膽木提取物及其在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了膽木的水、乙醇、乙醇水溶液提取物及其相應石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水層萃取物在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)藥物中的應用。同時也公開了上述提取物或萃取物的制備方法。實驗結果顯示：膽木水、乙醇、乙醇水溶液提取物及相應乙酸乙酯、正丁醇、水層萃取物均具有較強的抗MRSA作用，其中膽木70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位活性最強。
【專利說明】膽木提取物及其在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物中的應用【技術領域】
[0001]本發明屬中藥制藥領域，涉及膽木(Nauclea officinalis Pierre ex Pitard)提取物的新用途。
【背景技術】
[0002]眾所周知，當前細菌耐藥已成為全球范圍的重大公共健康問題，抗生素的濫用是造成細菌耐藥的重要原因。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，以下簡稱“MRSA”)具有多重耐藥性并伴有高發病率和高死亡率，是導致壞死性肺炎、嚴重敗血癥、壞死性筋膜炎等疾病的重要致病菌，是醫院感染和社區感染的重要病原菌之一，給臨床治療帶來了極大的困難。MRSA對絕大多數的抗菌藥耐藥，甚至對目前臨床抗耐藥菌最為有效的萬古霉素也開始出現耐藥，一旦MRSA發展到對萬古霉素普遍耐藥的程度，感染MRSA的患者將面臨無藥可治的危險境地。因此，針對細菌耐藥日趨嚴重的情況，尋找、開發具有抗耐藥菌MRSA作用的抗菌藥物，刻不容緩。
[0003]膽木(Nauclea officinalis Pierre ex Pitard)為菌草科烏擅屬植物，別名烏檀、細葉黃棵木、黃羊木、山熊膽、熊膽樹。膽木原為民間藥材，始載于廣州部隊編《常用中草藥手冊》和《全國中草藥匯編》等書籍，被1977年版《中國藥典》收載。膽木的莖和皮均能入藥，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，常用于感冒發熱、咽喉腫痛、急性結膜炎、急性扁桃體炎、肺炎、腸炎、痢疾等疾病的治療。目前沒有文獻報道膽木抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的藥物應用。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是開發膽木在制藥領域上的新用途。
[0005]目的之ー是，將膽木水或こ醇或こ醇水溶液提取物用于制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物。
[0006]目的之二是，進ー步優化膽木水或こ醇或こ醇水溶液提取物，開發活性更強的提取物。
[0007]目的之三是，公開上述提取物的制備方法。
[0008]本發明的技術方案:
[0009]一、本發明所述膽木提取物的制備方法，包括以下步驟:
[0010]1.取膽木藥材，用水或こ醇或こ醇水溶液提取，回收溶劑得浸膏，制得膽木水提取物或こ醇提取物或こ醇水溶液提取物。
[0011]2.上述浸膏加水稀釋，再用石油醚或こ酸こ酯或正丁醇萃取，取萃取液濃縮分別制得對應的膽木提取物。
[0012]所述的膽木藥材重量與提取溶劑體積比優選1:5~15。
[0013]建議所述浸膏加水稀釋后用等體積的萃取溶劑萃取。[0014]優選由以下方法制備的膽木70%こ醇提取物:取膽木藥材，按藥材重量與溶劑體積比為1:10的比例用70%こ醇水溶液提取兩次，回收溶劑得浸膏，浸膏加水稀釋后用等體積こ酸こ酯萃取三次，合并萃取液濃縮得所述膽木提取物。
[0015]二、將上述膽木提取物作為活性成分應用于抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物的制備。
[0016]本發明通過對膽木進行提取和分離，對各提取物抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的藥理作用進行篩選，來考察膽木抗MRSA的作用。實驗結果顯示:膽木水、こ醇、こ醇水溶液提取物及相應こ酸乙酯、正丁醇和水層萃取物均具有較強的抗MRSA作用，其中膽木70%こ醇提取物的こ酸こ酯萃取物活性最強，明顯優于其他方法制備的提取物。
[0017]本發明的上述膽木提取物可作為抗菌類藥物制劑的活性成分，制成片劑、膠囊、緩釋劑、注射劑、栓劑、復方制劑等。
[0018]本發明具有以下有益效果:
[0019]用本發明拓展了藥材膽木的新用途，由本發明方法制備得到的產品具有抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的作用，可作為天然的抗菌劑，應用于食品、藥品等行業；同時實現膽木植物的綜合利用和提高其附加值。本發明所稱的藥物包括人用藥物及其他動物用藥物。
[0020]本發明的制備エ藝簡單，生產成本低，可適應規模化生產。
【具體實施方式】
[0021]以下通過具體的實施例進ー步說明本發明的技術方案。
[0022]本發明通過下述方法對膽木提取物的抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的藥理作用進行篩選。
[0023]以微量肉湯稀釋法測定膽木提取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。
[0024]菌株:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA，編號為M1-M30)臨床分離株30株；金黃色葡萄球菌標準菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大學附屬第一醫院檢驗醫學部臨床微生物檢驗室提供，經中山大學附屬第一醫院臨床微生物檢驗室檢測確認其耐藥性。
[0025]MH肉湯培養基:MH肉湯干粉(英國OXOID LTD.) 2.lg，定容至100ml，NaOH調節pH至7.0，高壓滅菌，置4°C冰箱備用。
[0026]方法:參照美國國立臨床試驗標準化委員會(NCCLS)推薦的微量肉湯稀釋法操作。
[0027]實施例1
[0028]制備膽木水提取物及其萃取物
[0029]膽木(Nauclea officinalis Pierre ex Pitard)由海南金光藥業有限公司提供。膽木3000g，用水45000ml煎煮2次，每次2小時，過濾；合并濾液，濃縮得浸膏(水提取物)296.5g。取浸膏197.7g，用水2000ml混懸后，以每次2000ml，分別用石油醚、こ酸こ酷、正丁醇萃取，每種溶劑萃取三次，分別合并各萃取液，濃縮得石油醚提取物0.9g、こ酸こ酯提取物20.3g、正丁醇提取物74.lg、水層提取物102.4g。
[0030]實施例2[0031]膽木水提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的藥理作用的篩選
[0032]I實驗方法
[0033]I)最低抑菌濃度(MIC)的測定:
[0034]膽木水提取物及其萃取物、紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星、萬古霉素分別在MH肉湯培養基中進行一系列倍比稀釋，調節接種菌為1.0X106CFU/ml。35°C培養24小時，無沉淀出現的最低抗菌藥物的濃度為其最低抑菌濃度(MIC)。
[0035]2)最低殺菌濃度(MBC)的測定:
[0036]從I)項無菌生長的孔中移取50 ill至血平板上，均勻涂布，35°C培養24小時，菌落計數，使最初的實驗活菌數減少99.9%或以上所需要的最低抗菌藥物的濃度為其最低殺菌濃度(MBC)。
[0037]通過測定藥物的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)，并對數據進行統計得出MIC5(1、MIC90, MBC50, MBC90,來評價藥物抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的作用。
[0038]2實驗結果
[0039]膽木水提取物及其萃取物、四種抗生素(紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星、萬古霉素)對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的體外抑菌試驗結果見表1。
[0040]膽木水提取物及其萃取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的體外殺菌試驗結果見表2。`
[0041]經過統計分析，膽木水提取物及其萃取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的體外抑菌和殺菌試驗的MIC5Q、MIC90, MBC50, MBC90見表3。
[0042]經過統計分析，四種抗生素(紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星、萬古霉素)對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌試驗的MIC5(1、MIC9tl見表4:
[0043]表1膽木水提取物及其萃取物、四種抗生素對MRSA的體外抑菌試驗結果
[0044]
【權利要求】
1.ー種膽木提取物，其特征在于該提取物由以下方法制備:取膽木藥材，用提取溶劑水或者こ醇或者こ醇的水溶液提取，回收提取溶劑制浸膏，浸膏加水稀釋，再分別用萃取溶劑石油醚或こ酸こ酯或正丁醇萃取，萃取液濃縮得膽木提取物。
2.如權利要求1所述的膽木提取物，其特征在于所述的膽木藥材重量與提取溶劑體積比為I:5~15。
3.如權利要求1所述的膽木提取物，其特征在于所述浸膏加水稀釋后用等體積的萃取溶劑萃取。
4.如權利要求1所述的膽木提取物，其特征在于該提取物由以下方法制備:取膽木藥材，按藥材重量與溶劑體積比為1:10的比例用70%こ醇水溶液提取兩次，回收溶劑得浸膏，浸膏加水稀釋后用等體積こ酸こ酯萃取三次，合并萃取液濃縮得所述膽木提取物。
5.如權利要求1到4所述膽木提取物在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌類藥物中的應用。
6.如權利要求1到4所述 膽木提取物在制備食品抗菌劑中的應用。
【文檔編號】A61K36/74GK103520323SQ201310473042
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月11日 優先權日:2013年10月11日
【發明者】王永剛, 劉博宇, 蘇薇薇, 姜儻, 李泮霖, 歐淑芬 申請人:中山大學