專利名稱：銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一定濃度的銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途。
背景技術：
創面愈合是指由于致傷因子的作用造成組織缺失后，局部組織通過再生、修復、重建，進行修補的一系列病理生理過程，是炎癥細胞如巨噬細胞、中性粒細胞以及修復細胞如成纖維細胞、表皮細胞等的一系列生物學活動，如皮膚表皮細胞遷移和增殖。從創面形成后機體首先啟動凝血機制；凝血過程結束后進入炎癥期，由于局部血管的收縮，導致局部組織缺血，引起組織胺和其他血管活性物質的釋放，使創面局部的血管擴張；同時，因壞死組織以及可能的致病微生物的存在，引發機體的防御反應(炎癥反應)。創面形成后2-24天，表皮基底細胞開始增生，刺激創面基底部毛細血管和結締組織的反應性增生，隨后刺激肉芽組織生長，同時，巨噬細胞釋放的生長因子如血小板衍生生長因子(PDGF)，轉化生長因子β (TGFβ )和轉化生長因子a (TGFa )等，加速肉芽組織的形成，創面組織的缺失被填充，表皮細胞便從創面周緣向中心遷移，最終使得創面得以完全被再生的上皮細胞覆蓋。銀是滅菌作用最強的金屬，是制備抗菌材料的最佳選擇，銀對細菌、真菌和霉菌等都有很強的殺滅作用，用銀處理創面早在公元前就有記載。目前市面上的含銀制劑主要有銀離子、磺胺嘧啶銀、磺胺嘧啶銀/洗必泰、含硝酸鈰的磺胺嘧啶銀、納米銀敷料等，但它們均主要用于殺菌。硝酸銀的臨床標準濃度為0.5%(0.045mol/L)，是治療燒傷創面最常用的銀鹽溶液，超過l%(0.09mol/L)則對組織有毒性，會明顯抑制表皮細胞再生，而硝酸根對創面、細胞有毒性，在某 種程度上，會降低銀離子的抗菌作用而抑制愈合。銀離子制劑不穩定，當遇光會產生黑色沉淀。硝酸銀和磺胺嘧啶銀的應用中觀察到銀釋放的濃度達到3200ppm(0.0288mol/L),從磺胺卩密唳銀中釋放比從硝酸銀中釋放更慢,硝酸銀作用后會立即釋放大量的銀離子，在2小時內形成氯化銀，因此要頻繁換藥。燒傷科，通常磺胺嘧啶銀一天換2次，硝酸銀換藥次數一天達到12次。在磷酸鹽緩沖液中，銀的最低活性濃度是
0.05ppm(4.6X 10_7mOl/L)，營養肉湯和血漿會降低銀的功效。在復雜的有機物體液中，濃度在50-60.5ppm (4.6-5.6 X 10_4mol/L)，銀復合物如磺胺嘧啶銀會抑制創面愈合，且銀有很強的細胞毒性。0.5%的銀離子制劑具有抗菌收斂作用。目前市面上的銀離子制劑主要用于防止燒傷創面的淺Ir感染，銀離子明膠劑幾年前就已經上市，其硝酸銀含量為1%，該藥不僅能抑制細菌，還能促進表皮細胞生長，但銀離子明膠劑促進創面愈合的原因可能與其中含有大量甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸有關。銀離子制劑具有促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的作用繼而在防止感染的同時加速創面愈合尚未見報道。本發明申請人發現了銀離子制劑在低濃度作用下可促進人表皮細胞遷移和增殖，加速皮膚創面的愈合，其作用濃度比市面上已有銀離子產品低，大大降低了銀離子對機體組織細胞的毒性，同時保留了促進創面愈合和抗感染的作用。
發明內容
針對上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途，繼而使銀離子制劑在有效防止感染的同時加速創面愈合。為實現上述目的，本發明采取如下措施:本發明提供銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途。本發明所述銀離子制劑可以是由硝酸銀粉末和藥學上可接受的載體組成的溶液、明膠、軟膏、霜劑、粉劑或水凝膠等。優選地，本發明所述銀離子制劑為由硝酸銀粉末和藥學上可接受的載體組成的溶液或水凝膠。優選地，本發明所述銀離子制劑中銀離子濃度為10_6 10_4mol/L。本發明對所述銀離子制劑進行了細胞水平實驗和小鼠動物實驗，證實所述10_6 10_4mOl/L銀離子制劑具有促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的作用，在有效防止感染的同時可加速創面愈合。本發明所述的銀離子制劑具有促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的作用，繼而在有效防止感染的同時加速創面愈合。本發明所述的銀離子制劑比市售銀制劑的作用濃度更低，毒性更低，對表皮細胞的多種生物學活動具有促進作用。
圖1是10_6 10_4mol/L銀離子溶液對人表皮細胞株遷移的影響。圖2是Omol/L銀離子溶液對人表皮細胞株遷移的影響。圖3是1(Γ6 l(T4mol/L銀離子溶液對人表皮細胞株增殖的影響。圖4是10_6 10_4mol/L銀離子溶液對小鼠皮膚創面愈合的影響。圖5是Omol/L銀離子溶液對小鼠皮膚創面愈合的影響。圖6是10_6 10_4mol/L銀離子水凝膠對小鼠皮膚創面愈合的影響。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明的發明內容作進一步的詳細描述。應理解，本發明的實施例只用于說明本發明而非限制本發明，在不脫離本發明技術思想的情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段，做出的各種替換和變更，均應包括在本發明的范圍內。實施例1銀離子制劑的制備方法(1)銀離子溶液:采用蒸餾水或雙蒸水等將硝酸銀粉末配制成銀離子濃度為10_6 10_4mol/L的硝酸銀溶液。(2)銀離子水凝膠:稱取聚乙烯醇(PVA)，量取去離子水，把PVA在攪拌條件下，置85°C恒溫油浴中溶解完全，放入_20°C的冰箱里，冷凍24h，在室溫下解凍，稱一次冷凍融溶循環，待PVA溶解后，加入硝酸銀溶液，其中硝酸銀溶液由硝酸銀粉末溶解于蒸餾水或雙蒸水中配制而成，再采用相同的冷凍融溶方法循環5次，最終得到銀離子濃度為10_6 10_4mol/L的硝酸銀水凝膠。
實施例2銀離子溶液促進人表皮細胞株的遷移功能收集人表皮細胞株，用RPMI1640培養液重懸，調整細胞濃度為2 X IO5個/ml，把細胞懸液接種于12孔板中，每孔1ml，將細胞置于37°C、5%C02培養箱中培養，待細胞完全貼壁，以含終濃度3 μ g/ml絲裂霉素的培養液中培養24h后，用I μ I槍頭在培養孔底部劃痕，用PBS清洗2次；實驗分為實驗組和對照組，實驗組加入含10_6 10_4mol/L銀離子溶液的培養液，對照組加入RPMI1640培養液，實驗組和對照組各做3個復孔，將細胞放入培養箱中，分別于劃痕Oh、劃痕后6h、12h、24h、36h、48h觀察拍照。實驗結果如圖1、圖2所示，其中圖1是10_6 10_4mol/L銀離子溶液實驗組，圖2是RPMI1640培養液(Omol/L銀離子溶液)對照組。10_6 10_4mol/L銀離子溶液作用細胞6h后，實驗組細胞遷移的速度明顯加快，促細胞遷移的能力與對照組比較有明顯的差異，表明10_6 10_4mol/L銀離子溶液對人表皮細胞株的遷移有明顯的促進作用。實施例3銀離子溶液促進人表皮細胞株的增殖反應收集人表皮細胞株，用含10%新生小牛血清的無鈣改良RPMI1640培養液吹打制成單個細胞懸液，將細胞濃度調整為I X IO4個/ml細胞，取200 μ I加入96孔板中，將實驗分為實驗組1、實驗組2和對照組，實驗組加入10_6 10_4mol/L的銀離子溶液，每24h更換相應濃度藥物的培養液。細胞貼壁后立即進行第一次光吸收值測量，即為原始細胞基數值。以后分別在24h、36h、48h、72h、84h、96h每孔加入5mg/ml的MTT溶液20 μ 1，37°C孵箱中繼續孵育4h，終止培養，吸棄上清液，PBS漂洗3次，加入150 μ I DMSO (二甲基亞砜)，振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。然后在酶聯免疫檢測儀上選擇490nm波長，分組測定各孔光吸收值。實驗均獨立重復3次，每組共計測量9孔，結果取均數，以時間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細胞生長曲線。實驗結果如圖3所示，實驗組細胞生長明顯加快，促細胞增殖的能力與對照組比較有明顯的促進作用，表明10_6 10_4mol/L銀離子溶液對人表皮細胞株增殖有明顯的促進作用。實施例4銀離子溶液加速小鼠全層皮膚缺損創面愈合選取雄性BALB/C小鼠10只，體重25g，分為對照組和實驗組，每組各5只，將小鼠背部皮膚去毛，用4_打孔器平行打2個孔，立即照相，為O天照片，對照組將浸泡于蒸餾水中的敷料放于創面，實驗組將浸泡于實施例1制備的10_6 10_4mol/L銀離子溶液中的敷料放于創面，隔天換藥并照相。 實驗結果如圖4、圖5所示，其中圖4是10_6 10_4mol/L銀離子溶液實驗組于O天、6天、11天拍攝的照片，圖5是蒸懼水(Omol/L銀離子溶液)對照組于O天、6天、11天拍攝的照片。由圖4和圖5可知，10_6 10_4mol/L銀離子溶液敷料作用于小鼠創面6h后,傷口愈合的程度與對照組比較有明顯的差異，繼續作用至24h后，實驗組小鼠創面已基本愈合，表明浸泡于10_6 10_4mol/L銀離子溶液中的敷料在有效防止感染的同時加速創面愈合。實施例5銀離子水凝膠加速小鼠全層皮膚缺損創面愈合選取雄性BALB/C小鼠5只，體重25g，將小鼠背部皮膚去毛，用4.5mm打孔器平行脊柱左右打2個孔，左 邊創面為實驗組，右邊創面為對照組，立即照相，為O天照片，對照組將浸泡于Omol/L銀離子水凝膠中的敷料放于右邊創面，其中Omol/L銀離子水凝膠由實施例I所述銀離子水凝膠的制備方法獲得，不同之處在于所得水凝膠中不含銀離子；實驗組將浸泡于實施例1制備的10_6 10_4mol/L銀離子水凝膠中的敷料放于左邊創面，隔天換藥并照相。實驗結果如圖6所示，圖6是實驗組和對照組于O天、6天、10天拍攝的照片，左邊創面是實驗組，右邊創面是對照組。由圖6可知，浸泡于10_6 10_4mol/L銀離子水凝膠中的敷料作用于小鼠創面6天后，傷口愈合的程度與對照組比較有明顯的差異，繼續作用至10天后，實驗組小鼠創面已基本愈合，表明浸泡于10_6 10_4mol/L銀離子水凝膠中的敷料在有效防止感染的同時加速創面愈合。由以上實驗結果可知，本發明所述含銀離子濃度為10_6 10_4mol/L的銀離子制劑可在有效防止感染的同時加 速創面愈合。
權利要求
1.銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述的銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途，其特征在于:所述銀離子制劑為由硝酸銀粉末和藥學上可接受的載體組成的溶液或水凝膠。
3.根據權利要求1或2所述的銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途，其特征在于:所述銀離子制劑 中銀離子濃度為10_6 10_4mol/L。
全文摘要
本發明涉及銀離子制劑在制備促進皮膚表皮細胞遷移和增殖的藥物中的用途，即銀離子制劑可促進皮膚表皮細胞遷移和增殖，繼而在有效防止感染的同時加速創面愈合。本發明所述銀離子制劑為由硝酸銀粉末和藥學上可接受的載體組成的溶液或水凝膠，所述銀離子制劑中銀離子濃度為10-6～10-4mol/L。本發明所述的銀離子制劑比市售銀制劑的作用濃度更低，毒性更低。
文檔編號A61K33/38GK103191150SQ20131013167
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月16日 優先權日2013年4月16日
發明者彭代智, 劉小玲, 何傳果 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院