一種紫草提取物的制備方法及其應用的制作方法
【專利摘要】一種紫草提取物的制備方法及其應用，它涉及醫藥領域，具體涉及紫草提取物的制備方法及其應用。本發明的目的是公開一種紫草提取物的制備方法及其在制備治療腫瘤的藥物中的應用。方法：一、制備紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取；即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。本發明紫草提取物的應用，是紫草提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應用。本發明著重以婦科腫瘤和消化道細胞株為研究對象，證實紫草萘醌類有效部位對腫瘤細胞系具有確切的抑制生長誘導凋亡的生物活性，為將硬紫草及其萘醌類有效部位開發成療效卓越、靶點明確的抗癌新藥提供科學的實驗基礎。
【專利說明】一種紫草提取物的制備方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥領域，具體涉及紫草提取物的制備方法及其應用。
【背景技術】
[0002]腫瘤疾病已經成為威脅人類健康和生命的主要敵人之一，其發病率和死亡率都在逐年上升。死亡率僅次于心血管病，是人類的第二大殺手。如何通過有效措施防治惡性腫瘤已成為我國以至全世界防治疾病的首要任務，也是全社會特別是醫學領域急待解決的重大課題。但由于癌癥早期診斷的困難，相當數量的癌癥患者將依賴藥物治療，因此，抗腫瘤藥物的研發與應用是生物醫藥科學迅速發展的一個重要領域。
[0003]宮頸癌是最常見的婦性生殖道惡性腫瘤之一，在我國宮頸癌的發生占女性生殖道惡性腫瘤的第一位。不但在女性生殖器官癌瘤中占首位而且是女性各種惡性腫瘤中最多見的癌瘤。卵巢癌是一類很難被早期發現的癌癥，是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，占婦科癌腫的4%以上，其死亡率居婦科腫瘤首位，發病率占第三位，次于宮頸癌和宮體癌。卵巢癌的發病率近年來不斷上升，對女性健康危害極大。近三十年來，婦科癌瘤的治療取得了長足的進展，但唯獨卵巢癌的療效尚無明顯改善。胰腺癌是一種惡性程度很高的消化道常見腫瘤，其發病機制尚不明確，在惡性腫瘤中胰腺癌的發病率和死亡率都較高。胰腺癌具有高度惡性的生物學行為，臨床經過兇險，5年生存率很低，在60余種惡性腫瘤中，預后最差。
[0004]中醫藥治療腫瘤與西醫治療腫瘤相比有其獨特的優勢，中醫藥在腫瘤診治上有十分豐富的理論和臨床經驗。中藥由于成分復雜，通過發揮多層次、多環節、多靶點的綜合作用而抗腫瘤。中醫在治療腫瘤思路上充分利用中藥多靶點作用并結合中醫理論從整體觀出發對機體進行整體調節。中藥有著良好的研究開發前景，從中草藥中尋找抗腫瘤有效成分治療惡性腫瘤目前已越來越被廣大學者與患者所接受，并己成為常用的治療方法，是惡性腫瘤綜合治療中的有效手段之一。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是公開一種紫草提取物的制備方法及其在制備治療腫瘤的藥物中的應用。
[0006]本發明一種紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:
[0007]一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為40°C~50°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；
[0008]二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~50°C、解析釜加熱至40°C~50°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為20L/h~30L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為15MPa~20MPa、解析釜的解析壓力為4MPa~SMPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。[0009]本發明一種紫草提取物的應用，是紫草提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應用。
[0010]本發明的優點:
[0011]一、本發明提供了一種紫草提取物的制備方法，以紫草為原料，利用二氧化碳超臨界萃取技術對其進行以萘醌類成分為主的有效部位的進行高效的富集，提取、純化工藝，超臨界流體萃取法與傳統的化學溶劑提取法相比，其優越性是無化學溶劑殘留，無污染，避免提取物高溫熱裂解，保護生理活性物質的活性且工藝簡單，提取效率高且純度高，有利于工業生產；
[0012]二、本發明采用四因素一三水平正交設計，以含量和提取量為指標，用CO2超臨界流體萃取技術對中藥紫草中的萘醌類成分的萃取條件進行了優化選擇，得出紫草中萘醌類成分的最佳萃取條件為:萃取壓力17MPa、萃取溫度40°C、解析壓力5MPa、解析溫度40°C、流量25L/h ;經過分光光度法以紫草素測定提取物中總萘醌類成分含量的方法學考察表明，其精密度、穩定性、重現性和加樣回收率的相對標準偏差均小于3%，說明此方法準確、可靠；應用已建立的HPLC含量測定方法對有效部位群中乙酰紫草素等4種主成分進行測定，經計算，四種成分的總含量為58.42 + 6.15%，占總萘醌含量的87.30 + 3.22% ；
[0013]三、本發明通過體外活性篩選實驗來證實其抗腫瘤活性作用，研究結果表明，紫草有效部位可誘導多種腫瘤細胞凋亡；紫草有效部位可抑制人子宮頸鱗癌細胞Siha、人卵巢癌細胞Skov3、人胰腺癌細胞Bxpc3、人宮頸癌細胞Hela、人卵巢癌細胞Ηο_8910、人肝癌細胞H印G2的細胞生長，并呈劑量和時間依賴性，表明紫草有效部位對多種腫瘤均有較強的細胞毒活性，48h紫草提取物對六種細胞的IC50值均小于0.9ug/ml ;藥理研究發現紫草有效部位具有抗腫瘤作用，證明其對人6種腫瘤細胞的生長均有抑制作用，并呈明顯的量效關系，為探索高效且經濟的天然抗腫瘤藥物提供了實驗依據。
[0014]四、本發明著重以婦科腫瘤和消化道細胞株為研究對象，證實紫草萘醌類有效部位對腫瘤細胞系具有確切的抑制 生長誘導凋亡的生物活性，為將硬紫草及其萘醌類有效部位開發成療效卓越、靶點明確的的抗癌新藥提供科學的實驗基礎，為婦科癌和消化道癌癥的臨床治療采用合理的方案提供理論依據和科學的實驗數據。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1為紫草提取物作用Siha細胞生長曲線，圖1中的-▲-為紫草提取物作用24h時Siha細胞生長曲線，圖1中的-?-為紫草提取物作用48h時Siha細胞生長曲線，圖1中的--為紫草提取物作用72h時Siha細胞生長曲線；
[0016]圖2為紫草提取物作用skov3細胞生長曲線，圖2中的-▲-為紫草提取物作用24h時skov3細胞生長曲線，圖2中的-?-為紫草提取物作用48h時skov3細胞生長曲線，圖2中的--為紫草提取物作用72h時skov3細胞生長曲線；
[0017]圖3為紫草提取物作用Bxpc3細胞生長曲線，圖3中的-▲-為紫草提取物作用24h時Bxpc3細胞生長曲線，圖3中的-?_為紫草提取物作用48h時Bxpc3細胞生長曲線，圖3中的--為紫草提取物作用72h時Bxpc3細胞生長曲線；
[0018]圖4為紫草提取物作用Ho-8910細胞生長曲線，圖4中的-▲-為紫草提取物作用24h時Ho-8910細胞生長曲線，圖4中的-?-為紫草提取物作用48h時Ho-8910細胞生長曲線，圖4中的--為紫草提取物作用72h時Ho-8910細胞生長曲線；[0019]圖5為紫草提取物作用HepG2細胞生長曲線，圖5中的--為紫草提取物作用24h時H印G2細胞生長曲線，圖5中的-_為紫草提取物作用48h時H印G2細胞生長曲線，圖5中的--為紫草提取物作用72h時IfepG2細胞生長曲線；
[0020]圖6為紫草提取物作用Hela細胞生長曲線，圖6中的--為紫草提取物作用24h時Hela細胞生長曲線，圖6中的--為紫草提取物作用48h時Hela細胞生長曲線，圖6中的--為紫草提取物作用72h時Hela細胞生長曲線；
[0021 ] 圖7為48h不同劑量紫草提取物對六種腫瘤細胞毒作用圖，圖7中的□為48h濃度為0.075 u g/mL紫草提取物對六種腫瘤細胞毒作用圖，圖7中的國為48h濃度為0.15 Ug/mL紫草提取物對六種腫瘤細胞毒作用圖，圖7中的為48h濃度為0.75 u g/mL紫草提取物對六種腫瘤細胞毒作用圖；
[0022]圖8為正常Siha細胞形態圖；
[0023]圖9為紫草提取物處理后的Siha細胞形態圖；
[0024]圖10為正常Skov3細胞形態圖；
[0025]圖11為紫草提取物處理后的Skov3細胞形態圖；
[0026]圖12為正常Bxpc3細胞形態圖；
[0027]圖13為紫草提取物處理后的Bxpc3細胞形態圖。
【具體實施方式】
[0028]【具體實施方式】一:本實施方式一種紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:
[0029]一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為40°C~50°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩(2000±70 ym，10目)，保留篩下，得到紫草粉末；
[0030]二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~50°C、解析釜加熱至40°C~50°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為20L/h~30L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為15MPa~20MPa、解析釜的解析壓力為4MPa~SMPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
[0031]本實施方式步驟一中所述的紫草為紫草科植物紫草(Lithospermumerythrorhizon sieb.et Zucc)的干燥根,亦稱硬紫草；紫草中主要成分為萘醌類成分,經試驗證明紫草中萘醌類成分具有對熱不穩定性，紫草素在加熱60°C以上顏色由紅色變成紫黑色，隨溫度升高變化速度加快，薄層色譜法檢查斑點消失，提示紫草色素被破壞。
[0032]本實施方式提供了一種紫草提取物的制備方法，以紫草為原料，利用二氧化碳超臨界萃取技術對其進行以萘醌類成分為主的有效部位的進行高效的富集，提取、純化工藝，超臨界流體萃取法與傳統的化學溶劑提取法相比，其優越性是無化學溶劑殘留，無污染，避免提取物高溫熱裂解，保護生理活性物質的活性且工藝簡單，提取效率高且純度高，有利于工業生產。
[0033]本實施方式采用四因素一三水平正交設計，以含量和提取量為指標，用CO2超臨界流體萃取技術對中藥紫草中的萘醌類成分的萃取條件進行了優化選擇，得出紫草中萘醌類成分的最佳萃取條件為:萃取壓力17MPa、萃取溫度40°C、解析壓力5MPa、解析溫度40°C、流量25L/h ;經過分光光度法以紫草素測定提取物中總萘醌類成分含量的方法學考察表明，其精密度、穩定性、重現性和加樣回收率的相對標準偏差均小于3%，說明此方法準確、可靠；應用已建立的HPLC含量測定方法對有效部位群中乙酰紫草素等4種主成分進行測定，經計算，四種成分的總含量為58.42 + 6.15%，占總萘醌含量的87.30 + 3.22% ；[0034]本實施方式通過體外活性篩選實驗來證實其抗腫瘤活性作用，研究結果表明，紫草有效部位可誘導多種腫瘤細胞凋亡；紫草有效部位可抑制人子宮頸鱗癌細胞Siha、人卵巢癌細胞Skov3、人胰腺癌細胞Bxpc3、人宮頸癌細胞Hela、人卵巢癌細胞Ho-8910、人肝癌細胞HepG2的細胞生長，并呈劑量和時間依賴性，表明紫草有效部位對多種腫瘤均有較強的細胞毒活性，48h紫草提取物對六種細胞的IC50值均小于0.9ug/ml ;藥理研究發現紫草有效部位具有抗腫瘤作用，證明其對人6種腫瘤細胞的生長均有抑制作用，并呈明顯的量效關系，為探索高效且經濟的天然抗腫瘤藥物提供了實驗依據。
[0035]本實施方式著重以婦科腫瘤和消化道細胞株為研究對象，證實紫草萘醌類有效部位對腫瘤細胞系具有確切的抑制生長誘導凋亡的生物活性，為將硬紫草及其萘醌類有效部位開發成療效卓越、靶點明確的的抗癌新藥提供科學的實驗基礎，為婦科癌和消化道癌癥的臨床治療采用合理的方案提供理論依據和科學的實驗數據。
[0036]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C~50°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~45°C、解析釜加熱至40°C~45°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為20L/h~25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為15MPa~18MPa、解析釜的解析壓力為4MPa~6MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。其它與【具體實施方式】一相同。
[0037]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是:紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C~48°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~42°C、解析釜加熱至40°C~42°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為22L/h~25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為16MPa~17MPa、解析釜的解析壓力為5MPa~6MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。其它與【具體實施方式】一或二相同。
[0038]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同的是:紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C、解析釜加熱至40°C、貯罐加熱至30°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為17MPa、解析釜的解析壓力為5MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。其它與【具體實施方式】一至三之一相同。
[0039]【具體實施方式】五:本實施方式一種紫草提取物的應用，是紫草提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應用。[0040]本實施方式紫草提取物的應用，是將紫草提取物直接制成治療腫瘤的藥物。
[0041]本實施方式通過體外活性篩選實驗來證實其抗腫瘤活性作用，研究結果表明，紫草有效部位可誘導多種腫瘤細胞凋亡；紫草有效部位可抑制人子宮頸鱗癌細胞Siha、人卵巢癌細胞Skov3、人胰腺癌細胞Bxpc3、人宮頸癌細胞Hela、人卵巢癌細胞Ho_8910、人肝癌細胞HepG2的細胞生長，并呈劑量和時間依賴性，表明紫草有效部位對多種腫瘤均有較強的細胞毒活性，48h紫草提取物對六種細胞的IC50值均小于0.9ug/ml ;藥理研究發現紫草有效部位具有抗腫瘤作用，證明其對人6種腫瘤細胞的生長均有抑制作用，并呈明顯的量效關系，為探索高效且經濟的天然抗腫瘤藥物提供了實驗依據。
[0042]采用下述試驗驗證本發明的效果:
[0043]試驗一:一種紫草提取物的制備方法，按以下步驟進行:
[0044]—、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；
[0045]二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:稱取200克步驟一得到的紫草粉末裝入IL萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C、解析釜加熱至40°C、貯罐加熱至30°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為17MPa、解析釜的解析壓力為5MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
[0046]本試驗步驟一中所述的紫草為紫草科植物紫草(Lithospermum erythrorhizonsieb.et Zucc)的干燥根,亦稱硬紫草。
[0047]提取方法的比較:
[0048]超聲提取:稱取紫草粉末(過I號篩后篩下紫草粉末)100g，加入到95%乙醇中超聲提取2次，每次30min，過濾后減壓回收溶劑至無醇，干燥，即得到紫草提取物。
[0049]冷浸提取:稱取紫草粉末(過I號篩后的篩下紫草粉末)100g，加入到95%乙醇中冷浸36小時，過濾，濾液減壓回收溶劑至無醇，干燥，即得到紫草提取物。
[0050]回流提取:稱取紫草粉末(過I號篩后的篩下紫草粉末)100g，加入到SOOmL的95%乙醇中回流45min,過濾,再加600mL的95%乙醇回流30min,過濾,合并濾液，回收溶劑至無醇，干燥，即得到紫草提取物。
[0051]滲漉提取:稱取紫草粉末(過I號篩后的篩下紫草粉末)100g，w 200mL95%乙醇潤濕6小時，將潤濕好的藥粉均勻加入滲漉筒，排除筒內空氣后浸潰36小時，以3mL/10min的流速滲漉，減壓回收滲漉液至無醇，干燥，即得到紫草提取物。
[0052]按本發明試驗一的方法提取:得到紫草提取物。
[0053]將超聲提取、冷浸提取、回流提取、滲漉提取和按本發明試驗一的方法提取得到的紫草提取物各10mg，分別加95%乙醇溶解并定容至20mL，得到5份紫草提取物溶液，紫外-分光光度法在516nm的波長處測定吸收度，測定總萘醌含量，每份重復三次，結果見表
I:
[0054]表1提取方法的比較
[0055]
【權利要求】
1.一種紫草提取物的制備方法，其特征在于紫草提取物的制備方法按以下步驟進行: 一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為40°c~50°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末； 二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~50°C、解析釜加熱至40°C~50°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為20L/h~30L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為15MPa~20MPa、解析釜的解析壓力為4MPa~SMPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
2.根據權利要求1所述的一種紫草提取物的制備方法，其特征在于紫草提取物的制備方法按以下步驟進行:一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C~50°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~45°C、解析釜加熱至40°C~45°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為20L/h~25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為15MPa~18MPa、解析釜的解析壓力為4MPa~6MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
3.根據權利要求1所述的一種紫草提取物的制備方法，其特征在于紫草提取物的制備方法按以下步驟進行:一、制備紫 草粉末:將紫草置于溫度為45°C~48°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C~42°C、解析釜加熱至40°C~42°C、貯罐加熱至30°C~40°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為22L/h~25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為16MPa~17MPa、解析釜的解析壓力為5MPa~6MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h~3h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
4.根據權利要求1所述的一種紫草提取物的制備方法，其特征在于紫草提取物的制備方法按以下步驟進行:一、制備紫草粉末:將紫草置于溫度為45°C的條件下烘干，得到干燥的紫草，然后粉碎成粉末，過I號篩，保留篩下，得到紫草粉末；二、利用CO2超臨界萃取技術對步驟一得到的紫草粉末進行以萘醌類成分為主的有效部位的提取:將步驟一得到的紫草粉末裝入萃取釜中，將萃取釜加熱至40°C、解析釜加熱至40°C、貯罐加熱至30°C，然后開啟CO2瓶，控制CO2流量為25L/h，通過高壓泵對系統進行加壓，當萃取釜的萃取壓力為17MPa、解析釜的解析壓力為5MPa時，開始循環萃取，并保持萃取釜恒溫恒壓，當萃取2h后，從解析釜出料口出料，即得到深紅色的濃膏狀紫草提取物。
5.如權利要求1的制備方法制備的一種紫草提取物的應用，其特征在于是紫草提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK103494860SQ201310470068
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年10月10日 優先權日:2013年10月10日
【發明者】孫暉, 張愛華, 王喜軍 申請人:王喜軍