一種小兒清熱片的制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種小兒清熱片的制備方法，由黃柏117.6g、燈心草23.5g、梔子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，服用量減少，本發明還提供了小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用。
【專利說明】一種小兒清熱片的制備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥制劑【技術領域】，具體涉及一種小兒清熱片的制備方法及應用。
【背景技術】
[0002]小兒清熱片記載于藥典，處方為黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g，以上十一味，除薄荷素油外，朱砂、雄黃分別水飛成極細粉，黃連、大黃粉碎成細粉；黃柏、龍膽用70%乙醇滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮成稠膏；其余燈心草等四味加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏。將上述兩種稠膏與粉末混勻，干燥，粉碎，制成顆粒，干燥，加入上述薄荷素油，壓制成1000片，包糖衣，即得。能清熱解毒，祛風鎮驚。用于小兒風熱，煩躁抽搐，發熱口瘡，小便短赤，大便不利。
[0003]現有技術中，尚未有小兒清熱片在提取制備方面采用超臨界技術的報道，而采用打粉和水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應用。
【發明內容】
[0004]發明目的:為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種小兒清熱片的制備方法。
[0005]本發明的另一個目的在于提供一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用。
[0006]技術方案:本發明的目的是通過如下的方案實現的:
[0007]一種小兒清熱片的制備方法，由黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成:取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重0.5g。
[0008]上述一種小兒清熱片的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]上述一種小兒清熱片的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時間 160min。
[0010]上述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，小兒清熱片由黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃岑117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C, CO2流量l-3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒,干燥,壓片，制成1000片，每片重0.5g。
[0011]上述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，小兒清熱片制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，小兒清熱片制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
[0013]現有技術中，小兒清熱片每片0.5g，每次4片，一日3次，采用本發明制備成的小兒清熱片每片0.5g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。 【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0015]實施例1
[0016]取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C02流量lml/g生藥.min,萃取時間150min,得超臨界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥，壓片，制成500片，每片重0.5g。
[0017]實施例2
[0018]取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度50°C，C02流量3ml/g生藥.min,萃取時間180min,得超臨界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥，壓片，制成500片，每片重0.5g。
[0019]實施例3
[0020]取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min,得超臨界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥，壓片，制成500片，每片重0.5g。
[0021]實施例4:小兒清熱片抑制SCLC細胞增殖的實驗研究資料
[0022]I實驗材料
[0023]1.1實驗用細胞株
[0024]小細胞肺癌細胞SCLC細胞，南京正亮醫藥科技有限公司實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。
[0025]1.2實驗藥物
[0026]研究藥物:本發明小兒清熱片:按實施例3方法制備。
[0027]藥液儲液:稱取IOOmg小兒清熱片，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0028]1.3實驗試劑
[0029]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號:2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182);MTT (Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；
[0030]1.4實驗器材
[0031]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(M`ILLIP0RE型號:SLGP033RB) ;10cm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0032]2實驗方法
[0033]I) SCLC 細胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進行常規培養(IOcm 培養皿)，當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞后將其轉入離心管中，1000rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
[0034]2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ I,培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。
[0035]3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入小兒清熱片溶液，繼續培養24h。
[0036]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續培養 4h。
[0037]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0038]6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。
[0039]7)結果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0040]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。
[0041]3統計處理
[0042]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean+ S.D.表不。
[0043]4實驗結果
[0044]MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對SCLC細胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0045]表1小兒清熱片對SCLC細胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
組另Il藥物濃度(mg/ml)抑制率(％)
對照組O O
1519.5±12.75
[0046]
21024.2± 16.87*
31528.7±13.15**
42037.5 士 12.27**
[0047]注:與對照組比較，*P〈0.01 ;#Ρ〈0.0Ol
[0048]5實驗結論
[0049]小兒清熱片可 以抑制SCLC細胞增殖，減少SCLC細胞的細胞生長數目，該作用呈劑
量依賴性。
【權利要求】
1.一種小兒清熱片的制備方法，由黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重0.5g。
2.根據權利要求1所述一種小兒清熱片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據權利要求1所述一種小兒清熱片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
4.根據權利要求1所述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，其特征在于小兒清熱片由黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取黃柏117.6g、燈心草23.5g、桅子117.6g、鉤藤47g、雄黃47g、黃連70.6g、朱砂23.5g、龍膽47g、黃芩117.6g、大黃47g、薄荷素油0.47g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50。。，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重0.5g。
5.根據權利要求4所述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，其特征在于小 兒清熱片制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
6.根據權利要求4所述一種小兒清熱片在制備抑制小細胞肺癌細胞SCLC細胞增殖藥物中的應用，其特征在于小兒清熱片制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min，萃取時間160min。
【文檔編號】A61K9/20GK103479812SQ201310456336
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月29日 優先權日:2013年9月29日
【發明者】不公告發明人 申請人:南京正亮醫藥科技有限公司