鐵筷子提取物及其中有效成分的分離方法和所得化合物的制作方法
【專利摘要】本發明公開了鐵筷子提取物及其中有效成分的分離方法和所得化合物，所述鐵筷子提取物是將鐵筷子藥材分別用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，濃縮干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃縮、干燥而得。本發明經實驗研究發現，鐵筷子藥材乙醇提取浸膏中乙酸乙酯萃取部位有較好的鎮痛和抗炎作用，可將其用于制備抗炎鎮痛的藥物；并從該乙酸乙酯萃取部位分離得到17個化合物，其中有2個新化合物，12個化合物為鐵筷子中首次分離得到，為鐵筷子藥材以及含有鐵筷子的成藥制劑建立含量測定項目奠定了基礎，有利于提升鐵筷子藥材的質量標準及質量可控性，從而為鐵筷子的進一步開發利用奠定了基礎。
【專利說明】鐵筷子提取物及其中有效成分的分離方法和所得化合物
【技術領域】
[0001]本發明涉及鐵筷子提取物及其中有效成分的分離方法和所得化合物，屬于中藥有效成分的提取分離【技術領域】。
【背景技術】
[0002]鐵篌子為臘梅科臘梅屬植物臘梅Chimonanthus praecox(L.) link.及山臘梅Chimonanthus nitens oliv.的干燥細根,為貴州省苗藥,收載于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》，又名巖馬桑，臭蠟梅，野蠟梅等，具清熱解毒、活血散癖、消腫止痛之功效，主治哮喘，勞傷咳嗽，胃痛，膀骯炎、尿道炎、瘡癤腫毒及跌打損傷等癥。記載始于《救荒本草》，謂:“多生南方，今北土亦有之。其樹枝條頗似季，其葉似桃葉而寬大，紋微粗，開淡黃花。”《綱目》始載入藥，曰:“解暑，生津。”對其描述為:“蠟梅小樹，叢枝尖葉。……臘月開小花而香淡。”可見鐵筷子用藥歷史悠久。貴州省少數民族多用于治療風濕骨痛，跌打損傷等。目前已有貴州藥企已將鐵筷子運用到骨傷類疾病和風寒感冒的治療當中，例如貴州民族藥廠生產的風寒感冒膠囊、貴陽新天藥業股份有限公司生產的生龍驅風藥酒、貴州恒霸藥業有限責任公司生產的傷科靈噴霧劑等都已在市場上銷售。
[0003]由于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》中鐵筷子僅有顯微鑒別和薄層鑒別兩項，未建立含量測定項，質量可控性較差。為了促進民族藥相關科研基礎工作及利用開發，本課題對鐵筷子化學成分進行了系統研究，通過藥理實驗篩選鐵筷子有效部位并分離其中化學成分，選取分離得到 的有效成分作為對照品，可建立含量測定方法，為含有鐵筷子的成藥制劑或正在研制的成藥制劑的質量控制提供科學依據，這對藥材質量標準的提升和進一步研究以及推廣使用有重要的意義。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于，提供一種鐵筷子提取物及其制備方法，以及該提取物中有效成分的分離方法和所得化合物。本發明通過實驗篩選出苗藥鐵筷子抗炎鎮痛活性最佳有效部位，并從該最佳有效部位分離得到17個化合物，為鐵筷子藥材以及含有鐵筷子的成藥制劑建立含量測定項目奠定了基礎，有利于提升鐵筷子藥材的質量標準及質量可控性。
[0005]本發明的技術方案:一種鐵筷子提取物，是將鐵筷子藥材分別用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，濃縮干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃縮、干燥而得。
[0006]上述鐵筷子提取物的制備方法:取鐵筷子藥材，粉碎成粗粉，用6-8倍量95%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得95%乙醇提取液，備用；藥渣再用6-8倍量50%乙醇提取2_4次，每次l_3h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，減壓濃縮，回收溶劑，干燥，然后加入適量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，減壓濃縮乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯層
浸膏，干燥即得。
[0007]優選的制備方法為:取鐵筷子藥材，粉碎成粗粉，分別用8倍量、6倍量、6倍量95%乙醇提取3次，每次2h，得95%乙醇提取液，備用；藥渣再分別用8倍量、6倍量、6倍量50%乙醇提取3次，每次2h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，減壓濃縮，回收溶劑，70°C低溫真空干燥，然后加入適量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，減壓濃縮乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯層浸膏，干燥即得。
[0008]如上所述鐵筷子提取物在制備抗炎鎮痛藥物中的應用。
[0009]如上所述鐵筷子提取物中有效成分的分離方法:將鐵筷子提取物加入甲醇溶解分散，用40~80目硅膠拌樣，采用200~300目硅膠柱層析分離樣品，用氯仿-甲醇=100:0~0:100混合溶劑梯度洗脫，洗脫組分通過薄層層析展開，在紫外檢測儀下觀察，再通過5%磷鑰酸溶液或5%濃硫酸-乙醇溶液浸潤后高溫烘烤顯色觀察，合并相似組分，根據洗脫溶劑氯仿-甲醇的極性將乙酸乙酯萃取部位共分成7個段(1-7段對應的洗脫溶劑分別為氯仿-甲醇=100:0、100:2、100:5、100:10、100:20、100:50、0:100)，第 6 段放置后析出晶體，得化合物5 (ZY-5);第3段經中壓制備色譜，以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100梯度洗脫，再經結晶和重結晶得化合物I (ZY-1)，合并此段其余組分(除化合物I之外的組分)后分為3個次組分，再通過硅膠柱層析以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100反復洗脫，得化合物2 (ZY-2)、化合物3 (ZY-3)、化合物4 (ZY-4);第4段通過300~400目硅膠柱色譜，以不同比例石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇系統反復柱層析，得化合物7 (ZY-7)、化合物 8 (ZY-8)、化合物 9 (ZY-9)、化合物 10 (ZY-10)、化合物 11 (ZY-11)、化合物12 (ZY-12)、化合物13 (ZY-13)、化合物14 (ZY-14)、化合物16 (ZY-16)、化合物17(ZY-17)、化合物 18 (ZY-18)、化合物 19 (ZY-19)。
[0010]前述分離方法中，拌樣所用40~80目硅膠為鐵筷子提取物重量的1.75倍。
[0011 ] 前述分離方法中，采用200~300目硅膠柱層析分離時，裝柱硅膠為鐵筷子提取物重量的10倍。
[0012]采用前述分離方法從鐵筷子提取物中分離得到的化合物9，其分子式為C19H3tlO6，結
構式為
【權利要求】
1.一種鐵筷子提取物，其特征在于:它是將鐵筷子藥材分別用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，濃縮干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃縮、干燥而得。
2.如權利要求1所述鐵筷子提取物的制備方法，其特征在于:取鐵筷子藥材，粉碎成粗粉，用6-8倍量95%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得95%乙醇提取液，備用；藥渣再用6_8倍量50%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，減壓濃縮，回收溶劑，干燥，然后加入適量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，減壓濃縮乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯層浸膏，干燥即得。
3.根據權利要求2所述鐵筷子提取物的制備方法，其特征在于:取鐵筷子藥材，粉碎成粗粉，分別用8倍量、6倍量、6倍量95%乙醇提取3次，每次2h，得95%乙醇提取液，備用；藥渣再分別用8倍量、6倍量、6倍量50%乙醇提取3次，每次2h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，減壓濃縮，回收溶劑，70°C低溫真空干燥，然后加入適量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，減壓濃縮乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯層浸膏，干燥即得。
4.權利要求1所述鐵筷子提取物在制備抗炎鎮痛藥物中的應用。
5.權利要求1所述鐵筷子提取物中有效成分的分離方法，其特征在于:將鐵筷子提取物加入甲醇溶解分散，用40~80目硅膠拌樣，采用200~300目硅膠柱層析分離樣品，用氯仿-甲醇=100:0~0:100混合溶劑梯度洗脫，洗脫組分通過薄層層析展開，在紫外檢測儀下觀察，再通過5%磷鑰酸溶液或5%濃硫酸-乙醇溶液浸潤后高溫烘烤顯色觀察，合并相似組分，根據洗脫溶劑氯仿-甲醇的極性將乙酸乙酯萃取部位共分成7個段，第6段放置后析出晶體，得化合物5 ;第3段經中壓制備色譜，以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100梯度洗脫，再經結晶和重結晶得化合物1，合并此段其余組分后分為3個次組分，再通過硅膠柱層析以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100反復洗脫，得化合物2、化合物3、化合物4 ;第4段通過300~400目硅膠柱色譜，以不同比例石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇系統反復柱層析，得化合物7、化合物8、化合物9、化合物10、化合物11、化合物12、化合物13、化合物14、化合物16、化合物17、化合物18、化合物19。
6.根據權利要求5所述鐵筷子提取物中有效成分的分離方法，其特征在于:拌樣所用40~80目硅膠為鐵筷子提取物重量的1.75倍。
7.根據權利要求5所述鐵筷子提取物中有效成分的分離方法，其特征在于:采用200~300目硅膠柱層析分離時，裝柱硅膠為鐵筷子提取物重量的10倍。
8.采用權利要求5所述分離方法從鐵筷子提取物中分離得到的化合物9，其分子式為C19H3tlO6，結構式為
9.采用權利要求5所述分離方法從鐵筷子提取物中分離得到的化合物16，其分子式為C17H28O5，結構式為
【文檔編號】A61K36/185GK103599145SQ201310519900
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】靳鳳云, 章譽, 潘衛東, 王祥培, 錢海兵, 高源
申請人:貴陽中醫學院