專利名稱：一種低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥物組合物和其制備方法與應用的制作方法
一種低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥物組合物和其制備方法與應用技術領域
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種具有抗凝活性的低分子量巖藻糖化糖胺聚糖衍生物(derivate of Low molecular weight FucosylatedGlycosaminoglycan, dLFG),其制備方法,含有所述dLFG或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，以及dLFG及其藥物組合物在制備血栓性疾病治療藥物中的應用。
背景技術：
包括缺血性卒中、冠心病、靜脈血栓栓塞等疾病在內的血栓栓塞性疾病是人類主要的致死性病因。抗血栓藥物治療是臨床預防和治療血栓性疾病的基礎手段，但是，包括纖溶、抗凝、抗血小板藥物在 內的抗血栓藥物均存在主要和共性的缺陷:出血傾向和嚴重出血危險。
經典抗凝藥物肝素(f.1la/Xa抑制劑)及香豆素類抗凝藥(VitK拮抗劑)于上世紀三四十代應用于臨床，70多年來一直是深靜脈血栓、心源性卒中以及術后抗凝的藥物治療的基石，但是出血危險以及與之相關的藥效/藥代動力學缺陷嚴重限制了它們的臨床應用。肝素、香豆素類藥物均廣泛抑制凝血瀑布中的絲氨酸蛋白酶(凝血因子)，藥效個體差異較大且藥效影響因素復雜，臨床用藥需要進行持續監測。幾十年來，抗凝藥物研發的主要途徑和目標之一是提高新藥的藥理學作用靶點的選擇性、改善藥物藥效、藥代動力學特征，這些研究業已取得積極進展:其中低分子肝素(LMWH)如依諾肝素以及口服抗凝藥利伐沙班、達比加群的臨床應用最具代表性。但臨床上對于低出血傾向的新型抗凝藥仍存在巨大需求。
巖藻糖化糖胺聚糖(Fucosylated glycosaminoglycan, FGAG)是一種源于棘皮動物海參的體壁或內臟的糖胺聚糖類似物=FGAG具有類似硫酸軟骨素的主鏈，其主鏈由己糖醛酸、氨基己糖構成的二糖結構單元[—4)D-GlcUA(β I — 3)D-GalNAc(i3 I —]順次連接形成；FGAG的主鏈上存在巖藻糖基側鏈取代，一般認為，此側鏈硫酸巖藻糖以(α I — 3)糖苷鍵連接于D-GlcUA ;FGAG主鏈及側鏈糖羥基均可存在硫酸酯化(Yoshida et.al, Tetrahedron Lett, 1992，33:4959-4962 ; Mourao et.al, J BiolChem, 1996，271:23973-23984)。
天然來源的FGAG均具有顯著的抗凝血活性(Mmin'U! et al., ThrombRes, 2001, 102:167-176; Mourao et.al, J Biol Chem, 1996，271:23973-23984)，其抗凝活性涉及多個凝血因子靶點，其中以抑制內源性因子X酶(f.Xase, Tenase)活性最強(Sheehan&ffalke, Blood, 2006，107:3876-3882 ；Buyue&Sheehan, Blood, 2009，114:3092-3100)。除抗凝活性外，FGAG還存在較廣泛的藥理活性,如抗炎、抗腫瘤、纖溶、調血脂活性等(Tovar etal., Atherosclerosis, 1996，126:185-195;Kariya et al., J Biochem, 2002, 132(2):335-343; Borsig et al., J Biol Chem, 2007，282 (20): 14984-14991)，并且具有與抗凝活性矛盾的血小板活化及 f.XII 激活活性(Li et a 1.，Thromb Haemost, 1988, 59(3): 435-439; Fonseca et a 1., Thromb Haemost, 2010，103 (5): 994-1004),廣泛的藥理學作用限制了 FGAG 的實際應用。
FGAG的結構修飾是提高其潛在應用價值的途徑之一，例如制備其低聚產物，其目的是在保留抗凝活性的基礎上，降低其血小板及表面激活活性。中國專利公開號為CN101735336A和CN101724086A公開了制備低聚巖藻糖化糖胺聚糖的方法，通過在水相介質中用第四周期過渡金屬離子催化的過氧化物解聚法解聚巖藻糖化糖胺聚糖制備得到了低聚產物，該產物是內源性因子X酶的強效抑制劑，具有良好的抗凝抗血栓活性，出血傾向顯著降低，可用于預防和/或治療血栓性疾病。歐洲專利EP 0811635A1和EP 0408770A1對原型FGAG進行過氧化氫解聚獲得了分子量范圍分別為3，000 80，000、3，000 42，000的解聚產物，這些產物可以用于血管內膜增生以及血栓形成性疾病的防治。這些專利申請均采用過氧化物解聚法獲得FGAG的低聚產物。過氧化解聚法的優點在于，在降低多糖分子量的同時可較好地保持FGAG特征化學結構及抗凝活性，其缺點則在于產物解聚程度難以控制，反應產物一般需要連續取樣檢測，以確認反應是否終止的時間點。非還原性末端具有Λ4，5不飽和鍵的巖藻糖化糖胺聚糖衍生物迄今未見報道。發明內容
本發明的目的在于提供一種具有抗凝活性的低分子量巖藻糖化糖胺聚糖衍生物(derivate of Low molecular weight Fucosylated Glycosaminoglycan, dLFG),其制備方法，含有所述dLFG或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，以及dLFG及其藥物組合物在制備血栓性疾病治療藥物中的應用。
為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案:
本發明首先是提供一種低分子量巖藻糖化糖胺聚糖衍生物(dLFG)及其藥學上可接受的鹽。所述dLFG的組成單糖包括己糖醛酸、氨基己糖，脫氧己糖以及這些單糖的硫酸酯。其中，所述己糖醛酸為D-葡萄糖醛酸(D-GlcUA)及Λ4’5-己糖醛酸(4-脫氧-threo-己-4-烯吡喃糖醛酸，AUA)，所述氨基己糖為D-乙酰氨基半乳糖(2-N-乙酰基氨基_2_脫氧-D-半乳糖，D-GalNAc)或其端基還原廣物，所述脫氧己糖為L-巖操糖(L-Fuc)。
以摩爾比計，所 述dLFG的單糖及-0S03 —的組成比例范圍是，己糖醛酸:氨基己糖:脫氧己糖:硫酸酯基=1:(1 ±0.3): (I ±0.3):(3.0± 1.0)。一般來說，在本發明所述dLFG所含的己糖醛酸中，以摩爾比計，AUA所占的百分比不低于2.5%。
本發明所述dLFG的分子量可采用高效凝膠滲透色譜儀與激光小角光散射儀聯機(HPGPC-LALLS)檢測和標定；采用已標定分子量的系列dLFG為標準品制作標準曲線，聯用紫外檢測器(UVD)和/或示差檢測器(RID)的高效凝膠色譜法(HPGPC)可常規檢測所述dLFG的分子量。
以重均分子量(Mw)計，本發明所述dLFG的分子量范圍為3kD 20kD ;本發明優選實施方案中，所述dLFG的Mw范圍為約5kD 12kD。
本發明所述dLFG的多分散指數(polydispersityindex, F1DI) —般介于1.0 1.8之間，所謂PDI是指所述dLFG的重均分子量Mw與數均分子量Mn的比值。在本發明優選實施方案中，所述dLFG的PDI值介于1.1 1.5之間。
進一步地，本發明所述低分子量糖胺聚糖衍生物是具有式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，
權利要求
1.一種低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽，其中: 所述低分子量糖胺聚糖衍生物的組成單糖包括己糖醛酸、氨基己糖，脫氧己糖以及這些單糖的硫酸酯，其中，所述己糖醛酸為D-葡萄糖醛酸及Λ4’5-己糖醛酸(4-脫氧-threo-己-4-烯吡喃糖醛酸)，所述氨基己糖為乙酰氨基半乳糖(2-N-乙酰基氨基_2_脫氧-D-半乳糖)或其端基還原廣物，所述脫氧己糖為L-巖操糖； 以摩爾比計，所述低分子量糖胺聚糖衍生物中的單糖及-oso3—的組成比例范圍是，己糖醛酸:氨基己糖:脫氧己糖:硫酸酯基=1:(1±0.3):(1±0.3):(3.0±1.0);其所含己糖醛酸中，以摩爾比計，Λ4’5-己糖醛酸占全部己糖醛酸的百分比不低于2.5% ； 所述低分子量糖胺聚糖衍生物的重均分子量Mw范圍為3kD 20kD ； 所述低分子量糖胺聚糖衍生物的多分散指數介于1.0至1.8之間。
2.如權利要求1所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述低分子量糖胺聚糖衍生物是具有式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，
3.如權利要求1或2所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述的低分子量糖胺聚糖衍生物的重均分子量范圍為5kD 12kD ;所述的低分子量糖胺聚糖衍生物的多分散指數值介于1.1至1.5之間。
4.如權利要求1或2或3所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述的低分子量糖胺聚糖衍生物是棘皮動物門海參綱動物體壁和/或內臟來源的巖藻糖化糖胺聚糖的β -消除法解聚產物，以及解聚產物的還原性末端的還原衍生化產物。
5.如權利要求4所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述的棘皮動物門海參綱動物包括但不限于: 仿刺參 Apostichopus japonicus; 白底福肛參 Actinopyga mauritiana; 烏皺福肛參 Actinopyga miliaris; 海地瓜 Acaudina molpadioides; 蛇目白尼參 Bohadschia argus; 紅腹海參 Holothuria edulis; 黑乳海參 Holothuria nobilis;玉足海參 Holothuria Ieucospilota ； 中華海參 Holothuria sinica; 蕩皮海參 Holothuria vagabunda ； 美國肉參 Isostichopus badionotus ；巴西參 Ludwigothurea grisea ； 綠剌參 Stichopus chloronotus; 梅花參Thelenota ananas ； 巨梅花參Thelenota anaxo
6.如權利要求1或2所述的低分子量糖胺聚糖藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述的藥學上可接受的鹽是低分子量糖胺聚糖衍生物的堿金屬、堿土金屬鹽及有機銨鹽。
7.如權利要求6所述的低分子量糖胺聚糖衍生物的藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述的藥學上可接受的鹽是低分子量糖胺聚糖衍生物的鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。
8.權利要求1所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽的制備方法，包括如下步驟: (1)以棘皮動物來源的巖藻糖化糖胺聚糖為原料，通過酯化反應其所含己糖醛酸上的游離羧基全部或部分地轉化為羧酸酯基，獲得羧酸酯化物； (2)步驟(I)所得羧酸酯化物在非水溶劑中，在堿性試劑存在下，通過酯基β_消除反應獲得低分子量糖胺聚糖衍生物； (3)步驟(2)所得低分子量糖胺聚糖衍生物，進行還原性末端的還原處理，獲得末端還原的低分子量糖胺聚糖衍生物； (4)步驟(2)和步驟(3)所得低分子量糖胺聚糖衍生物通過堿解法將羧酸酯基轉變為游離羧基。
9.如權利要求8所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)包括: (i)將棘皮動物來源的巖藻 糖化糖胺聚糖轉化為季銨鹽； ( )將(i)所得季銨鹽在非質子化溶劑系統中與鹵代烴、鹵代芳烴反應生成羧基被完全或部分酯化的衍生物。
10.如權利要求8所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽的制備方法，其特征在于，其步驟(2)所述非水溶劑任選乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、CH2Cl2XHCl3其一或者它們的混合溶劑；所述堿性試劑任選Na0H、K0H、Cl-C4醇鈉、乙二胺、三正丁胺、4-二甲氨基吡啶其一或者它們的混合物。
11.如權利要求8所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽的制備方法，其特征在于，其步驟(3)所述末端還原處理是將還原性末端的糖基還原成糖醇、糖醚、糖酯、芳族和/或雜環取代衍生物。
12.如權利要求8所述的低分子量糖胺聚糖衍生物及其藥學上可接受的鹽的制備方法，其特征在于，其步驟(3)所述末端還原處理是通過還原性末端的還原氨基化反應形成含氮衍生物。
13.權利要求1至7任一項所述的低分子量糖胺聚糖或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，其含有有效抗凝血劑量的低分子量糖胺聚糖或其藥學上可接受的鹽，以及藥用賦形劑。
14.如權利要求13所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的劑型為注射用水溶液或注射用凍干粉針劑。
15.權利要求1至7任一項所述的低分子量糖胺聚糖或其藥學上可接受的鹽在制備血栓性疾病的治療和/或預防藥物中的應用。
16.權利要求13或14所述的藥物組合物在制備血栓性疾病的治療和/或預防藥物中的 應用。
全文摘要
提供一種具有抗凝活性的低分子量巖藻糖化糖胺聚糖衍生物(derivate of Low molecular weight Fucosylated Glycosaminoglycan,dLFG)，其制備方法，含有所述dLFG或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，以及dLFG及其藥物組合物在制備血栓性疾病治療藥物中的應用。
文檔編號A61K31/726GK103145868SQ201310099800
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月26日 優先權日2013年1月7日
發明者趙金華, 劉吉開, 吳明一, 高娜, 盧鋒, 李姿 申請人:中國科學院昆明植物研究所