同時(shí)具溶血栓、清除自由基和血栓靶向功能的新穎化合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種同時(shí)具有溶血栓、清除自由基和血栓靶向/抗血栓三種功能的新穎化合物及其制備方法和用途。本發(fā)明以連接臂將溶血栓肽、自由基清除劑和血栓靶向/抗血栓肽組合在一起形成三元綴合物，得到集跨血腦屏障、溶血栓、清除自由基、血栓靶向/抗血栓等作用于一體的所述化合物。本發(fā)明還涉及含有所述化合物的藥物組合物，其中所述化合物形成納米球結(jié)構(gòu)。本發(fā)明化合物具有較高的清除NO自由基活性、優(yōu)異的溶血栓活性和血栓靶向/抗血栓活性。本發(fā)明化合物還具有優(yōu)異的抗缺血性中風(fēng)活性，可制備成治療腦梗塞的臨床藥物。
【專利說明】同時(shí)具溶血栓、清除自由基和血栓靶向功能的新穎化合物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種同時(shí)具有溶血栓、清除NO自由基和血栓靶向/抗血栓三種功能的新穎化合物及其制備方法和用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及以含有羧基和氨基的連接臂將含PAK (Pro-Ala-Lys)序列的溶血栓寡肽、1_ (4-氧乙酰基-苯基)-3，3，4，4-四甲基-咪唑啉及含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的血栓靶向肽/抗血栓寡肽連接在一起形成的“含PAK序列肽/咪唑啉/含RGD序列肽”的新穎三元綴合物。本發(fā)明還涉及包含所述化合物的用于清除NO自由基、溶血栓、血栓靶向/抗血栓和治療中風(fēng)/腦梗塞的藥物組合物。本發(fā)明同時(shí)還涉及所述化合物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在全球范圍內(nèi)，血栓性疾病的發(fā)病率和死亡率都居首位。冠狀動(dòng)脈血栓，導(dǎo)致心梗。腦血管栓塞，導(dǎo)致腦梗，也就是臨床上的缺血性中風(fēng)。心?；颊呒瓤梢造o脈注射溶栓藥物，也可以施以搭橋手術(shù)。必須指出，給心?；颊哽o脈注射溶栓藥物的正面結(jié)果是缺血再灌注。由于缺血再灌注過程中產(chǎn)生大量NO自由基，所以溶栓過程與心肌損傷及患者死亡相聯(lián)系。這是目前溶栓治療心梗的嚴(yán)重問題。目前，腦梗治療面臨的問題更復(fù)雜。例如現(xiàn)有溶栓藥物都不能有效地跨過血腦屏障，以至于靜脈注射溶栓藥物對(duì)腦梗患者的療效極其有限。又例如目前還沒有適宜的手術(shù)可以救治腦?；颊摺Ｍ瑯?，給腦梗患者靜脈注射溶栓藥物即使有正面結(jié)果，缺血再灌注過程中也會(huì)產(chǎn)生大量NO自由基，使溶栓過程與腦組織損傷及患者死亡相聯(lián)系。這是目前溶栓治療腦梗的嚴(yán)重問題。再者，中風(fēng)患者的臨床治療面臨四個(gè)難題:1)除tPA (tissue-type plasminogen activator,組織型纖溶酶原激活劑)外,沒有其它藥物可對(duì)中風(fēng)患者顯示療效；2) tPA治療只在患者中風(fēng)3小時(shí)之內(nèi)顯示療效，即tPA只有3小時(shí)治療黃金期；3)tPA治療通常引起全身出血；4)tPA治療無法避免缺血再灌注過程中產(chǎn)生的大量NO自由基對(duì)患者造成的腦組織損傷及患者死亡。只有解決了這四個(gè)難題，中風(fēng)患者的臨床治療才可能獲得實(shí)質(zhì)性突破。
[0003]在中國專利申請(qǐng)公布號(hào)CN102807604和CN102807605的申請(qǐng)案中，公開了 N°-(l，3-二氧-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-2-苯基-4’ -氧乙酰基)_ηω-脂肪?；?Lys-Arg-Gly-Asp-Val 和 Na-(1,3- 二氧-4，4,5,5- B 甲基咪唑啉 _2_ 苯基-4，-氧乙酰基)-ηω-脂肪?；?Lys-Arg-Gly-Asp-Phe兩種化合物。這兩種化合物是將具清除NO自由基活性的咪唑啉與含RGD序列(Arg-Gly-Asp)的抗血栓寡肽以賴氨酸組合。與本發(fā)明的化合物不同，此兩種化合物中沒有連接溶栓肽。由是此兩種化合物沒有溶血栓作用，不適用于制備溶血栓藥物，且不適用于治療缺血性中風(fēng)的患者。
[0004]為解決上述問題，需要一種同時(shí)具有溶血栓、清除NO自由基和血栓靶向/抗血栓作用的新穎化合物。并且，這樣的新穎化合物要能夠有在患者中風(fēng)3小時(shí)之后顯示療效，SP不受使用tPA的3小時(shí)治療黃金期的限制；沒有tPA樣的全身出血反應(yīng)；且能夠清除缺血再灌注過程中產(chǎn)生的大量NO自由基。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明提供一種集跨血腦屏障、溶血栓、抗血栓和清除NO自由基活性作用于一體的三元綴合物，其中所述三元是指具清除NO自由基活性的咪唑啉類、具溶血栓活性肽及血栓靶向肽，其通過適合的連接臂連接在一起。
[0006]具體而言，本發(fā)明之三元綴合物可以式I化合物表示:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一種式I化合物:
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3_二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述連接用基團(tuán)選自羧基和氨基所構(gòu)成的群組。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述連接臂為天然氨基酸。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物,其中所述天然氨基酸選自L-Lys、L-Asp和L-Glu所構(gòu)成的群組。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物,其中所述具溶血栓活性肽為含PAK(Pro-Ala-Lys)序列、AKP (Ala-Lys-Pro)序列或KAP (Lys-Ala-Pro)序列的寡肽或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列為結(jié)構(gòu)單元的重復(fù)序列肽。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中所述含PAK序列、AKP序列或KAP序列的寡妝選自 PAK、RPAK (Arg-Pro-Ala-Lys)、ARPAK (Ala-Arg-Pro-Ala-Lys)、GRPAK(Gly-Arg-Pro-Ala-Lys)、QRPAK (Gln-Arg-Pro-Ala-Lys)、AKP、KAP ,KPAK (Lys-Pro-Ala-Lys)、PAKP (Pro-Ala-Lys-Pro)、AKPAK (Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)和PAKPA (Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)所構(gòu)成的群組。
8.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中所述以PAK序列、AKP序列或KAP序列為結(jié)構(gòu)單元的重復(fù)序列肽選自(PAK)n、(AKP)η和(KPA)η所構(gòu)成的群組，其中η為2至6。
9.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述血栓靶向肽為含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的寡肽。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中所述含RGD序列的寡肽選自RGDS (Arg-Gly-Asp-Ser) >RGDV(Arg-Gly-Asp-Val)和 RGDF(Arg-Gly-Asp-Phe)所構(gòu)成的群組。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述血栓祀向肽為RGD(Arg-Gly-Asp)肽與YIGS (Tyr-1Ie-Gly-Ser)肽進(jìn)行綴合式修飾而得的多肽。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中所述修飾而得的多肽選自HGSRRGDS、YIGSRRGDV, YIGSRRGDF, YIGSRYIGSK、YIGSRYIGSR、YIGSKRGDS、YIGSKRGDF、YIGSKRGDV、YIGSKYIGSK、YIGSKYIGSR、RGDSRGDS、RGDVRGDV、RGDFRGDF、RGDSYIGSR、RGDSYIGSK、RGDVYIGSR、RGDVYIGSK、RGDFYIGSR、和 RGDFYIGSK 所構(gòu)成的群組。
13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Lys ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(PiO-Ala-Lys)的寡肽；且所述血栓靶向肽為含RGD序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽。
14.如權(quán)利要求13所述的化合物，具有以下通式1-1或1-2:
15.如權(quán)利要求14所述的化合物，具有以下通式1-1-1:.N,NH-KAPRA
16.如權(quán)利要求14所述的化合物，具有以下通式1-1-2:
17.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中aa3為V(Val)。
18.如權(quán)利要求14所述的化合物，具有以下通式1-1-3:
19.如權(quán)利要求14所述的化合物，具有以下通式1-1-4:
20.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Asp ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(PiO-Ala-Lys)的寡肽；且所述血栓靶向肽為含R⑶序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽。
21.如權(quán)利要求20所述的化合物，具有以下通式1-3或1-4:
22.如權(quán)利要求21所述的化合物，其中Ba1SR(Arg);aa2 SG(Gly);且aa3為V (Val)。
23.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Glu ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(PiO-Ala-Lys)的寡肽；且所述血栓靶向肽為含R⑶序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽。
24.如權(quán)利要求23所述的化合物，具有以下通式1-5或1-6:
25.如權(quán)利要求24所述的化合物，其中Ba1SR(Arg) ;aa2 SG(Gly);且aa3為V (Val)。
26.—種藥物組合物，包含如權(quán)利要求1至25任一項(xiàng)所述的化合物，及藥學(xué)上可接受的載劑。
27.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中所述化合物選自具有通式1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、和1-6的化合物所構(gòu)成的群組:
28.如權(quán)利要求27所述的藥物組合物，其中所述化合物選自具有通式1-1-1、1-1-2、1-1-3和1-1-4的化合物所構(gòu)成的群組:
29.如權(quán)利要求28所述的藥物組合物，其中所述化合物可形成二聚體、三聚體、或四聚體結(jié)構(gòu)。
30.如權(quán)利要求29所述的藥物組合物，其中所述化合物可形成納米球結(jié)構(gòu)。
31.如權(quán)利要求30所述的藥物組合物，其中所述納米球結(jié)構(gòu)的直徑為2nm至300nm。
32.如權(quán)利要求31所述的藥物組合物，其中所述納米球結(jié)構(gòu)的直徑為2nm至lOOnm。
33.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物，作為溶血栓藥物。
34.如權(quán)利要求33所述的藥物組合物，用于治療心肌梗塞(Mmyocardialinfarction)、中風(fēng)(Ischemic stroke)、靜脈栓塞(Deep vein thrombosis)、肺栓塞(Pulmonary embolism)、周邊動(dòng)脈阻塞性疾病(Peripheral arterial occlusivedisease)、靜脈導(dǎo)管阻塞(occluded central vascular access devices)、動(dòng)靜脈瘻管及分流管阻塞(Clotted arteriovenous fistula and shunts)、或頸動(dòng)脈狹窄(CarotidStenosis)。
35.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物，作為清除NO自由基藥物。
36.如權(quán)利要求35所述的藥物組合物,用于治療神經(jīng)退化疾病(Neurodegenerativediseases)、心血管疾病(Cardiovascular disease)、精神疾病、高地綜合癥(Altitudesickness)、糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury)、癌癥、X染色體易裂癥(Fragile X syndrome)、鐮刀型紅血球疾病(Sickle Cell Disease)、扁平苔蘚(Lichen planus)、白斑病(Vitiligo)、或慢性疲勞癥候群。
37.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物，作為抗血栓藥物。
38.如權(quán)利要求37所述的藥物組合物,用于治療血小板增多癥(Thrombocytosis)、骨髓增生性疾病(myeloproliferative disease)、真性紅細(xì)胞增多癥(Polycythemia vera)、或布卡綜合征。
39.如權(quán)利要求26所述的藥物組合物作為治療中風(fēng)或腦梗藥物。
40.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，用于連續(xù)給藥方式來治療中風(fēng)或腦梗。
41.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，用于治療發(fā)病超過3小時(shí)的中風(fēng)或腦梗。
42.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，用于治療發(fā)病超過4小時(shí)的中風(fēng)或腦梗。
43.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，用于治療發(fā)病超過6小時(shí)的中風(fēng)或腦梗。
44.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，用于治療發(fā)病超過24小時(shí)的中風(fēng)或腦梗。
45.一種權(quán)利要求1所述式I化合物的制備方法，
46.如權(quán)利要求45所述的制備方法，步驟(1)更包含將所述連接臂(AA1)的第二和第三連接用基團(tuán)以保護(hù)基保護(hù)，且將具溶血栓活性肽(AA2)和血栓靶向肽(AA3)上除連接用一端外的活性基團(tuán)以保護(hù)基保護(hù)；步驟(3)更包含先將受保護(hù)的第二連接用基團(tuán)去保護(hù)，再將所述具溶血栓活性肽與所述去保護(hù)的第二連接用基團(tuán)相連接；步驟(4)更包含先將受保護(hù)的第三連接用基團(tuán)去保護(hù)，再將所述血栓靶向肽與所述去保護(hù)的第三連接用基團(tuán)相連接；且步驟(4)后更包含將具溶血栓活性肽(AA2)和血栓靶向肽(AA3)上受保護(hù)的活性基團(tuán)去保護(hù)。
47.如權(quán)利要求45所述的制備方法，其中所述第一連接用基團(tuán)為氨基，且所述第二和第三連接用基團(tuán)選自羧基和氨基所構(gòu)成的群組。
48.如權(quán)利要求47所述的制備方法,其中所述連接臂選自L-Lys、L-Asp和L-Glu所構(gòu)成的群組。
49.如權(quán)利要求45所述的制備方法，其中所述具溶血栓活性肽為含PAK(PiO-Ala-Lys)序列、AKP(Ala-Lys-Pro)序列或KAP(Lys-Ala-Pro)序列的寡肽或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列為結(jié)構(gòu)單元的重復(fù)序列肽。
50.如權(quán)利要求49所述的制備方法，其中所述含PAK序列、AKP序列或KAP序列的寡妝選自 PAK(Pro-Ala-Lys)、RPAK (Arg-Pro-Ala-Lys)、ARPAK (Ala-Arg-Pro-Ala-Lys)、GRPAK(Gly-Arg-Pro-Ala-Lys)、QRPAK(Gln-Arg-Pro-Ala-Lys)、AKP、KAP、KPAK (Lys-Pro-Ala-Lys)、PAKP (Pro-Ala-Lys-Pro)、AKPAK (Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)和PAKPA (Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)所構(gòu)成的群組。
51.如權(quán)利要求49所述的制備方法，其中所述以PAK序列、AKP序列或KAP序列為結(jié)構(gòu)單元的重復(fù)序列肽選自(PAK)n、(AKP)η和(KPA)η所構(gòu)成的群組，其中η為2至6。
52.如權(quán)利要求45所述的制備方法,其中所述血栓祀向肽為含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的寡肽。
53.如權(quán)利要求52所述的制備方法，其中所述含RGD序列的寡肽選自RGDS (Arg-Gly-Asp-Ser)、RGDV(Arg-Gly-Asp-Val)和 RGDF(Arg-Gly-Asp-Phe)所構(gòu)成的群組。
54.如權(quán)利要求45所述的制備方法,其中所述血栓祀向肽為RGD(Arg-Gly-Asp)肽與YIGS(Tyr-1le-Gly-Ser)肽進(jìn)行綴合式修飾而得的多肽。
55.如權(quán)利要求54所述的制備方法，其中所述修飾而得的多肽選自HGSRRGDS、YIGSRRGDV, YIGSRRGDF, YIGSRYIGSK、YIGSRYIGSR、YIGSKRGDS、YIGSKRGDF、YIGSKRGDV、YIGSKYIGSK、YIGSKYIGSR、RGDSRGDS、RGDVRGDV、RGDFRGDF、RGDSYIGSR、RGDSYIGSK、RGDVYIGSR、RGDVYIGSK、RGDFYIGSR、和 RGDFYIGSK 所構(gòu)成的群組。
56.如權(quán)利要求45所述的制備方法，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Lys ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(PiO-Ala-Lys)的寡肽；且所述血栓靶向肽為含R⑶序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽。
57.如權(quán)利要求56所述的制備方法，其中1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]_4，4，5，5-四甲基咪唑啉與L-Lys連 接臂的一氨基相連接；所述含PAK序列的寡肽上的羧基與L-Lys連接臂的另一氨基相連接；且所述含RGD序列的寡肽上的氨基與L-Lys連接臂的羧基相連接。
58.如權(quán)利要求56所述的制備方法，其中I，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉與L-Lys連接臂的一氨基相連接；所述含PAK序列的寡肽上的氨基與L-Lys連接臂的羧基相連接；且所述含RGD序列的寡肽上的羧基與L-Lys連接臂的另一氨基相連接。
59.如權(quán)利要求45所述的制備方法，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3_ 二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Asp ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(Pro-Ala-Lys)的寡肽；所述血栓靶向肽為含RGD序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽；且其中1，3-二氧基_2_[ (4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉與L-Asp連接臂的氨基相連接；所述含PAK序列的寡肽上的氨基與L-Asp連接臂的一羧基相連接；且所述含RGD序列的寡肽上的氨基與L-Asp連接臂的另一羧基相連接。
60.如權(quán)利要求45所述的制備方法，其中所述具清除NO自由基活性的咪唑啉類為1，3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉；所述連接臂為L-Glu ;所述具溶血栓活性肽為含PAK序列(PiO-Ala-Lys)的寡肽；且所述血栓靶向肽為含RGD序列(Arg-Gly-Asp)的寡肽；且其中1，3-二氧基_2_[ (4-氧乙酸)苯基]-4，4，5，5-四甲基咪唑啉與L-Glu連接臂的氨基相連接；所述含PAK序列的寡肽上的氨基與L-Glu連接臂的一羧基相連接；且所述含RGD序列的寡肽上的氨基與L-Glu連接臂的另一羧基相連接。
61.如權(quán)利要求56至60任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述含PAK序列的寡妝選自 ARPAK(Ala-Arg-Pro-Ala-Lys)、 GRPAK(Gly-Arg-Pro-Ala-Lys)ΛQRPAK(Gln-Arg-Pro-Ala-Lys) Λ RPAK(Arg-Pro-Ala-Lys)和 PAK 所構(gòu)成的群組；且所述含 RGD 序列的寡妝選自 RGDS (Arg-Gly-Asp-Ser)、RGDV (Arg-Gly-Asp-Val)和RGDF(Arg-Gly-Asp-Phe)所構(gòu) 成的群組。
【文檔編號(hào)】A61P35/02GK103665107SQ201310068532
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年3月5日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月5日
【發(fā)明者】彭師奇, 趙明, 蔣雪云 申請(qǐng)人:永光制藥有限公司