一種具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊及其制備方法

專利名稱：一種具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組織再生材料研發(fā)領(lǐng)域，尤其涉及一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊及其制備方法，該具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊應(yīng)用于牙科牙周病的治療，可以募集機(jī)體內(nèi)源性干細(xì)胞，促進(jìn)牙周組織再生。
背景技術(shù)：
牙周炎(periodontitis)是世界范圍內(nèi)的慢性牙周感染性疾病,發(fā)病率高(中老年人發(fā)病率70%以上)，危害性大(牙周炎導(dǎo)致的牙周支持組織喪失是成人牙齒脫落的主要原因)。牙周炎的治療和牙周缺損的修復(fù)再生是國際關(guān)注的難題，牙周病的防治面臨巨大的壓力和挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)牙周治療手段(如潔治術(shù)、刮治術(shù)、翻瓣術(shù)等)雖可有效控制牙周疾病進(jìn)程，卻不能使失去的牙周組織獲得良好的再生；牙周骨移植(bone grafting)、引導(dǎo)組織再生(guided tissue regeneration, GTR)和引導(dǎo)骨再生(guided bone regeneration, GBR)技術(shù)的廣泛開展和臨床應(yīng)用，大大提高了牙周炎治療的療效，但在恢復(fù)牙周組織的生理結(jié)構(gòu)和功能上還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有達(dá)到臨床所期望的目標(biāo)。近年來，組織工程(tissue engineering)和再生醫(yī)學(xué)(regenerative medicine)研究取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，為多種組織、器官缺損治療帶來了新希望。利用組織工程的原理、技術(shù)和方法促進(jìn)牙周組織再生的研究正引起越來越廣泛的重視和關(guān)注，并日益成為牙周再生研究的重點和核心。牙周組織的再生治療技術(shù)是口腔醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱門課題，對牙周炎的臨床治療將產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。同時，牙周組織涉及牙槽骨(alveolar bone)、牙周膜(periodontalIigament)和牙骨質(zhì)(cementum)三種完全不同的組織,加上這三種組織之間的復(fù)雜結(jié)構(gòu)關(guān)系與功能，使牙周組織再生可以作為機(jī)體復(fù)雜組織器官再生的“模型”，因此，牙周再生研究的意義已經(jīng)大大超過牙病治療本身。其實，我們機(jī)體組織都不同程度具有一定再生能力，只是多數(shù)情況下，這種“ 自發(fā)性”再生能力不足以對疾病產(chǎn)生治療作用。2009年，Discher等在一篇發(fā)表于Science (2009 ；324:1673-7)的文章中指出，機(jī)體組織干細(xì)胞龕中儲藏的干細(xì)胞，這些干細(xì)胞的激活為再生治療提供了一種全新的設(shè)計策略。利用體外設(shè)計的再生生物材料或制劑，激活機(jī)體內(nèi)源性干細(xì)胞系統(tǒng)，募集機(jī)體自身內(nèi)源性干細(xì)胞發(fā)揮再生修復(fù)作用，是避免體外細(xì)胞移植、極大程度實現(xiàn)機(jī)體組織內(nèi)源性再生的基礎(chǔ)，將有力推動牙周病臨床治療方法和技術(shù)的革新，具有重要的臨床意義，同時也必將對再生醫(yī)學(xué)的生物材料設(shè)計、研制和開發(fā)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。牙周缺損區(qū)域生理性微環(huán)境的破壞和可供組織修復(fù)再生利用的干細(xì)胞缺乏是牙周組織再生困難的根本原因。如何利用植入生物材料的設(shè)計，重建健康組織微環(huán)境，模擬生理狀態(tài)下細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的相互作用，募集機(jī)體自體已經(jīng)存在的干細(xì)胞促進(jìn)缺損組織修復(fù)再生是再生醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域近年來新起的熱門課題。雖然隨著干細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷深入，現(xiàn)階段體外干細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增方法和外源性干細(xì)胞體內(nèi)移植(stem cell transplantation)技術(shù)為解決組織再生所需干細(xì)胞提供了可能,但干細(xì)胞移植的臨床轉(zhuǎn)化還有很多問題沒有得到根本解決，如安全高效的培養(yǎng)技術(shù)、細(xì)胞植活率低下、細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)性能的調(diào)控等都面臨諸多挑戰(zhàn)，因此，利用體外培養(yǎng)的干細(xì)胞治療臨床一些非致死性疾病(如牙周組織缺損)還存在爭議。利用生物材料的設(shè)計，復(fù)合細(xì)胞信號分子，模擬干細(xì)胞在體內(nèi)的運動、交通和遷移機(jī)制，誘導(dǎo)內(nèi)源性干細(xì)胞募集和“歸巢”(stemcell homing)促進(jìn)牙周組織再生有望解決體外干細(xì)胞培養(yǎng)與移植面臨的轉(zhuǎn)化困難，具有廣闊的研究前景和臨床應(yīng)用空間。2010年，國外學(xué)者(Mao JJ)利用生物材料復(fù)合細(xì)胞歸巢誘導(dǎo)因子募集機(jī)體自身干細(xì)胞在動物體內(nèi)已經(jīng)實現(xiàn)了牙周組織、牙髓(J Dent Res2010 ;89:842-7)和兔的關(guān)節(jié)軟骨(Lancet2010 ；376:440-8)的再生，為干細(xì)胞“歸巢”實現(xiàn)內(nèi)源性組織再生研究奠定了基礎(chǔ)。然而，在上述研究結(jié)果向大動物和人的轉(zhuǎn)化過程中，進(jìn)一步優(yōu)化支架材料的細(xì)胞募集性和功能化設(shè)計至關(guān)重要。發(fā)明人認(rèn)為，借助藥物控釋系統(tǒng)(drug delivery system, DDS),攜帶多種關(guān)鍵的外源性信號分子并穩(wěn)定有效釋放，動員激活機(jī)體干細(xì)胞系統(tǒng)，募集內(nèi)源性干細(xì)胞實現(xiàn)功能性組織再生，是組織工程生物材料研究的新方向，具有重要的臨床意義和廣闊的應(yīng)用前景。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-l, SDF-1)是屬于 CXC 類趨化蛋白一種細(xì)胞因子，系統(tǒng)命名CXCL12(CXC chemokine ligand-12)，是已知唯一能與受體CXCR4結(jié)合并激活的天然趨化因子。最近研究表明SDF-1/CXCR4軸在干細(xì)胞歸巢中具有關(guān)鍵作用。SDF-1在正常情況下主要由骨髓基質(zhì)細(xì)胞釋放，確保CD34+的HSCs向骨髓的趨化黏附。研究表明，靜脈注射SDF-1 a能促進(jìn)HSCs的動員，抗CXCR4和SDF-1的中和抗體能抑制其趨化作用。HSCs、內(nèi)皮祖細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)等均能表達(dá)其特異性受體CXCR4，組織損傷時局部SDF-1上調(diào)，是調(diào)節(jié)干細(xì)胞歸巢并募集到損傷組織的一個關(guān)鍵因素。因此SDF-1可以作為干細(xì)胞“歸巢”的首選誘導(dǎo)因子，其生理機(jī)能與效果也得到了很多實驗的證實。血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor, F1DGF)是人體血小板中含的一種蛋白質(zhì)生長因子 ，為促細(xì)胞分裂劑，可刺激成纖維細(xì)胞和其他多種細(xì)胞分裂增殖。PDGF最初從血小板中發(fā)現(xiàn)，在損傷早期從血小板a顆粒釋放出來，啟動并加速組織創(chuàng)傷修復(fù)。TOGF生物學(xué)活性主要有幾方面:(1)趨化活性:誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的游走，對中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞有趨化性。在創(chuàng)傷早期，可以促進(jìn)周圍細(xì)胞向創(chuàng)傷部位聚集，配合血小板的凝血作用，激活創(chuàng)傷部位的免疫系統(tǒng)，為創(chuàng)傷修復(fù)奠定基礎(chǔ)；(2)具有縮血管活性:H)GF能引起血管收縮，是比血管緊張素II更強(qiáng)的血管活性物質(zhì)。在創(chuàng)傷初期，可以刺激創(chuàng)傷部位的毛細(xì)血管迅速收縮，降低創(chuàng)傷部位的血壓與流速，促進(jìn)血液凝固，為創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)造條件。同時，PDGF可以誘導(dǎo)受損的上皮細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，促進(jìn)血管的形成與再生，為創(chuàng)傷修復(fù)提供保證；(3)促分裂效應(yīng):H)GF能刺激血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞的分裂增生。I3DGF通過激活TOGF受體跨膜蛋白傳遞細(xì)胞信號，刺激停滯于G0/G1期的成纖維細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞進(jìn)入分裂增殖周期；(4)參與磷酸酯酶激活與前列腺素代謝:H)GF與有受體的細(xì)胞作用時，能誘導(dǎo)磷酸酰肌醇循環(huán)和花生四烯酸的釋放，促進(jìn)前列腺。最近研究表明，PDGF-BB能夠募集平滑肌細(xì)胞促進(jìn)血管的成熟和穩(wěn)定，基礎(chǔ)和臨床研究結(jié)果均表明I3DGF-BB具有良好促進(jìn)牙周組織再生的潛能。PDGF的應(yīng)用在美國等發(fā)達(dá)國家十分廣泛，這方面的研究也不斷取得進(jìn)展。基因重組人類血小板衍生生長因子(recombinant human F1DGF, rhPDGF)是目前所有眾多生長因子中唯一通過美國FDA批準(zhǔn)被應(yīng)用，作為臨床處方藥的生物工程產(chǎn)品。其應(yīng)用之一就是以重組人血小板衍生生長因子凝膠劑型的REGRANEX Gel用來作為糖尿病晚期肢端潰瘍的清創(chuàng)愈合與修復(fù)。另外，血小板衍生生長因子TOGF在重度燒傷、皮膚病患、骨骼與牙齒缺損與再生已經(jīng)關(guān)節(jié)修復(fù)方面的應(yīng)用也取得了巨大的進(jìn)展。無論是SDF-1還是TOGF的臨床應(yīng)用，都面臨在體內(nèi)被組織液稀釋、代謝或因酶的降解而失活。發(fā)明人認(rèn)為，借助緩/控釋系統(tǒng)和再生生物材料設(shè)計，也可以使活性因子向缺損組織定位、持續(xù)釋放，極大刺激缺損區(qū)域組織自身的修復(fù)再生潛能。細(xì)胞因子與多種支架材料直接復(fù)合后，雖然可以取得比單純支架好的效果，但這種簡單復(fù)合(add-on或absorb-1n)不能實現(xiàn)生長因子的生物緩釋，只有借助新型設(shè)計的高效藥物輸送系統(tǒng)的作用，才有望實現(xiàn)良好的組織再生。發(fā)明人認(rèn)為，借助納米藥物載體的控釋技術(shù)，包封干細(xì)胞“歸巢”誘導(dǎo)因子(SDF-la和TOGF-BB)，復(fù)合到基于細(xì)胞黏附、滲透設(shè)計的多孔凝膠微囊中，實現(xiàn)細(xì)胞因子控制 釋放，植入體內(nèi)時可募集機(jī)體自身來源的干細(xì)胞，達(dá)到促進(jìn)組織內(nèi)源性再生的目的，有望開發(fā)可供臨床選擇的商品化產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于利用純天然材料，提供一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的材料配方和相應(yīng)制備方法、以及具有攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB的細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑和相應(yīng)制備方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。技術(shù)方案一:一種具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，包含基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球、重均分子量為100-105kDa的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、重均分子量為IOOkDa的明膠、重均分子量為17kDa聚丙基丙烯酰胺，以及助溶劑、乳化劑和穩(wěn)定劑。上述技術(shù)方案的特點和進(jìn)一步改進(jìn)在于:優(yōu)選地，所述基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球、血小板源性生長因子-BB納米微球、甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、明膠和聚丙基丙烯酰胺的質(zhì)量比為(0.6-1.0):(0.6-1.0):(1.6X104-2.0XlO4):( 1.0X IO4-L 6X IO4):(2.2X 103-3.4X 103)。優(yōu)選地，所述助溶劑包含磷酸鹽緩沖液；所述乳化劑包含體積比為(2-4):1的二氯甲烷和丙酮混合溶劑；所述穩(wěn)定劑包含重均分子量為40-60kDa的海藻酸鈉。更優(yōu)選地，磷酸鹽緩沖溶液的PH值為7.1-7.3 ;乳化劑也可選自二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、丙酮、四氫呋喃、冰醋酸、苯、甲苯中的一種或兩者以上的混合物。優(yōu)選地，所述甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐中，右旋糖酐分子量為37-39.6kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯和右旋糖酐的聚合比例為1:(80-120);所述甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:(0.6-1.2):(0.05-0.09)。優(yōu)選地，所述具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊平均粒徑為38.46-47.3 ym，孔隙率為74%-90%，平均孔徑為 0.4-3.4 u mo
技術(shù)方案二:上述攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:步驟1:稱取質(zhì)量為8.0X IO4-L 2X IO5份的磷酸鹽緩沖液，將質(zhì)量為0.6-1.0份的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球(載藥量為9.6%)、0.6-1.0份的血小板源性生長因子-BB納米微球(載藥量為8.7% ；)分散于磷酸鹽緩沖液中(基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球等份)，制成兩種納米微球質(zhì)量濃度為
1.2X l(T5-6.7 X Kr3%的水相溶液(單種納米微球質(zhì)量濃度為6.0X l(T4-3.4X 1(T3%的水相溶液);步驟2:將質(zhì)量為1.6X104_2.0XlO4份的重均分子量為100_105kDa的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、1.0X 104-1.6X 104份的重均分子量為IOOkDa的明膠、
2.2X103-3.4 X IO3份的重均分子量為17kDa聚丙基丙烯酰胺依次溶于6.0 X IO4-L 0 X IO5份的體積比為(2-4):1的二氯甲烷和丙酮混合溶劑中，冰浴超聲分散0.8-1.2min，制成質(zhì)量濃度為2% -4.5%的油相溶液；步驟3:將所述水相溶液和所述油相溶液制備成油包水型乳液，將質(zhì)量為4.0 X IO4份的重均分子量為4-6萬的海藻酸鈉溶于剩余質(zhì)量份的磷酸緩沖液中，與所述油包水型乳液混合后冰浴超聲分散8-12min,制成微乳液；步驟 4:將所述微乳液在室溫下低速攪拌60_12min，自然揮發(fā)或抽提去除二氯甲烷，制得所述攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。技術(shù)方案三:技術(shù)方案一或技術(shù)方案二所述的制備方法制得的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊在治療牙周炎藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案四:一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑，其特征在于，包括攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊以及藥學(xué)上可接受的輔料。優(yōu)選地，所述藥學(xué)上可接受的輔料為聚氧乙烯聚氧丙烯醚。技術(shù)方案五:技術(shù)方案四所述的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:在低于20°C的溫度下，將技術(shù)方案二所述的制備方法制得的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊邊攪拌邊加入6.0X103-9.0X IO3重量份的聚氧乙烯聚氧丙烯醚，溶解后制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑。本發(fā)明采用含兩種載藥納米微球(分別包封基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球，載藥量分別為9.6%和8.7%)的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)/明膠(gelatin)凝膠微囊，可以控制藥物在一定時間里以一定的速度釋放，延長藥物的生理活性作用時間；凝膠微囊具有良好的多孔性和孔隙率，有利于細(xì)胞募集后其黏附、生長和增值；將基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB加入到多孔凝膠微囊中制得的凝膠微囊制劑具有募集性的的優(yōu)點，可有效發(fā)揮藥理活性。膠原、多糖基水凝膠等天然生物材料來源廣泛，具有良好的生物相容性，且大多是美國食品和藥物管理局FDA允許臨床應(yīng)用、有些甚至已經(jīng)應(yīng)用于臨床的生物材料(如:膠原、右旋糖酐)；其作為制備生長因子DDS和多種組織工程支架的原材料，制備方便(可以制備不同的劑型)、工藝簡單、反應(yīng)條件溫和，是較為理想的用來制備細(xì)胞因子等活性藥物DDS和組織工程支架的原材料，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。明膠(gelatin)是來源于動物膠原的一種天然生物材料,其等電點可以通過制備工藝進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而制備成酸性明膠和堿性明膠。不同等電點的明膠會與荷電相反的信號分子通過離子間的相互作用而結(jié)合，這種結(jié)合可以使生長因子的釋放得到有效的延長，由此可見明膠基生物材料可以作為不同生長因子的載體。例如等電點為5.0的酸性明膠與堿性的堿性成纖維細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)化生長因子-P結(jié)合，而等電點為9.0的堿性明膠可與顯酸性的骨形態(tài)發(fā)生蛋白_2、血管內(nèi)皮生長因子、SDF-1結(jié)合，才能使細(xì)胞因子有效釋放。然而水性環(huán)境中，單純明膠的快速增溶作用會破壞這種靜電吸附，仍然導(dǎo)致生長因子產(chǎn)生極為明顯的“突釋”效應(yīng)，體外24h內(nèi)釋藥甚至可達(dá)70%以上，達(dá)不到預(yù)期的緩釋效果，這在我們的前期實驗中已經(jīng)得到證實。右旋糖酐(dextran)是一種可溶性多糖，主要由a-1，6連接的D-葡萄糖殘基和少量的a_l，2、a_l，3、a _1，4支鏈交連而成，長期以來被作為血代替品廣泛應(yīng)用于臨床。近年來，引入功能基的右旋糖酐凝膠被廣泛作為蛋白類藥物載體進(jìn)行研究。為了形成凝膠，必須在右旋糖酐支鏈中引入交鏈，引入可以通過化學(xué)和物理的方法完成。發(fā)明人前期設(shè)計合成的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)在葡聚糖酶、膠原酶存在的情況下可以完全降解，而且可以通過制備工藝的改變來控制目標(biāo)產(chǎn)品溶脹、載藥、釋藥及降解性能，是一種很有前途的載體材料。改良后的右旋糖酐基水凝膠載體材料，可以賦予其溫度敏感、PH敏感特性，對周圍環(huán)境變化具有可“感`知”能力，具有智能給藥的材料基礎(chǔ)，有望達(dá)到智能控釋給藥的目的。然而作為生長因子載體，右旋糖酐基生物材料缺乏與明膠相似的與生長因子的靜電作用，只能形成一種物理的包封與吸附，藥物極易通過“擴(kuò)散、滲透作用”而快速釋放，因此“突釋”效應(yīng)也非常明顯。但是，利用明膠對生長因子的靜電吸附作用和右旋糖酐基水凝膠的酶降解特征，通過物理或化學(xué)的方法將這兩種材料進(jìn)行耦合，目標(biāo)產(chǎn)物的藥物釋放就會大大延長。材料降解控制釋藥，包封生物酶控制降解，為減少藥物的初期“突釋”、實現(xiàn)生長因子的長時間釋放提供了新的契機(jī)。發(fā)明人在前期的實驗中，利用甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)和明膠(Gtn)在水成溶液PEG中的不混溶性和甲基丙烯酸激進(jìn)分子與明膠的交聯(lián)率禹合作用，在反應(yīng)促進(jìn)劑的存在的條件下成功制備了 Dex-GMA/Gtn凝膠納米微球,避免了有機(jī)溶劑的使用，達(dá)到了對生長因子的生物緩釋作用。我們?nèi)〉玫膶嶒灲Y(jié)果主要包括:①首先成功對右旋糖酐基生物材料進(jìn)行改性，枝接激進(jìn)分子實現(xiàn)了明膠與右旋糖酐基生物材料的有機(jī)結(jié)合，其釋藥主要由材料降解決定；③在國外學(xué)者研究的基礎(chǔ)上，建立了避免有機(jī)溶劑參與的完全水性環(huán)境(All-aqueous system)中合成生長因子微載體的方法；④在一定程度上實現(xiàn)了生長因子的生物緩/控釋。本發(fā)明將上述納米控釋給藥的經(jīng)驗引入細(xì)胞募集性凝膠微囊的研制，制備具有誘導(dǎo)募集機(jī)體內(nèi)源性干細(xì)胞的凝膠微囊，這種多孔微囊仍基于甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠在的交聯(lián)耦合作用，目標(biāo)產(chǎn)品將為內(nèi)源性組織再生、組織工程、器官移植等多領(lǐng)域的研究提供更為廣闊的空間。細(xì)胞募集性設(shè)計是新型功能化支架研制中面臨的重要基礎(chǔ)問題。利用藥物控釋的手段和方法，實現(xiàn)促干細(xì)胞“歸巢”誘導(dǎo)因子的生物控釋，能誘導(dǎo)組織再生所必需的內(nèi)源性干細(xì)胞向缺損區(qū)域募集和“歸巢”，實現(xiàn)多種組織生理性和功能性再生。新型細(xì)胞募集性生物材料的研制將為多種組織內(nèi)源性再生和體內(nèi)組織工程提供有效的研究基礎(chǔ)，為重建復(fù)雜組織和器官的生理結(jié)構(gòu)和功能提供新的治療方法，具有重要的臨床意義和廣闊的應(yīng)用前景。本發(fā)明利用納米微球包裹技術(shù)，以天然生物材料為載體的凝膠微囊不但可以控制負(fù)載藥物以一定的速度釋放，而且可以通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩(wěn)定性，從而使藥物的藥理活性達(dá)到較理想的效果。本發(fā)明中采用的天然包埋材料甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA) /明膠(gelatin)，由甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)和明膠(gelatin)按一定比例通過交聯(lián)聚合得到,為無定型聚合物,共聚物具有更大的親水性，可用于藥物控釋載體和組織工程細(xì)胞培養(yǎng)支架，具有組織相容性好，對人體安全無害等特點。復(fù)合基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB納米微球的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA) /明膠(gelatin)凝膠微囊具有長時間釋放兩種細(xì)胞因子，募集機(jī)體內(nèi)源性干細(xì)胞的特點。本發(fā)明采用的明膠是來源于動物膠原的一種天然生物材料，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，無毒，具有吸濕性，絕大多數(shù)都易溶于水，可溶于乙醇、丙酮、氯仿等多數(shù)有機(jī)溶劑，通常情況下不活潑、不水解、耐熱，可用熱壓滅菌。在室溫條件下，分子量在100以下的明膠通常為無色或幾乎無色的透明澄清粘稠液體，分子量在2000以上的為固體。明膠水溶液pH值成微酸性或微堿性，其分子鏈上兩段的羥基都具有反應(yīng)活性，能發(fā)生所有脂肪族羥基所能進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)。明膠目前應(yīng)用極為廣泛，它可應(yīng)用于醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、化工等綜合能更多領(lǐng)域，具有以下優(yōu)點:首先明膠是無毒和低免疫原性親水聚合物，具有良好的生物相容性；其次，明膠是種兩親性物質(zhì)，既可以溶解于水，又可以溶解于絕大多數(shù)的有機(jī)溶劑，明膠具有化學(xué)惰性，對絕大多數(shù)化學(xué)反應(yīng)穩(wěn)定，但在其羥基火化后又易于跟含有氨基等化合物進(jìn)行鍵合，把許多優(yōu)良性質(zhì)轉(zhuǎn)移到結(jié)合物中；除此以外，明膠價格相對低廉，適宜規(guī)?；a(chǎn)。本發(fā)明采用的右旋糖酐(Dextran, Dex)對人體無毒無害,是經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用作血漿代替品的材料，具有良好的生物可降解性，使用后能被自然界中微生物完全降解，最終生成二氧化碳和水，不污染環(huán)境，是公認(rèn)的環(huán)境友好材料。本發(fā)明采用的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐由右旋糖酐與甲基丙烯酸縮水甘油酯按一定比例通過共聚得到，為無定型聚合物，玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為40-55°C，粘度IV (dl/g)范圍:0.10 1.0。作為優(yōu)選，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)中，右旋糖酐(Dextran T40)分子量為37-39.6kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯和右旋糖酐的聚合比例為1:80-120。甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為
1:(0.6-1.2):(0.05-0.09)。本發(fā)明優(yōu)選穩(wěn)定劑米用重均分子量為4_6萬的海藻酸鈉,分子式為(C6H708Na)n,主要由海藻酸的鈉鹽組成，由a-L-甘露糖醛酸(M單元)與b-D-古羅糖醛酸(G單元)依靠1，4-糖苷鍵連接并由不同GGGMMM片段組成的共聚物。海藻酸鈉是一種天然多糖，具有藥物制劑輔料所需的穩(wěn)定性、溶解性、粘性和安全性。本發(fā)明在攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性凝膠微囊制劑中，包括攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性凝膠微囊以及藥學(xué)上可接受的輔料；優(yōu)選藥學(xué)上可接受的輔料為聚氧乙烯聚氧丙烯醚。其中，聚氧乙烯聚氧丙烯醚(泊洛沙姆)是一種高分子非離子型表面活性劑，為美國國家處方集新增加的藥物輔助材料，具有在低溫下(4_5°C )為液體，體溫下為凝膠的獨特性質(zhì)。凝膠具有黏附性能好，不易在骨創(chuàng)傷組織脫落和揮發(fā)的優(yōu)點。本發(fā)明提供的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性凝膠微囊制劑在4-5°C為可流動的膠體，20-38°C為凝膠。


下面結(jié)合附圖和具體實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1為凍干的本發(fā)明攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的掃描電鏡圖；圖2為單個的本發(fā)明攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的電鏡放大電鏡圖；圖3為本發(fā)明攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的局部放大電鏡圖，其中微孔中復(fù)合有納米微球；圖4為本發(fā)明攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的剖面放大電鏡圖，其中微囊微孔中復(fù)合有納米微球；圖5為本發(fā)明的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊粒徑分布圖。圖6為本發(fā)明的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊體外釋藥曲線圖。
具體實施例方式本發(fā)明中，右旋糖酐購自夏斯生物科技公司；甲基丙烯酸縮水甘油酯購自百靈威科技有限公司，明膠、海藻酸鈉、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB及其Elisa試劑盒購自SIGMA公司；磷酸鹽緩沖液，購自西安化學(xué)試劑廠；聚氧乙烯聚氧丙烯醚(泊洛沙姆)，購自上海醫(yī)藥公司。實施例1:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊(膠體溶液)分別稱取5 U g基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a和5 ii g血小板源性生長因子-BB納米微球分散于0.5g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取150mg甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠(甲基丙烯 酸縮水甘油酯右旋糖酐的重均分子量為100-105kDa，明膠的重均分子量為IOOkDa,聚丙基丙烯酰胺的重均分子量為17kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:0.6:0.05)溶于5g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷:丙酮=6:2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散Imin制備乳劑，備用。將上述乳劑緩慢加入20g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含200mg海藻酸鈉)，超聲分散lmin，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3h，除去有機(jī)溶劑，即制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。實施例2:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊(膠體溶液)分別稱取10 ii g基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a和10 ii g血小板源性生長因子-BB納米微球分散于Ig磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取300mg甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠(甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐的重均分子量為100-105kDa，明膠的重均分子量為IOOkDa,聚丙基丙烯酰胺的重均分子量為17kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:1:0.07)溶于IOg有機(jī)溶劑中(二氯甲烷:丙酮=6:2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散Imin制備乳劑，備用。將上述乳劑緩慢加入40g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含400mg海藻酸鈉)，超聲分散lmin，并繼續(xù)在室溫低速攪拌5h，除去有機(jī)溶劑，即制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。實施例3:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊(膠體溶液)分別稱取20 ii g基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a和20 y g血小板源性生長因子-BB納米微球分散于2g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取600mg甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠(甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐的重均分子量為100-105kDa，明膠的重均分子量為IOOkDa,聚丙基丙烯酰胺的重均分子量為17kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:1.2:0.09)溶于20g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷:丙酮=6:2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散Imin制備乳劑，備用。將上述乳劑緩慢加入80g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含800mg海藻酸鈉)，超聲分散lmin，并繼續(xù)在室溫低速攪拌4h，除去有機(jī)溶劑，即得制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。實施例4:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊(膠體溶液)分別稱取4 ii g基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a和4 ii g血小板源性生長因子-BB納米微球分散于0.6g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取120mg甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠(甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐的重均分子量為100-105kDa，明膠的重均分子量為IOOkDa,聚丙基丙烯酰胺的重均分子量為17kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:1:0.09)溶于6g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷:丙酮=6:2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1.2min制備乳劑，備用。將上述乳劑緩慢加入16g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含160mg海藻酸鈉)，超聲分散
0.8min,并繼續(xù)在室溫低速攪拌3h，除去有機(jī)溶劑，即得制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子_1 a納米微球和血小板源 性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。
實施例5:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊(膠體溶液)分別稱取6 ii g基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a和6 ii g血小板源性生長因子-BB納米微球分散于0.4g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取150mg甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐和明膠(甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐的重均分子量為100-105kDa，明膠的重均分子量為IOOkDa,聚丙基丙烯酰胺的重均分子量為17kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐(Dex-GMA)、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為1:1.2:0.07)溶于4g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷:丙酮=6:2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散0.Smin制備乳劑，備用。將上述乳劑緩慢加入24g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含240mg海藻酸鈉)，超聲分散1.2min,并繼續(xù)在室溫低速攪拌5h，除去有機(jī)溶劑，即制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子_1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。實施例6:制備攜 帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑在實施例1制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液中，在低溫(溫度低于20°C)攪拌下，少量多次共加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。實施例7:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑在實施例2制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液中，在低溫(溫度低于20°C)攪拌下，少量多次共加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。實施例8:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑在實施例3制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液中，在低溫(溫度低于20°C)攪拌下，少量多次共加入15g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。實施例9:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑在實施例4制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液中，在低溫(溫度低于20°C)攪拌下，少量多次共加入3.0g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。實施例10:制備攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑在實施例5制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液中，在低溫(溫度低于20°C)攪拌下，少量多次共加入4.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。實施例11分別取實施例1至5中制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊膠體溶液各10 y L，共5份樣本，冷凍干燥后用光學(xué)顯微鏡觀察微球的表面形態(tài)，微囊表面呈多孔狀，囊球體大小較均勻。將微球置于載玻片上，盡量對微球進(jìn)行分散后，在顯微鏡下隨機(jī)選取I個視野進(jìn)行拍照，以照片上的標(biāo)尺為依據(jù)對每一個微囊球的直徑進(jìn)行測量。每5pm為單位，直徑±2.5iim的全部計入，平均粒徑為38.46-47.3 iim，粒徑分布范圍較窄。實施例12分別取基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB對照品約10mg，精密稱重，置于IOOg量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，依次稀釋，使實際配置的對照品溶液濃度分別為0.1，0.2,0.5，l，5，10，20，50ng/L，加入到微量反應(yīng)板的微孔中。按照SIGMA公司提供的操作程序，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)在HTS7000紫外熒光高效分析儀測定標(biāo)準(zhǔn)樣品在在490nm波長的吸光度(0D)。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB濃度C進(jìn)行對數(shù)直線回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為:A=0.48901+0.08603C n=7，r=0.9964，由圖像分析可知，在l_600nm范圍內(nèi)為線性關(guān)系較好的直線方程，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB濃度的對數(shù)均與吸收度有定量關(guān)系。將實施例1制備的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的膠體溶液在4°C、40000rpm條件下離心,2h后分離樣品中上清液，測定基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB濃度，分別計算基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a和血小板源性生長因子-BB的載藥量和包封率。其中，載藥量公式:
權(quán)利要求
1.一種具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，包含基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球、重均分子量為100-105kDa的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、重均分子量為IOOkDa的明膠、重均分子量為17kDa聚丙基丙烯酰胺，以及助溶齊U、乳化劑和穩(wěn)定劑。
2.如權(quán)利要求1所述的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，所述基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球、血小板源性生長因子-BB納米微球、甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、明膠和聚丙基丙烯酰胺的質(zhì)量比為(0.6-1.0): (0.6-1.0): (1.6X104-2.0XlO4):(1.0XlO4-L 6X IO4):(2.2X 103-3.4X 103)。
3.如權(quán)利要求1所述的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，所述助溶劑包含磷酸鹽緩沖液；所述乳化劑包含體積比為(2-4):1的二氯甲烷和丙酮混合溶劑；所述穩(wěn)定劑包含重均分子量為40-60kDa的海藻酸鈉。
4.如權(quán)利要求1所述的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，所述甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐中，右旋糖酐分子量為37-39.6kDa，甲基丙烯酸縮水甘油酯和右旋糖酐的聚合比例為1:(80-120);所述甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、明膠和聚丙基丙烯酰胺的聚合比例為 I: (0.6-1.2): (0.05-0.09)。
5.如權(quán)利要求1所述的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，所述細(xì)胞募集性的凝膠微囊的平均粒徑為38.46-47.3um,孔隙率為74%_90%，平均孔徑為0.4-3.4 Um0
6.如權(quán)利要求1所述的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:步驟1:稱取質(zhì)量為6.0X IO4-L OX IO5份的磷酸鹽緩沖液，將質(zhì)量為0.6-1.0份的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和0.6-1.0份的血小板源性生長因子-BB納米微球分散于磷酸鹽緩沖液中，制成兩種納米微球質(zhì)量濃度分別為6.0X 10_4-3.4X 10_3%的水相溶液； 步驟2:將質(zhì)量為1.6X 104-2.0X IO4份的重均分子量為100-105kDa的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、1.0X 104-1.6X 104份的重均分子量為IOOkDa的明膠、2.2X103-3.4 X IO3份的重均分子量為17kDa聚丙基丙烯酰胺分別溶于8.0X IO5-L 2 X IO6份的體積比為(2-4):1的二氯甲烷和丙酮混合溶劑中，冰浴超聲分散0.8-1.2min，制成質(zhì)量濃度為2% -4.5%的油相溶液； 步驟3:將所述水相溶液和所述油相溶液制備成油包水型乳液，將質(zhì)量為4.0X IO4份的重均分子量為4-6萬的海藻酸鈉溶于剩余質(zhì)量份的磷酸緩沖液中，與所述油包水型乳液混合后冰浴超聲分散8-12min,制成微乳液； 步驟4:將所述微乳液在室溫下高速攪拌60-120min，自然揮發(fā)或抽提出去二氯甲烷，制得所述所述攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊。
7.如權(quán)利要求1至5任一項或如權(quán)利要求6所述的制備方法制得的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊在治療牙周炎藥物中的應(yīng)用。
8.一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1至5任一項或權(quán)利要求6所述的制備方法制得的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊以及藥學(xué)上可接受的輔料。
9.如權(quán)利要求8所述的攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的輔料為聚氧乙烯聚氧丙烯醚。
10.一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:在低于20°C的溫度下，將權(quán)利要求6所述的制備方法制得的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊邊攪拌邊加A 6.0XlO3-Q.0X IO3重量份的聚氧乙烯聚氧丙烯醚，溶解后制得攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 a納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及組織再生生物材料研發(fā)領(lǐng)域，公開了一種攜帶基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球的具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊及其制備方法、以及具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊制劑及其制備方法。該具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊及其制劑可應(yīng)用于牙科，通過募集機(jī)體自身干細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)源性牙周組織再生。該具有細(xì)胞募集性的凝膠微囊，其特征在于，包含基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α納米微球和血小板源性生長因子-BB納米微球、重均分子量為100-105kDa的甲基丙烯酸縮水甘油酯右旋糖酐、重均分子量為100kDa的明膠、重均分子量為17kDa聚丙基丙烯酰胺，以及助溶劑、乳化劑和穩(wěn)定劑。
文檔編號A61K38/19GK103169951SQ20131008525
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月15日
發(fā)明者陳發(fā)明, 孫?；? 魯紅, 安瑩, 高麗娜 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)