用于治療人類炎癥性疾病的脂質體皮質類固醇的制作方法

用于治療人類炎癥性疾病的脂質體皮質類固醇的制作方法
【專利摘要】本發明涉及用于人類炎癥性疾病的位點特異性治療的包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體的藥物組合物，所述脂質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括水溶形式的第一皮質類固醇，所述藥物組合物以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量以不多于每兩周一次的治療頻率為人類患者提供快速、強烈且持久的抗炎癥效果。此外，本發明涉及上述藥物組合物作為例如類風濕疾病或相關的炎癥性結締組織疾病、腎的炎癥性疾病或炎癥性腸病的炎癥性疾病的介入治療的應用，所述應用與第二游離皮質類固醇制劑的慢性治療聯合或與例如氨甲喋呤的疾病修飾劑的慢性治療聯合。
【專利說明】用于治療人類炎癥性疾病的脂質體皮質類固醇

【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物領域。更具體地，本發明涉及對炎癥性疾病的皮質類固醇治療。

【背景技術】
[0002] 如炎癥性結締組織疾病（例如類風濕關節炎（RA)、腎的炎癥性疾病和炎癥性腸病 (IBD)的炎癥疾病，為慢性、進行性和衰退性疾病，經常導致殘疾。潑尼松龍和其它皮質類固 醇可對炎癥疾病有效，但由于包括骨質疏松癥、對下丘腦-垂體-腎上腺軸（ΗΡΑ)的抑制、 肌肉萎縮、胰島素耐受、易發生皮膚擦傷、嚴重細菌感染的增加的風險和心血管狀況的副作 用（ΑΕ)的高發病率，上述皮質類固醇的全身性應用受限。在多數情況下，這些ΑΕ的嚴重性 取決于處方藥劑的劑量、暴露持續時間和效力。除了差的安全性狀況，在體內發炎區域的差 的定位性也限制了皮質類固醇在患者中的有效性，因為這需要頻繁給藥皮質類固醇以達到 足夠的療效。
[0003] 近年來，已經開展了數條研究路線以改善皮質類固醇的治療指數。這些路線涵蓋 例如，開發選擇性皮質類固醇（GC)受體激動劑（SEGRA)、將皮質類固醇與增強其在激活的 炎癥細胞中的效果的藥物聯合、開發控釋制劑、和設計實現將皮質類固醇靶向輸送至炎癥 的實際位點的高級劑型。可通過封裝在長循環脂質體（LCL)中實現皮質類固醇的靶向輸 送，其中LCL在靜脈注射后循環，并同時由于增加的血管滲透性而在炎癥病變的位點處滲 出，在靶位點選擇性地建立皮質類固醇局部的補給（depot)。該方法例如在W002/45688和 W003/105805中描述，并在對關節炎和其它炎癥疾病的實驗動物模型的臨床前研究中被證 明有效。
[0004] 通常，在這些實驗中，10mg/kg劑量的PEG-脂質體潑尼松龍磷酸鹽（PLP)在治療后 導致炎癥的消退長達1星期，此后炎癥又緩慢恢復。20mg/kg的PEG-脂質體潑尼松龍磷酸 鹽可導致在治療后兩星期仍能觀察到炎癥的消退。同樣劑量的游離潑尼松龍的單次治療無 效，而用游離潑尼松龍的每日重復治療僅導致短暫的減輕的效果，如實施例1中的研究結 果所示（圖1A和1B)。
[0005] 然而，以l〇mg/kg和20mg/kg的皮質類固醇的劑量水平對人類進行脂質體皮質類 固醇靜脈給藥是不現實的。如果對體重為75kg的個體以每kg體重20mg劑量的潑尼松龍 給藥，則總共給藥1. 5g潑尼松龍。通常脂質體潑尼松龍制劑的潑尼松龍含量為每mLl. 5mg 潑尼松龍。因此，每kg體重20mg的潑尼松龍的劑量將需要每次治療一升的制劑（1.5g潑尼 松龍/1. 5mg/mL)。該制劑的這樣的量則要求以超過12小時的時間輸液，以避免輸液反應或 過敏反應，即由例如脂質體的顆粒對人類的靜脈給藥導致的假性變態反應。此外，這些高潑 尼松龍劑量造成對患者給藥巨大量的脂質體組分，例如磷脂和膽固醇。因此優選更低劑量 的脂質體皮質類固醇用于治療人類的炎癥性疾病，因為在這種情況下，需要給藥更少的脂 質體皮質類固醇制劑，并且給藥時間不必長達12個小時。然而，在動物研究中，低于10mg/ kg的脂質體潑尼松龍的劑量具有小得多的持續效果，例如實施例1中所示（圖2A和2B)。 lmg/kg的潑尼松龍僅在4天內具有有限的效果。2mg/kg的潑尼松龍盡管稍微更有效，但顯 示同樣的效力持續時間。甚至在5mg/kg時治療活性也不會持續超過1周。
[0006] 在現有公開中描述了相似的觀察。例如，W002/45688描述了 10mg/kg的脂質體潑 尼松龍磷酸鹽的劑量在患有佐劑誘導的關節炎的大鼠中有效。盡管其提到lmg/kg的脂質 體潑尼松龍磷酸鹽同樣有效，但是沒有指出療效的持續時間。類似的科學公開，Metselaar JM等2003,證明了 lmg/kg的脂質體潑尼松龍磷酸鹽的劑量在患有佐劑誘導的關節炎的大 鼠中具有治療活性，該活性僅持續4天（參見Metselaar JM.等的圖3A)。因而在大鼠中 lmg/kg的劑量的持續治療會需要至少每4天一次的脂質體皮質類固醇的給藥。
[0007] EP2127639描述了脂質體皮質類固醇在治療心血管疾病中的用途。作為實例，描述 了對患有主動脈粥樣硬化斑塊的兔子的治療。以15mg/kg體重的劑量的脂質體潑尼松龍磷 酸鹽治療兔子，這導致持續長達兩周的療效。沒有測試或描述更低劑量的脂質體皮質類固 醇。
[0008] W02006/060759涉及脂質體去炎松用于治療呼吸道的用途。描述了允許每一周至 兩周一次通過霧化器給藥，沒有提到脂質體去炎松的劑量。W02006/060759的實驗部分描述 了哮喘的小鼠模型。每周用脂質體去炎松治療小鼠一次。
[0009] 因此，現有技術教導了以至少10mg/kg體重的劑量給藥可導致在炎癥性疾病的動 物模型中持續至少兩周的療效。在這些動物中以更低劑量的脂質體皮質類固醇給藥僅在以 更高頻率進行治療時（例如每周一次或每4天一次）才具有令人類滿意的療效。因此，根 據在現有公開和本申請實施例1中描述的在大鼠、小鼠和兔子中進行的實驗，本領域技術 人員會預期為了實現有效的治療反應，低于l〇mg/kg的皮質類固醇的劑量水平的治療會需 要至少在一周內重復，可能甚至每4天重復。在本發明之前，預期低于10mg/kg的皮質類固 醇的劑量不可能獲得持續的治療反應。最多會預期短期效果，這需要給藥多劑量的脂質體 皮質類固醇。在臨床情況下，這意味著，在這些低劑量水平，由于脂質體皮質類固醇會在門 診情況下給藥，患者則需要每4至7天去一次醫院以接受新的靜脈輸液，而這是不實際的。 為了使脂質體皮質類固醇的治療可行，患者需要獲得能夠讓他/她在治療后回家并無需重 復治療、或至少無需在之后的兩周或甚至更長時間段內回到醫院的持續的治療反應。此外， 治療的輸液時間優選不超過約4小時，因此治療需要限制在最多200mL的脂質體皮質類固 醇制劑。最后，治療優選允許患者繼續他/她的維持治療，包括例如相對便宜且廣泛使用 的小分子疾病修飾劑（例如氨甲喋呤、羥氯喹、來氟米特、環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA劑、 6_巰基嘌呤或硫唑嘌呤）。這樣的疾病修飾劑對抑制炎癥的臨時惡化無效，也不用于抑制 炎癥的臨時惡化，而是用于修飾疾病的長期過程。臨床實踐顯示了，缺少對炎癥的短期惡化 的有效治療時，患者有可能停止他/她的相對便宜的（常用的）疾病修飾劑的維持治療，反 而希望開始以相對較貴的生物產品（例如英夫利昔單抗、依那西普、阿達木單抗、阿那白滯 素及相關產品）的治療。與疾病修飾劑相比，這樣的生物產品在急性情況下有效，但是像疾 病修飾劑那樣，需要用作為維持治療。然而，使用這樣的生物產品的維持治療的成本比使用 疾病修飾劑的治療成本高很多倍，并且患者轉向生物產品的趨勢會最終造成醫療成本負擔 的巨大的增長。


【發明內容】

[0010] 本發明的目的是通過提供能夠被用于在患有例如炎癥性結締組織疾病（尤其是 類風濕關節炎）、腎的炎癥性疾病或炎癥性腸病的炎癥性疾病的惡化或活躍期的患者中實 現長期且具有臨床意義的治療反應的脂質體皮質類固醇制劑以克服上述限制。因此，本發 明在一個方面提供了用于治療人類炎癥性疾病的方法，所述方法包括對有該需求的人類給 藥包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體的藥物組合物，所述脂質體可選地包括不 多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所 述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括不多于5mg/kg體 重的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量的水溶形式的第一皮質 類固醇，其中所述治療具有不多于兩周一次的治療頻率。還提供了脂質體的用途，所述脂 質體由不帶電的形成囊泡的脂質組成，所述脂質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電 荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至 200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量 的除潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量的水溶形式的第一皮質類固醇，所述第一皮質類固 醇用于制備用于治療人類炎癥性疾病的藥物，其中所述治療具有不多于兩周一次的治療頻 率。
[0011] 脂質體由不帶電的形成囊泡的脂質組成，可選地包括不多于10摩爾％的帶負電 荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至 200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括水溶形式的第一皮質類固醇，這里也將所述 脂質體稱作"用于用在根據本發明的方法中的脂質體"和"如這里限定的脂質體"。
[0012] 這里將包括這樣的脂質體的藥物組合物稱作"用于用在根據本發明的方法的藥物 組合物"和"包括這里所述的脂質體的藥物組合物"。
[0013] 本發明提供了以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的 皮質類固醇的劑量對患有炎癥性疾病的人類給藥脂質體皮質類固醇造成多達2周或更長 的出人意料的長期持續的療效的啟示。如實施例2中所示，在類風濕關節炎（RA)患者中 以相對較低的150mg(約2mg/kg)的劑量顯示出快速、強烈且持久的抗炎活性，所述活性與 目前市場上用于這些疾病的相對較新的靜脈注射的抗TNF-α的生物品相當（一滴EULAR DAS-28評分1. 5點）。與大鼠中在這些劑量水平上的已知臨床前研究結果相比，在這種低 劑量水平（并因此臨床上更實用）中觀察到的長期持續效果是新的（參見圖6中對實施例 1中的大鼠臨床前研究結果與實施例2中報道的根據本發明的對人類的臨床研究結果的比 較）。在臨床實踐中，這意味著，當患者經歷炎癥疾病的惡化或活躍期（即疾病發作）時，單 次治療可足以保持對疾病發作的控制。或者，如果需要重復治療，只要惡化或活躍疾病期還 在持續，兩周一次或更低的治療頻率可足以保持對疾病發作控制。
[0014] 將用于用在根據本發明的方法中的包括脂質體的藥物組合物與包括游離的皮質 類固醇的第二藥物組合物有益地聯合。本發明人類發現靜脈注射的脂質體皮質類固醇的治 療與皮質類固醇的肌肉內注射劑型互補。如實施例2中所證明，與肌肉內給藥的等效劑量 的游離皮質類固醇（實施例2中的甲基潑尼松龍）相比，所述脂質體皮質類固醇在患有RA 的人類中的治療活性不僅更強，還更快。如圖3至5中所示，脂質體皮質類固醇提供了快速 且強烈的治療反應，尤其在第一周內。在給藥后第一個兩周內其具有最高的治療活性，即 EULAR疾病活性評分的最大減少，此后該評分再次逐漸增加。另一方面，游離皮質類固醇的 肌肉內注射劑型在幾周后引起減輕的治療反應。給藥后治療活性逐漸增加，并在給藥后三 至七周時達到其最大治療活性。因此，肌肉內注射給藥的游離皮質類固醇作用為貯庫制劑。 因此脂質體皮質類固醇與游離的皮質類固醇的聯合尤其有益，因為同時實現了強的直接治 療活性以及給藥后幾周的強治療活性。因此，如果使用這樣的聯合，脂質體皮質類固醇作用 為對炎癥性疾病的直接治療，并且游離皮質類固醇作用為貯庫制劑，即更慢地建立的治療。 因此同時進行這兩種治療產生在更長的時間內（4至6周或更長）的有效性，這樣可避免脂 質體制劑的重復治療至少4周的時間。
[0015] 因此，在一個實施方式中，本發明提供了用于治療人類炎癥性疾病的方法，所述方 法包括對具有該需求的人類給藥包括這里所述的脂質體的藥物組合物，以及包括第二游離 皮質類固醇的藥物組合物。優選不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍 以外的皮質類固醇的劑量，以及不多于兩周一次的脂質體皮質類固醇的治療頻率。
[0016] 還提供了包括含這里所述的脂質體的藥物組合物以及含第二游離皮質類固醇的 藥物組合物的部件的試劑盒。所述部件的試劑盒進一步優選包括用于不多于5mg/kg體重 的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇且治療頻率為不多于每兩周一 次的第一脂質體皮質類固醇的給藥方案，及可選地〇. 5至5mg/kg體重之間的潑尼松龍或等 效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇的第二游離皮質類固醇的給藥方案的說明書。優 選所述部件的試劑盒包括對應于不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松 龍以外的皮質類固醇且治療頻率為不多于每兩周一次的給藥方案的量的脂質體皮質類固 醇。因此，所述部件的試劑盒優選包括一個或多個劑量單位，每個劑量單位適合以不多于 5mg/kg體重的潑尼松龍的劑量或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇給藥第一脂 質體皮質類固醇。此外，所述部件的試劑盒優選包括一個或多個劑量單位，每個劑量單位適 于以0. 5至5mg/kg體重之間的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑 量給藥第二游離皮質類固醇。
[0017] 此外提供的是包括這里所述的脂質體的藥物組合物與包括第二游離皮質類固醇 的藥物組合物的組合，所述組合用在用于治療人類炎癥性疾病的方法中，優選不多于5mg/ kg體重的脂質體潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量，其中所述治 療具有不多于每兩周一次的治療頻率。
[0018] 這里所用的"游離皮質類固醇"是指未包含在例如脂質體的微囊泡中的皮質類固 醇。可選地，所述游離皮質類固醇與藥學上可接受的載體偶合和/或存在于藥學上可接受 的稀釋劑中，可選地在一種或多種藥學上可接受的添加劑存在下。第二游離皮質類固醇優 選為脂溶性形式，且可與第一脂質體皮質類固醇相同或不同。優選第二游離皮質類固醇為 用在用于治療人類炎癥性疾病的臨床實踐中使用的皮質類固醇，通常為潑尼松龍、甲基潑 尼松龍、去炎松、地塞米松、倍他米松、可的松或它們各自的衍生物，例如潑尼松龍醋酸鹽、 甲基潑尼松龍醋酸鹽、去炎松醋酸鹽、倍他米松醋酸鹽。
[0019] 在根據本發明的方法中，優選對有該需求的人類口服、關節、靜脈、皮下給藥或最 優選肌肉內給藥包括所述第二游離皮質類固醇的藥物組合物。優選靜脈給藥，更優選通過 靜脈輸液給藥包括這里所述的脂質體的藥物組合物。
[0020] 如果使用包括這里所述的脂質體和第二游離皮質類固醇的給藥的聯合治療，那么 所述治療優選包括以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的皮質 類固醇的劑量以不多于每兩周一次的治療頻率給藥包括所述脂質體的藥物組合物。所述第 二游離皮質類固醇優選以0. 5至5mg/kg之間的劑量給藥，優選1至5mg/kg，給藥頻率為不 多于每兩周一次。最優選地，所述第一脂質體皮質類固醇和所述第二游離皮質類固醇共同 給藥。"共同"是指第一和第二皮質類固醇同時或幾乎同時給藥。第二游離皮質類固醇優選 在給藥第一脂質體皮質類固醇開始前一小時之內、在給藥第一脂質體皮質類固醇期間、或 在給藥第一脂質體皮質類固醇結束后一小時之內給藥，更優選在給藥第一脂質體皮質類固 醇之前或之后30分鐘之內給藥，甚至更優選在給藥第一脂質體皮質類固醇之前或之后15 分鐘之內或在給藥第一脂質體皮質類固醇期間給藥。
[0021] 用在根據本發明的方法中的包括脂質體的藥物組合物還有益地與包括疾病修飾 劑的藥物組合物聯合。根據本發明，用在根據本發明的方法中的包括脂質體的藥物組合物 特別適合阻礙炎癥性疾病的活躍發作。當本來由于疾病修飾劑的持續治療而具有相當穩定 的病程的患者偶爾且意外地經受炎癥的活躍發作或惡化時，這樣的藥物脂質體組合物提供 了有效的介入治療。優選不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除潑尼松龍以外的 皮質類固醇的劑量，以及不多于每兩周一次的脂質體皮質類固醇的治療頻率。
[0022] 因此，在一個實施方式中，本發明提供了用于治療人類炎癥性疾病的方法，包括對 具有該需求的人類給藥包括這里所述的脂質體的藥物組合物和包括疾病修飾劑的藥物組 合物。所述治療包括用含疾病修飾劑的所述藥物組合物的維持治療和用包括脂質體皮質類 固醇的藥物組合物的對炎癥的惡化的臨時治療（Temporary treatment)。
[0023] 還提供了包括這里所述的脂質體的藥物組合物與包括疾病修飾劑的藥物組合物 的組合，以用在用于治療人類炎癥性疾病的方法中。
[0024] 如實施例2中詳述，發現接受氨甲喋呤的維持治療的患有類風濕關節炎的患者比 未攝取氨甲喋呤或攝取另一種疾病修飾劑的患者對脂質體皮質類固醇的治療更敏感。盡管 事實上文獻中并未報道皮質類固醇與氨甲喋呤的聯合治療，實施例2中報道的臨床試驗顯 示接受游離皮質類固醇與氨甲喋呤聯合的肌肉內給藥的患者并沒有顯示出比接受游離皮 質類固醇的而沒有氨甲喋呤的肌肉內給藥患者更好的反應（圖7)。相反，根據本發明，與 單獨的脂質體皮質類固醇相比，脂質體皮質類固醇與氨甲喋呤的聯合確實提供了更好的結 果。因此，這里所述的脂質體與氨甲喋呤聯合的維持治療在降低疾病活性方面高度有效，而 用游離皮質類固醇與氨甲喋呤的聯合治療這樣的患者的卻不是這樣。在臨床實踐中，這意 味著本來被相對便宜的口服疾病修飾劑（如氨甲喋呤）的維持治療成功治療且經受了該疾 病的活躍期或惡化的患者現在可以非常有效地被脂質體皮質類固醇的單次輸液或僅僅幾 次重復輸液治療。這允許具有低頻率的疾病發作的患者能夠快速回到疾病的低活躍期并繼 續他們相對便宜的疾病修飾劑的治療，不必或無需轉到更貴的生物品的治療，這種治療近 來更多地進入了炎癥疾病的領域。除了患者的方便外，從衛生經濟學的視角來說這也很重 要，因為需要使用脂質體皮質類固醇的治療有助于將與炎癥疾病的治療相關的成本保持在 限度以內。
[0025] 因此，在優選的實施方式中，患有炎癥性疾病的人類接受包括疾病修飾劑的藥物 組合物的維持治療并在所述炎癥性疾病的發作后接受包括脂質體的藥物組合物的臨時治 療。
[0026] 本領域中已知術語"疾病修飾劑"，并指在炎癥疾病中被用作的維持治療的小分子 藥物，即患者在長時間段內攝取該藥物以調節疾病的進程，所述時間段通常長于一個月，但 更通常長于三個月。例如，用于類風濕關節炎的治療的疾病修飾劑為疾病修飾抗風濕藥物 (DMARD)。用作炎癥疾病中的維持治療的這樣的小分子藥物優選具有不多于800道爾頓的 分子量。優選用在根據本發明的方法中的疾病修飾劑選自用于炎癥疾病的持續治療的臨床 實踐中給出的相對便宜的疾病修飾劑的組中，例如氨甲喋呤、羥氯喹、來氟米特、環磷酰胺、 5_氟尿嘧啶、5-ASA劑、6-巰基嘌呤、霉酚酸酯和硫唑嘌呤。在特別優選的實施方式中，所述 疾病修飾劑為氨甲喋呤。如果根據本發明治療的疾病為類風濕疾病或相關的炎癥性結締組 織疾病，所述疾病修飾劑優選選自由氨甲喋呤、羥氯喹、來氟米特、環磷酰胺、5_氟尿嘧啶、 5-ASA劑、6-巰基嘌呤和硫唑嘌呤組成的組中，最優選所述疾病修飾劑為氨甲喋呤。如果根 據本發明治療的疾病為腎的炎癥性疾病，所述疾病修飾劑優選選自由羥氯喹、霉酚酸酯、硫 唑嘌呤和環磷酰胺組成的組中。如果根據本發明治療的疾病為炎癥性腸病，所述疾病修飾 劑優選選自由5-ASA劑、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤和氨甲喋呤組成的組中。
[0027] 如這里所用的"維持治療"是指患者在長時間段內接受的關于調節疾病的進程的 治療，通常長于一個月，但更通常長于三個月。通常，維持治療包括以每日劑量給藥藥物，如 疾病修飾劑。
[0028] 如這里所用的"臨時治療"是指患者通過單獨劑量或有限次數（即小于10,優選小 于5,例如2或3次的劑量）接受的治療。這里使用"臨時治療"以與"維持治療"的治療區 分，如上所述，"維持治療"需要在長時間段內的治療。
[0029] 如這里所用的"發作"是指炎癥性疾病進入活躍期或惡化，因而疾病表現的嚴重性 的增加的期間。
[0030] 優選地，包括疾病修飾劑的藥物組合物以用于口服的片劑、膠囊或酏劑口服的形 態給藥。包括如這里所述的脂質體的藥物組合物優選靜脈給藥，更優選通過靜脈輸液給藥。 如果使用包括如這里所述的脂質體和疾病修飾劑的給藥的聯合治療，所述治療優選包括以 不多于5mg/kg體重的皮質類固醇的劑量以不多于每兩周一次的治療頻率給藥含所述脂質 體的藥物組合物。
[0031] 如這里所用的"治療頻率"是指用在根據本發明的方法中的（包括）脂質體（的 藥物組合物）的給藥頻率。例如，每兩周一次的治療頻率是指每兩周一次對患者給藥該藥 物組合物，即兩次不同劑量的給藥被隔開約兩周。在臨床實踐中，這可以是兩周加減一天或 兩天。不多于兩周一次的治療頻率是指以兩周一次或通常更少對患者給藥該藥物組合物， 例如每三周一次或每四周一次。因此，兩次服藥之間的時間為至少兩周，或者根本沒有給藥 第二個劑量。如這里所述的藥物組合物的唯一或單獨給藥也涵蓋在術語"不多于每兩周一 次的治療頻率"中。
[0032] 根據本發明，用在根據本發明的方法中的包括脂質體的藥物組合物的劑量為不多 于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇。如這里所用的 "等效劑量"定義為需要產生與給定劑量的潑尼松龍的藥理效果相同的藥理效果的皮質類 固醇的劑量。例如，如果潑尼松龍的劑量為2. 5mg/kg，另一種皮質類固醇的等效劑量為具有 與2. 5mg/kg的潑尼松龍相同的藥理效果的劑量。術語"藥理效果"是指皮質類固醇在人體 上的效果，優選療效。與潑尼松龍相比，甲基潑尼松龍和去炎松具有1.25的效價比。如這 里所用的"效價比"是指皮質類固醇與潑尼松龍的藥理效果的比，而潑尼松龍的效力被設定 為1。因此，具有1. 25的效價比的皮質類固醇是指5/1. 25 = 4mg/kg的劑量的所述皮質類 固醇具有與5mg/kg的劑量的潑尼松龍相當的效果。因此所述4mg/kg的劑量為5mg/kg的 潑尼松龍的等效劑量。如前所述，與潑尼松龍相比，甲基潑尼松龍和去炎松具有1. 25的效 價比。因此，在一個實施方式中，用在根據本發明的方法中的脂質體包括甲基潑尼松龍或去 炎松，并且所述劑量為不多于4mg/kg體重的甲基潑尼松龍或去炎松。與潑尼松龍相比，地 塞米松和倍他米松具有6. 5的效價比。因此，在另一個實施方式中，用在根據本發明的方法 的脂質體包括地塞米松或倍他米松，并且所述劑量為不多于〇. 8mg/kg體重的地塞米松或 倍他米松，因為所述劑量為與5mg/kg體重的潑尼松龍等效的劑量。作為另一個實施例，與 潑尼松龍相比，氟氫可的松醋酸鹽具有3. 5的效價比。因此，在另一個實施方式中，用在根 據本發明的方法中的脂質體包括氟氫可的松醋酸鹽，并且所述劑量為不多于1.4mg/kg體 重的氟氫可的松醋酸鹽，因為所述劑量為與5mg/kg體重的潑尼松龍等效的劑量。
[0033] 該劑量通常可為4mg/kg的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固 醇或更低，例如不多于3. 5mg/kg的潑尼松龍的劑量或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮 質類固醇，或不多于3mg/kg的潑尼松龍的劑量或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類 固醇。優選不多于2. 5mg/kg體重的潑尼松龍的劑量或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮 質類固醇。優選劑量的實例為2. 5mg/kg、2mg/kg、l. 5mg/kg和lmg/kg。在一個實施方式中， 用在根據本發明的方法的脂質體包括甲基潑尼松龍或去炎松，且所述劑量為不多于2mg/kg 體重的甲基潑尼松龍或去炎松。在另一個實施方式中，用在根據本發明的方法中的脂質體 包括地塞米松或倍他米松，并且所述劑量為不多于0. 4mg/kg體重的地塞米松或倍他米松。 在再一個實施方式中，用在根據本發明的方法的脂質體包括氟氫可的松醋酸鹽，并且（包 括）所述劑量（的藥物組合物）為不多于〇.7mg/kg體重的氟氫可的松醋酸鹽。上述劑量 都為與5mg/kg體重的潑尼松龍等效的劑量。最優選地，所述劑量為不多于2. 5mg/kg體重 的潑尼松龍。
[0034] 可在兩周后重復治療，然而三周、四周或更長的治療間隔也是可能的。或者，如果 該單獨治療足以克服人類炎癥疾病的活躍期或惡化，那么可使用用在根據本發明的方法中 的具有不多于5mg/kg的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇的藥物 組合物的單獨治療，所述劑量優選為不多于4mg/kg，更優選不多于3mg/kg，更優選不多于 2.5mg/kg〇
[0035] 用于用在根據本發明的方法中的包括脂質體、游離皮質類固醇或疾病修飾劑的藥 物組合物優選進一步包括藥學上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。
[0036] 用于用在根據本發明的方法中的脂質體具有40nm至200nm的平均粒徑，使用 Malvern DLS測量激光裝置通過動態光散射確定所述平均粒徑。優選脂質體具有75nm和 150nm之間的直徑。脂質體優選具有相對較低的多分散性系數，即0.2以下，這意味著粒徑 分布較窄。
[0037] 用在根據本發明的方法中的脂質體通常包括不帶電的形成囊泡的脂質，所述脂質 來自磷脂的組中，所述磷脂可以是人工合成的或來自天然來源，可選地被人工修飾。優選所 述不帶電的形成囊泡的脂質為部分合成或全部合成。包括由天然來源獲得的或部分或全 部合成的，或可變的脂質鏈長和不飽和度的磷脂酰膽堿（PC)適合用于本發明中。如這里 使用，術語"部分合成的或完全合成的形成囊泡的磷脂"意思是至少一種形成囊泡的磷脂， 所述磷脂為人工制造的或來源于天然產生的磷脂，所述磷脂被人工修飾。優選的磷脂含有 產生具有相對較高的轉變溫度的雙分子層的飽和烷基鏈。特別優選二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)、氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿（DSPC)和氫化蛋磷脂酰膽堿 (HEPC)。用在根據本發明的方法中的脂質體包括不多于10摩爾％的PEG化的脂質和/或不 多于10摩爾％的帶負電荷的脂質。優選的PEG化的脂質由在一端的具有200至20, 000道 爾頓之間的分子量的PEG聚合物和在另一端的親脂性脂錨定分子組成。通常錨定分子選自 磷脂和固醇的組中。優選的PEG化的脂質為PEG2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE) 和PEG2000-膽固醇。帶負電荷的脂質優選為二棕櫚酰磷脂酰甘油（DPPG)和二硬脂酰磷脂 酰甘油（DSPG)。用于用在根據本發明的方法中的脂質體進一步優選包括合成的或天然來源 的固醇或類固醇，所述固醇和類固醇在A環的3位上具有羥基。在固醇化合物的組中，優選 膽固醇。
[0038] 基于制劑中形成囊泡的脂質的總摩爾比，聚合物脂質綴合物和帶負電荷的脂質的 部分為0至10摩爾％，且優選1至10摩爾％，更優選2. 5至10摩爾％。帶負電荷的脂質， 特別是聚合物-脂質綴合物在脂質體制劑中的存在穩定了該制劑，并在脂質體的循環時間 上具有有利的效果。然而，通過以物理指標仔細地選擇具體的脂質組合物，可獲得合適的長 循環時間，而不使用PEG-脂質綴合物或帶負電荷的脂質。例如，50nm至100nm的DSPC和膽 固醇和/或如鞘磷脂的鞘脂的脂質體適用于根據本發明的方法中。
[0039] 在特別優選的實施方式中，本發明提供了用于根據本發明的用途或根據本發明 的方法中的脂質體，其中所述脂質體包括〇至50mol %的膽固醇、50至90mol %的不帶電 的部分合成或全部合成的形成囊泡的脂質、〇至lOmol%的與聚乙二醇偶合的兩親性形 成囊泡的脂質和〇至lOmol %的帶負電荷的形成囊泡的脂質。例如根據W002/45688或 W003/105805中所述的方法制造這樣脂質體。然而，其中并未描述根據本發明的低劑量和 治療頻率。用于用在根據本發明的方法中的脂質體優選具有約75nm至150nm之間的平均 粒徑尺寸范圍。如上所述,所述部分合成或全部合成的形成囊泡的脂質優選選自由DSPC、 DPPC、HSPC和HEPC組成的組中。
[0040] 用在根據本發明的方法中的脂質體的具體實例為：
[0041] ?由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體，包括不多于10摩爾％的由聚乙二醇 衍生處理的兩親性形成囊泡的脂質，并且可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成 囊泡的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并且含有 皮質類固醇，其特征在于所述皮質類固醇以水溶形式存在；
[0042] ?由膽固醇和選自DSPC、HSPC、HEPC和DPPC的不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂 質體，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑且含有皮質類固 醇，其特征在于所述皮質類固醇以水溶形式存在；
[0043] ?由不帶電的形成囊泡的脂質體和不多于5摩爾％的帶負電荷的二棕櫚酰磷脂酰 甘油組成的脂質體，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并 且含有皮質類固醇，其特征在于所述皮質類固醇以水溶形式存在；
[0044] ?由膽固醇和選自部分或全部合成的磷脂的不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質 體，，可選地包括不多于5摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質，所述脂質體具有在40nm至 200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并且含有皮質類固醇，其特征在于所述皮質類固醇 以水溶形式存在。
[0045] 如所述，可根據在制備常用的脂質體或PEG-脂質體中所使用的方法（例如 W002/45688或W003/105805中所公開的方法）制備根據本發明使用的脂質體。通過將皮質 類固醇溶解在水相中以將活性成分被動加載至脂質體內足以達到充分的封裝，但也可以使 用其它方法，以進一步增加封裝效率。用于形成脂質體的脂質組分可選自各種形成囊泡的 脂質，例如磷脂、鞘脂和固醇。通過例如鞘磷脂和麥角固醇代替（全部或部分）這些基本組 分看來是可能的。為了在脂質體中的有效封裝水溶性皮質類固醇，從而避免藥物從脂質體 中泄漏，尤其是具有飽和、固化的酰基鏈的磷脂組分顯示為有效。
[0046] 用于用在根據本發明的方法中的脂質體組合物包括水溶性皮質類固醇。這里將術 語"水溶性"定義為在25°C的溫度下在水中或緩沖為中性pH的水中具有至少10g/l的溶解 度。根據本發明可被有益地使用的水溶性皮質類固醇為由具有游離羥基的皮質類固醇與例 如C2至C12脂肪性飽和和不飽和二羧酸的有機酸、和例如磷酸和硫酸的無機酸制備的堿金 屬鹽和銨鹽。作為堿金屬鹽，優選鉀鹽和鈉鹽。也可使用其它的帶正電荷或負電荷的皮質 類固醇的衍生物。水溶性皮質類固醇的具體實例為倍他米松磷酸鈉、地奈德磷酸鈉、地塞米 松磷酸鈉、氫化可的松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉、甲基潑尼松龍磷酸二鈉、甲基潑尼松 龍琥珀酸鈉、氫化潑尼松磷酸鈉、氫化潑尼松琥珀酸鈉、潑尼索酯鹽酸、潑尼松龍磷酸二鈉、 潑尼松龍琥珀酸鈉、曲安奈德磷酸二鈉和曲安奈德磷酸二鈉。在這些皮質類固醇中，優選潑 尼松龍磷酸二鈉、潑尼松龍琥珀酸鈉、甲基潑尼松龍磷酸二鈉、甲基潑尼松龍琥珀酸鈉、地 塞米松磷酸二鈉和倍他米松磷酸二鈉。上述皮質類固醇通常被用于抗炎癥疾病和障礙的全 身性治療中。因此，在一個實施方式中，第一皮質類固醇包括在用于根據本發明的方法中的 脂質體中，和/或第二游離皮質類固醇為用于全身性給藥的皮質類固醇。如這里所用，"用 于全身性給藥的皮質類固醇"意思是所述皮質類固醇是在用于抗炎癥疾病的全身性治療中 的臨床實踐中。
[0047] 由于已經證明了通過在具有40nm至200nm的平均粒徑的長循環脂質體中使用 水溶形式的皮質類固醇，發生了藥物對發炎位點的有效靶定，因此本發明也可有利地應 用于皮質類固醇，由于各種原因，所屬皮質類固醇通常被用于局部應用。這樣的皮質類 固醇例如包括阿氯米松雙丙酸鹽、安西縮松、倍氯米松單丙酸鹽、倍他米松17-戊酸鹽、 環甲松（ciclomethasone)、氯倍他索丙酸鹽、氯倍他松丁酸鹽、地潑羅酮丙酸鹽、地奈德、 去氧米松、地塞米松醋酸鹽、雙氟可龍戊酸鹽、二氟拉松二醋酸鹽、雙氟可龍、二氟潑尼 酯、特戊酸氟米松、氟尼縮松、氟輕松醋酸鹽、醋酸氟輕松、特戊酸氟考龍、氟米龍醋酸鹽 (fluormetholone acetate)、氟潑尼定醋酸鹽、哈西縮松、鹵米松、氫化可的松醋酸鹽、甲輕 孕酮、甲基潑尼松龍醋酸鹽、莫米松糠酸鹽、帕拉米松醋酸鹽、潑尼卡酯、潑尼松龍醋酸鹽、 潑尼立定、瑞美松龍、特戊酸氫可的松和己曲安奈德。特別感興趣的局部用皮質類固醇為， 例如，布地奈德、氟尼縮松和氟替卡松丙酸鹽，一旦這些藥物在體循環中變得可用，所述局 部用皮質類固醇就被快速有效地清除（clearance)。通過根據本發明制備水溶形式的這些 類固醇并將其封裝至長循環的脂質體中，現在可能全身性給藥這些皮質類固醇，以達到位 點特異性的藥物輸送，從而避免與全身性治療相關的副作用，并克服皮質類固醇所固有的 問題，例如快速釋放。在這方面，顯示布地奈德磷酸二鈉為具有很大意義的鹽。因此在一個 實施方式中，用于用在根據本發明的方法中的包含在脂質體中的第一皮質類固醇和/或第 二游離皮質類固醇為用于局部應用的皮質類固醇。如這里使用，"用于局部給藥的皮質類固 醇"意思是所述皮質類固醇用在抗炎癥疾病的局部治療的臨床實踐中，即所述皮質類固醇 被應用于例如皮膚的體表或例如陰道粘膜、肛門粘膜、喉粘膜和眼粘膜的粘膜上。
[0048] 可被根據本發明的脂質體組合物成功治療的炎癥性疾病的實例為炎癥性結締組 織疾病、腎的炎癥性疾病和炎癥性腸病（IBD)。炎癥性結締組織疾病的具體實例為類風濕關 節炎、全身性紅斑狼瘡（以例如狼瘡性腎炎作為其顯著的臨床表現之一）、強直性脊柱炎、 骨關節炎和牛皮癬性關節炎。根據本發明的方法治療的炎癥性疾病優選為風濕性疾病，更 優選類風濕關節炎、或炎癥性腸病、或腎的炎癥性疾病。在炎癥性腸病中，根據本發明治療 的炎癥性疾病優選潰瘍性結腸炎和克羅恩病。根據本發明治療的腎的炎癥性疾病優選為腎 小球腎炎、狼瘡性腎炎、急性移植排斥反應和動靜脈瘺衰竭。
[0049] 在以下實施例中進一步解釋本發明。這些實施例不限制本發明的范圍，而僅用于 說明本發明。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0050] 圖1.脂質體和游離潑尼松龍磷酸鹽（PLP)在患有佐劑誘導的關節炎的大鼠中的 治療的治療活性。
[0051] A.用10mg/kg的PLP-聚乙二醇（PEG)脂質體（實心圓）、10mg/kg的游離PLP (實 心方形）和生理鹽水對照治療（空心方形）的單獨治療的肉眼檢查爪炎癥評分的效果。
[0052] B.用20mg/kg的PLP-(PEG)脂質體（實心圓）的評分、20mg/kg的游離PLP (實心 方形）和生理鹽水對照（空心方形）的每日治療的評分的效果。棒形顯示5只大鼠的平均 值和SEM。在第14天進行治療。
[0053] 圖2.增加劑量水平的潑尼松龍磷酸鹽（PLP)-聚乙二醇（PEG)脂質體在患有佐劑 誘導的關節炎的大鼠中的單獨治療的治療活性。
[0054] A.用lmg/kg的PLP-PEG脂質體（灰色圓）、10mg/kg的游離PLP (實心方形）和生 理鹽水對照治療（空心方形）的肉眼檢測爪炎癥評分的效果。
[0055] B.用2mg/kg的PLP-PEG脂質體（灰色圓）、5mg/kg的PLP-PEG脂質體（實心方 形）和生理鹽水對照（空心方形）的評分的效果。
[0056] 棒形顯示3至5只大鼠的平均值和SEM。在第14天㈧和第13天⑶進行治療。
[0057] 圖3.用150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂質體（實心圓）和等效劑量的120mg(l. 6mg/ kg)的甲基潑尼松龍（肌肉內貯庫制劑，空心方形）的EULAR疾病活性評分（DAS28分）的 效果。棒形顯示兩個治療組中的7位受試人類的平均值和SEM。值表示為在治療當天的疾 病評分（基線）的％，基線定義為100 %。
[0058] 圖4.在150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂質體（測試藥物）或等效劑量的 120mg(1.6mg/kg)的甲基潑尼松龍（對照藥物）后達到良好、減輕或無 EULAR響應的患者的 分布。棒形顯示兩個治療組中的7位受試人類的平均值和SEM。
[0059] 圖5.在150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂質體（測試藥物）或等效劑量的 120mg(l. 6mg/kg)的甲基潑尼松龍（對照藥物）后由VAS評分確定的疼痛強度。
[0060] 棒形顯示兩個治療組中的7位受試人類的平均值和SEM。值表示為治療當天的VAS 評分的％。
[0061] 圖6.大鼠與人類中的2mg/kg的潑尼松龍磷酸鹽（PLP)PEG-脂質體的單獨治療的 治療活性。
[0062] Α·大鼠中作為基線（100% )的％的肉眼檢查疾病評分的效果。
[0063] B.人類中作為基線（100% )疾病活性評分（DAS28評分）的效果。
[0064] 棒形顯示3至5只大鼠 ㈧和7個人類⑶的平均值和SEM。
[0065] 圖7.用以下單獨治療的EULAR疾病活性評分（DAS28評分）的效果：
[0066] A. 150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂質體，接受慢性氨甲喋呤治療的患者（實心圓，η =4)與對未攝取氨甲碟呤的患者（空心方形，η = 3)相比較。
[0067] Β.等效劑量的120mg(l. 6mg/kg)的甲基潑尼松龍（肌肉內C庫制劑），接受慢性 氨甲喋呤治療的患者（實心圓，η = 4)與對未攝取氨甲喋呤的患者（空心方形，η = 3)相 比較。
[0068] 棒形顯示平均值和SEM。值表示為治療當天的疾病評分的％，基線定義為100%。

【具體實施方式】
[0069] 實施例1 :大鼠的實驗性關節炎研究
[0070] 制劑
[0071] 含有潑尼松龍磷酸鹽的PEG脂質體是由750mg的二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC)、 250. 8mg的膽固醇和267. 6mg的PEG-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE)組成。稱重這些 組分并將其在l〇〇ml的圓底燒瓶中混合。將脂質溶解在約30ml的乙醇中，然后在40°C下于 旋轉蒸發儀中在1小時內真空蒸發至干燥。稱重1200mg的潑尼松龍磷酸二鈉并將其溶解在 12ml的無菌水中。將該溶液加入干燥的脂質膜，并在玻璃珠的存在下在一小時內振蕩以使 脂質膜完全水化。將脂質體懸浮液轉移至擠出機（Avestin，最大體積15ml)并使用孔徑低 于100nm的聚碳酸酯濾膜使用氮氣在壓力下擠出。然后，用無菌生理鹽水透析。通過動態 光散射確定脂質體的平均粒徑，并發現其為93. 1 ± 1. 2nm，多分散性系數為0. 095±0. 024。 通過HPLC方法確定潑尼松龍磷酸鹽的封裝效率，并發現其在3%至4%之間。在4°C于氮氣 氣氛下儲存脂質體的懸浮液，并發現其在長于一年的時間內穩定。
[0072] 大鼠，實驗關節炎和研究方案
[0073] 使用在弗氏不完全佐劑中的熱滅活的結核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis)在尾根部對劉易斯鼠進行皮下免疫。在免疫后9至12天之間開始爪炎癥， 約在20天后達到最嚴重，之后逐漸愈合。通過肉眼評分爪炎癥的嚴重性進行對疾病的評 估，每只爪的最高分4分，并測量由疾病誘導的體重較少。將脂質體潑尼松龍磷酸鹽對這些 變量的治療效力與相同劑量的未封裝的藥物比較。當平均分大于6時（在疾病誘導后14 或15天）對大鼠進行治療。
[0074] 結果
[0075] 在使用單劑量的脂質體潑尼松龍磷酸鹽（10mg/kg的潑尼松龍磷酸鹽）治療后3 天內在5只大鼠的4只中觀察到炎癥的完全緩解（圖1A)。未封裝的潑尼松龍磷酸鹽在單 次注射后未顯著改變疾病的進程。因此，決定每天注射甚至更高劑量的20mg/kg的未封裝 的潑尼松龍，注射7天。該治療方案使炎癥評分從平均6. 5分（第14天）減小至從第15 天至第21天的約5. 0的平均分（每天使用生理鹽水的對照治療在第20天達到10. 6的最 高分，圖1B)。然而，在第14天單次注射相同劑量的20mg/kg的脂質體潑尼松龍磷酸鹽導致 佐劑性關節炎（AA))癥狀直到第20天才消失。
[0076] 還在大鼠佐劑性關節炎模型中測試了低于10mg/kg的脂質體潑尼松龍的劑量水 平。證明在這些劑量水平下的效力持續時間短。lmg/kg的脂質體潑尼松龍僅在4天內具 有有限的效果（圖2A)，而2mg/kg盡管稍微更有效，但是顯示出相同的效果持續時間（圖 2B)。即使在5mg/kg下，治療活性持續不超過1周（圖2B)。
[0077] 實施例2 :人類RA研究
[0078] 制劑
[0079] 含有聚乙二醇（PEG)的潑尼松龍由包圍水性區室的脂質雙分子層組成，所述水性 區室中封裝有潑尼松龍的水溶性磷酸二鈉衍生物。每mL制劑含有1. 5mg/mL潑尼松龍磷酸 鈉、30mg的棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC)、9mg的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-PEG2000(PEG-DSPE) 和8mg的類固醇。將脂質體分散在用磷酸鹽緩沖液緩沖的pH7. 4的10%的蔗糖中。
[0080] 通過將脂質成分與皮質類固醇的水溶液混合、隨后重復高剪切均化以減少所形成 囊泡的尺寸來制備該制劑。用切向流過濾除去未封裝的皮質類固醇。使用0.2微米濾膜通 過死端式過濾進行滅菌。
[0081] 制劑經以下表征和質量控制：粒子尺寸和多分散性指數（分別為l〇〇nm和〈0. 1， 由動態光散射測量），通過HPLC分析測量的潑尼松龍和脂質賦形劑的含量，無菌狀態和致 熱原性（后者由LAL分析（Biowhittaker，Walkersville，MD)測量），和殘留溶劑測試。所 有購買的原材料都經過GMP認證，并在GMP條件下進行脂質體制造。
[0082] 患者
[0083] 為了評估潑尼松龍PEG-脂質體制劑在炎癥疾病中的治療活性，在臨床試驗中招 募了 16名患有活躍RA的自愿的患者，其中用150mg的靜脈輸液的潑尼松龍-PEG-脂質體 (約2mg/kg體重的潑尼松龍）治療8名患者被一次，且等效劑量的120mg的甲基潑尼松龍貯 庫制劑（肌肉內）治療8名患者被一次。合格的標準如下：年齡> 18歲，根據修訂的1987 年ARA標準（Arnett FC等，1988)的RA，篩選訪視時，如修改后的疾病活性評分（DAS28， Prevoo ML等，1995)定義的活躍疾病彡3. 2。
[0084] 排除標準包括腎功能、肝功能和血液測試異常、妊娠期、哺乳期、感染或惡性腫瘤、 臨床上嚴重或不穩定的身體狀況和內分泌失調。在進入研究前2周內不允許口服GC，在基 線前8周內不允許關節內或肌肉內GC，并且在測試開始前12周內使用疾病修飾抗類風濕藥 物（DMARD)的治療必須穩定。
[0085] 研究方案
[0086] 在滿足入選和排除標準后，設計研究的藥物的給藥。在第1天，允許患者進入病 房，在那里他們接受潑尼松龍PEG-脂質體/安慰劑或甲基潑尼松龍/安慰劑。在基線后， 在多達12周期間對患者每周評價。每次訪問包括臨床評估、評價疾病活性、生命體征、安全 性評價和血液取樣。使用疾病活性評分（DAS28)由相同的評價者測量疾病活性，并使用歐 洲風濕病防治聯合會（EULAR)標準（Zandbelt MM等，2011 ;Van Gestel AM等，1996)評價 對治療的響應。在每周評價中，通過DAS28的>1. 2的增加或如果其導致>5. 1的DAS28則 是DAS的0· 6至1. 2的增加定義為疾病發作（Den Broeder AA等，2002)。
[0087] 數據分析
[0088] DAS28評分為測量測試干預的效力的主要結果指標（primary outcome measure)。 為了分析主要結果，控制類型I差誤在0. 05的顯著性水平。分析幾個次要療效指標以證實 主要指標的結果。這些包括DAS的單獨部分、患者的疼痛評價、對疾病活性的醫師評價。由 于這是對有限數量的患者的測試，因此多數分析僅是描述性的。使用能夠應用兩個樣本的 t檢驗的統計分析。
[0089] 結果
[0090] 在16名患者中，14名患者（每組7名）被評估為有效。在治療后弟一周內在測試 藥物（潑尼松龍PEG-脂質體）組中發現了明顯的治療改善。在對照藥物組（肌肉內甲基 潑尼松龍）中可見更慢的和更減輕的治療改善（圖3)。
[0091] 測試藥物組顯示了根據對治療響應的EULAR定義更高百分比的響應者。有趣的 是，只有在測試藥物組中的患者具有良好的EULAR響應（圖4)。在對照藥物中，觀察到的響 應僅為減輕。在"不疼"至"非常疼"的范圍內的100mm線上測量疼痛強度。在LCLP組中 疼痛改善得更好且降低得更快（圖5)。與對照藥物相比，在"研究者對RA活性的評估"的 水平上發現了測試藥物的顯著更好的效力。
[0092] 安全性分析顯示兩個治療組中的不良反應的相當的模式。有一個嚴重的不良反應 (輕微的輸液反應）可能與測試藥物有關。測試藥物沒有帶來進一步的毒性關注。
[0093] 有趣的是，在人類研究中2mg/kg的潑尼松龍PEG-脂質體的效力被證明比相同的 劑量在大鼠實驗性關節炎中的效力長得多，后者的效力沒有持續長過幾天。圖6A顯示了 2mg/kg的脂質體潑尼松龍在大鼠關節炎中的單獨治療的效力，并且圖6B顯示了在人類中 在關節炎癥水平上的效力（為了比較，將治療當天的基線值定義為100% )。
[0094] 圖7顯示了用于接收氨甲喋呤的慢性治療的患者和不接受這樣的治療的患者的 測試藥物和對照藥物的療效。進行氨甲喋呤的慢性治療的患者比不攝取氨甲喋呤或其它疾 病修飾劑的患者對用脂質體潑尼松龍的治療更敏感（圖7A)。然而，接受對照藥物（肌肉內 甲基潑尼松龍）與氨甲喋呤聯合的患者并沒有顯示比接收未與氨甲喋呤聯合的對照藥物 的患者對結合更好的響應。
[0095] 實施例3 :人類炎癥性腸病研究
[0096] 制劑
[0097] 如實施例2所述制備含有PEG脂質體的潑尼松龍。
[0098] 患者
[0099] 根據以下主要入選/排除標準在14天的篩選階段期間選擇20名年齡在18歲和 75歲之間的患有活躍的潰瘍性結腸炎（UC)的患者：年齡> 18歲至75歲，通過內窺鏡評價 并由組織學測量證實的UC歷史檔案（至少6個月），Mayo評分> 5,其中內窺鏡的子評分 彡2,并且直腸出血的子評分彡1，且穩定服藥（6-MP/硫唑嘌呤、5-ASA、MTX、生物品），并且 由病史和身體檢查確定有良好的身心健康（除了被研究的疾病）。
[0100] 研究方案
[0101] 當將受試者隨機分配到研究產品分支時，在第1天和第15天以至少1小時的期間 單獨輸液250mL生理鹽水中的150mg PEG脂質體潑尼松龍磷酸鈉（Nanocort) IV (約2mg/kg 體重的潑尼松龍）。當將受試者隨機分配到安慰劑分支時，在第1天和第15天在至少1小 時的期間以250mL生理鹽水（無 Nanocort)的單獨輸液。
[0102] 在基線后，在長達8周的時間內對患者每周評價一次。每次訪問包括臨床評估、評 價疾病活性、生命體征、安全性評價和血液取樣。疾病活性測量為在第15、29、57和85天獲 得臨床緩解或響應的受試者的測量的％，通過Nanocort與安慰劑組的部分Mayo評分測量， 并且通過在Nanocort與安慰劑組中用顯微鏡評估對活檢樣品的組織病理學評價（急性炎 癥評分和炎癥分級）來評分。
[0103] 結果
[0104] 目前招募了 7名患者。在多數患者中可見快速和大量有益的療效。
[0105] 參考文獻
[0106] Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, McShane DJ, Fries JF, Cooper NS,Healey LA，Kaplan SR，Liang MH，Luthra HS，et al.The American Rheumatism Associationl987revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheuml988 ；31:315-324.
[0107] Den Broeder AA, Creemers MC, van Gestel AM, van Riel PL. Dose titration using the Disease Activity Score(DAS28)in rheumatoid arthritis patients treated with anti-TNF-alpha. Rheumatology(Oxford)2002 ；41:638-642.
[0108] Metselaar JM, Wauben MH, Wagenaar-Hilbers JP, Boerman 0C, Storm G. Complete remission of experimental arthritis by joint targeting of glucocorticoids with long-circulating liposomes. Arthritis Rheum2003 ；48(7):2059-66.
[0109] Prevoo ML, van't Hof MA, Kuper HH, van Leeuwen MA, van de Putte LB, van Riel PL. Modified disease activity scores that include twenty-eight-joint counts. Development and validation in a prospective longitudinal study of patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheuml995 ；38:44-48.
[0110] Van Gestel AM, Prevoo ML, van't Hof MA, van Rijswijk MH, van de Putte LB,van Riel PL. Development and validation of the European League Against Rheumatism response criteria for rheumatoid arthritis. Comparison with the preliminary American College of Rheumatology and the World Health Organization/ International League Against Rheumatism Criteria. Arthritis Rheuml996 ；39:34-40.
[0111] Zandbelt MM，Welsing PM，van Gestel AM，van Riel PL. Health Assessment Questionnaire modifications: is standardisation needed ? Ann Rheum Dis2001 ； 60:841-845.
【權利要求】
1. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體， 所述脂質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩 爾％的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑， 并包括水溶形式的第一皮質類固醇，以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了 潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量用在治療人類炎癥性疾病的方法中，其中所述治療具有 不多于每兩周一次的治療頻率。
2. 用于治療人類炎癥性疾病的方法，所述方法包括對有該需求的人類給藥藥物組合 物，所述藥物組合物包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體，所述脂質體可選地包 括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂 質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括不多于5mg/ kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇的劑量的水溶形式的第 一皮質類固醇，其中所述治療具有不多于每兩周一次的治療頻率。
3. 脂質體的用途，所述脂質體由不帶電的形成囊泡的脂質組成，可選地包括不多于10 摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質 體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括水溶形式的第一皮質類 固醇，以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇的 劑量用于制備治療人類炎癥性疾病的藥物，其中所述治療具有不多于每兩周一次的治療頻 率。
4. 部件的試劑盒，包括： a) 藥物組合物，所述藥物組合物包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質體，所述 脂質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％ 的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包 括水溶形式的第一皮質類固醇；和 b) 包括第二游離皮質類固醇的藥物組合物。
5. 用在治療人類炎癥性疾病的方法中的包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質 體的藥物組合物和包括第二游離皮質類固醇的藥物組合物的組合，所述脂質體可選地包括 不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質， 所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑，并包括水溶形式的第一 皮質類固醇，以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類 固醇的劑量給藥所述第一皮質類固醇，其中所述治療具有不多于每兩周一次的治療頻率。
6. 用于治療人類炎癥性疾病的方法，所述方法包括對有該需求的人類給藥包括由不帶 電的形成囊泡的脂質組成的脂質體的藥物組合物和包括第二游離皮質類固醇的藥物組合 物，所述脂質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10 摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒 徑，并包括不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以外的皮質類固醇 的劑量的水溶形式的第一皮質類固醇，其中所述治療具有不多于每兩周一次的治療頻率。
7. 用在治療人類炎癥性疾病的方法中的包括由不帶電的形成囊泡的脂質組成的脂質 體的藥物組合物和包括疾病修飾劑的藥物組合物的組合，所述脂質體可選地包括不多于10 摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的PEG化的脂質，所述脂質體 具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑并包括水溶形式的第一皮質類固醇。
8. 用于治療人類炎癥性疾病的方法，所述方法包括對有該需求的人類給藥包括由不帶 電的形成囊泡的脂質組成的脂質體的藥物組合物和包括疾病修飾劑的藥物組合物，所述脂 質體可選地包括不多于10摩爾％的帶負電荷的形成囊泡的脂質和/或不多于10摩爾％的 PEG化的脂質，所述脂質體具有在40nm至200nm的尺寸范圍內的選定的平均粒徑并包括水 溶形式的第一皮質類固醇。
9. 根據權利要求7所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合或根據權利要求8 所述的方法，其中所述人類接受用包括疾病修飾劑的所述藥物組合物的維持治療，并且，其 中所述人類在所述炎癥性疾病發作后接受用包括脂質體的所述藥物組合物的臨時治療。
10. 根據權利要求7至9的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合或 方法，其中使用所述疾病修飾劑的所述治療為所述炎癥性疾病的維持治療的一部分，并且 其中使用所述脂質體的所述治療為在所述炎癥性疾病發作后的臨時治療。
11. 根據權利要求7至10的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合 或方法，其中所述疾病修飾劑為氨甲喋呤、羥氯喹、來氟米特、環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA 齊U、6-巰基嘌呤、霉酚酸酯或硫唑嘌呤。
12. 根據權利要求7至11的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合或 方法，其中所述治療包括以不多于5mg/kg體重的潑尼松龍或等效劑量的除了潑尼松龍以 外的皮質類固醇的劑量給藥包括脂質體的所述藥物組合物，并且其中所述治療具有不多于 每兩周一次的治療頻率。
13. 根據權利要求1至3或5至12的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中 的藥物組合物、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述炎癥性疾 病為類風濕疾病或相關的炎癥性結締組織疾病、炎癥性腸病或腎的炎癥性疾病。
14. 根據權利要求1至13的任一項所述的用的在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥物 組合物、部件的試劑盒、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述 第一皮質類固醇和/或所述第二游離皮質類固醇為用于全身性給藥的皮質類固醇。
15. 根據權利要求14所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥物組合物、部件的 試劑盒、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述皮質類固醇選自 由潑尼松龍、地塞米松、甲基潑尼松龍組成的組中。
16. 根據權利要求1至15的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥物組 合物、部件的試劑盒、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述第 一皮質類固醇和/或所述第二游離皮質類固醇為用于局部應用的皮質類固醇。
17. 根據權利要求16所述用在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥物組合物、部件的試 劑盒、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述皮質類固醇選自由 布地奈德、氟尼縮松和氟替卡松丙酸鹽組成的組中。
18. 根據權利要求1至3或12的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥 物組合物、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述劑量為： 不多于5mg/kg體重的潑尼松龍，或 不多于4mg/kg體重的甲基潑尼松龍或去炎松，或 不多于0. 8mg/kg體重的地塞米松或倍他米松，或 不多于1. 4mg/kg體重的氟氫可的松醋酸鹽。
19.根據權利要求1至3或12的任一項所述的用在治療人類炎癥性疾病的方法中的藥 物組合物、用在治療人類炎癥性疾病的方法中的組合、用途或方法，其中所述劑量為： 不多于2. 5mg/kg體重的潑尼松龍，或 不多于2mg/kg體重的甲基潑尼松龍或去炎松，或 不多于0. 4mg/kg體重的地塞米松或倍他米松，或 不多于0. 7mg/kg體重的氟氫可的松醋酸鹽。
【文檔編號】A61K31/573GK104144679SQ201280065036
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2012年11月2日 優先權日:2011年11月4日
【發明者】若斯貝特·馬爾滕·梅策拉爾 申請人:恩瑟拉德斯醫藥有限公司