專利名稱：一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑及用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥方劑及其用途，具體地，涉及一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑及其用途。
背景技術：
慢性腎臟病(Chronic kidney disease, CKD)是臨床上除急性腎炎和急性尿路感染(腎臟急性炎癥性疾病)外多種腎臟疾病的共同臨床病理過程，病程遷延，最終會發展為終末期腎臟病(End stage renal disease,ESRD) 0美 國腎臟病數據表明，終末期腎臟疾病的發病人數在不斷增加，從1998年至2002年由39.4人/百萬上升至98.3人/百萬。據此估計，未來10年該數據將以每年4.1%的上升。在我國，成年人群CKD總患病率已達10.8%。因此，如何對CKD進行早期防治、延緩病情進展，是各國腎臟病研究者面臨的重要課題。慢性腎功能衰竭是嚴重腎臟疾病的最終歸宿。據報道我國每年約有13萬人會發生慢性腎衰。雖然血透、腹透及腎移植術的開展為此提供了新途徑，有效延長了病人的生命，但由于存在費用高、腎源不足及各種并發癥的問題，尚難完全普及，尋找非透析療法對此疾病的防治無疑十分關鍵。與此同時，馬兜鈴酸腎病是近年 來發現的主要以腎小管間質性病變為主的疾病，其病情進展迅速，預后較差，臨床上尚無有效的治療方法，目前多以糖皮質激素治療為主，但是用藥適應證及具體用藥方案還未有定論。由于含馬兜鈴酸成分的中草藥及其成藥在某些疾病的治療方面有其獨特的療效，還不可能將其完全限制使用。探討此疾病的發病機制及尋找有效的預防和治療措施是關鍵需要解決的問題。臨床資料顯示:目前我國CKD患者中IgA腎病(IgA nephropathy, IgAN)患者約占原發性腎小球疾病的30% -40%。積極尋找延緩或阻斷腎小球硬化發生發展過程對于CKD患者的治療是當前腎臟病學者共同關注的話題。另外，雖然目前以葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B, SEB)或以SEB為主誘導的模型接近人類IgAN發病過程，反映其部分病理改變特點，但是該模型的不足之處在于腎小球硬化形成時間較長且難以控制。因此，尋找一種近似人類IgAN發病規律且腎小球硬化出現時間較早的實驗動物模型也是IgAN研究過程中一需要迫切解決的問題。
發明內容
本發明的目的是提供一種用于防治慢性腎臟病的中藥復方制劑，針對目前慢性腎臟病治療的不足，提供新型慢性腎臟病的治療方法，該方法能夠更好的提高目前慢性腎臟病治療療效的研究現狀。為了達到上述目的，本發明提供了一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，該中藥復方制劑的原料包含以下成分:肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10-15g、牡丹皮10-15g。肉蓯蓉:性味甘咸、溫性；歸腎、大腸經，有補腎助陽，潤腸通便作用。仙靈脾:性味辛甘、溫性；歸腎、肝經，有補腎壯陽，祛風除濕作用。桃仁:性味苦甘；歸心、肝、大腸經，有活血化瘀，潤腸通便，止咳平喘作用。紅花:性味苦、溫性；歸心、肝經，有活血通經，祛瘀止痛作用。牡丹皮:性味苦辛，微寒；歸心、肝、腎經，有清熱涼血，活血祛瘀作用。肉蓯蓉、仙靈脾為君藥，協同作用，桃仁、紅花為臣藥，協同作用，丹皮為佐藥。該中藥復方實際也可根據需要添加其他輔料。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，其中，所述的中藥復方制劑的原料由以下成分組成:肉蓯蓉30g、仙靈脾15g、桃仁15g、紅花15g、牡丹皮15g。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，其中，所述的中藥復方制劑的用法為用水煎服。所述的用水煎服具體過程包含:水加入后，泡上30分鐘左右再煎。一般先用武火(大火)，煎沸后再用文火(小火)，保持沸的狀態，避免藥液外溢及過快熬干。煎藥時不宜頻頻打開鍋蓋，盡量防止氣味走失，減少揮發成分的外溢。一般武火5-10分鐘，文火煎20分種左右可以把藥液倒出來，然后加水 (和第一次相當或少點)再如上法煎一次，把此煎煮的藥液混合后分2-3次/日服用。本發明還提供了一種上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑的用途，其中，所述的用途包含用于馬兜鈴酸腎病發病機制的研究，以及用于對相應的馬兜鈴酸腎病的防治。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑的用途，其中，所述的用途還包含用于對IgAN腎小球硬化大鼠模型進行干預和研究。本發明提供的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑具有以下優點: (I)CKD防治是目前腎臟病研究領域的難題，本發明在現代醫學規范治療基礎上，積極
探索中醫藥在此領域的應用。根據中醫“久病多虛”、“久病多瘀”理論，通過溫陽活血防治CKD，研究證實本發明具有顯著臨床療效；并在此基礎上展開實驗研究，進一步闡明其作用機制。因此，具備研究可行性及合理性。(2)本發明提供的溫陽活血方是經過長期臨床治療的經驗方，相較于國內其他單位所用中藥方劑，具有藥味少(由肉蓯蓉、仙靈脾、桃仁、紅花、牡丹皮五味藥組成)、用藥合理(溫涼并用、攻補兼施，使“補而不滯邪，瀉而不傷正”)、成本低、效果好等特點，因此易于推廣使用。目前我們已在臨床對其進行推廣應用，而國內外同類研究的治療用藥，多局限于臨床或者實驗研究階段。(3)在馬兜鈴酸腎病發病機制研究方面，國內外同類研究多集中于馬兜鈴酸對腎小管上皮細胞的影響等方面，而馬兜鈴酸對腎血管尤其是腎間質微血管的影響卻鮮有研究報道。因此，我們用關木通成功復制了大鼠慢性馬兜鈴酸腎病模型，通過施用本發明在該模型上研究慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎缺血損傷機制，對可能參與該過程的細胞因子Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、BMP-7、Caspase-3和CD34進行了探討，初步揭示了腎缺血損傷機制在慢性馬兜鈴酸腎病進展中的作用。(4)本發明還通過復合感染聯合5/6腎切除方法構建出的IgAN腎小球硬化動物模型驗證了溫陽活血方可延緩IgAN腎小球硬化模型的進展。
圖1為實施例二的實驗流程示意圖。圖2為實施例二的各組4周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖3為實施例二的各組8周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖4為實施例二的各組12周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖5為實施例二的HIF-1 α表達的蛋白免疫印跡(Western blot)檢測結果示意圖。圖6為實施例二的TGF-β I表達的Western blot檢測結果示意圖。圖7為實施例二的MMP-9表達的Western blot檢測結果示意圖。圖8為實施例二的 ΜΡ-1表達的Western blot檢測結果示意圖。圖9為實施例三的體內實驗流程示意圖。圖10-1和圖10-2為實施例三的體外實驗流程示意圖。圖11為實施例三的體內實驗各組大鼠腎小球電鏡結果示意圖(X4200)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖12為實施例三的體內實驗各組大鼠腎小管電鏡結果示意圖(X 11500)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方 組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖13為實施例三的體內實驗各組大鼠腎間質電鏡結果示意圖(X 11500)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖14為實施例三的體內實驗各組大鼠腎組織BMP-7表達情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖15為實施例三的體內實驗各組大鼠腎組織Caspase-3表達情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖16為實施例三的體內實驗各組大鼠腎組織⑶34表達情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖17為實施例三的體外實驗倒置顯微鏡下觀察NRK-52E細胞正常形態示意圖。圖18為實施例三的體外實驗各組透射電鏡觀察示意圖。圖19為實施例三的體外實驗各組免疫細胞化學法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α -SM)的表達結果示意圖。圖20為實施例四的實驗流程示意圖。圖21為實施例四的各組大鼠免疫熒光的表達結果示意圖(Χ400)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖22為實施例四的各組大鼠糖原染色(PAS)光鏡觀察示意圖(Χ400)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖23為實施例四的各組大鼠透射電鏡觀察示意圖(X 5000)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖24為實施例四的各組大鼠TGF-β I免疫組化結果示意圖(X 200)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。
圖25為實施例四的各組大鼠FN免疫組化結果示意圖(X 200)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖26為實施例四的各組大鼠a -SMA免疫組化結果示意圖(X 200)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖27為實施例四的各組大鼠I3DGF免疫組化結果示意圖(X 200 )，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。圖28為實施例四的各組大鼠FGF-1免疫組化結果示意圖(X200)，N假手術組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫結合組。
具體實施例方式以下結合附圖對本發明的具體實施方式
作進一步地說明。實施例一:用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑(溫陽活血方)改善CKD的臨床研究。通過采用溫陽活血方治療CKD2-3期陽虛血瘀型患者，觀察其對腎功能:包括血清肌酐(血清Scr)、血清胱抑素C (Cys-C)、尿素氮(BUN)、24小時蛋白定量、內生肌酐清除率(Ccr)、腎小球濾過濾(eGFR)等，血常規:包括血紅蛋白(Hb)、紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)等，肝功能:包括谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)等，心電圖(EKG)等實驗指標的影響，旨在進一步了解溫陽活血方在治療CKD2-3期陽虛血瘀型患者的臨床療效和安全性，探求慢性腎臟病的優化治療方案。選取213例CKD2-3期陽虛血瘀型患者，采用隨機對照方法將其分為溫陽活血方組(108例)和西醫一體化治療 組(105例)，其中西醫一體化治療組給予西醫基礎治療，溫陽活血方組在西醫基礎治療的基礎上加用溫陽活血方，療程為12周，連續觀察一個療程后檢測兩組治療前后腎功能(血清Scr、BUN、Cys-C)、24h尿蛋白定量，Ccr、eGFR,血常規(Hb、RBC、WBC、PLT)、肝功能(ALT、AST)、心電圖、中醫癥候積分及臨床癥狀積分的變化情況。觀察過程中定期隨訪，如實填寫臨床病例觀察表及癥狀積分表。根據以上數據進行統計分析及有效性評價。本實施例所選213例病例均為2010年I月至2012年7月就診于上海市普陀區中心醫院、上海市利群醫院、上海市第六人民醫院腎內科門診及住院患者。一.診斷標準。西醫診斷標準:2005年，國際腎臟病學會提高腎臟病整體預后工作組(KDIGO)明確提出了慢性腎臟病(CKD)的定義:(1)腎臟損傷(腎臟結構或功能異常)>3個月，伴或不伴有腎小球濾過率(GFR)下降，腎臟病理學檢查異常或腎臟損傷(血、尿成分或影像學檢查異常)；(2)eGFR <60ml*min-l* (1.73m2)-1彡3個月，有或無腎臟損傷證據。慢性腎臟病的臨床分期見表I。表I 慢性腎臟病的分期標準。
權利要求
1.種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，其特征在于，該中藥復方制劑的原料包含以下成分: 肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10_15g以及牡丹皮10_15g。
2.權利要求1所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，其特征在于，所述的中藥復方制劑的原料由以下成分組成: 肉蓯蓉30g、仙靈脾15g、桃仁15g、紅花15g以及牡丹皮15g。
3.權利要求1所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，其特征在于，所述的中藥復方制劑的用法為用水煎服。
4.種如權利要求f 3中任意一項所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑的用途，其特征在于，所述的用途包含用于馬兜鈴酸腎病發病機制的研究。
5.權利要求4所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑的用途，其特征在于，所述的用途 還包含用于對IgAN腎小球硬化大鼠模型進行干預。
全文摘要
本發明公開了一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑及用途，該中藥復方制劑的原料由以下成分組成肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10-15g以及牡丹皮10-15g。該中藥復方制劑的用法為用水煎服。本發明還提供該用于防治慢性腎臟病的中藥復方制劑的用途，即用于馬兜鈴酸腎病發病機制研究的用途，和用于對IgAN腎小球硬化大鼠模型進行干預的用途。本發明提供的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復方制劑，針對目前慢性腎臟病治療的不足，提供了一種新型慢性腎臟病的治療和研究方法，能夠更好的提高目前慢性腎臟病治療療效的研究現狀。
文檔編號A61K36/736GK103083434SQ20131005674
公開日2013年5月8日 申請日期2013年2月22日 優先權日2013年2月22日
發明者彭文, 何立群, 王云滿, 王浩, 王利, 付文成, 池楊峰 申請人:上海市普陀區中心醫院, 上海中醫藥大學附屬普陀醫院