包含神經調節蛋白的藥物制劑及裝置制造方法
【專利摘要】本發明涉及包含神經調節蛋白(neuregulin，NRG)的裝置或制劑，該裝置或制劑可向哺乳動物血液中長期注入神經調節蛋白，從而使神經調節蛋白在血液中持續存在。實驗證明血液中持續存在的NRG不僅能長時間持續激活其下游信號傳導系統，還能顯著改善心衰心臟的功能。本發明中向哺乳動物血液長期注入神經調節蛋白的裝置具體包括裝有NRG溶液的容器及配套注射系統，含NRG溶液的膠囊式滲透壓泵，含NRG的制劑具體包括NRG和聚乙二醇(PEG)的耦聯物或含NRG的脂質體、微球等。
【專利說明】包含神經調節蛋白的藥物制劑及裝置
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物化學、分子生物學和醫學領域。具體而言，本發明涉及釋放神經調節蛋白到動物血液中的藥物制劑及裝置。
[0002]發明背景
[0003]神經調節蛋白(neuregulin, NRG ；heregulin, HRG),又叫神經膠質生長因子(glial growth factor, GGF), neu 分化因子(new differentiation factor, NDF),為分子量在44KD左右的糖蛋白，它們在細胞間傳遞信號，是酪氨酸激酶受體ErbB家族的配體。神經調節蛋白家族含 4 個成員:NRG1，NRG2，NRG3，NRG4。(Falls et al.，Exp Cell Res.284:14-30,2003)對后三者的生物學功能相對來講知之甚少。NRGl在神經系統、心臟和乳腺中起著重要作用，還有證據顯示NRGl信號傳遞在其他一些器官系統的發育、功能以及人類疾病(包括精神分裂癥和乳腺癌)的發病機理中起作用。NRGl有很多異構體。對基因突變小鼠(基因敲除小鼠)的研究說明在N末端區或表皮生長因子(EGF)類似區不同的異構體，其在體功能也不一樣。本發明是以神經調節蛋白I β (NRG10)為基礎的。
[0004]神經調節蛋白1β 為一跨膜蛋白(Holmes et al.，Science256，1205-1210，1992)。膜外部分是N末端，包括免疫球蛋白類似區(Ig-like domain)和EGF類似區(EGF-1ikedomain)，膜內部分是C末端。在細胞外基質的金屬蛋白酶作用下，神經調節蛋白的膜外部分可被酶切下來而呈游離狀態，從而有利于和周圍細胞表面的ErbB受體結合，激活相應的細胞信號傳遞。
[0005]ErbB受體家族也分為四類，ErbBl、ErbB2、ErbB3和ErbB4，它們都是跨膜蛋白，分子量在180-185KD附近。除ErbB2外，它們在膜外的N末端都含配體結合區；除ErbB3夕卜，它們在膜內的C末端都含 蛋白酪氨酸激酶活性。其中ErbBl是表皮生長因子的受體，ErbB3和ErbB4都是神經調節蛋白的受體。在神經調節蛋白的受體中，只有ErbB2和ErbB4在心臟表達量較高。(Yarden et al.，Nat Rev Mol Cell Biol, 2:127-137, 2001)
[0006]當神經調節蛋白與ErbB3或ErbB4的膜外部分結合時，將引起ErbB3、ErbB4與其他ErbB受體(常常包括ErbB2)形成異源二聚體，或ErbB4自身形成同源二聚體，然后導致受體的膜內部分被磷酸化(Yarden et al.,Nat Rev Mol Cell Biol, 2:127-137, 2001)。磷酸化的膜內部分可進一步與細胞內的多種信號傳遞蛋白結合，從而激活下游ERK或AKT信號通路，引起一系列細胞反應:包括刺激或抑制細胞增殖、細胞凋亡、細胞遷移、細胞分化或細胞粘連。
[0007]神經調節蛋白對心臟的發育尤其重要(W00037095, CNl276381，W003099300,W09426298, US6444642, W09918976, W00064400, Zhao et al.，J.Biol.Chem.273，10261-10269,1998)。在胚胎發育早期，神經調節蛋白的表達主要局限于心內膜，隨后通過旁分泌途徑釋放到周圍心肌細胞并與細胞膜上的蛋白酪氨酸激酶受體ErbB4膜外部分結合，ErbB4進而與ErbB2形成異源二聚體。ErbB4/ErbB2復合物的形成及激活對早期海綿樣心臟形成小梁是必須的。神經調節蛋白、ErbB4和ErbB2三個蛋白基因中的任何一個缺失都會使胚胎沒有小梁并在發育早期死于子宮。W00037095顯示一定濃度的神經調節蛋白可持續激活ERK信號通路，促進心肌細胞在的生長及分化，引導心肌細胞和細胞粘連處肌節和細胞骨架的重建，改善心肌細胞的結構，增強心肌細胞的收縮。W00037095及W003099300還指出神經調節蛋白可用于檢測、診斷和治療各種心血管疾病。
[0008]下面列舉了與本發明有關的一些現有技術文獻:
[0009]K cardiac muscle function and manipulation ；W00037095
[0010]2、生長因子神經調節蛋白及其類似物的新應用；CN1276381
[0011]3、neuregulin based methods and compositions for treating cardiovasculardiseases ；W003099300
[0012]4、You-yang Zhao，Douglas R.Sawyer, Ragavendra R.Baligaj Douglas J.0pel,Xinqiang Han, Mark A.Marchionni, and Ralph A.Neuregulins Promote Survival andGrowth of Cardiac Myocytes.Kelly J.Biol.Chem.273,10261-10269(1998)
[0013]5λMethods for treating muscle diseases and disorders ；W09426298
[0014]6、Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cellmitogenesis，differentiation or survival using a neuregulin ；US6444642
[0015]7、Therapeutic methods comprising use of a neuregulin ;W09918976
[0016]8λMethods for treating congestive heart failure ；W00064400
[0017]9、William E.HolmesiMark X.Sliwkowski，Robert W.Akita，William J.Henzel，James Lee, John W.Park,. Daniel Yansuraj Nasrin Abadi, Helga Raab, GailD.Lewis,H.Michael Shepard，Wun-Jing Kuang, William 1.Wood, David V.Goeddel，RichardL.Wandlen.1dentification of heregulin，a specific activator ofpl85 (erbB2).Science256，1205-1210(1992)
[0018]10、 Douglas L.Falls.Neuregulins:functions, forms， and signalingstrategies.Experimental Cell Research284，14-30 (2003)
[0019]11、Yosef Yarden，Mark X.Sliwkowsk1.Untangling the ErbB signallingNetwork.Nature Reviews:Molecular Cell Biology2127-137(2001)。
[0020]發明概述
[0021]發明人發現給大鼠注射一定量(10μg/kg:蛋白量/體重)的神經調節蛋白能激活體內的ERK和AKT信號通路，進而有利于心力衰竭的恢復。
[0022]發明人近來還發現給哺乳動物持續給神經調節蛋白(NRG)，也能激活ERK和AKT信號通路，并能提高哺乳動物心臟的FS和/或EF值，及預防心臟肥大，進而能大大提高心衰心臟的收縮功能，達到比快速給藥更好的效果。
[0023]因此，我們將神經調節蛋白注入膠囊式滲透壓泵、微量注射器、與PEG耦聯或包裝于脂質體、微球中，然后再植入或注入動物體內，這樣就能夠持續地釋放神經調節蛋白，從而延長蛋白的半衰期，降低蛋白用量，減少病人的用藥次數，降低毒副作用，同時又起到比快速注射更好的治療作用。
[0024]本發明的一方面提供一種預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂的裝置，該裝置包括有效量的神經調節蛋白，其特征在于，該裝置是長期釋放神經調節蛋白的裝置。
[0025]本發明的預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂的裝置通過向哺乳動物血液中長期釋放神經調節蛋白，可激活哺乳動物心肌細胞的MAP激酶信號通路并引起心肌細胞的生長或分化，從而預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂，尤其是哺乳動物心力衰竭。
[0026]在一較佳實施方式中，本發明的裝置包括容器和/或配套注射系統，該容器例如是泵和/或注射器，如滲透壓泵、微量注射泵。
[0027]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可誘導心肌細胞中ERK和/或AKT信號通路的持續激活。
[0028]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可提高哺乳動物心臟的EF和/或FS值。
[0029]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可預防哺乳動物心臟肥大。
[0030]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可減小哺乳動物左心室的內徑。
[0031]在本發明進一步較佳實施例中,所述的疾病是心力衰竭。
[0032]在本發明中，所述的疾病或紊亂選自心血管疾病、癌癥、神經系統疾病、肌肉疾病、肌肉萎縮癥(如杜興肌營養不良、肢帶型肌營養不良)、多發性硬化、脊髓損傷、中風、眼或耳疾病、糖尿病、精神分裂癥及老年性癡呆癥。
[0033]在本發明中，所述的神經調節蛋白可為NRG1，NRG2, NRG3, NRG4的功能氨基酸片段，即含EGF類似區的任何氨基酸片段。
[0034]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期低劑量釋放可以減小其對哺乳動物的副作用，其中副作.用包括胃腸道紊亂和/或心包液滲漏。
[0035]在本發明進一步較佳實施例中，所述的長期釋放包括每天連續釋放10分鐘到24小時，更佳地每天連續釋放至少4小時，最佳地每天連續釋放至少6小時。
[0036]在本發明進一步較佳實施例中，所述的神經調節蛋白還可用其它影響哺乳動物基因表達的因子如FGF(纖維細胞生長因子)、VEGF(血管內皮生長因子)、IGF(胰島素類似生長因子)、內皮素、LIF(白血病抑制因子)、EGF(表皮生長因子)、TOGF(血小板源生長因子)、TGF (轉化生長因子)、IL-1K白細胞介素11)、TNF(腫瘤壞死因子)、干擾素、激素(如腦鈉肽家族和胰島素)、ΕΡ0(紅細胞生成素)或CSF (集落刺激因子)等配體家族成員來替代。
[0037]本發明另一方面是提供一種預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂的藥物制劑，該藥物制劑包括有效量的神經調節蛋白，其中，該藥物制劑是長期釋放神經調節蛋白的藥物制劑。
[0038]本發明的預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂的藥物制劑通過向哺乳動物血液中長期釋放神經調節蛋白，可激活哺乳動物心肌細胞的MAP激酶信號通路并引起心肌細胞的生長或分化，從而預防、治療或延緩哺乳動物疾病或紊亂，尤其是哺乳動物心力衰竭。
[0039]在一較佳實施方式中，本發明的藥物制劑是NRG和聚合物的耦聯物、脂質體和/或微球或其它緩慢釋放藥物的制劑。該聚合物是聚乙二醇和/或聚乙二醇衍生物。
[0040]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可誘導心肌細胞中ERK和/或AKT信號通路的持續激活。
[0041]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可提高哺乳動物心臟的EF和/或FS值。[0042]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可預防哺乳動物心臟肥大。
[0043]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期釋放可減小哺乳動物左心室的內徑。
[0044]在本發明進一步較佳實施例中,所述的疾病是心力衰竭。
[0045]在本發明，所述的疾病或紊亂選心血管疾病、癌癥、神經系統疾病、肌肉疾病、肌肉萎縮癥(如杜興肌營養不良、肢帶型肌營養不良)、多發性硬化、脊髓損傷、中風、眼或耳疾病、糖尿病、精神分裂癥及老年性癡呆癥。
[0046]在本發明中，所述的神經調節蛋白可為NRG1，NRG2, NRG3, NRG4的功能氨基酸片段，即含EGF類似區的任何氨基酸片段。
[0047]在本發明進一步較佳實施例中，神經調節蛋白的長期低劑量釋放可以減小其對哺乳動物的副作用，其中副作用包括胃腸道紊亂和/或心包液滲漏。
[0048]在本發明進一步較佳實施例中，所述的長期釋放包括每天連續釋放10分鐘到24小時，更佳地每天連續釋放至少4小時，最佳地每天連續釋放至少6小時。
[0049]在本發明進一步較佳實施例中，所述的神經調節蛋白還可用其它影響哺乳動物基因表達的因子如FGF(纖維細胞生長因子)、VEGF(血管內皮生長因子)、IGF(胰島素類似生長因子)、內皮素、LIF(白血病抑制因子)、EGF(表皮生長因子)、TOGF(血小板源生長因子)、TGF(轉化生長因子)、IL-11 (白細胞介素11)、TNF(腫瘤壞死因子)、干擾素、激素(如腦鈉肽家族和胰島素)、ΕΡ0 (紅細胞生成素)或CSF (集落刺激因子)等配體家族成員來替代。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0050]圖1是神經調節蛋白在三種給藥條件下誘導的正常大鼠左心室組織AKT、ERK的磷酸化隨時間變化的圖。其中“vehicle”即賦形劑，“P-AKT”、“P-ERK”和“NRG”分別代表磷酸化的AKT，磷酸化的ERK和神經調節蛋白。“ im”、“ iv”和“ ivgtt”指的是肌肉注射，靜脈
注射和靜脈滴注。
[0051]圖2是用BaI2染色檢測電泳后各泳道中PEG的結果圖。將反應后的PEG和神經調節蛋白混合物通過凝膠過濾柱SlOO分離，收集各組分電泳后染色。圖中“mixture”指PEG和神經調節蛋白反應后的混合物。“M”和“peakl”、“peak2”、“peak3”分別代表蛋白分子量標記和反應混合物經過SlOO柱分離后的洗脫峰1，2，3。“NRG-mono-PEG”、“NRG-d1-PEG”和“NRG-poLy-PEG”分別指的是與一個PEG結合的神經調節蛋白、與兩個PEG結合的神經調節蛋白和與多個(至少3個)PEG結合的神經調節蛋白。
[0052]圖3是用考馬氏亮藍染色檢測電泳后各泳道中神經調節蛋白的結果圖。其中的縮寫標記含義同圖2。在M泳道，各條蛋白帶的分子量從下往上依次為14.4kD，20.1kD,31.0kD, 43.0kD, 66.2kD 和 97.4kD。
發明詳述
[0053]神經調節蛋白是具有重要生物學功能的糖蛋白。本發明提供了神經調節蛋白在治療和預防心血管疾病中的新方式。但是，本發明并不受限于所闡述之原理。[0054]在本發明中，所有術語均具有本領域的技術人員普遍已知的含義。
[0055]術語“神經調節蛋白”是指能夠激活ErbB2/ErbB4或ErbB2/ErbB3異二聯蛋白酪氨酸激酶的分子，包括神經調節蛋白異構體、神經調節蛋白中的EGF區域、神經調節蛋白突變體，和任何能激活上述受體的神經調節蛋白類的基因產物。作為例子，但非限制性地，本發明的神經調節蛋白是神經調節蛋白β 2異構體的一個片段，即177-237位氨基酸片段，其中包含了受體結合區EGF類似區。該片段的氨基酸序列為:SHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCPNEFTCDRC QNYVMASFYKAEELYQ。應該理解的是，本發明的神經蛋白包括完整蛋白、其片段和各種突變體、等價物、模擬體等等，也包括上述物質與它種物質的融合體、偶聯體或者結合物，包括上述物質的變性或者未變性形式，包括上述物質的各種各樣修飾物。在不背離本發明的基礎上，對神經調節蛋白進行截短、氨基酸替換或添加等等變化都是在本發明的范圍之內。
[0056]實施例1神經調節蛋白在不同給藥條件下誘導的正常大鼠左心室組織AKT、ERK磷酸化
[0057]試驗方法:將體重為200±20g的雄性Wistar大鼠分成三個一組，分別后肢肌肉注射(im)、尾靜脈注射(iv)或尾靜脈滴注(iVgtt, 20 μ 1/min,持續2小時左右)賦形劑(IOmMNa2HP04-NaH2P04,150mM· NaCl，0.2% HSA(人血清白蛋白)，5%甘露醇，ρΗ6.0，劑量為 4ml/kg鼠體重)或10 μ g/kg神經調節蛋白(NRG1 β 2之177-237氨基酸片段，澤生科技開發有限公司，批號=200503002)，溶解于賦形劑中，濃度為2.Syg/ml，劑量為4ml/kg鼠體重)，然后分別給藥后于20min、lr、2hr、4h;r、6hr斷頸處死,摘下心臟,剪取左心室,用預冷的生理鹽水洗凈后將同組三個左心室在裂解液(50mMTris pH7.4,5mM EDTA, 150mM NaCl,l%Triton X-100,2mM Na2VO4, 50mM NaF, 2mM PMSF及Cocktail 蛋白酶抑制劑混和物(無EDTA，Roche))中剪碎、勻漿，將勻漿液于12，OOOrpm離心5min，取上清，同上再離心一次，_80°C凍存。用前化凍，再于12，OOOrpm離心5min，取上清。用BCA方法測定蛋白濃度，取適量樣品與 2X 樣品緩沖液(0.125M Tris ρΗ6.8，20%甘油，4% SDS，0.2M DTT，0.012%溴芬藍)混合，煮3min，然后電泳，轉膜，分別用ERK、磷酸化ERK或AKT、磷酸化AKT對應的抗體(Cellsignaling公司)來檢測樣品的ERK、AKT磷酸化狀態。
[0058]實驗結果如圖1所示，為神經調節蛋白不同給藥方法的正常大鼠左心室AKT、ERK的磷酸化水平隨時間變化的情況圖。從圖中可以看出，與賦形劑相比，三種給藥方法下神經調節蛋白都能持續誘導ERK的磷酸化，而神經調節蛋白誘導的AKT磷酸化水平則在給藥后20min時較高，Ihr時降低，2hr時又開始回升,到4hr時回復到較高水平。特別值得注意的是，尾靜脈滴注時神經調節蛋白對ERK、AKT磷酸化的影響跟其他兩種注射方法沒有明顯區別，提示神經調節蛋白的持續低劑量給藥方法也是同樣有效的。
[0059]實施例2不同給藥方法時神經調節蛋白恢復冠脈結扎大鼠心功能的情況
[0060]實驗方法:
[0061 ] 1、大鼠冠脈結扎、心超檢測及分組
[0062]200±20g Wistar雄性大鼠(中國科學院上海實驗動物中心)腹腔注射氯胺酮(Ketamine) 100mg/kg麻醉后,仰臥固定于鼠板,頸部及胸部去毛后用新潔爾滅消毒。頸部正中切口，鈍性分離氣管，18G動靜脈針留置第3-5氣管軟骨間，退出針芯，將塑料套管推入氣管內l_2cm，固定，以備接小動物呼吸機(SAR-830/P ventilator，潮氣量約lml/100g/次，頻率60次/分鐘)。胸部左前切口，鈍性分離，暴露第4、5肋骨，用彎頭紋式止血鉗從肋間穿透胸壁并剪斷第4肋，接通開啟呼吸機，暴露心臟，觀察肺充氣及心跳情況。撕開心包，將上部脂肪墊上翻，充分暴露左心耳和肺動脈圓錐，于二者之間用6/0醫用無損傷縫合線結扎冠狀動脈前降支，可看到結扎后心肌局部呈現白色(約8_X8mm)，活動明顯減弱。縫合胸壁，堵住呼吸機回氣口使肺充盈，用力擠壓胸部排氣后，縫合胸部肌肉和皮膚。觀察呼吸情況，待自主呼吸后去除呼吸機。
[0063]結扎后第14天心臟超聲儀(Philips Sonos7500S4探頭)檢測，選用EF值在30-50%之間的大鼠隨機分組，每組12只。
[0064]2、冠脈結扎大鼠給藥、心超檢測
[0065]結扎后第15天稱重、給藥。“對照組”尾靜脈注射賦形劑，給藥體積為0.4ml/100g,每天I次，連續給藥5天,停藥2天,再連續給藥5天；“給藥組”尾靜脈注射神經調節蛋白，劑量為10 μ g/kg,給藥體積也為0.4ml/100g,每日I次,連續給藥5天,停藥2天,再連續給藥5天；“靜脈滴注給藥組”分組后第5天，做膠囊式滲透壓泵(ALZET2ML1)植入手術，泵中充入神經調節蛋白溶液2ml (含神經調節蛋白250 μ g，如果大鼠體重按照250g計算，給藥速度接近6 μ g/kgXh,達峰血藥濃度與給大鼠尾靜脈注射0.7 μ g/kg神經調節蛋白后相當)。給藥7天后，心超檢查。次日用生理記錄儀(ABinstruments powerlab4_25)做血流動力學檢查、心臟解剖學檢查。
[0066]2.1、膠囊式滲透壓泵(ALZET2ML1)裝藥并植入體內
[0067]在無菌操作臺內給每支(250 μ g)神經調節蛋白先注入Iml無菌注射用水，再注入Iml無菌生理鹽水，溶解后用無菌注射器抽取神經調節蛋白溶液，給注射器換上鈍頭注射針頭，排凈氣泡。取下膠囊式滲透壓泵的流量調節器并將泵直立，將注射針頭從泵的頂端小孔處插入至最底部，緩慢推入神經調節蛋白溶液，直至有溶液溢出小孔，拔出注射針頭，擦凈泵外周溶液。把流量調節 器上方的半透明蓋子去掉，露出一小段不銹鋼管，將長5cm的PE60管與之連緊。注射器吸取神經調節蛋白溶液，排凈氣泡，針頭與PE60管相連，充入藥物溶液至流量調節器滿為止。將流量調節器未與PE60管連接的一端插入泵中，至流量調節器的白色邊緣與泵貼緊為止，拔掉注射器及針頭。將連接好的泵浸入37°C的無菌生理鹽水中過夜，用前取出。
[0068]用氯胺酮麻醉大鼠，取仰臥位，頸部備皮并消毒，用滅菌鋪巾覆蓋大鼠身體。在頸前偏右側縱向切口，小心分離頸外靜脈，在遠心端結扎，穿雙線，用眼科剪在頸外靜脈上做一斜剪口，再用顯微鑷撐開切口，將連接了膠囊式滲透壓泵的PE60管插入約2cm，近心端扎緊，遠心端多處扎緊固定PE60管。然后自切口處向頸后外側鈍性分離一竇道至背部肩胛處，再鈍性分離一空間，將膠囊式滲透壓泵自竇道塞入背部肩胛處的空間內。縫合切口，并開始計時。待大鼠蘇醒后送其回鼠房，讓其自由進食水。[0069]
【權利要求】
1.一種預防、治療或延緩哺乳動物疾病的緩釋裝置，其中含有有效量的神經調節蛋白，并且將所述神經調節蛋白持續釋放到該哺乳動物體內，以達到比快速注射相同劑量神經調節蛋白更優的預防、治療或延緩該哺乳動物疾病的效果，其中所述持續釋放是指每天持續釋放至少4小時。
2.如權利要求1所述的裝置，其包含一個滲透壓泵。
3.如權利要求1所述的裝置，其包含一個微量注射泵。
4.如權利要求1所述的裝置，其中所述持續釋放是指每天連續釋放至少6小時。
5.如權利要求1所述的裝置，其中所述持續釋放是指每天連續釋放至少8小時。
6.如權利要求1所述的裝置，其中所述疾病選自心血管疾病、癌癥、神經系統疾病、肌肉疾病、肌肉萎縮癥(如杜興肌營養不良、肢帶型肌營養不良)、多發性硬化、脊髓損傷、中風、眼或耳疾病、糖尿病、精神分裂癥及老年性癡呆癥。
7.如權利要求1所述的裝置，其中所述疾病是心力衰竭。
8.如權利要求1所述的裝置，其中所述神經調節蛋白可為NRGl，NRG2，NRG3或NRG4的功能氨基酸片段，即含神經調節蛋白家族EGF類似區的任何氨基酸片段。
9.一種預防、治療或延緩哺乳動物疾病的緩釋組合物，其中含有有效量的神經調節蛋白，并且將所述神經調節蛋白持續釋放到該哺乳動物體內，以達到比快速注射相同劑量神經調節蛋白更優的預防 、治療或延緩該哺乳動物疾病的效果，其中所述持續釋放是指每天持續釋放至少4小時。
10.如權利要求9所述的組合物，其特征在于所述神經調節蛋白是與聚合物耦聯的或被脂質體或微球所包含的。
11.如權利要求10所述的組合物，其中所述聚合物是聚乙二醇和/或聚乙二醇衍生物。
12.如權利要求9所述的組合物，其中所述持續釋放是指每天連續釋放至少6小時。
13.如權利要求9所述的組合物，其中所述持續釋放是指每天連續釋放至少8小時。
14.如權利要求9所述的組合物，其所述疾病選自心血管疾病、癌癥、神經系統疾病、肌肉疾病、肌肉萎縮癥(如杜興肌營養不良、肢帶型肌營養不良)、多發性硬化、脊髓損傷、中風、眼或耳疾病、糖尿病、精神分裂癥及老年性癡呆癥。
15.如權利要求9所述的組合物，其所述疾病是心力衰竭。
16.如權利要求9所述的組合物，其中所述神經調節蛋白可為NRG1，NRG2，NRG3或NRG4的功能氨基酸片段，即含神經調節蛋白家族EGF類似區的任何氨基酸片段。
【文檔編號】A61P27/02GK103432681SQ201310348834
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2007年5月25日 優先權日:2007年5月25日
【發明者】周明東 申請人:上海澤生科技開發有限公司