一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物及其制備方法，屬于藥物制劑領域。本發明采用脂質體技術和原位凝膠技術聯合使用，使主藥成分鹽酸拓撲替康通過主動載藥法載入脂質雙分子層膜內；殼聚糖/β-甘油磷酸鈉的溫敏凝膠作為凝膠材料，其能夠在低溫保持液態，溫度升高到體溫時轉變為固態。本發明公開了其制備方法，包括采用硫酸銨梯度法制備鹽酸拓撲替康脂質體，凍干保護劑的選擇，殼聚糖以及β-甘油磷酸鈉濃度的確定，組合物的組裝方式。本發明可以在保護活性成分提高制劑穩定性的基礎上，同時控制藥物的釋放，提高了主藥的生物利用度；采用瘤內注射的方式，減小了主藥成分的副作用，提高了患者的順應性；且易灌裝，便于工業化生產。
【專利說明】一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及瘤內注射制劑及其制備方法，具體涉及一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物及其制備方法，屬于藥物制劑領域。
【背景技術】
[0002]當前腫瘤治療的主要模式為:手術切除、放射療法和化學療法。在腫瘤治療過程中，幾乎所有的腫瘤患者都會接受外科手術盡可能的切除腫瘤組織。然而，手術切除腫瘤組織后殘留的腫瘤細胞極有可能會在術后放射治療或者全身化療的給藥過程中引起轉移。改變全身化學療法的給藥方式,采取瘤內注射的方式直接將藥物注射到腫瘤部位已經逐漸引起人們的注意。并且這也將成為抗腫瘤藥物提高生物利用度的有效途徑。這種給藥方式可以有效的提高藥物在腫瘤部位的有效濃度，降低全身藥物濃度，進一步可以降低全身化療引起的全身毒副作用。與此同時，在過去的10年中，原位凝膠已經成為科學家的研究熱點。其最受矚目優點為可以在注射部位形成任意的形狀。然而近年來臨床上備受關注的微創療法可以避免手術將藥物送達給藥部位也促進了原位凝膠的發展。
[0003]原位凝膠又稱即型凝膠，是指高分子材料以溶液或半固體狀態給藥，當暴露于機體生理狀態后，在用藥部位發生相改變，形成的半固體或液體制劑。其作用機制為，依據體內外不同的生理環境(pH、溫度、離子)發生相轉化，體外以液體形式存在，注射入體內立刻轉為凝膠。原位凝膠可以采用單一類型的原位凝膠基質，也可以采用幾種不同類型的原位凝膠基質聯合使用。與傳統腫瘤治療制劑相比，瘤內注射的原位凝膠制劑具有顯著的優點:
(1)能較長時間地與腫瘤組織緊密接觸，有較好的生物黏附性，克服了傳統制劑會很快被代謝很難達到有效藥物濃度的缺點，從而提高了生物利用度；(2)組織相容性良好，使用方便，減少了給藥頻率，提高了患者的順應性；(3)三維網狀結構高度親水，可將其中的藥物束縛于其中或其間隙中，能控制藥物釋放；(4)理化性能特殊，因其在體外條件下呈易流動的液體狀態，故易灌裝，便于工業化生產；(5)給藥劑量準確，長期給藥也不易引起全身毒性和不良反應。
[0004]殼聚糖(chitosan)是天然陽離子多糖，具有良好生物相容性、可生物降解性、來源豐富等特點，已廣泛用于藥物載體和生物醫學領域，而且殼聚糖/β -甘油磷酸鈉(β -glycerophosphate, GP)水凝膠具有溫敏性,該體系中的β -甘油磷酸鹽也是公認的無毒的生物相容性物質。殼聚糖/GP可以混合成一種良好的注射用支持系統。殼聚糖與GP的混合液在室溫與低溫狀態下為液體狀態，在人體的生理溫度狀態與人體的PH環境下，該混合液就會變成凝膠。近年許多關于殼聚糖/GP水凝膠支持系統的研究，并大大發展該水凝膠系統在給藥系統上的應用。殼聚糖是甲殼素的脫乙酰衍生物，具有良好的生物降解性和生物相容性，同時殼聚糖具有生物黏附性能，可起到控制藥物釋放的作用，具有獨特的性質，因此被廣泛地應用于藥物載體的研究中。
[0005]鹽酸拓撲替康(topotecan，TPT)是一種半合成水溶性的喜樹堿的衍生物。作為喜樹堿的衍生物，其主要作用于拓撲異構酶I，由于喜樹堿衍生物穩定了 Τορο-Ι-DNA斷裂復合物，抑制了復制的進行，從而遏制了復制叉的移動；同時當喜樹堿衍生物使Topo-1-DNA斷裂復合物的物理特性發生改變，當停止用藥后，也不能使斷裂復合物還原，形成了喜樹堿衍生物S期特異性細胞殺傷作用的機制。拓撲替康的主要毒性反應為骨髓抑制，這是一種劑量限制性的毒性反應，但其發生可以預測，且它并非血液毒性較為輕微，屬于劑量依賴性，較易控制。盡管如此，拓撲替康注射液給藥時仍存在局限性。作為喜樹堿的衍生物，保持其內酯環完整，是其發揮細胞毒性的關鍵，其在酸性條件下(PH<4)穩定存在，而在生理條件下(pH = 7.4)，拓撲替康很不穩定，極易發生水解反應，即E環從具活性的內酯環結構水解成無活性的開環結構，如圖所示。
[0006]主動載藥法是以內外水相的不同離子梯度作動力裝載藥物的一種方法。在應用此法時，與被動載藥法相同，可采用多種方法制備空白脂質體，如薄膜分散法、乙醇注入法、逆向蒸發法、復乳法等，而在加載藥物前，需用不同方法在內外水相之間建立各種離子梯度。該方法可大大提高兩親性藥物的包封率，尤其是弱酸、弱堿類藥物，而且可降低藥物的滲漏。主動載藥法一般分為PH梯度法和硫酸銨梯度法。硫酸銨梯度法原理:采用硫酸銨溶液作為水相，輔以磷脂等材料先行制備空白脂質體，此脂質體雙分子膜內存在有硫酸銨，硫酸銨分子發生解離形成銨離子(NH4+)并可進一步解離成氨分子(NH3)和氫離子(H+)。由于NH3跨膜速率和滲透率系數遠遠大于S042—，所以只要設法除去脂質體外水相中的硫酸銨，便可形成脂質體內外水相的硫酸銨濃度梯度，以此濃度梯度為驅動力，NH3分子可以離開脂質體擴散到脂質體外水相中。同時隨著NH3分子的向外擴散，脂質體的內水相中開始積累相應多量的H+，進而在脂質體內外建立起一個pH梯度。根據膜內外離子平衡原理，兩個梯度的存在促使存在外水相的有機藥物可以逆梯度進入親脂性的脂質體。當所有內水相中的硫酸銨全部除去后，內水相的PH低于5，為鹽酸拓撲替康提供了一個相對穩定的環境，保持其具有藥理活性的內酯環的 完整性。
[0007]本發明提供了一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，將TPT脂質體載入殼聚糖/GP原位凝膠中，不但可以給鹽酸拓撲替康提供一個相對的穩定環境，保護內酯環的完整性，還可以延緩藥物的釋放，具有重要的理論和實踐意義。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是為臨床提供一種實用方便、穩定可靠的治療腫瘤的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑及其制備方法，旨在克服傳統腫瘤治療所存在的不足。
[0009]本發明將鹽酸拓撲替康通過主動載藥法，利用脂質體內外水相的硫酸銨濃度梯度，將鹽酸拓撲替康載入脂質體內部,而且當所有內水相中的硫酸銨全部除去后，內水相的PH低于5，為鹽酸拓撲替康提供了一個相對穩定的環境，保持其具有藥理活性的內酯環的完整性。將鹽酸拓撲替康載入脂質體中，不但可以避免鹽酸拓撲替康在生理條件下開環，降低生物活性，由于其組成材料為磷酯雙分子層膜，類似于生物膜，易與生物融合，還可以促進藥物對生物膜的穿透性，提高其生物利用度。
[0010]本發明采用硫酸銨梯度法制備脂質體的技術和殼聚糖原位凝膠的技術聯合使用。
[0011]本發明提供的鹽酸拓撲替康脂質體瘤內注射原位凝膠制劑的組成為:鹽酸拓撲替康、制備脂質體用脂質、原位凝膠基質、滲透壓調節劑，離子梯度調節劑、注射用水。
[0012]本發明將鹽酸拓撲替康制成脂質體原位凝膠瘤內注射制劑。本發明提供的鹽酸拓撲替康脂質體原位凝膠瘤內注射制劑中脂質體的平均粒度< 200nm，包載率> 85%，其他各項指標也均符合要求。
[0013]本發明提供的鹽酸拓撲替康脂質體原位凝膠瘤內注射制劑，制備脂質體用脂質的量為15~375mg/mL，優選的量為50~100mg/mL。制備脂質體用脂質為磷脂和膽固醇。脂質體可按硫酸銨梯度法制備。
[0014] 本發明提供的鹽酸拓撲替康制成脂質體原位凝膠瘤內注射制劑，原位凝膠基質采用殼聚糖/ β -甘油磷酸鈉溫敏性原位凝膠。殼聚糖的用量為0.5~5.0mg/mL,優選1.5~
2.5mg/mL, β -甘油磷酸鈉的用量為1.0~60.0mg/mL,優選20.0~5.0mg/mL。
[0015]本發明提供的鹽酸拓撲替康脂質體原位凝膠瘤內注射制劑組合物，其制備方法主要包括以下幾個步驟:
[0016](1)稱取處方量的磷脂、膽固醇，用有機溶劑溶解，混合均勻；
[0017](2)將脂質溶液于薄膜蒸發器上，減壓除去有機溶劑，制備磷脂膜；
[0018](3)按處方加入注射用水，加入離子梯度調節劑，溶解過濾，除菌，備用；
[0019](4)將3所得溶液傾入磷脂膜，待磷脂膜完全水化后，用高壓均質機制備空白脂質體；
[0020](5)按照處方加入注射用水，加入滲透壓調節劑，溶解過濾，除菌，備用；
[0021](6)將4所得空白脂質體置于透析袋中，在5所得滲透壓調節劑中進行透析；
[0022](7)將6所得脂質體混合液，加入處方量的鹽酸拓撲替康，孵育，得到載有鹽酸拓撲替康的脂質體；
[0023](8)將7所得的脂質體，加入處方量的凍干保護劑，通過凍干，得到脂質體的凍干粉；
[0024](9)按照處方加入注射用水，加入冰醋酸，溶解過濾，除菌，備用；
[0025](10)按照處方加入9所得的醋酸溶液，加入殼聚糖，溶解，過濾，除菌，備用；
[0026](11)將8所得的脂質體凍干粉，加入到10所得的殼聚糖稀酸溶液中混勻；
[0027](12)按照處方加入注射用水，加入甘油磷酸鈉，溶解過濾，除菌，備用；
[0028](13)將12所得溶液與11所得溶液混合，微孔濾膜過濾，除菌，無菌分裝即得。
[0029]以上制備方法中所使用的有機溶劑:可選擇乙醚、氯仿、二氯甲烷中的一種或多種混合物組成。
[0030]本發明采用脂質體技術和原位凝膠技術聯合使用，使主藥成分鹽酸拓撲替康通過主動載藥法載入雙分子層脂質膜內，保護活性成分，提高了制劑的穩定性；同時控制了鹽酸拓撲替康的釋放，提高了主藥的生物利用度；采用瘤內注射的方式，減小了主藥成分的副作用，提高了患者的順應性；且易灌裝，便于工業化生產。
【具體實施方式】
[0031]以下典型實施例用來舉例說明本發明，在本領域內的技術人員對本發明所做的簡單替換或改進等均屬于本發明所保護的技術方案之內。
[0032]具體實施例1
[0033]稱取大豆卵磷脂0.8g、膽固醇0.08g，加二氯甲烷IOmL溶解。35°C旋蒸抽除二氯甲烷，真空干燥2h，除去殘余的有機溶劑。加入20mL0.3mol/L的硫酸銨溶液，35°C水合30min。高壓均質處理，過0.22 μ m微孔濾膜整粒。加80mg鹽酸拓撲替康粉末，攪拌溶解，65°C孵育20min,過0.22 μ m微孔濾膜既得脂質體成品。選擇5 %乳糖及5 %蔗糖為凍干保護劑，對脂質體進行凍干。脂質體包封率為86.9%。
[0034]殼聚糖(0.05g)加入醋酸溶液(0.1M)，攪拌均勻，加入制得的鹽酸拓撲替康脂質體凍干粉3mg，攪拌均勻，置于冰水浴繼續攪拌15min，將β -甘油磷酸鈉(48 %，0.8mL) 4°C冰箱冷卻15min,然后在攪拌下逐滴加入到殼聚糖溶液中，繼續攪拌15min,即得鹽酸拓撲替康瘤內注釋組合物制劑。
[0035]具體實施例2
[0036]稱取大豆卵磷脂0.8g、膽固醇0.18g，加二氯甲烷IOmL溶解。35°C旋蒸抽除二氯甲烷，真空干燥2h，除去殘余的有機溶劑。加入20mL0.3mol/L的硫酸銨溶液，35°C水合30min。高壓勻漿處理，過0.22 μ m微孔濾膜整粒。加80mg鹽酸拓撲替康粉末，攪拌溶解，65°C孵育20min,過0.22 μ m微孔濾膜既得脂質體成品。選擇5 %乳糖及5 %蔗糖為凍干保護劑，對脂質體進行凍干。脂質體包封率為90.6%。
[0037]殼聚糖(0.05g)加入醋酸溶液(0.1M)，攪拌均勻，加入制得的鹽酸拓撲替康脂質體凍干粉3mg，攪拌均勻，置于冰水浴繼續攪拌15min，將β -甘油磷酸鈉(48 %，0.8mL) 4°C冰箱冷卻15min,然后在攪拌下逐滴加入到殼聚糖溶液中，繼續攪拌15min,即得鹽酸拓撲替康瘤內注釋組合物制劑。
[0038]具體實施例3
[0039]稱取大豆卵磷脂0.9g、膽固醇0.225g，加二氯甲烷IOmL溶解。35°C旋蒸抽除二氯甲烷，真空干燥2h，除去殘余的有機溶劑。加入20mL0.25mol/L的硫酸銨溶液，35°C水合30min。高壓均質處理,過0`.22 μ m微孔濾膜整粒。加80mg鹽酸拓撲替康粉末,攪拌溶解，65°C孵育20min，過0.22 μ m微孔濾膜既得脂質體成品。選擇5%乳糖及5%蔗糖為凍干保護劑，對脂質體進行凍干。脂質體包封率為93.6%。
[0040]殼聚糖(0.05g)加入醋酸溶液(0.1M)，攪拌均勻，加入制得的鹽酸拓撲替康脂質體凍干粉3mg，攪拌均勻，置于冰水浴繼續攪拌15min，將β -甘油磷酸鈉(48 %，0.8mL) 4°C冰箱冷卻15min，然后在攪拌下逐滴加入殼聚糖，繼續攪拌15min，即得鹽酸拓撲替康瘤內注釋組合物制劑。
[0041]具體實施例4
[0042]稱取大豆卵磷脂0.9g、膽固醇0.225g，加二氯甲烷IOmL溶解。35°C旋蒸抽除二氯甲烷，真空干燥2h，除去殘余的有機溶劑。加入20mL0.35mol/L的硫酸銨溶液，35°C水合30min。高壓均質處理,過0.22 μ m微孔濾膜整粒。加80mg鹽酸拓撲替康粉末,攪拌溶解，65°C孵育20min，過0.22 μ m微孔濾膜既得脂質體成品。選擇5%葡萄糖及5%蔗糖為凍干保護劑，對脂質體進行凍干。脂質體包封率為88.6%。
[0043]殼聚糖(0.05g)加入醋酸溶液(0.1M)，攪拌均勻，加入制得的鹽酸拓撲替康脂質體凍干粉3mg，攪拌均勻，置于冰水浴繼續攪拌15min，將β -甘油磷酸鈉(48 %，0.8mL) 4°C冰箱冷卻15min,然后在攪拌下逐滴加入到殼聚糖溶液中，繼續攪拌15min,即得鹽酸拓撲替康瘤內注釋組合物制劑。
【權利要求】
1.一種新型鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其特征在于該組合物含有鹽酸拓撲替康、制備脂質體用脂質和原位凝膠基質。
2.根據權利要求1所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其特征在于該組合物還含有滲透壓調節劑、離子梯度調節劑及注射用水。
3.根據權利要求1~2所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其特征在于所述的磷脂和膽固醇的摩爾比為1:1~10: 1，優選1.5: 1.0~4.0: 1.0。
4.根據權利要求1所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物,其特征在于所述的原位凝膠基質采用溫敏性的殼聚糖凝膠，優選殼聚糖的冰醋酸水溶液與β -甘油磷酸鈉的混合物。
5.根據權利要求1和4所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其特征在于殼聚糖的用量為0.5~5.0mg/mL,優選1.0~2.5mg/mL。
6.根據權利要求1和4所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其特征在于β-甘油磷酸鈉的用量為1.0~60.0mg/mL，優選20.0~50.0mg/mL。
7.根據權利要求1~6所述的鹽酸拓撲替康瘤內注射制劑組合物，其制備方法具體包括以下幾個步驟: (1)稱取處方量的磷脂、膽固醇，用有機溶劑溶解，混合均勻； (2)將脂質溶液于薄膜蒸發器上，減壓除去有機溶劑，制備磷脂膜； (3)按處方加入注射用水，加入離子梯度調節劑，溶解過濾，除菌，備用； (4)將3所得溶液傾入磷脂膜，待磷脂膜完全水化后，用高壓均質機制備空白脂質體； (5)按照處方加入注射用水，加入滲透壓調節劑，溶解過濾，除菌，備用； (6)將4所得空白脂質體置于透析袋中，在5所得滲透壓調節劑中進行透析； (7)將6所得脂質體混合液，加入處方量的鹽酸拓撲替康，孵育，得到載有鹽酸拓撲替康的脂質體； (8)將7所得的脂質體，加入處方量的凍干保護劑，通過凍干，得到脂質體的凍干粉； (9)按照處方加入注射用水，加入冰醋酸，溶解過濾，除菌，備用； (10)按照處方加入9所得的冰醋酸溶液，加入殼聚糖，溶解，過濾，除菌，備用； (11)將8所得的脂質體凍干粉，加入到10所得的殼聚糖稀酸溶液中混勻； (12)按照處方加入注射用水，加入甘油磷酸鈉，溶解過濾，除菌，備用； (13)將12所得溶液與11所得溶液混合，微孔濾膜過濾，除菌，無菌分裝即得。
8.根據權利要求7所述的有機溶劑，可選擇乙醚、氯仿、二氯甲烷中的一種或多種混合物組成。
9.根據權力要求7所述的滲透壓調節劑可以選用氯化鈉、葡萄糖以及磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的混合物的一種。
【文檔編號】A61P35/00GK103479568SQ201310495867
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年10月22日 優先權日:2013年10月22日
【發明者】吳正紅, 邢嘉玉, 祁小樂, 主雪華, 張子崴 申請人:中國藥科大學