一種中藥組合物及其制備方法和用途的制作方法

專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及ー種中藥組合物及其制備方法和用途，具體涉及一種由制何首烏、葛根、緑茶、紅花制成的中藥組合物及其制備方法以及該中藥組合物在制備具有增強免疫力和降血脂作用的保健產品中的應用。
背景技術：
西醫認為，隨著人們高脂、高 糖、高蛋白的飲食習慣的改變，加之工作、學習的忙碌和緊張、體育活動的減少、煙酒過度等原因，導致機體代謝功能紊亂，而致高血脂癥、脂肪肝、代謝紊亂綜合征、動脈粥樣硬化癥等相關疾病逐年升高。而血脂異常和動脈粥樣硬化是多種心腦血管病發生和發展的重要危險因素。動脈粥樣硬化穩定斑塊向易損斑塊的轉變與心腦血管病事件的發生有密切關系。動脈粥樣硬化的形成是ー個漫長而復雜的過程，血脂過高是引起動脈樣硬化的主要因素，而炎性反應貫穿于易損斑塊的形成及破裂的全過程。Ross教授曾明確提出“動脈粥樣硬化是ー種炎癥性疾病”。炎癥參與動脈粥樣硬化的發生發展，最終導致動脈粥樣斑塊破裂及血栓形成，乃至發生急性心肌梗死，急性腦卒中等。現代研究表明，免疫因素(細胞免疫、體液免疫、自身免疫、補體系統、細胞因子、粘咐因子及細胞凋亡等)介入了動脈粥樣硬化的發生和發展。腦卒中吋，中樞神經系統受損勢必影響到機體的免疫功能，而免疫系統亦可反饋影響和調節中樞神經系統。大量動物實驗和臨床觀察證明腦血管病存在免疫功能異常，對疾病的發生、發展起到重要作用。具體有(I)T細胞免疫功能低下，國內外學者對腦血管病外周的免疫功能檢測數結果表明，淋巴細胞轉化率降低，總T細胞減少，CD4+/CD8+比值下降，且細胞免疫功能下降的程度與腦損傷部位及病情的嚴重程度有夫。(2)體液免疫反應亢進，腦血管疾病患者自身抗體的檢出率及血清IgG明顯高于正常人，且血液循環中有過量的免疫復合物(CIC)，CIC對血管壁的免疫損傷作被認為是動物粥樣硬化發生或加重的重要因素。同時補體系統激活也參與了動脈粥樣硬化的發生、發展以及血栓形成過程，在腦血管病的發病中起重要作用。(3)細胞因子參與炎癥及腦損傷，患者外周血IL-2活性降低，而11-6、IL-8升高，TNF-a的表達增強。紅細胞免疫功能降低，腦血管病患者紅細胞免疫粘附功能降低，清除CIC的能力下降，使CIC沉積于血管內皮，造成損害，重型患者較為明顯，提示臨床上可將紅細胞免疫功能的測定作為判定預后的參考指標。同樣，各種細胞和分子介導的免疫機制也參于了冠心病動脈粥樣硬化的發生，促進動脈粥樣硬化的發展、惡化。鑒于心腦血管病在發病的過程中存在免疫功能平衡失調，好能盡早給予免疫療法，提高機體免疫調節水平，對早期預防動脈粥樣硬化，防治心腦血管病開辟一條新的途徑。中醫認為本證的發生與發展與年老體衰、膏梁厚味、七情內傷、外感六淫等病因有關。若病邪久羈，則損肝傷脾。損肝則氣機不利，《素問 舉痛論》云“百病生于氣”，因氣為血帥，氣行則血行，氣滯血瘀，血瘀則脈不通；傷腎則腎陰不足，陰虛生內熱。瘀熱互結，日久則化熱生毒，瘀、熱、毒互結，阻滯脈道，損傷脈絡，侵犯五臟，終至脈道狹窄，甚至阻塞而致諸癥叢生。
專利200910018352提供ー種具有增強免疫力和降脂作用的保健品及其制備方法，該保健品是由下述重量份配比的原料制成的制品制何首烏3 5、葛根2 4、緑茶2 4。該制品具有提高機體免疫力，調節血脂，抗凝，降粘，消除血栓，保護肝臟，改善心、腦血液循環，補益肝腎，活血化瘀，清熱解毒等功能。但是該處方中制何首烏滋補肝腎，葛根升陽，綠茶清熱解毒，沒有活血化瘀的藥物，活血化瘀效果不夠好，因此對伴有瘀血的高脂血癥及免疫カ低下效果不夠好。

發明內容
為了解決上述的技術問題，本發明提供了一種中藥組合物及其制備方法，該中藥組合物具有增強免疫力及降血脂的功效，使用方便，對伴有血瘀的高脂血癥及免疫力低下具有良好的效果。
本發明是通過如下技術方案實現的ー種中藥組合物，由如下重量份的中藥原料藥制成制何首烏400-500份、葛根280-360 份、綠茶 280-360 份、紅花 140-220 份。優選的，上述中藥組合物，由如下重量份的中藥原料藥制成制何首烏430-470份、葛根300-340份、綠茶300-340份、紅花160-200份。優選的，上述的中藥組合物，由如下重量份的中藥原料藥制成制何首烏450份、葛根320份、綠茶320份、紅花180份。本發明的以上組成中，各味藥的重量是以生藥計算的，如果以克為單位，如制成制齊U，則因制劑的大小不同可制成100-1000劑。所述100-1000劑是指單位劑量的制劑形式，如片劑100-1000片，膠囊劑100-1000粒，顆粒劑IOO-1OOOg, ロ服液lOO-lOOOml，膏劑lOO-lOOOg，丸劑 100-1000 丸等。以上組成是按重量作為配比的，在生產時可按照相應比例増大或減少，如大規模生產可以以kg為單位，或以t (噸)為單位；小規模制劑也可以以g為單位。重量可以增大或者減小，但各組成之間的生藥材重量配比的比例不變。以上重量配比的比例是經過科學篩選得到的，對于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖或瘦小的病人，可以相應調整組成的量的配比，増加或減少不超過100%，藥效基本不變。本發明的中藥組合物，可単獨或根據需要可以加入一些藥物可接受的載體，可以采用制劑學常規技術制備該藥物制劑，如將藥物活性物質與藥物可接受的載體混合。在制成藥物制劑時可以制成任何可藥用的ロ服劑型，這些劑型選自片劑、膠囊劑、ロ服液、ロ含劑、顆粒劑、丸劑、散劑，優選的是膠囊劑。所述的載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合剤、濕潤劑、崩解齊U、吸收促進劑、表面活性剤、吸附載體、潤滑劑等。所述藥物可接受的的載體選自蜂蜜、煉蜜、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基こ酸、蛋氨酸、維生素A、維生素C、維主素E、維生素D、氮酮、EDTA ニ鈉、EDTA鈣鈉，ー價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚こ烯吡咯烷酮、甘油、丙ニ醇、こ醇、吐溫60-80、司班-80、蜂蠟、羊毛脂、液體石蠟、十六醇、沒食子酸酯類、瓊、三こ醇胺、堿性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚こニ醇、環糊精、3 -環糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。上述中藥組合物的制備方法，包含如下步驟a、將綠茶加入8 12倍重量水，7(T80°C溫浸3(T60min，得綠茶提取液，備用；b、取葛根總量的6(T80%粉碎成80目的葛根細粉，備用；C、將剩余的葛根和制何首烏、紅花水煎煮2次，第I次加入8 12倍量水，煎煮f 2小時，第二次加入6 10倍量水，煎煮0. 5^1. 5小時，合并煎煮液，備用；d、將煎煮液和綠茶提取液在55 65°C、-0. 03 _0. 09Mpa條件下濃縮成相對密度為1.20 1. 25的清膏；e、將葛根細粉加入到清膏中，混勻，制粒，得本發明中藥組合物的活性物質；f、該活性物質單獨或與藥物可接受的載體混合，按照制劑學常規方法制得。優選的，上述中藥組合物的制備方法，包含如下步驟a、將綠茶加入8 12倍重量水，7(T80°C溫浸45min，得綠茶提取液，備用；b、取葛根總量的70%粉碎成80目的葛根細粉，備用；C、將剩余的葛根和制何首烏、紅花水煎煮2次，第I次加入10倍量水，煎煮1. 5小時,第二次加入8倍量水，煎煮I小時，合并煎煮液，備用；d、將煎煮液和綠茶提取液在60°C、-0. 06Mpa條件下濃縮成相對密度為1. 2(Tl. 25
的清膏； e、將葛根細粉加入到清膏中，混勻，制粒，得本發明中藥組合物的活性物質；f、該活性物質單獨或與藥物可接受的載體混合，按照制劑學常規方法制得。本發明的中藥制劑，在制成藥劑時，単位劑量的藥劑可含有本發明的藥物活性物質0. flOOOmg，其余為藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體以重量計可以是制劑總重量的 0. 01-99. 9%o 上述中藥組合物在制備具有增強免疫力作用的保健產品中的應用。上述中藥組合物在制備具有降血脂作用的保健產品中的應用。本發明中藥組合物適用于免疫力低下或高血脂的人群，尤其適用于伴有血瘀的老年免疫力低下或高血脂人群。本群不適用于少年兒童及孕產婦、乳母、月經過多者、慢性腹瀉者。食用方法及食用量每日3次，每次2粒，ロ服。本發明的有益效果在于(I)本發明提供了一種新的具有增強免疫力和降血脂作用的藥物組合物，滿足了臨床需要。(2)本發明中藥組合物組方精當。中醫認為免疫力低下和高血脂的發生與發展與年老體衰、膏梁厚味、七情內傷、夕卜感六淫等病因有夫。若病邪久羈，則損肝傷脾。損肝則氣機不利，《素問 舉痛論》云“百病生于氣”，因氣為血帥，氣行則血行，氣滯血瘀，血瘀則脈不通；傷腎則腎陰不足，陰虛生內熱。瘀熱互結，日久則化熱生毒，瘀、熱、毒互結，阻滯脈道，損傷脈絡，侵犯五臟，終至脈道狹窄，甚至阻塞而致諸癥叢生。本發明中藥組合物中，制何首烏為君藥，何首烏味苦、甘、澀，性溫，歸肝、心腎經。有補肝腎，益精血，烏須發，強筋骨之功，用于眩暈耳鳴，腰膝酸軟，肢體麻木，須發早白，血虛萎黃，高血脂等癥，故為君藥。綠茶為臣藥，綠茶，味苦、甘，性涼，歸心、肺、胃經，有清頭目，除煩渴，消食化痰，清熱解毒，利尿，提神之功，用于頭痛，目昏，多睡善寐，心煩ロ渴，食積痰滯等癥，故為臣藥。紅花為佐藥，紅花味辛、性溫，歸心、肝經，具有活血通經，散淤止痛的功效，與何首烏配伍，能夠增強君藥的補益作用。葛根為使藥，葛根味甘、辛，性涼，歸脾、胃經。有解肌退熱、生津透疹，升陽止瀉之功，葛根因其氣輕浮而因使諸藥上行，直達心腦，又能解肌透表而因諸藥直達脈絡，故為使藥。總之，該方依據中醫理論，融匯臨床經驗，選藥精當，配伍嚴謹，切中病機。君、臣、佐、使俱全，藥物之間七情和合，共奏補益肝腎，活血化瘀，清熱解毒；提高機體免疫力，調節血脂等。臨床用于機體免疫力低下，高脂血癥，高粘質血癥，脂肪肝等出現肝腎虧虛、瘀熱內阻證者。尤其適合于伴有瘀血的免疫力低下和高脂血癥。( 3 )首次通過藥效學實驗研究證明本發明中藥組合物低、中、高劑量組能増加小鼠的足跖腫脹度；中、高劑量組能提高小鼠的抗體生成細胞數中劑量組能提高腹腔巨噬細 胞吞噬雞紅細胞吞噬百分率。該樣品對小鼠的脾臟/體重比值和I胸腺/體重比值、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞吞噬指數、小鼠碳廓清能力、小鼠的血清溶血素水平、小鼠的脾淋巴細胞轉化能力和NK細胞活性無明顯影響。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》判定標準，本發明中藥組合物有一定的增強免疫力作用。發明中藥組合物三個劑量組和陽性藥物組均能明顯降低高血脂大鼠的膽固醇、甘油三酷、低密度脂蛋白的水平，此作用呈現一定的劑量相關性。(4)藥理毒理學實驗結果表明小鼠急性毒性試驗的最大耐受量法試驗結果顯示，該受試物對兩種性別小鼠的MTD均大于10. Og/kg. bw，根據急性毒性分級標準，該樣品屬實際無毒級物質。遺傳毒性試驗結果=Ames試驗結果為陰性；小鼠骨髄嗜多染紅細胞微核試驗結果為陰性；大鼠精子畸形試驗結果為陰性；大鼠30d喂養試驗結果顯示該樣品30d喂養對大鼠各項觀察指標未見毒性作用。(5)本發明中藥組合物制劑穩定，做成制劑，服用和攜帯方便，便于長期服用做保健之用。以下通過實驗例來進ー步闡述本發明所述藥物組合物的有益效果，這些實驗例包括本發明藥物組合物的藥理毒理學試驗及藥效學試驗。以下實驗例中所用藥物取自實施例1o實驗例I本發明中藥組合物的藥理毒理學實驗1.1樣品人體推薦量為2. 4g/人/日。取本發明中藥組合物的有效成分作為受試物供實驗用，成人體重按60kg計。1. 2試驗動物及飼養環境SPF級昆明種小鼠(小鼠急性毒性試驗、骨髓微核試驗和精子畸形試驗用)和SPF級Wistar大鼠(大鼠30d喂養試驗用)。1. 3小鼠急性毒性試驗按照最大耐受量(MTD)法試驗進行。選擇雌雄各10只小鼠，體重為18. 5—21. 4g。實驗前空腹16h備用(不限制飲水)。稱取10. Og受試物，以蒸餾水配至30ml，終濃度為0. 333g/ml，分兩次灌胃給予實驗動物，每次間隔4h，灌胃量為0. 15ml/10g. bw,累計染毒劑量為10. Og/kg. bw.記錄動物的中毒表現及死亡情況,連續觀察14d。
1. 4遺傳毒性試驗1.4.1Ames試驗試驗菌株為經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102，體外活化系統為多氯聯苯誘導的大鼠肝勻漿制備的S-9混合液。取受試物，分別以蒸餾水、ニ甲基亞砜、95%こ醇、丙酮作溶劑，經過比較，該受試物在蒸餾水中溶解效果最好，故試驗中選取蒸餾水作溶剤。根據毒性測定結果，試驗設立8、40、200、1000,5000 ug/M 5個劑量，同時設立自發回變組、溶劑對照組和陽性對照組。稱取受試物5. OOg,置于容量瓶中，以蒸餾水作溶剤，定容至100ml，濃度為50000 u g/ml，用蒸汽消毒器0. 055Mpa，20min處理，冷卻后取出放置40°C保存。取無菌蒸餾水依次進行1:4稀釋，得出濃度分別為10000、2000、400、80ii g/ml。每皿加入0. 1ml，受試物濃度分別相當于5000、1000、200,40 y g/皿。試驗按照平板摻入法在加S-9與不加S-9混合液的條件下進行，每個組別設3個平皿。若受試物的回變菌落數為自發回變菌落數的2倍以上，并具有劑量 反應關系則判定為陽性。整套試驗在相同條件下重復做兩次。
1. 4. 2小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗選擇體重25 30g小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。3個實驗組染毒劑量分別為2. 5,5. O、10. Og/kg. bw,另設蒸餾水明性對照組和環磷酰胺陽性對照組(40mg/kg. bw)。分別稱取2. 5、5. O、10. Og受試物，分別以蒸餾水配至30ml，終濃度分別為0. 083,0. 167,0. 333g/ml，灌胃給予實驗動物。灌胃量為0. 3ml/10g. bw，共兩次，間隔24h，末次給予受試物后6h處死動物，常規制片。每只動物鏡檢1000個嗜多染紅細胞(PcE)，記錄微核細胞數，計算微核率(即微核細胞數/嗜多染紅細胞數，以千分率表示)。同時觀察200個PCE，計數觀察到的正染紅細胞(NCE)數目，并計算PCE/NCE比值。1. 4. 3小鼠精子畸形試驗選擇體重30 34g雄性小鼠25只，隨機分為5組。每組5只。3個實驗組染毒劑量分別為2. 5,5. O、10. Og/kg. bw,另設蒸餾水陰性對照組和環磷酰胺陽性對照組(40mg/kg. bw)。分別稱取2. 5、5. 0、10. Og受試物，以蒸懼水配至30ml,終濃度分別為0. 083,0. 167,0. 333g/ml，灌胃給予實驗動物。灌胃量為0. 3ml/10g. bw，每天ー次，連續5d，首次灌胃后第35d處死動物，常規制片。每只動物計數1000個結構完整的精子，記錄畸變類型和數量，計算精子畸形率(以百分率表示)。1. 5大鼠30d喂養試驗1. 5.1試驗方法選用體重70 90g斷乳大鼠80只，隨機分為4組，每組20只，雌雄各半。根據人體推薦量設立3個實驗組。受試物劑量分別為1.0、2.0、4.0g/kg.bw(分別相當于人體推薦量的25、50、100倍)。將受試物按照1. 0,2. 0,4. 0% (質量分教)摻入基礎飼料飼喂實驗動物，對照組飼喂基礎飼料。單籠喂養，自由飲食，連續觀察30d。觀察內容主要有動物的一般表現、行為、中毒體征等。每周稱量體重I次，稱量2次食物剰余量和撒食量，計算每周食物攝入量，每周及總食物利用率。第30d尾靜脈取血，進行血常規測定。禁食16h后于第31d腹主動脈取血，進行血液學測定及血生化測定。然后處死并對大鼠進行解剖，進行臟器稱量和組織病理學檢查。2 結果2.1急性毒性試驗灌胃給予受試物后，未見明顯中毒癥狀。14d內動物無死亡。大耐受量試驗結果顯示，該受試物對兩種性別小鼠的均大于10. Og/kg。根據急性毒性分級標準，該樣品屬實際無毒級物質。
2. 2遺傳毒性試驗2. 2.1Ames試驗兩次試驗中受試物各劑量組回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，亦無劑量-反應關系，說明在加與不加S-9時該樣品對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株均未呈現遺傳毒性。2. 2. 2小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗受試物各劑量組微核率與陰性對照組比較無顯著性差異(P>0. 05)，而環磷酰胺陽性對照組與陰性對照組比較有極顯著性差異(P〈0. 01)，說明該樣品無致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核作用。2. 2. 3小鼠精子畸形試驗受試物各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對照組比較無顯著性差異(P>0. 05)，而環磷酰胺陽性對照組與陰性對照組比較有極顯著性差異(P〈0. 01)，說明該樣品無致小鼠精子畸形作用。
2. 3大鼠30d喂養試驗結果在試驗期內各實驗組動物生長發育良好，體重增重、食物利用率、臟器重量和臟器系數等各項指標均在本實驗室正常值范圍內。實驗組血常規及血生化各指標均在本實驗室正常值范圍內。病理組織學檢查實驗組被檢臟器未見有意義的病理改變。實驗例2本發明中藥組合物增強免疫力功能實驗1.材料與方法1.1樣品人體推薦量為2. 4g/人/日。取本發明中藥組合物的有效成分作為受試物供實驗用，成人體重按60kg計。1. 2實驗動物選用中國醫學科學院實驗動物研究所繁殖的SPF級健康心以雌性小鼠，體重18-22g，共192只，分為四組，免疫ー組進行臟器/體重比值、遲發型變態反應、抗體生成細胞檢測及血清溶血素測定；免疫ニ組進行碳廓清實驗；免疫三組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗；免疫四組進行ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗和NK細胞活性測定實驗。1. 3劑量選擇本發明中藥組合物人體推薦量為姆天2. 4g/60kg. bw,實驗設三個劑量組，即0. 20kg. bw、0. 40kg. bw、l. 20kg. bw ;低、中、高三個組的劑量分別相當于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍。以蒸餾水為溶劑將本發明中藥組合物的活性物質分別配至所需濃度，即稱取0. 440g、0. 80g、2. 40g樣品用蒸懼水分別配至40ml,同時設立溶劑對照組，按姆天0. 2ml/10g. bw 經ロ灌胃。1. 4儀器與試劑紫外-可見分光光度計、電子天平、數顯游標卡尺(精密度0. 01mm)、微量注射器(50 ia)、co2培養箱、恒溫水浴箱、離心機、連續光譜酶標儀、顯微鏡、玻片架、200目篩網、手術器械、秒表、一次性定量取血管、24孔和96孔細胞培養板。SRBC、補體(豚鼠血清)、Hanks液、SA緩沖液、瓊脂糖、印度墨汁、Na2CO3溶液、都氏試劑、YAC-1 細胞、RPMI1640 完全培養液、乳酸鋰、INT、PMS、NAD、0. 2moI/LTris-HcI 緩沖液、l%NP40、ConA、1%冰醋酸、MTT液、酸性異丙醇、lmol/LHCL溶液、PBS緩沖液、Giemsa染液等。1. 5實驗方法1. 5.1遲發型變態反應(DTH)(足跖增厚法)
小鼠腹腔注射2%(V/V) SRBC,致敏后4天測量左后足跖厚度，然后在測量部位皮下注射20%(V/V)SRBC，每鼠注射20iU，注射后24小時測量左后足跖部厚度，同一部位測量三次，取均值。以攻擊前后足跖厚度差值〈足跖腫脹度)來表示DTH的程度。1. 5. 2ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗(MTT法)無菌取脾，制備脾細胞懸液，用Hanks液洗2次，每次離心IOmin (1000r/min)，將細胞懸浮于ImlRPMI 1640完全培養液中，調整細胞濃度為3X 106個/mol將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔1ml，一孔加入75 u I ConA液，另一孔作為對照，置5%C02、37°C培養箱中培養72小吋。培養結束前4小時，每孔吸取上清液0. 7ml，加入0. 7ml不含小牛血清的R. PMI1640完全培養液，同時加入MTT50iU，繼續培養4小吋。培養結束后，每孔加入 Iml酸性異丙醇，吹打均勻使紫色結晶完全溶解，在570nm波長處測定OD值，以加ConA孔的OD值減去不加ConA孔的OD值表示淋巴細胞增殖能力。1. 5. 3小鼠臟器/體重比值及血清溶血素測定小鼠腹腔注射SRBC五天后，摘眼球取血，離心取血清稀釋150倍，進行半數溶血值測定。然后處死動物，取胸腺、脾臟稱重，計算臟器/體重比值。同時制備脾細胞懸液，進行抗體生成細胞測定。1. 5. 4抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法)取脾，制成細胞懸液。將表層培養基加熱溶解后與等量雙倍Hanks液混合，分裝小試管，每管0. 5ml，再向管內加50iill0%SRBC(V/V，用SA液配制)、25 脾細胞懸液，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在玻片架上，CO2培養箱溫育1. 5h，然后用SA液稀釋的補體(I 8)加入到玻片架凹槽內，繼續溫育1. 5h后，計數溶血空斑數。1.5. 5小鼠碳廓清試驗小鼠尾靜脈注射1:3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入立即計時，注入墨汁后2、lOmin，分別從內眥靜脈叢取血20iU，并將其加到2ml Na2CO3溶液中，用紫外-可見分光光度計在600nm波長處以Na2CO3溶液作空白對照測光密度值(OD)。將小鼠處死，取肝和脾臟稱重，計算吞噬指數。吞噬指數a=結束體重 X K173/ (肝重 + 脾重)K= (IogOD1-1ogOD2) / (Vt1)1. 5. 6小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗小鼠腹腔注射20%雞紅細胞懸液1ml，間隔4小時處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉動鼠板I分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37 °C溫育30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，Giemsa染液染色10分鐘，用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計算吞噬率和吞噬指數。吞噬百分率(%)=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數+計數的巨噬細胞數X 100%吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/計數的巨噬細胞數1. 5. 7NK細胞活性測定實驗前24小時將靶細胞傳代培養，應用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為4X IO5個/ml。小鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，制備脾細胞懸液，用Hanks液洗2次,姆次離心IOmin (1000r/min)。棄上清液將細胞衆彈起,加入0. 5ml滅菌水裂解紅細胞，20秒后再加入0. 5ml2倍Hanks液及8ml Hanks液，離心IOmin (1000r/min),用Iml含10%小牛血清的RPMI1640完全培養液重懸，用1%冰醋酸稀釋后計數，調整細胞濃度為2 X IO7個/mol將靶細胞加入96孔培養板，每孔100 yl，試驗孔加入IOOiU脾細胞(效靶比50 :1)，自然釋放孔加入100 ill培養液，最大釋放孔加入100iill%NP40，370°C培養4小吋，離心，取上清液100 ill置96孔酶標板中，加入LDH基質液100 yl，反應3分鐘，以lmol/L的HCI終上反應，在酶標儀490nm處測定OD值。NK細胞活性(%)=(反應孔OD-自然釋放孔0D) + (最大釋放孔OD-自然釋放孔0D) X 100%1. 6試驗數據用Excel軟件建立數據庫，用stata軟件進行統計分析。2.結果2.1宏濟堂牌宏濟膠囊對小鼠遲發型變態反應(DTH))的影響表I本發明中藥組合物對小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響
權利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于，由如下重量份的中藥原料藥制成制何首烏400-500份、葛根280-360份、綠茶280-360份、紅花140-220份。
2.根據權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由如下重量份的中藥原料藥制成 制何首烏430-470份、葛根300-340份、綠茶300-340份、紅花160-200份。
3.根據權利要求2所述的中藥組合物，其特征在于，由如下重量份的中藥原料藥制成 制何首烏450份、葛根320份、綠茶320份、紅花180份。
4.包含權利要求1所述的中藥組合物單獨或與藥學上可接受的載體制成的口服劑型。
5.根據權利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，為膠囊劑。
6.根據權利要求1所述的中藥組合物的制備方法，包含如下步驟a、將綠茶加入8 12倍重量水，7(T80°C溫浸3(T60min，得綠茶提取液，備用；b、取葛根總量的6(Γ80%粉碎成80目的葛根細粉，備用；C、將剩余的葛根和制何首烏、紅花水煎煮2次，第I次加入8 12倍量水，煎煮廣2小時， 第二次加入6 10倍量水，煎煮O. 5^1. 5小時，合并煎煮液，備用；d、將煎煮液和綠茶提取液在55 65°C、-O.03^-0. 09Mpa條件下濃縮成相對密度為1.20 1· 25的清膏；e、將葛根細粉加入到清膏中，混勻，制粒，得本發明中藥組合物的活性物質；f、該活性物質單獨或與藥物可接受的載體混合，按照制劑學常規方法制得。
7.根據權利要求6所述的中藥組合物的制備方法，包含如下步驟a、將綠茶加入10倍重量水，7(T80°C溫浸45min，得綠茶提取液，備用；b、取葛根總量的70%粉碎成80目的葛根細粉，備用；C、將剩余的葛根和制何首烏、紅花水煎煮2次，第I次加入10倍量水，煎煮1. 5小時， 第二次加入8倍量水，煎煮I小時，合并煎煮液，備用；d、將煎煮液和綠茶提取液在60°C、_0.06Mpa條件下濃縮成相對密度為1. 2(Tl. 25的清膏；e、將葛根細粉加入到清膏中，混勻，制粒，得本發明中藥組合物的活性物質；f、該活性物質單獨或與藥物可接受的載體混合，按照制劑學常規方法制得。
8.權利要求1所述的中藥組合物在制備具有增強免疫力作用的保健產品中的應用。
9.權利要求1所述的中藥組合物在制備具有降血脂作用的保健產品中的應用。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種中藥組合物及其制備方法和用途，具體涉及一種由制何首烏、葛根、綠茶、紅花制成的中藥組合物及其制備方法以及該中藥組合物在制備具有增強免疫力和降血脂作用的保健產品中的應用。本發明中藥組合物，由如下重量份的中藥原料藥制成制何首烏400-500份、葛根280-360份、綠茶280-360份、紅花140-220份。該中藥組合物具有補益肝腎，活血化瘀，清熱解毒的功效，藥理研究表明該中藥組合物具有增強免疫力和降血脂的作用，臨床用于輔助治療免疫力低下和高脂血癥，尤其適合于伴有瘀血的免疫力低下和高脂血癥。
文檔編號A61P3/06GK103006905SQ20131001120
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月11日 優先權日2013年1月11日
發明者李櫻, 文哲亮, 李秀鳳, 高鈞 申請人:山東宏濟堂制藥集團有限公司