專利名稱：一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種納米纖維膜，尤其涉及一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜及其制備方法。
背景技術(shù)：
肌腱粘連是臨床常見疾患，由于缺乏有效的粘連防治措施，常常使治療陷入“粘連-松解-再粘連”的惡性循環(huán)，嚴(yán)重影響了患者的肢體功能。在肌腱和周圍組織之間放置防粘連膜具有一定減少肌腱粘連的作用，但是它們不具有促進(jìn)肌腱愈合和滑動的功能。此夕卜，由于材料或結(jié)構(gòu)的原因，包裹肌腱后只能起到物理阻隔作用，可能出現(xiàn)的排異以及干擾肌腱愈合等現(xiàn)象嚴(yán)重影響肌腱功能的恢復(fù)。因此，尋找合適的防粘連膜材料和結(jié)構(gòu)，負(fù)載防粘連藥物，通過藥物的不斷釋放促進(jìn)肌腱愈合，達(dá)到防止肌腱粘連的目的，具有重要意義。早期應(yīng)用的防粘連膜多采用非生物材料(如硅橡膠)制成，但存在組織反應(yīng)大、排異明顯、無通透性、影響肌腱的內(nèi)源性愈合與需二期手術(shù)取出等不足，嚴(yán)重時可因為阻隔了肌腱的營養(yǎng)而使其發(fā)生變性。因此，目前這種材料構(gòu)成的防粘連膜已基本不用。近年來，由可降解高分子材料制成的防粘連膜已經(jīng)問世，在這一類物質(zhì)中，既有天然的高分子材料，如纖維素衍生物、透明質(zhì)酸、幾丁質(zhì)及其衍生物等，也有合成的高分子聚合物，如聚乳酸(polylactic acid, PLA)、聚己內(nèi)酯(polycaprolactone, PCL)、聚輕基乙酸及它們的共聚物等。
肌腱的愈合與粘連形成過程比較復(fù)雜，堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblast growth factor, bFGF)、胰島素樣生長因子-1、表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-13、血小板源性生長因子等細(xì)胞因子都參與了這一過程。Chan等證實了正常肌腱細(xì)胞和腱鞘細(xì)胞均能產(chǎn)生bFGF等細(xì)胞因子，進(jìn)一步研究證實bFGF等細(xì)胞因子是通過細(xì)胞增殖反應(yīng)來促進(jìn)肌腱愈合，并在鼠髕腱模型中發(fā)現(xiàn)bFGF等細(xì)胞因子可促進(jìn)肌腱細(xì)胞增殖和III型膠原的合成。沙德峰等在大鼠肌腱損傷縫接處放置bFGF復(fù)合緩釋降解膜，實驗結(jié)果顯示bFGF復(fù)合緩釋降解膜有增加肌腱內(nèi)部愈合能力的作用，并能使腱內(nèi)部愈合快于腱周結(jié)締組織增生，不僅加快了愈合過程，而且達(dá)到減輕或防止粘連形成的作用。細(xì)胞因子雖然具有高生物活性、促進(jìn)肌腱愈合和減少粘連形成的優(yōu)勢，但也存在半衰期短、不耐酸堿及水溶液中易失活等不足。因此，理想的治療模式是提供一個載體，使其可以在局部緩慢穩(wěn)定的釋放，并保證細(xì)胞因子活性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，能緩慢穩(wěn)定的釋放細(xì)胞因子，保證了細(xì)胞因子的連續(xù)釋放和長期活性。本發(fā)明提供了一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，組成材料包括細(xì)胞因子、葡聚糖和可降解高分子材料，其中細(xì)胞因子負(fù)載在所述葡聚糖玻璃體的納米顆粒中，負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒封裝在所述可降解高分子材料的纖維中。
優(yōu)選地，所述負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒中細(xì)胞因子和葡聚糖的質(zhì)量比為(0.5-0.8): (10-10000)。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料的質(zhì)量為細(xì)胞因子和葡聚糖總質(zhì)量的1-200倍。優(yōu)選地,所述負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒的粒徑為0.05_10um。優(yōu)選地，所述細(xì)胞因子選自堿性成纖維細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子-1、表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-13、血小板源性生長因子等中的一種或多種。優(yōu)選地，所述所述細(xì)胞因子為堿性成纖維細(xì)胞生長因子。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料選為聚羥基羧酸、幾種羥基羧酸單體的共聚物、羥基羧酸與多元醇共聚物、聚磷酸酯、聚碳酸酯或聚酸酐中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料為聚羥基羧酸。其中，羥基羧酸優(yōu)選為α -羥基羧酸，所述α-羥基羧酸指的是所述羧酸中，至少有一個羥基位于與羧基相鄰的碳原子上，分子結(jié)構(gòu)為R1-C (R2) (OH) -C 00H，其中R1選自H或C-ClO的烷基，更優(yōu)選為H或C1-C5的烷基，更優(yōu)選為H或C1-C3的烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基等，R1最優(yōu)選為甲基(即α -羥基羧酸為乳酸)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的是，本發(fā)明所述羥基羧酸也可以用內(nèi)酯替代，如己內(nèi)酯替代羥基己酸，由于本發(fā)明中，內(nèi)酯與羥基羧酸所起作用相同，因此，內(nèi)酯也包括在本發(fā)明羥基所述的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，所述多元醇優(yōu)選為二元醇，最優(yōu)選為α - 二元醇，如丙二醇、乙二醇，最優(yōu)選為乙二醇。本發(fā)明所述可降解高分子材料最優(yōu)選為乳酸均聚物、或乳酸與其它α -羥基羧酸共聚物、或乳酸與α_二元醇共聚物、或其混合物；更優(yōu)選為乳酸與α-二元醇共聚物，更優(yōu)選為乳酸與乙二醇共聚物、乳酸與α -丙二醇共聚物、或其混合物，最優(yōu)選為乳酸與乙二醇共聚物。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的是，本發(fā)明所述二元醇也可以用環(huán)氧化合物替代，如環(huán)氧乙烷替代乙二醇、環(huán)氧丙醇替代丙二醇，由于本發(fā)明中，環(huán)氧烷化合物與多元醇所起作用相同，因此，環(huán)氧烷化合物也包括在本發(fā)明羥基所述的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料選聚羥基羧酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚己內(nèi)酯共聚物、聚己內(nèi)酯、聚磷酸酯、聚碳酸酯或聚酸酐或者其他生物醫(yī)用類可降解高分子材料等中的一種或幾種，。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料分子量為20KDa_200KDa。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料為聚乳酸，分子量為30_70KDa。優(yōu)選地，所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜的纖維直徑為0.1-30 μ m0本發(fā)明還提供了一種上述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜的制備方法，包括以下步驟:步驟1，將細(xì)胞因子、葡聚糖溶液和聚多元醇溶液混合，控制細(xì)胞因子、葡聚糖和聚多元醇的質(zhì)量比為1: (10-1000): (100-10000)，然后干燥得到固體，固體用有機溶劑洗滌除去聚多元醇，得到負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒；步驟2，將步驟I得到的負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒和可降解高分子材料分散或溶解在有機溶劑中，通過靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，控制可降解高分子材料的質(zhì)量為步驟I中得到的負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆?？傎|(zhì)量的1-200倍。
優(yōu)選地，步驟I中葡聚糖溶液的濃度為0.2_20wt %，聚多元醇的濃度為
0.2-20wt % ο其中，所述聚多元醇優(yōu)選為聚二元醇，更優(yōu)選為聚^-二元醇；^-二元醇指的是至少有兩個相鄰的碳原子上分別連接有一個羥基，分子結(jié)構(gòu)為R3-C(R4) (OH)-C(Rs)(OH) -R6，其中，R3、R4、R5、R6分別獨立地選自H或Cl-ClO的烷基，更優(yōu)選為H或C1-C5的烷基，更優(yōu)選為H或C1-C3的烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基；R3、R4、R5、R6分別獨立地最優(yōu)選為H (即多元醇或α-二元醇為乙二醇)。應(yīng)當(dāng)注意的是，上述二元醇也可以用環(huán)氧化合物替代，如環(huán)氧乙烷替代乙二醇、環(huán)氧丙烷替代α-丙二醇，所制備的聚合物具有相同的結(jié)構(gòu)。優(yōu)選地，所述聚多元醇為聚乙二醇。優(yōu)選地，所述聚乙二醇為PEG6000或PEG4000等。所述有機溶劑優(yōu)選為脂肪烴、芳香烴、氯代烴、醇、酮、醛、酯、腈、羧酸、亞砜、酰胺類溶劑。所述脂肪烴的例子包括:戍烷、己烷、辛烷、環(huán)己烷等。所述芳香烴的例子包括:苯乙烯、苯、甲苯、二甲苯等。所述氯代烴的例子包括:二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、溴仿、氯苯、二氯苯(對二氯苯、鄰二氯苯)、四氯乙烷等。所述醇的例子包括:甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、叔丁醇、甘油、丁二醇、戊二醇、乙二醇單 甲醚、乙二醇單乙醚、乙二醇單丁醚等。所述酮的例子包括:丙酮、丁酮、甲基丁基酮、環(huán)己酮等。所述醛的例子包括:乙醛、丙醛、戊二醛、乙二醛等。所述酯的例子包括:乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丁酯、甲酸戊酯等。所述腈的例子如:乙腈等。所述羧酸的例子包括:甲酸、乙酸等。所述亞砜的例子包括:二甲基亞砜、氯化亞砜、二苯基亞砜等。所述酰胺的例子包括:N，N- 二甲基甲酰胺、N，N- 二乙基甲酰胺等。優(yōu)選地，步驟I中所述有機溶劑為正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺等中的一種或幾種。優(yōu)選地，步驟2中所述有機溶劑為能溶解可降解高分子材料的溶劑。優(yōu)選地，步驟2中所述有機溶劑為為甲醇、乙醇、正丁醇、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、N, N-二甲基甲酰胺(DMF)、異丙醇、三氟乙醇或六氟異丙醇或其它能溶解可降解高分子材料等中的一種或幾種。優(yōu)選地，步驟2中可降解高分子材料溶解在有機溶劑中，得到可降解高分子材料溶液，然后將負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒分散或溶解在生物降解高分子的溶液中。優(yōu)選地，步驟2中所述可降解高分子材料為聚乳酸，分子量為30_70KDa。優(yōu)選地，步驟2中通過共混靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜。優(yōu)選地，步驟2中靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓8-25kV，流速0.01-0.lmL/min，接受臺離噴絲頭的距離10-20cm。本發(fā)明提供的負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜將細(xì)胞因子包裹在葡聚糖玻璃體納米顆粒中后，負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒再進(jìn)一步被封裝在可降解高分子材料纖維中。將細(xì)胞因子包裹在葡聚糖玻璃體納米顆粒中可有效地克服細(xì)胞因子不耐酸堿及水溶液中易失活等缺陷，保證了細(xì)胞因子的長期活性，而且細(xì)胞因子釋放時通過兩個包層相繼擴散，可以使細(xì)胞因子有效釋放時間長。實驗證明，本發(fā)明提供的負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜沒有突釋，有效釋放時間可達(dá)30天，而現(xiàn)有負(fù)載細(xì)胞因子的PLLA纖維的有效釋放時間僅為10天。本發(fā)明提供的負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜有效地控制細(xì)胞因子的緩慢釋放，保證了細(xì)胞因子的長期活性，而生物可降解高分子材料則自行降解，本制劑無毒、無免疫原性，生物相容性好，提聞療效，減少副作用，在臨床上具有重要意義。
圖1為實施例1所得負(fù)載bF·GF的葡聚糖玻璃體納米顆粒的掃描電鏡圖；圖2為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的掃描電鏡圖；圖3為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的體外藥物釋放實驗結(jié)果圖；圖4為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的體外細(xì)胞實驗增生結(jié)果圖；圖5為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的體外細(xì)胞實驗細(xì)胞活性圖；圖6為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的動物實驗整體觀察結(jié)果圖；圖7為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的動物實驗的組織切片圖。圖8為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的動物實驗的I膠原蛋白染色檢測圖；圖9為實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜的動物實驗的蛋白表達(dá)檢測圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，以更好地理解本發(fā)明。實施例1將0.1gbFGF加入100mL5%葡聚糖水溶液中溶解均勻，然后與1000mL5% PEG溶液使用漩渦混合器混合，_80°C預(yù)凍24h后冷凍干燥。凍干粉分散在二氯甲烷中，渦流，獲得均一的懸濁液，離心除去上清液，重新加入二氯甲烷(DCM)，重復(fù)上述操作3次。除去殘余二氯甲烷后得到負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)。取IOOmg所得bFGF/DGNs通過冰浴超聲波處理分散在2gDCM中，0.5g聚左乳酸(PLLA)和Ig DMF通過冰浴攪拌加入到bFGF/DGNs，通過靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載bFGF的納米纖維膜(bFGF/DGNs-PLLA)。其中，靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓20kV，流速0.04mL/min,接受臺離噴絲頭的距離15cm。采用同樣的制備工藝制備bFGF-PLLA纖維膜和PLLA纖維膜。掃描電鏡(SEM)觀察本實施例所得負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)，結(jié)果如圖1所示，納米顆粒平均粒徑約為200 500nm。掃描電鏡(SEM)觀察本實施例所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜，結(jié)果如圖2所示，bFGF/DGNs成功地封裝到PLLA中，bFGF/DGNs-PLLA 纖維直徑均一，約為 0.77±0.21 μ m。使用bFGF酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測量計算本實施例所得bFGF/DGNs-PLLA纖維膜中 bFGF 包封率達(dá)到 48.71±13.53%，而 bFGF-PLLA 纖維膜中僅為 24.64±16.43%, bFGF/DGNs-PLLA纖維膜的bFGF包封率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于bFGF-PLLA纖維膜，表明bFGF/DGNs-PLLA纖維膜中DGNs能很好地保護(hù)bFGF的活性，保證了 bFGFs的長期活性。建立體外藥物釋放模型，觀察本實施例所得bFGF/DGNs-PLLA纖維膜的藥物釋放情況，結(jié)果如圖3所示，葡聚糖保護(hù)bFGF的bFGF/DGNs-PLLA纖維膜沒有初期突釋，控制釋放bFGF近30天，bFGF的累計釋放量為6IOOpg。然而，bFGF-PLLA纖維膜控制釋放bFGF近20天，bFGF的累計釋放量為2900pg。bFGF/DGNs-PLLA纖維膜中釋放累計的bFGF是bFGF-PLLA纖維膜中的兩倍多。進(jìn)行體外細(xì)胞增生實驗，結(jié)果如圖4所示，比起PLLA纖維膜和bFGF-PLLA纖維膜，bFGF/DGNs-PLLA纖維膜上細(xì)胞生長更好。測試細(xì)胞活性，結(jié)果如圖5所示，比起PLLA纖維膜和bFGF-PLLA纖維膜，bFGF/DGNs-PLLA纖維膜上死/活細(xì)胞率越低，表明bFGF/DGNs-PLLA纖維膜更利于細(xì)胞粘連與增生。進(jìn)行動物實驗，將本實施例所得bFGF/DGNs-PLLA纖維膜作為物理屏障，用于肌腱損傷，防治肌腱周圍組織粘連，實驗結(jié)果如圖6 8所示。圖6中，空白組(control)出現(xiàn)嚴(yán)重腱周粘連，需要銳器剝離來分離；PLLA組、bFGF-PLLA組和bFGF/DGNs-PLLA組僅觀察到少量粘連區(qū)域，且可以通過鈍器剝離來分離，bFGF-PLLA組和bFGF/DGNs-PLLA組中肌腱厚度顯著增加，尤其是bFGF/DGNs-PLLA組，表明bFGF促進(jìn)肌腱愈合。圖7中，空白組(control)腱周組織和肌腱之間布滿了纖維組織束；對照例組(PCL)在腱周組織和肌腱邊界處觀察到疏松纖維組織束；PLLA組、bFGF-PLLA組和bFGF/DGNs-PLLA組中幾乎沒有松纖維組織束，bFGF/DGNs-PLLA組中觀察到明顯的腱內(nèi)膠原束，表明bFGF/DGNs-PLLA組肌腱愈合更好、血管密度更高。圖8中，bFGF/DGNs-PLLA組中I膠原蛋白陽性表達(dá)最多，排列最密集，也表明了 bFGF/DGNs-PLLA組肌腱愈合更好。圖9也表明bFGF/DGNs-PLLA組中I膠原蛋白表達(dá)最聞。實施例2將0.1gbFGF加入100mL5%葡聚糖水溶液中溶解均勻，然后與1000mL5% PEG溶液使用漩渦混合器混合，_80°C預(yù)凍24h后冷凍干燥。凍干粉分散在二氯甲烷中，渦流，獲得均一的懸濁液，離心除去上清液，重新加入二氯甲烷(DCM)，重復(fù)上述操作3次。除去殘余二氯甲烷后得到負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)。取120mg所得bFGF/DGNs通過冰浴超聲波處理分散在2gDCM中，0.5g聚左乳酸(PLLA)和Ig DMF通過冰浴攪拌加入到bFGF/DGNs，通過共混靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載bFGF的納米纖維膜(bFGF/DGNs-PLLA)。其中，靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓20kV，流速0.04m L/min,接受臺離噴絲頭的距離15cm。實施例3將0.1gbFGF加入 100mL5%葡聚糖水溶液中溶解均勻，然后與1000mL5% PEG溶液使用漩渦混合器混合，_80°C預(yù)凍24h后冷凍干燥。凍干粉分散在二氯甲烷中，渦流，獲得均一的懸濁液，離心除去上清液，重新加入二氯甲烷(DCM)，重復(fù)上述操作3次。除去殘余二氯甲烷后得到負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)。取IlOmg所得bFGF/DGNs通過冰浴超聲波處理分散在2gDCM中，0.5g聚左乳酸(PLLA)和Ig DMF通過冰浴攪拌加入到bFGF/DGNs，通過共混靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載bFGF的納米纖維膜(bFGF/DGNs-PLLA)。其中，靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓20kV，流速0.04mL/min,接受臺離噴絲頭的距離15cm。
實施例4將0.1gbFGF加入100mL5%葡聚糖水溶液中溶解均勻，然后與1000mL5% PEG溶液使用漩渦混合器混合，_80°C預(yù)凍24h后冷凍干燥。凍干粉分散在二氯甲烷中，渦流，獲得均一的懸濁液，離心除去上清液，重新加入二氯甲烷(DCM)，重復(fù)上述操作3次。除去殘余二氯甲烷后得到負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)。取IOOmg所得bFGF/DGNs通過冰浴超聲波處理分散在2gDCM中，0.6g聚左乳酸(PLLA)和Ig DMF通過冰浴攪拌加入到bFGF/DGNs，通過共混靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載bFGF的納米纖維膜(bFGF/DGNs-PLLA)。其中，靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓20kV，流速0.04m L/min,接受臺離噴絲頭的距離15cm。
實施例5 將0.1gbFGF加入100mL5%葡聚糖水溶液中溶解均勻，然后與1000mL5% PEG溶液使用漩渦混合器混合，_80°C預(yù)凍24h后冷凍干燥。凍干粉分散在二氯甲烷中，渦流，獲得均一的懸濁液，離心除去上清液，重新加入二氯甲烷(DCM)，重復(fù)上述操作3次。除去殘余二氯甲烷后得到負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒(bFGF/DGNs)。取IOOmg所得bFGF/DGNs通過冰浴超聲波處理分散在2gDCM中，0.7g聚左乳酸(PLLA)和Ig DMF通過冰浴攪拌加入到bFGF/DGNs，通過共混靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載bFGF的納米纖維膜(bFGF/DGNs-PLLA)。其中，靜電紡工藝參數(shù)條件為:電壓20kV，流速0.04m L/min,接受臺離噴絲頭的距離15cm。體外藥物釋放實驗、體外細(xì)胞增生實驗和動物實驗表明，實施例2-5所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜同實施例1所得負(fù)載bFGF的納米纖維膜，沒有初期突釋，藥物有效釋放時間約為30天，能有效改善組織粘連、促進(jìn)肌腱愈合。綜上所述，本發(fā)明提供的負(fù)載bFGF的納米纖維膜將bFGF包裹在葡聚糖玻璃體納米顆粒中后，負(fù)載bFGF的葡聚糖玻璃體納米顆粒再進(jìn)一步被封裝在可降解高分子材料纖維中。將bFGF包裹在葡聚糖玻璃體納米顆粒中可有效地克服bFGF不耐酸堿及水溶液中易失活等缺陷，保證了 bFGFs的長期活性，沒有初期突釋，而且bFGF釋放時通過兩個包層相繼擴散，可以使bFGF有效釋放時間長。以上對本發(fā)明的具體實施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，組成材料包括細(xì)胞因子、葡聚糖和可降解高分子材料，其中細(xì)胞因子負(fù)載在所述葡聚糖玻璃體的納米顆粒中，負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒封裝在所述可降解高分子材料的纖維中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒中細(xì)胞因子和葡聚糖的質(zhì)量比為(0.5-0.8): (10-10000)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述可降解高分子材料的質(zhì)量為細(xì)胞因子和葡聚糖總質(zhì)量的1-200倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述細(xì)胞因子選自堿性成纖維細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子-1、表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-13、血小板源性生長因子中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述可降解高分子材料選自聚羥基羧酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚己內(nèi)酯共聚物、聚己內(nèi)酯、聚磷酸酯、聚碳酸酯或聚酸酐中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述可降解高分子材料分子量為20KDa-200KDa。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，其特征在于，所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜的纖維直徑為0.1-30 μ m。
8.—種如權(quán)利要求1所述負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1，將細(xì)胞因子、葡聚糖溶液和聚多元醇溶液混合，控制細(xì)胞因子、葡聚糖和聚多元醇的質(zhì)量比為1: (10-1000): (100-10000)，然后干燥得到固體，固體用有機溶劑洗滌除去聚多元醇，得到負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒，；步驟2，將步驟I得到的負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒`和可降解高分子材料分散或溶解在有機溶劑中，通過靜電紡絲技術(shù)制得負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，控制可降解高分子材料的質(zhì)量為步驟I中得到的負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒總質(zhì)量的1-200倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述制備方法，其特征在于，步驟I中葡聚糖溶液的濃度為0.2-20wt%，聚多元醇的濃度為0.2-20wt%。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述制備方法，其特征在于，步驟I中聚多元醇為聚乙二醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜，組成材料包括負(fù)載細(xì)胞因子、葡聚糖和可降解高分子材料，其中細(xì)胞因子負(fù)載在葡聚糖玻璃體納米顆粒中，負(fù)載細(xì)胞因子的葡聚糖玻璃體納米顆粒封裝在可降解高分子材料的纖維中。該負(fù)載細(xì)胞因子的納米纖維膜能有效地控制細(xì)胞因子的緩慢釋放，保護(hù)了細(xì)胞因子在制備及釋放過程中的長期活性，而生物可降解高分子材料則自行降解，本制劑無毒、無免疫原性，生物相容性好，提高療效，減少副作用，在臨床上具有重要意義。
文檔編號A61L31/04GK103071188SQ20131003002
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者范存義, 劉珅, 崔文國, 金拓, 吳飛 申請人:上海市第六人民醫(yī)院