有效用于胃腸功能紊亂、炎癥、癌癥和其他疾病治療的鳥苷酸環化酶激動劑的制作方法

有效用于胃腸功能紊亂、炎癥、癌癥和其他疾病治療的鳥苷酸環化酶激動劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種新型的鳥苷酸環化酶-C激動劑多肽及其在治療人類疾病中的應用，所述人類疾病包括胃腸功能紊亂、炎癥或者癌癥(例如，胃腸道癌癥)。所述多肽可以單獨被給藥，或者與cGMP依賴型磷酸二酯酶抑制劑結合給藥。胃腸功能紊亂可分類為過敏性腸綜合癥、便秘、或酸度過量等。胃腸道疾病可被分類為發炎癥性腸道疾病或其他胃腸道狀況，包括克羅恩病和潰瘍性結腸炎和癌癥。
【專利說明】有效用于胃腸功能紊亂、炎癥、癌癥和其他疾病治療的鳥苷酸環化酶激動劑
[0001]本申請是2008年6月4日遞交的申請號為200880101768.0，發明名稱為“有效用于胃腸功能紊亂、炎癥、癌癥和其他疾病治療的鳥苷酸環化酶激動劑”的分案申請。
[0002]相關申請
[0003]本申請要求2007年6月4日遞交的美國臨時申請第60 / 933，194號的優先權，該申請的內容通過引證全部并入本文。
發明領域
[0004]本發明涉及鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑的治療劑應用，所述應用可以作為一種提高細胞內cGMP產量的方法。所述激動劑可以單獨使用或者與cGMP特異性磷酸二酯酶抑制劑結合使用，從而防止或治療炎癥，癌癥和其他疾病，特別是胃腸道和肺部的炎癥，癌癥和其他疾病。
【背景技術】
[0005]尿鳥苷素，鳥苷肽和細菌ST多肽是結構相關性多肽，這些多肽能夠結合鳥苷酸環化酶受體并且刺激細胞內生產環鳥苷單磷酸(cGMP)的(1-6)。從而造成囊性纖維化跨膜轉運調節因子(CFTR)的活化，所述囊性纖維化跨膜轉運調節因子(CFTR)是一種頂端膜途徑，允許氯從腸道細胞沿著腸道(1-6)流出。囊性纖維化跨膜轉運調節因子(CFTR)的活化以及隨后的氯經上皮分泌作用的提高會導致鈉離子及水向腸道內腔分泌的刺激作用。因此，作為囊性纖維化跨膜轉運調節因子(CFTR)活性的旁分泌調節，環鳥苷單磷酸(cGMP)受體激動劑調節流體和電解液在胃腸(GI)道(1-6)的轉移(美國專利第5，489，670號)。因此，環鳥苷單磷酸(cGMP)調節的囊性纖維化跨膜轉運調節因子(CFTR)活化作用以及下游信號傳導在使腸道生理機能正常`化方面起到了十分重要的作用。因此，在這一過程中出現的任何異常現象都回潛在的導致胃腸功能紊亂，例如過敏性腸綜合癥、炎癥性腸道疾病、酸度過度和癌癥(25，26)。
[0006]上皮細胞的再生過程包括胃腸道細胞在所述內腔中的增殖、遷移、分化、衰老和最后的損失(7，8)。根據上皮細胞增殖指數，所述胃腸道(GI)粘膜可以被分成三個不同的區域。這三個區域中的一個叫做增殖區，增殖區由未分化的干細胞組成，負責提供穩定的新細胞。所述干細胞驗證內腔向上遷徙，直到能將他們排出的位置。隨著這種遷徙作用，所述細胞失去其分裂能力，成為分化細胞，能夠在胃腸道(GI)粘膜內執行某些特定的功能(9)。胃腸道(GI)粘膜的更新是非常快的，可以再24-48小時時間內就完成完全的更新(9)。在這一過程中，突變細胞和不在需要的細胞被新細胞所替代。因此，通過不斷的保持增殖和凋亡之間的平衡可以調節胃腸道(GI)粘膜的體內平衡(8)。
[0007]在腸道上皮上細胞增殖作用和凋亡作用的比率可以在各種各樣的不同的環境下進行增加或者減少，例如，作為對生理學刺激的響應，所述生理學刺激例如，老化作用、炎癥性信號傳導、激素刺激、肽、生長因子、化學物質和飲食習慣。另外，增加的增殖作用比率通常與更新時間的減少和增殖區(10)的擴張有關。在潰瘍性結腸炎及其他胃腸道(GI)功能性紊亂(11)等病理學情況下所觀察得到的增殖作用指數都是非常高的。因此，腸增生作用是胃腸道炎癥和致癌作用的主要助催化劑。
[0008]尿鳥苷素和鳥苷肽除了可以用作腸道液體和離子分泌調節劑之外，這些多肽還可以被用于胃腸道(GI)粘膜的持續更新中，該應用通過維持細胞沿著胃腸道(GI)粘膜的增殖作用和凋亡作用的平衡來完成。因此，在這種更新過程中，由降低尿鳥苷素和/或鳥苷肽產生造成的任意失常情況都可以導致胃腸道(GI)發炎和癌癥(25，26)。這種現象與之前公布的國際申請第WOOl / 25266中公開的數據一致，國際申請第WOOl / 25266教導了，具有尿鳥苷素活性區域的多肽可以在結腸中起到息肉發生抑制劑的作用，并且所述多肽可以作為結腸癌治療的一部分。但是，目前的數據也建議尿鳥苷素還可以與一種當前位置的受體相結合，這種受體與鳥苷酸環化酶(GC-C)受體所不同(3，4)。缺乏這種鳥苷酸環化酶受體的基因敲除鼠在腸道中顯示出對ST肽的抵抗力，尿鳥苷素和ST肽在體內腎臟中的作用并沒有被破壞(3)。這些結果進一步支持了一個事實，這個事實是通過鳥苷肽誘導的薄膜去極化作用可以通過5，7，4-三羥基異黃酮、一種酪氨酸激酶抑制劑來阻斷，相反，通過尿鳥甘素誘導的過超極化并沒有起到作用(12，13)。因此，本領域普通技術人員并不清楚所述尿鳥苷素及其類似物的抗結腸癌活性和抗炎癥性活性是否能夠通過與這些受體中的一個或兩個相結合來調節。
[0009]炎癥性腸道疾病是一組紊亂的統稱，這種紊亂是由腸道引起的，后來發展成炎癥，具有組織發紅和發腫等特征。胃腸道(GI)發炎可以是一種慢性病癥并且經常導致胃腸道(GD癌癥(14)。這種炎癥性腸道疾病(IBD)包括克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎(UC)。據估計，大約1，000, 000美國人都患有炎癥性腸道疾病(IBD)，其中男性病人和女性病人好像具有相同的感染率。大多數病例可以在30歲之前被診斷出來，同時，更多的疾病發現在六十、七十或者更大的年齡階段。
[0010]克羅恩氏病是一種嚴重的炎癥性疾病，這種疾病主要作用在回腸和結腸中，同時還可以發生在胃腸道的其他部分`，相反，潰瘍性結腸炎(UC)是一種專有的炎癥性疾病，專門發生在結腸、大部分腸道(15)上。克羅恩氏病可以涉及腸道的所有層面，并且在幾片患病的腸道部分之間可以存在正常健康的腸，與克羅恩氏病有所不同的是，潰瘍性結腸炎(UC)只以一種連續的方式作用在結腸最里面的部分(粘膜)(16)。根據胃腸道患病的部分不同克羅恩氏病可以被認為是回腸炎、局限性回腸炎、結腸炎等等。克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎(UC)與結腸痙攣綜合癥或者過敏性腸綜合癥不同，結腸痙攣綜合癥或者過敏性腸綜合癥是一種可移動的胃腸道紊亂。
[0011]盡管炎癥性腸道疾病(IBD)的精確原因仍然是位置的，但是本領域普通技術人員相信胃腸道(GI)粘膜的持續更新過程出現的失常情況可以被包括在疾病中(17，18)。胃腸道(GI)線路的更新過程是一種有效的并且有活力的過程，該過程包括對不需要的破壞細胞持續不帶的增殖和補充。細胞沿著胃腸道(GI)粘膜的增殖比率是非常高的，僅次于造血系統的增殖比率。因此，增殖和凋亡過程的平衡在保持胃腸道(GI)粘膜體內平衡方面是重要的(19，20)。
[0012]胃腸道(GI)體內平衡取決于腸道粘膜上皮細胞的增殖作用和程序性細胞死亡(細胞凋亡)作用。因此，細胞不斷的從絨毛部分損失進入腸道內腔，并通過在小囊處以基本上相等的速率發生細胞增殖作用，隨后向上移動到絨毛處進行補充。日益明顯的是，細胞死亡的控制作用是一種同等重要的或者是更加重要的細胞數目和增殖指數調節劑(19，20)。降低的細胞凋亡速率通過與異常生長、發炎、和贅生轉化有關。因此，減少的增殖作用和/或增加的細胞死亡都可能會減少細胞數目，相反，增加的增殖作用和/或減少的細胞死亡作用會增加腸道組織的增殖指數(20)，這會導致胃腸道(GI)的炎癥性疾病和癌癥。
[0013]通過對照細胞離子流動可以看出，尿鳥苷素和鳥苷肽似乎也可以促進細胞凋亡。在細胞凋亡過程中出現的改變與腫瘤的發展的轉移性表型有關。盡管最初的胃腸道(GI)癌癥局限于小腸、結腸和直腸，但是這些癌癥可以轉移并波及其他區域，例如骨骼、淋巴結、肝臟、肺、腹膜、卵巢和腦部。通過增強K+的流出和Ca++的流入，尿鳥苷素和相關的肽可以促進轉化細胞的死亡，并因此抑制轉移。
[0014]過敏性腸綜合癥(IBS)和慢性先天性便秘是一種病理學病況，這種病況能夠產生許多腸部不適和痛苦，但是與炎癥性腸道疾病(IBD)，例如潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病不同的是，過敏性腸綜合癥(IBS)不會造成嚴重的發炎或者改變腸道組織，并且，通常不認為過敏性腸綜合癥(IBS)能夠增加結腸直腸癌的患病風險。過去，炎癥性腸道疾病(IBD)、乳糜瀉和過敏性腸綜合癥(IBS)被認為是完全無關的疾病。現在，根據發炎的描述，雖然對于過敏性腸綜合癥(IBS)是初步的，但是在過敏性腸綜合癥(IBS)和乳糜瀉的癥狀之間有相同的部分，這一論點以及納入考慮范圍內。急性細菌性胃腸病是目前識別的在感染過敏性腸綜合癥之后的病況發展過程中具有最強的患病風險系數的疾病。臨床上的風險系數包括延長的急性疾病和催吐藥的缺失。對炎癥性刺激的最初確定的敏感程度也可以是過敏性腸綜合癥的風險因素。基礎病理生理學顯示增加的腸部穿透性和低程度的發炎，以及改變的流動性和內臟靈敏度(27)。血清緊張素(5-羥基色胺[5-HT])是腸道功能的一種重要的調節因子，已知在過敏性腸綜合癥(IBS)的病理生理學中起到非常重要的作用。已經表明，5-羥基色氨(5-HT)的活性可以通過環鳥苷單磷酸(cGMP)來調節(28)。因此，根據觀察結果以及環鳥苷單磷酸(cGMP)其他的作用，我們相信鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑可以有效用于治療過敏性腸綜合癥(IBS)。
`[0015]考慮到炎癥性病況在西方社會的發病率以及伴隨的從發炎的組織，特別是腸道組織發展成癌癥性病變的風險，這里存在改善炎癥性疾病，特別是胃腸道的炎癥性疾病治療方法的需要。

【發明內容】

[0016]本發明基于鳥苷酸環化酶受體激動劑的發展。所述激動劑是尿鳥苷素和細菌性ST多肽的類似物，具有某些高級性質，例如在N末端和C末端對羧肽酶和/或其他的蛋白水解酶降解作用的高抵抗力，所述其他的蛋白水解酶存在于刺激后的人類腸液和人類胃液中。
[0017]本發明的多肽可以用于治療任何響應增強的環鳥苷單磷酸(cGMP)胞內水平的病況。通過增強細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)產量和/或通過抑制環鳥苷單磷酸(cGMP)-特異性磷酸二酯酶的降解作用，可以增加環鳥苷單磷酸(cGMP)的細胞內水平。可以被治療或者預防的具體的病況是胃腸功能紊亂、炎癥性紊亂、肺紊亂、癌癥、心臟功能紊亂、眼部功能紊舌L、口腔紊亂、血液紊亂、肝臟功能紊亂、皮膚疾病、前列腺功能紊亂、內分泌紊亂、增加的胃腸道活動性和肥胖癥。胃腸道紊亂包括，例如，過敏性腸綜合癥(IBS)、非潰瘍性消化不良、慢性腸假性梗阻、機能性消化不良、結腸假性梗阻、十二指腸反流、胃食管反流疾病(GERD)、腸梗阻發炎(例如，手術后腸梗阻)、胃輕癱、胃灼熱(在胃腸道中出現高酸性)、便秘(例如，與使用藥物有關的便秘，所述藥物例如鴉片樣物質、骨關節炎藥、骨質疏松癥藥；手術后便秘；與神經性紊亂有關的便秘)。炎癥性紊亂包括組織發炎和器官發炎，例如腎發炎(例如，腎炎)、胃腸系統發炎(例如，克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎)；胰腺發炎(例如，胰腺炎)、肺部發炎(例如，支氣管炎或者哮喘)或者皮膚發炎(例如，銀屑病、濕疹)。肺部紊亂包括，例如，慢性阻塞性肺病(COPD)和纖維癥。癌癥包括組織致癌作用和器官致癌作用，包括轉移性腫瘤，例如胃腸癌癥(例如，胃癌、食道癌、胰腺癌、結腸直腸癌、腸癌、肛門癌、肝癌、膽囊癌、或者結腸癌；肺癌；甲狀腺癌；皮膚癌(例如，黑素瘤)；口腔癌；泌尿道癌癥(例如膀胱癌或者腎癌)；血液癌(例如髓細胞癌或者白血病)或者前列腺癌。心臟紊亂包括例如，充血性心力衰竭、氣管賁門高血壓、高膽固醇或者高甘油三酯。肝臟紊亂包括，例如，肝硬化和纖維癥。另外，鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑還可以被用于促進肝臟移植病人體內肝臟再生。眼部紊亂包括，例如，增加的眼內壓、青光眼、干眼癥、視網膜變性、淚腺功能紊亂或者眼部發炎。皮膚紊亂包括，例如，干燥病。口腔紊亂包括，例如，口干燥(口腔干燥)、休格林氏癥(Sjogren’s syndrome)、牙銀疾病(例如,牙周病)、或者唾液腺管堵塞或者機能失調。前列腺紊亂包括，例如，良性前列腺肥大(BPH)。內分泌紊亂包括，例如，糖尿病、甲狀腺機能亢進癥、甲狀腺機能減退癥和囊腫性纖維化。
[0018]在一個方面，本發明涉及一種肽，該肽基本上由如下氨基酸序列:SEQ ID NOs:
2-54和SEQ ID N0s57_98組成，本發明還涉及一種治療劑組合物，該治療劑組合物包括這些肽。優選的肽包括SEQ ID NO:8、9、10、58和59。術語“基本上由。。。組成”是指所述肽與序列識別號所代表的序列以及其他在結構和功能上與序列識別好所代表的序列沒有本質區別的序列一致。為了實現本申請的目的，如果與SEQ ID NOs:2-54和57-98肽的結構相比一種肽結構的變化超過三個氨基酸，或者與參照多肽，例如SEQ ID N0:l、55或者56相t匕，一種肽對細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)產量的活化作用減少超過50%，就認為這種肽是基本上不同的肽。優選的，基本`上相似的肽之間的區別不超過2個氨基酸并且其活化環鳥苷單磷酸(cGMP)產量的作用相差不超過大約25%。本發明肽序列包含至少12個氨基酸殘基，優選長度在12到26個氨基酸之間。
[0019]所述多肽可以以單位劑量形式，與一種或一種以上藥學上可接受的載體、賦形劑或者稀釋劑一起存在于一種藥物組合物中。術語“單位劑量形式”涉及一種單一的藥物傳遞實體，例如，一種片劑、膠囊劑、溶液或者吸入劑。在對患者給藥時呈遞的多肽的量應該足夠實現陽性的治療效果(一般地，在100微克到3克之間)。“陽性的治療效果”由什么組成主要取決于接受治療的具體狀況，并且包括任意本領域技術人員能夠識別的重要改善。例如，可以由減少的炎癥、息肉或者腫瘤的縮小、轉移性病變的減少等等組成。
[0020]在依舊另一個方面，本發明對所述病人給藥一種治療有效量的環鳥苷單磷酸-特異性磷酸二酯酶(cGMP-PDE)抑制劑和所述鳥苷酸環化酶受體激動劑，環鳥苷單磷酸-特異性磷酸二酯酶(cGMP-PDE)抑制劑和所述鳥苷酸環化酶受體激動劑可以同時給藥或者順序給藥。所述環鳥苷單磷酸-特異性磷酸二酯酶(cGMP-PDE)抑制劑包括，例如，舒林砜(sulindae sulfone)、敏喘寧和莫他匹酮(motapizone)、vardenifil (伐地那非)、和西地那非(Sildenafil)。另外，鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑肽可以與環狀核苷酸載體抑制劑結合使用。
[0021]選擇性地，也可以給藥消炎劑。消炎劑包括，例如，類固醇和非類固醇類消炎藥(NSAIDS)。
[0022]通過下面的詳細說明和權利要求書，本發明的其他特點和優點變得顯而易見，本發明的其他特點和優點也包括在下面的詳細說明和權利要求書中。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1A是一種條形圖，顯示了 SP-304與人工胃液(SGF) —起培養指定的時間之后的生物活性。所述SP-304的生物活性可以通過測定其在T84細胞中刺激環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的能力來確定。在培養之后，使用樣品測定其在T84細胞中刺激環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的能力。在與人工胃液(SGF) —起培養的第O分鐘，所述環鳥苷單磷酸(cGMP)在樣品中的刺激活性認為是100%。樣品在與人工胃液(SGF) —起培養的其他時間的活性以作為O分鐘的樣品活性的百分比來計算。所述數據是三個數值平均數土標準差。
[0024]圖1B是一種示意圖，顯示了 SP-304樣品與人工胃液(SGF) —起培養指定時間之后的高效液相色譜分析。在與人工胃液(SGF)培養過程中，SP-304的主尖峰沒有變化，這一結果顯示了這種肽能夠抵抗人工胃液(SGF)的消化作用。箭頭表明了 SP-304的洗提位置。
[0025]圖2A是一種條形圖，顯示了在T84細胞中將SP304樣品與人工腸液(SIF) —起培養指定時間之后環式鳥漂呤磷酸合成。在培養之后，使用樣品測定其在T84細胞中刺激環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的能力。在與人工腸液(SIF) —起培養的第O分鐘，所述環鳥苷單磷酸(cGMP)在樣品中的刺激活性認為是100%。樣品在與人工腸液(SIF) —起培養的其他時間的活性以作為O分鐘的樣品活`性的百分比來計算。所述數據是三個數值平均數土標準差。
[0026]圖2B是一種示意圖，顯示了 SP-304樣品與(A)加熱失活的人工腸液(SIF) —起培養300分鐘之后或者(B)與人工腸液(SIF) —起培養120分鐘之后的高效液相色譜分析。在與人工腸液(SIF)培養過程中，SP-304完全轉變為另一種肽，在9.4分鐘時洗提出來，如*的顯示。箭頭表明了 SP-304的位置。
[0027]圖3是一種示意圖，表示了 SP-304可能的降解產物。
[0028]圖4顯示了通過SP-304截斷肽在T84細胞內合成環鳥苷單磷酸(cGMP)的刺激作用。因此，SP-338與SP-304具有基本上一樣的肽序列，區別僅在于SP-338缺失C末端的亮氨酸(Leu)。相似的SP-327、SP-329和SP-331相對于其相應的母體SP_326、SP_328和SP-330相比具有C-末端亮氨酸(Leu)的缺失。評價這些多肽在T84細胞中刺激環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的能力。取得重復試驗結果的平均數作為實驗結果。
[0029]圖5顯示了通過SP-304和相似的肽在T84細胞中對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用。將細胞暴露于肽類似物30分鐘，使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。所述數據被表示為三個數值平均數土標準差。
[0030]圖6顯示了通過SP-339和其他的肽在T84細胞中對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用。將T84細胞暴露于指定的肽中30分鐘，使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。所述數據被表示為三個數值平均數土標準差。V[0031]圖7A顯示了 SP-333在指定時間內抵抗人工腸液(SIF)消化作用的穩定性。通過將多肽與加熱鈍化的人工腸液(SIF) —起培養產生對照樣品，將對照樣品標記為C120。將樣品從培養物中移出并在95°C條件下加熱5分鐘，鈍化消化酶，然后用于刺激T84細胞中的環鳥苷單磷酸的合成。每個組中，將在O分鐘時環鳥苷單磷酸(cGMP)刺激活性看做是100%。所得結果數據時三個值的平均數土標準差。
[0032]圖7B顯示了 SP-332在指定時間內抵抗人工腸液(SIF)消化作用的穩定性。通過將多肽與加熱鈍化的人工腸液(SIF) —起培養產生對照樣品，將對照樣品標記為C120。將樣品從培養物中移出并在95°C條件下加熱5分鐘，鈍化消化酶，然后用于刺激T84細胞中的環鳥苷單磷酸的合成。每個組中，將在O分鐘時環鳥苷單磷酸(cGMP)刺激活性看做是100%。所得結果數據時三個值的平均數土標準差。
[0033]圖7C顯示了 SP-304在指定時間內抵抗人工腸液(SIF)消化作用的穩定性。通過將多肽與加熱鈍化的人工腸液(SIF) —起培養產生對照樣品，將對照樣品標記為CO和C60。將樣品從消化液中移出并在95°C條件下加熱5分鐘，鈍化消化酶，然后用于刺激T84細胞中的環鳥苷單磷酸的合成。每個組中，將在O分鐘時環鳥苷單磷酸(cGMP)刺激活性看做是100%。所得結果數據時三個值的平均數土標準差。
[0034]圖7D顯示了 SP-304樣品在與人工腸液(SIF) —起培養O到60分鐘之后的高效液相色譜分析。箭頭顯示了 SP-304肽的洗提位置。這些數據清楚的顯示了 SP-304峰值在洗提14.3分鐘之后完全不見，并且在7.4分鐘和10.3分鐘出現兩個新的峰值。這些新出現的肽峰代表了 SP-304可能的降解產物。
[0035]圖7E顯示了 SP-332樣品在與人工腸液(SIF) —起培養O到120分鐘之后的高效液相色譜分析。箭頭顯示了 SP-332肽的洗提位置。這些數據顯示，在與人工腸液(SIF) —起培養之后，肽SP-332在洗提14.8分鐘之后沒有發生變化，顯示了 SP-332對人工腸液中存在的蛋白酶的水解作用不敏感`。
[0036]圖7F顯示了 SP-333樣品在與人工腸液(SIF) —起培養O到120分鐘之后的高效液相色譜分析。箭頭顯示了 SP-333肽的洗提位置。這些數據顯示，在與人工腸液(SIF) —起培養之后，肽SP-333在洗提14.8分鐘之后沒有發生變化，顯示了 SP-333在120分鐘的培養時間內對人工腸液中存在的蛋白酶的水解作用不敏感。
[0037]圖8顯示了 T84細胞中SP-333聚乙二醇化類似物對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用。將T84細胞暴露于指定的多肽中30分鐘，并使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。結果表示為三個數據的平均數土標準差。
[0038]圖9顯示了 T84細胞中SP-304單獨使用或者與磷酸二酯酶(I3DE)抑制劑舒林砜(Sulindae Sulfone) (100微摩)或者敏喘寧(100微摩)結合使用對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用。將T84細胞暴露于指定的多種處理方法中30分鐘，并使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。結果表示為兩個數據的平均數。
[0039]圖10顯示了 T84細胞中SP_304(0.1微摩或者1.0微摩)單獨使用或者與增加濃度的磷酸二酯酶O3DE)抑制劑結合使用對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用，如圖所示。將T84細胞暴露于指定的多種處理方法中30分鐘，并使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。結果表示為兩個數據的平均數。
[0040]圖11顯示了 T84細胞中SP_333(0.1微摩或者1.0微摩)單獨使用或者與增加濃度的敏喘寧結合使用對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用，如圖所示。將T84細胞暴露于指定的多種處理方法中30分鐘，并使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。結果表示為兩個數據的平均數。
[0041]圖12顯示了 T84細胞中SP_333(0.1微摩)單獨使用或者與增加濃度的舒林砜(Sulindae Sulfone)結合使用對環鳥苷單磷酸(cGMP)合成的刺激作用，如圖所示。將T84細胞暴露于指定的多種處理方法中30分鐘，并使用細胞溶解產物確定細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。結果表示為兩個數據的平均數。
[0042]圖13顯示了環鳥苷單磷酸(cGMP)水平細胞內濃度示意圖。通過鳥苷酸環化酶(GC-C)活化作用刺激環鳥苷單磷酸(cGMP)合成或者通過抑制環鳥苷單磷酸(cGMP)-磷酸二酯酶O3DE)對環鳥苷單磷酸(cGMP)降解作用可疑斥為細胞內環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。因此，將鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑與磷酸二酯酶(I3DE)抑制劑的結合可以產生一種協同效應，從而增強組織和器官中的環鳥苷單磷酸(cGMP)水平。
【具體實施方式】
[0043]本發明是以鳥苷酸環化酶(GC-C)激動劑的發展為基礎的。所述激動劑是尿鳥苷素和細菌性的ST肽的類似物，這些激動劑具有一些高級性質，例如，在N末端和C末端對羧肽酶和/或其他的蛋白水解酶降解作用的高抵抗力，所述其他的蛋白水解酶存在于刺激后的人類腸液和人類胃液中。
[0044]所述鳥苷酸環化酶(GC-C)可以在不同的細胞中表達，包括在胃腸道上皮細胞上的表達，和在腸道外組織上的表達，所述腸道外組織包括腎臟、肺、胰臟、腦垂體、腎上腺、生長中的肝臟、心臟以及男性和女性的生殖組織(參見文獻Vaandrager2002MOICellBiochem230:73-83)。所述鳥苷酸環化酶(GC-C)是腸道和腎臟中液體和電解質平衡的關鍵的調節因子。在腸道中，當收到刺激時，鳥苷酸環化酶(GC-C)會導致腸道上皮環鳥苷單磷酸(cGMP)的增加。所述環鳥苷單`磷酸(cGMP)的增加會導致水吸收和那吸收的下降，以及氯離子和鉀離子分泌的增加，從而導致腸道液體好電解液運輸方面的變化和腸道活動性的增加。
[0045]根據本發明的鳥苷酸環化酶-C激動劑包括SEQ ID N0:2_54和SEQ ID NO:57-98，所述激動劑概括在下面的表1和表1I中。本發明所述的鳥苷酸環化酶-C激動劑在這里統一表不為“GCRA多肽”。
[0046]
【權利要求】
1.一種肽，該肽由氨基酸序列:SEQ ID NO:8組成，其中所述肽是一種[4,12 ;7，15]雙環肽。
2.—種單位劑量的藥物組合物，包括一種鳥苷酸環化酶受體激動劑肽，這種鳥苷酸環化酶受體激動劑肽由氨基酸序列:SEQ ID NO:8組成，并以治療有效量存在于一種藥物載體、賦形劑或稀釋劑中，其中所述肽是一種[4，12 ;7，15]雙環肽。
3.根據權利要求1所述的肽，其中，所述肽能夠增加細胞中環鳥苷單磷酸(cGMP)的產生。
4.根據權利要求2所述的藥物組合物，其中所述肽能夠增加細胞中環鳥苷單磷酸(cGMP)的產生。
5.根據權利要求2或者4所述的藥物組合物，其中單位劑量形式選自由片劑、膠囊劑、溶液以及吸入劑所組成的組中。
6.一種鳥苷酸環化酶受體激動劑在制備用于在需要的病人中預防或者治療一種病況的藥物中的應用，其中，所述病況選自由潰瘍性結腸炎、過敏性腸綜合癥(IBS)、非潰瘍性消化不良、慢性腸假性梗阻、機能性消化不良、結腸假梗阻、十二指腸反流、與麻醉止痛藥使用有關的便秘、胃食管反流疾病(GERD)、手術后便秘、胃輕癱、與神經性疾病有關的便秘、胃灼熱、缺少腸胃活動性、充血性心力衰竭、高血壓、良性前列腺肥大(BPH)、結腸癌、肺癌、膀胱癌、肝癌、唾液腺癌或者皮膚癌、支氣管炎、組織發炎、器官發炎、呼吸道發炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)所組成的組中，所述鳥苷酸環化酶受體激動劑由氨基酸序列:SEQ ID NO:8組成，其中所述肽是一種[4，12 ;7，15]雙環肽。
7.根據權利要求6所述的應用，進一步包括有效劑量的環鳥苷單磷酸(cGMP)-依賴性磷酸二酯酶抑制劑在制備有效劑量的所述藥物中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其中，包括同時或者順序應用有效劑量的環鳥苷單磷酸(cGMP) -依賴性磷酸二酯酶抑制劑與鳥苷酸環化酶受體激動劑。
9.根據權利要求7所述的應用，其中，所述環鳥苷單磷酸(cGMP)-依賴型磷酸二酯酶抑制劑選自由舒林砜、敏喘寧、莫他匹酮(motapizone)、伐地那非、和西地那非所組成的組中。
10.根據權利要求7所述的應用，進一步包括有效劑量的至少一種消炎劑在制備有效劑量的所述藥物制劑的應用。
11.根據權利要求10所述的應用，其中，所述消炎劑是一種類固醇或非類固醇類消炎藥(NSAIDS)。
12.—種體外增加細胞中環鳥苷單磷酸(cGMP)產量的方法，包括將所述細胞與一種肽相接觸，所述肽由SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列所組成，其中所述肽是一種[4，12 ;7，15]雙環肽。
13.根據權利要求12所述的方法，進一步包括將所述細胞與一種環鳥苷單磷酸(cGMP) -依賴型磷酸二酯酶抑制劑相接觸。
14.根據權利要求13所述的方法，其中，所述環鳥苷單磷酸(cGMP)-依賴型磷酸二酯酶抑制劑選自由舒林砜、敏喘寧、莫他匹酮、伐地那非、和西地那非所組成的組中。
【文檔編號】A61P35/00GK103601792SQ201310478406
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2008年6月4日 優先權日:2007年6月4日
【發明者】K·沙魯布海, G·S·雅各布 申請人:協同醫藥品公司