專利名稱：一種小牛血去蛋白提取物的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。
背景技術：
牛血去蛋白提取物，是由小牛血中分離得到的一組小分子生物活性物質，含有寡糖、核酸衍生物、氨基酸和小分子肽類等有機物和磷、鈣等無機物。小牛血去蛋白提取物能改善氧和葡萄糖的吸收及利用(不依賴于胰島素)，從而提高ATP的周轉，為細胞提供較高的能量。在腦功能降低(低血氧)和能量需求增加(修復，再生)等情況下，本品可增進與能量有關的功能代謝，保持細胞功能，促使供血量增加。適用于腦卒中、腦外傷。周圍血管病及腿部潰瘍。可用于皮移植、燒傷、燙傷、糜爛、創傷、褥瘡的傷口愈合，放射所引起的皮膚、黏膜損傷。小牛血去蛋白提取物現行的提取方法大致有以下幾種工藝方法，一類是較早期工藝路線，在提取工藝中的步驟中使用蛋白酶類，目的是將大分子蛋白水解成小分子肽類，這種工藝雖然可以提高小分子肽的含量，但缺點是，原有的天然小分子肽類也會被酶破壞，降低或是去除原有的生物活性 ，如國內發明專利CN100374123C、和CN1062135C等，另一類是在分離提取工藝中采用PH值調酸、調堿的方式，利用酸和堿使大分子蛋白變性而去除，再采用超濾法進行分子分級而獲得小分子物質，此種工藝的缺點是調酸、調堿過程引入了較多的外源性無機離子，如國內發明專利CN101366727B等。
發明內容
本發明是要解決現有方法會破壞小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工藝中引入不必要的外源性無機離子的問題，提供了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。本發明一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min,在3000轉/分鐘的條件下離心15 20min,收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至0 30°C，裝入容器中，置于-20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 400C的水浴中融化，然后在14000轉/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對步驟二得到的上清液進行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液，經0.22 y m濾膜除菌過濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。本發明在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，保留原有生物活性。同時，在提取工藝中不添加任何化學物質，又克服了引入不必要的外源性無機離子，而且工藝簡單，易于生產化。
具體實施例方式具體實施方式
一:本實施方式一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min，在3000轉/分鐘的條件下離心15 20min，收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對步驟二得到的上清液進行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進行濃縮，濃縮至原體積的20 %，收集濃縮液，經0.22 μ m濾膜除菌過濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。本實施方式在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，保留原有生物活性。同時，在提取工藝中不添加任何化學物質，又克服了引入不必要的外源性無機離子，而且工藝簡單，易于生產化。
具體實施方式
二:本實施方式與具體實施方式
一的不同的是:步驟一中攪拌25min。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三:本實施方式與具體實施方式
一或二的不同的是:步驟一中在3000轉/分鐘的條件下離心18min。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四:本實施方式與具體實施方式
一至三之一的不同的是:步驟二中在14000轉/分鐘的條件下離心8min。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五:本實施方式與具體實施方式
一至四之一的不同的是:小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物灌裝于安瓿中，經濕熱滅菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。其它與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六:本實施方式與具體實施方式
一至五之一的不同點是:小牛血去蛋白提取物溶液制成片劑，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物溶液經過減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉為主藥，以淀粉、蔗糖和硬脂酸鎂為輔料；其中小牛血去蛋白提取物粉:淀粉:蔗糖:硬脂酸鎂的比例為1.8: 1.0: 1.0: 0.4。其它與具體實施方式
一至五之一相同。通過以下試驗驗證本發明的有益效果:試驗1、本試驗一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進行:一、制備小牛血清:取檢疫合格的小牛血1000L，攪拌25min，在3000轉/分鐘的條件下離心ISmin,收集上清液，即得小牛血清920L ;二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉/分鐘的條件下離心8min，收集上清液900L ;三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對步驟二得到的上清液進行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液700L ;四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液140L，經0.22 μ m濾膜除菌過濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
對本試驗制備的小牛血去蛋白提取物溶液進行檢驗，結果顯示本試驗制備的小牛血去蛋白提取物溶液總固體物含量為5.5%。游離氨基酸含量為每Iml中含1.2mg，符合現有國家標準。試驗2、本試驗一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進行:一、制備小牛血清:取檢疫合格的小牛血1000L，攪拌30min，在3000轉/分鐘的條件下離心20min,收集上清液，即得小牛血清920L ;二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至0 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉/分鐘的條件下離心lOmin，收集上清液900L ;三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對步驟二得到的上清液進行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液700L ;四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液140L，經0.22 y m濾膜除菌過濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。將本試驗制得的140L小牛血去蛋白提取物溶液，放入減壓干燥機中，在溫度不超過60°C的情況下減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉8.08公斤(含水5% )。處方:
權利要求
1.一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物的制備方法按以下步驟進行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min，在3000轉/分鐘的條件下離心15 20min，收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對步驟二得到的上清液進行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進行濃縮，濃縮至原體積的20 %，收集濃縮液，經0.22 μ m濾膜除菌過濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
2.根據權利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟一中攬拌25min。
3.根據權利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟一中在3000轉/分鐘的條件下離心18min。
4.根據權利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟二中在14000轉/分鐘的條件下離心8min。
5.根據權利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物灌裝于安瓿瓶中，經濕熱滅菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。
6.根據權利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成片劑，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物溶液經過減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉為主藥，以淀粉、蔗糖和硬脂酸鎂為輔料；其中小牛血去蛋白提取物粉 :淀粉:蔗糖:硬脂酸鎂的比例為1.8: 1.0: 1.0: 0.4。
全文摘要
一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，它涉及一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。本發明是要解決現有方法會破壞小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工藝中引入不必要的外源性無機離子的問題，方法為一、制備小牛血清；二、熱處理；三、超濾；四、納濾濃縮。本發明在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，同時，在提取工藝中不添加任何化學物質，又克服了引入不必要的外源性無機離子，而且工藝簡單，易于生產化。本發明應用于制藥領域。
文檔編號A61K9/20GK103191151SQ20131011333
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月2日 優先權日2013年4月2日
發明者董繼勝, 王金富, 馮文善, 李永久, 趙波 申請人:黑龍江迪龍制藥有限公司