輔料制成膠囊劑、片劑、散劑或顆粒劑降血脂藥物。
[0022]在上述工藝中，原料可以是桅子鮮果或經干燥的桅子果，以及桅子葉、桅子花、桅子樹枝或根等原料。[0023]在上述工藝中，原料浸提至醇洗脫濃縮液，均在密閉容器內進行。
[0024]在上述工藝中，采用微濾包括孔徑為0.1~10 μ m的纖維素膜、陶瓷膜或PP棉去除多糖、蛋白質等水溶性的大分子物質。
[0025]在上述工藝中，精制純化所使用的吸附柱為對藏紅花素(西紅花苷及其類似物)有選擇性吸附的大孔樹脂柱，如D101、HP20、X-5、HPD300、H103、AB-8等。洗脫用的低級醇為乙醇或甲醇，推薦使用40-90%的乙醇。
[0026]在上述工藝中，可以采用冷凍干燥或噴霧干燥對藏紅花素的濃縮液進行干燥。為了使產品有更好的內在質量和外觀，建議采用真空冷凍干燥。
[0027]在上述工藝中銀杏葉提取物黃酮、葡萄籽提取物原花青素通過商業途徑購買所得，其銀杏葉提取物中黃酮總含量> 24-28%，葡萄籽提取物中原花青含量≥ 90%。
[0028]經過多次生產總結，采用本發明的工藝方法生產藏紅花素，產品得率為89.2%~93.5% (與原料的品種相關)，產品提取或利用率均達95%，生產周期為28-45小時，每生產I公斤上述藏紅花素，乙醇消耗量低于6公斤。
[0029]
【權利要求】
1.一種天然藏紅花素提取分離方法及其降血脂藥物的制備，它包括水提取、膜過濾結合大孔吸附樹脂柱層析；還包括藏紅花素、銀杏葉提取物黃酮和葡萄籽提取物原花青素降血脂藥物復合制劑按照質量比的配方，其特征在于:包括以下步驟: (1)去離子水浸提:將桅子干果清洗去雜，粉碎過篩成20目粗粉，然后加入50~100倍的去離子水，加入1%的助溶劑，在溫度40~50°C下浸提2次，每次4~6h，將提取液合并； (2)離心除雜:將提取液經過離心機進行分離除雜； (3)膜分離去多糖:經離心機分離除雜后的提取液，用微濾膜PP棉過濾，操作溫度25~35°C，壓力0.1~0.5Mpa ;得到的濾液用截留分子量為10000道爾頓的聚砜中空纖維式超濾膜(UF)進一步過濾，操作溫度25~35 °C，壓力0.05~0.1Mpa ； (4)大孔吸附樹脂精制藏紅花素:采用非極性大孔吸附樹脂對步驟(3)中的濾液進行吸附，先用去離子水洗去雜質，再用20~30%醇溶液洗去桅子苷等極性較大的物質，最后用40~90%醇溶液洗脫目標物質，洗脫液濃縮后經噴霧干燥成高純度藏紅花素； (5)藏紅花素產品品質:將步驟(4)所得產品用反相高效液相色譜法定量分析藏紅花素(西紅花苷及類似物)，并用紫外分光光度計法定量測定總色價； (6)降血脂藥物的復配:將步驟(4)制備的高純度藏紅花素與銀杏葉提取物黃酮、葡萄籽提取物原花青素按照質量分數配比成降血脂藥物。
2.根據權利要求1所述的步驟(1)中萃取助溶劑，其特種在于所述的萃取助溶劑從烷基酚與環氧乙烷縮合物、吐溫-80中選擇。
3.根據權利要求1所述的步驟(2)中離心機，其特征在于所述的離心機從平板離心機、臥式離心機和碟式離心機中選擇。
4.根據權利要求1所述的步驟(3)中的膜系統，其特征在于所用的膜是微濾陶瓷膜、微濾PP棉、中空式纖維超濾膜或卷式超濾膜。
5.根據權利要求1所述的步驟(4)中的低級醇為乙醇或甲醇。
6.根據權利要求1所述的步驟(4)中的干燥方式為冷凍干燥或低溫噴霧干燥。
7.根據權利要求1所述的步驟(5)中的藏紅花素檢測方法，其特征在于所述的檢測方案按照、GB7912-2010方法測定。
8.根據權利要求1所述的步驟(5)中的降血脂藥物的復配，按照質量分數配比，包括步驟(4)制備的高純度藏紅花素2~10份，銀杏葉提取物黃酮35~50份、葡萄籽提取物原花青素20~40份。
9.根據權利要求1步驟(5)和權利要求8所述，降血脂藥物按照常規方法制成膠囊劑、片劑、散劑或顆粒劑。
【文檔編號】A61P3/06GK103665059SQ201310652092
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月5日 優先權日:2013年12月5日
【發明者】何靜仁, 劉莉, 段李歌, 蔡小雙, 張瑞 申請人:武漢新國峰科技開發有限公司