一種甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝的制作方法
【專利摘要】一種甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于：將甘草酸與白蛋白在一定條件下反應，使甘草酸與白蛋白成功偶聯，通過透析的辦法將未與白蛋白偶聯的甘草酸去除，然后偶聯甘草酸的白蛋白溶液凍干，得到偶聯甘草酸的白蛋白凍干粉；將偶聯甘草酸的白蛋白以一定濃度溶于水中，羥基喜樹堿溶于氯仿乙醇的混合溶液中，將羥基喜樹堿溶液緩慢滴加到白蛋白溶液中，以一定的轉速和時間勻漿；將勻漿之后的混懸液在一定的壓力下均質一定的次數，得到水包油的乳液；將混懸液通過旋轉蒸發的方法去除有機溶劑：乙醇和氯仿，然后以凍干的方式去除混懸液中的水，得到甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉。
【專利說明】一種甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉及其制備工藝，特別涉及對肝癌的治療具有靶向性，載藥量高，平均粒徑小且分布均勻的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒的制備方法。
技術背景
[0002]甘草酸是甘草中最主要的活性成分。甘草酸具有保肝護肝的作用，因此常作為保肝成分添加在藥劑中，甘草酸能夠在肝臟大量聚積，國內研究表明，肝細胞表面存在甘草酸受體，而在肝腫瘤細胞表面甘草酸受體大量表達，表達量是正常肝細胞的1.5-5倍。因此，將甘草酸與載體偶聯則具有肝靶向性的可能。國內已有研究表明經甘草酸修飾的脂質體具有良好的趨肝性，甘草酸偶聯的白蛋白則能夠大量的被肝細胞吸收。因此，本發明以甘草酸偶聯的白蛋白作為載體，制 備了以羥基喜樹堿為模型藥物的肝癌靶向制劑。
[0003]輕基喜樹堿(hydroxycamptothein, HCPT)是從我國特有的珙桐科植物喜樹中提取出來的一種天然生物堿，是繼紫杉醇之后又一具有發展前途的抗癌藥物。羥基喜樹堿是喜樹堿的一種衍生物，作為拓撲異構酶I抑制劑，有效的干擾DNA的復制，從而達到抑制腫瘤的效果。羥基喜樹堿是一種廣譜的抗腫瘤藥物且與其他抗腫瘤藥物無交叉耐藥性，對原發性肝癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、頭頸部癌等惡性腫瘤有明顯療效。
[0004]羥基喜樹堿水溶性極差、見光易分解。臨床應用中，常將羥基喜樹堿內酯環打開制備羥基喜樹堿鈉鹽注射液。羥基喜樹堿鈉鹽具有良好的水溶性，但其半衰期短，且有較大的毒副作用包括骨髓抑制、腎毒性等。將羥基喜樹堿包被于白蛋白納米粒中，增強了羥基喜樹堿的水溶性、穩定性和長效性、抑瘤活性強、毒副作用大大降低，并且甘草酸偶聯的白蛋白包被的羥基喜樹堿具有優越的肝腫瘤細胞靶向性，為開發一種新型的肝癌靶向制劑提供了新的希望。
[0005]高壓均質法作為一種納米粒的制備方法具有能縮小制劑粒徑和獲得較窄且均勻粒徑分布的特點
[0006]目前已公開發表的文獻與專利與羥基喜樹堿納米粒制劑相關聯的有:專利CN01138252.X公布了羥基喜樹堿葡聚糖納米粒的制備方法，其制備思路為將羥基喜樹堿溶于堿性溶液中，在于葡聚糖經過反溶劑原理形成納米粒后，調節體系PH值至酸性，使羥基喜樹堿恢復內酯形態，但得到的納米粒粒徑分布寬。CN01133700.1公布了羥基喜樹堿聚乳酸納米粒的制備方法，制備思路為將羥基喜樹堿在堿性條件下制備成羧酸鹽以增加其水溶性，利用反溶劑的辦法制備出納米粒，該方法中羥基喜樹堿內酯環被打開，活性大大降低且具有較大的毒副作用，此外粒徑分布較寬。專利CN200710002545.6公布了羥基喜樹堿納米靶向制劑的制備方法，其原料包括明膠、叔丁醇、維生素、殼聚糖、羧甲基纖維素鈉和羥基喜樹堿，納米粒由于有殼聚糖正電性，易與負電性的腫瘤細胞發揮藥效，因此具有主動靶向性，但這種靶向性仍具有廣譜特征。專利CN200710036426.2公布了羥基喜樹堿長循環納米粒，其結構為羥基喜樹堿包封于丙交酯乙交酯共聚物PLGA中，表面在被覆表面活性劑和膜修飾材料。納米粒具有緩釋、毒性低、體內滯留時間長溶液相中穩定性高的特點，且粒徑小，但不具備主動靶向性。專利CN201110135725.8公布了羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法，以生物可降解的材料作為藥物載體，制備的納米粒具有緩釋長效的作用，但納米粒不具有主動靶向性，且聚合物作為載體材料生物兼容性差。
[0007]本發明為了克服以上方法的不足，以具有肝靶向性的甘草酸與生物大分子白蛋白偶聯，以此作為藥物載體，利用高壓均質乳化法制備了甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒。
【發明內容】
[0008]本發明涉及一種納米肝癌靶向制劑的制備方法，特別涉及甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備方法。
[0009]本發明所采用的技術方案是:首先，將甘草酸與白蛋白在一定條件下反應，使甘草酸與白蛋白成功偶聯，通過透析的辦法將未與白蛋白偶聯的甘草酸去除，然后偶聯甘草酸的白蛋白溶液凍干，得到偶聯甘草酸的白蛋白凍干粉；然后，將偶聯甘草酸的白蛋白以一定濃度溶于水中，羥基喜樹堿溶于氯仿乙醇的混合溶液中，將羥喜溶液緩慢滴加到白蛋白溶液中，以一定的轉速和時間勻漿；將勻漿之后的混懸液在一定的壓力下均質一定的次數，得到水包油的乳液；將混懸液通過旋轉蒸發的方法去除有機溶劑:乙醇和氯仿，然后以凍干的方式去除混懸液中的水，得到甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉。
[0010]本方法的優點在于
[0011](I)所得甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉具有主動的肝癌靶向性，載藥量高，平均粒徑小且分布均勻。
[0012](2)生產成本低，易 于產業化。
具體實施方案
[0013]下面對本發明的實施例作進一步詳細描述:首先，將甘草酸與白蛋白在一定條件下反應，使甘草酸與白蛋白成功偶聯，通過透析的辦法將未與白蛋白偶聯的甘草酸去除，然后偶聯甘草酸的白蛋白溶液凍干，得到偶聯甘草酸的白蛋白凍干粉；然后，將偶聯甘草酸的白蛋白以一定濃度溶于水中，羥基喜樹堿溶于氯仿乙醇的混合溶液中，將羥喜溶液緩慢滴加到白蛋白溶液中，以一定的轉速和時間勻衆；將勻衆之后的混懸液在一定的壓力下均質一定的次數，得到水包油的乳液；將混懸液通過旋轉蒸發的方法去除有機溶劑:乙醇和氯仿，然后以凍干的方式去除混懸液中的水，得到甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉。
[0014]所述的與甘草酸偶聯的白蛋白可以使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、重組白蛋白等，優選牛血清白蛋白。
[0015]所述的反應前甘草酸偶聯的白蛋白濃度范圍為0.5?4mg/mL，優選濃度為Img/
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[0016]所述的用于溶解羥基喜樹堿的溶劑為氯仿與乙醇的混合溶劑，其中氯仿與乙醇的體積比范圍為5:5?9:1，優選體積比為:7:3。[0017]所述的溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相的體積比范圍為5:1?33:1，優選體積比為13:1。
[0018]所述的溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相發生乳化的過程中，勻漿速度的范圍為5000?15000rpm，優選勻漿轉速為5000rpm。
[0019]所述的溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相發生乳化的過程中，勻漿時間的范圍為I?12min，優選勻漿時間為lmin。
[0020]所述的溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相進一步的乳化過程中，均質壓力的范圍為400?1200bar，優選均質壓力為800bar。
[0021 ] 所述的溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相進一步的乳化過程中，均質次數的范圍為3?15次,優選均質次數為7次。
[0022]實例1:
[0023]將60mg偶聯甘草酸的白蛋白溶解于60mL水中，將7.4mg羥基喜樹堿溶于2.4mL氯仿-無水乙醇溶液中，超聲5分鐘,將白蛋白水溶液置于勻衆器轉頭下,勻衆轉速5000rpm,滴加溶有輕基喜樹堿的有機相，滴加完之后勻衆I分鐘，將勻衆后的體系轉移到均質機中，在SOObar壓力下均質7次，得到半透明有淡黃色乳光的體系。通過旋轉蒸發的辦法除去有機相，得到的水分散液再經冷凍干燥得到甘草酸偶聯的白蛋白包載的羥基喜樹堿納米粒凍干粉。納米粒平均粒徑低于200nm，包封率和載藥量為96.7%和10.6%。
[0024]實例2:
[0025]將SOmg偶聯甘草酸的白蛋白溶解于SOmL水中，將9.6mg羥基喜樹堿溶于3.2mL氯仿-無水乙醇溶液中，超聲10分鐘,將白蛋白水溶液置于勻衆器轉頭下，勻衆轉速5000rpm,滴加溶有輕基喜樹堿的有機相，滴加完之后勻衆I分鐘，將勻衆后的體系轉移到均質機中，在SOObar壓力下均質7次，得到半透明有淡黃色乳光的體系。通過旋轉蒸發的辦法除去有機相，得到的水分散液再經冷凍干燥得到甘草酸偶聯的白蛋白`包載的羥基喜樹堿納米粒凍干粉。納米粒平均粒徑低于200nm，包封率和載藥量為93.1%和9.97%。
【權利要求】
1.一種甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝:首先，將甘草酸與白蛋白在一定條件下反應，使甘草酸與白蛋白成功偶聯，通過透析的辦法將未與白蛋白偶聯的甘草酸去除，然后偶聯甘草酸的白蛋白溶液凍干，得到偶聯甘草酸的白蛋白凍干粉；然后，將偶聯甘草酸的白蛋白以一定濃度溶于水中，羥基喜樹堿溶于氯仿乙醇的混合溶液中，將羥喜溶液緩慢滴加到白蛋白溶液中，以一定的轉速和時間勻漿；將勻漿之后的混懸液在一定的壓力下均質一定的次數，得到水包油的乳液；將混懸液通過旋轉蒸發的方法去除有機溶劑:乙醇和氯仿，然后以凍干的方式去除混懸液中的水，得到甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉。
2.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，與甘草酸偶聯的白蛋白可以使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、重組白蛋白等，優選牛血清白蛋白。
3.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，反應前甘草酸偶聯的白蛋白濃度范圍為0.5?4mg/mL，優選濃度為lmg/mL0
4.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，用于溶解羥基喜樹堿的溶劑為氯仿與乙醇的混合溶劑，其中氯仿與乙醇的體積比范圍為5:5?9:1，優選體積比為:7:3。
5.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，白蛋白與羥基喜樹堿反應時，溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相的體積比范圍為5:1?33:1，優選體積比為13:1。
6.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相發生乳化的過程中，勻漿速度的范圍為5000?15000rpm，優選勻漿轉速為5000rpm。`
7.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相發生乳化的過程中，勻漿時間的范圍為I?12min，優選勻漿時間為lmin。
8.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相進一步的乳化過程中，均質壓力的范圍為400?1200bar,優選均質壓力為800bar。
9.按照權利要求1所述的甘草酸介導的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向納米粒凍干粉的制備工藝，其特征在于，溶解白蛋白的水相與溶解羥基喜樹堿的有機相進一步的乳化過程中，均質次數的范圍為3?15次，優選均質次數為7次。
【文檔編號】A61P35/00GK103432083SQ201310136847
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年4月19日 優先權日:2013年4月19日
【發明者】祖元剛, 趙修華, 孟麗, 葛云龍, 張印, 鄧怡平 申請人:東北林業大學, 祖元剛