一種構建哮喘動物模型的方法
【專利摘要】一種構建哮喘動物模型的方法，取新鮮家蠶蠶蛹15-20克，加液氮研磨至變為粉末，加25ml的PBS蠶蛹蛋白沖洗下來，在勻漿器中研磨1-2h，取出勻漿器中的蠶蛹蛋白，4℃離心8000rpm/15min，取上清液，重復離心三次，BCA法測蛋白濃度達標，得家蠶蛋白。應用5-6周齡Babl/c小鼠，腹腔注射蠶蛹蛋白50μg/只加氫氧化鋁4mg致敏，一周一次，連續腹腔注射三周。最后一次致敏后，連續激發一周（蠶蛹粗蛋白50μg/只每天滴鼻）。最后1天滴鼻后24h，進行氣道高反應檢測和病理學檢查。本發明解決了構建哮喘動物模型難的問題，該動物模型穩定可控，可用于哮喘發病機制的研究和哮喘治療藥物的療效評價。
【專利說明】一種構建哮喘動物模型的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，更具體地，本發明涉及一種構建哮喘動物模型的方法。【背景技術】
[0002]過敏性哮喘是嚴重影響人類健康，且其發病率每年以5%的速度增長。根據聯合國世界衛生組織的估算，世界范圍內哮喘患者達三億之多，并波及到各個層次包括不同年齡或不同經濟狀況的人群中。在過去的二十年中，像哮喘等過敏性疾病呈穩定的上升趨勢。這不僅影響人們的生活質量，特別是幼兒哮喘，直接影響了兒童身體的正常發育，還對國家經濟的發展造成一定阻礙作用。
[0003]目前，國內外對過敏性哮喘的研究日益加深，但是針對過敏性哮喘的有效的特異性治療手段卻相對甚少。現在國際上通用的過敏性哮喘動物模型只有雞卵清白蛋白(OVA)誘導的小鼠哮喘模型。由于雞卵清白蛋白并不是一個在人體引發疾病的過敏原，通過此模型所獲得的研究結果，并不能很好地反映人體內哮喘的病理狀態。因此，建立一種能模擬人體哮喘病理狀態的動物模型，可用于抗過敏藥物的篩選以及研究哮喘的發病機制有重要的科學意義和潛在的臨床應用價值。
[0004]而且雖然腎上腺糖皮質激素仍然是比較有效的治療和預防過敏性哮喘發作的藥物，但其較大的副作用限制了臨床的應用。鑒于直接進行人體試驗的局限性，有關病因的確定、發病機制的探索、新治療方法的評價、新藥的研究與開發在相當程度上均需通過動物實驗進行。因此，哮喘動物模型對于哮喘的研究具有十分重要的意義。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種以家蠶蛋白誘導形成的構建哮喘動物模型的方法，使動物模型穩定可控，用于哮·喘發病機制的研究和哮喘治療藥物的療效評價。
[0006]本發明的技術方案是:一種構建哮喘動物模型的方法，其特征在于該方法使用家蠶蛋白誘導形成。
[0007]本發明進一步的技術方案是:由家蠶蠶蛹15-20克，加液氮研磨至變為粉末，再加25ml的PBS蠶蛹蛋白沖洗下來，在勻漿器中研磨l_2h，取出勻漿器中的蠶蛹蛋白，低溫離心后取上清液，得家蠶蛋白。
[0008]本發明更進一步的技術方案是:家蠶蠶蛹為新鮮的家蠶蠶蛹。
[0009]本發明再進一步的技術方案是:勻漿器中的蠶蛹蛋白重復離心三次后取上清液，得家蠶蛋白。
[0010]本發明以家蠶蛋白誘導形成的哮喘動物模型，有效解決了構建哮喘動物模型難的問題，與現有的雞卵清白蛋白(OVA)誘導的小鼠哮喘模型相比，本發明以家蠶蛋白誘導形成的哮喘動物模型穩定可控，能很好地反映人體內哮喘的病理狀態，可用于哮喘發病機制的研究和哮喘治療藥物的療效評價。【具體實施方式】
[0011]以下結合【具體實施方式】對發明的詳細結構作進一步描述。
[0012]1、家蠶蛋白的準備:
取新鮮家蠶蠶蛹15-20克，加液氮研磨至變為粉末，加25ml的PBS蠶蛹蛋白沖洗下來，在勻衆器中研磨l_2h,取出勻衆器中的蠶蛹蛋白，4°C離心8000rpm/15min,取上清液,重復離心三次，BCA法測蛋白濃度達標，得家蠶蛋白。
[0013]2、造模:
應用5-6周齡Babl/c小鼠，腹腔注射蠶蛹蛋白50 μ g/只加氫氧化鋁4 mg致敏，一周一次，連續腹腔注射三周。最后一次致敏后，連續激發一周(蠶蛹粗蛋白50yg/只每天滴鼻)。最后I次激發24 h后，進行氣道高反應檢測和病理學檢查。
[0014]3、模型的鑒定:
本發明構建的哮喘動物模型以出現典型哮喘樣發作、病理組織出現多種炎癥細胞浸潤(包括嗜酸細胞、淋巴細胞、中性粒細胞、巨噬細胞)為特征；其臨床典型特征有:氣道炎癥和氣道高反應性為主。
[0015]①模型組激發后的反應哮喘鼠可聞及明顯的喘鳴，在吸入蠶蛹蛋白后出現明顯抓鼻，煩躁不安，進而出現呼吸增快，腹肌抽搐，四肢癱軟，反應遲鈍，有的出現張口呼吸，并逐漸俯伏在一起，取出動物后可見遺留較多排泄物。對照組鼠未出現上述表現，偶見抓鼻，
并一直保持常態。
[0016]②模型組BALF中白細胞分類情況與對照組比較，模型組BALF中中性細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞百分比對照組明顯升高，差異均有統計學意義(P〈0.05)。
[0017]③模型組鼠肺組織病理學改變肺組織病理顯示哮喘組大鼠支氣管黏膜損傷明顯，支氣管、血管周圍嗜酸性粒細胞浸潤顯著增多；對照組支氣管上皮完整，支氣管管壁和血管周圍無嗜酸性粒細胞浸潤。
[0018]④模型組出現明顯的氣道高反應。
【權利要求】
1.一種構建哮喘動物模型的方法，其特征在于該方法使用家蠶蛋白誘導形成。
2.根據權利要求1所述的構建哮喘動物模型的方法，其特征是由家蠶蠶蛹15-20克，加液氮研磨至變為粉末，再加25ml的PBS蠶蛹蛋白沖洗下來，在勻漿器中研磨1-2h，取出勻漿器中的蠶蛹蛋白，低溫離心后取上清液，得家蠶蛋白。
3.根據權利要求1或2所述的構建哮喘動物模型的方法，其特征是家蠶蠶蛹為新鮮的家蠶蠶蛹。
4.根據權利要求1或2所述的構建哮喘動物模型的方法，其特征是勻漿器中的蠶蛹蛋白重復離心三次后取上清液，得家蠶蛋白。
5.根據權利要求3所述的構建哮喘動物模型的方法，其特征是勻漿器中的蠶蛹蛋白重復離心三次后取上清液，得家蠶蛋白。
【文檔編號】A61K38/02GK103566353SQ201310541794
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月6日 優先權日:2013年11月6日
【發明者】劉志剛, 左建宏, 李維中 申請人:劉志剛, 左建宏, 李維中