利用egfr抗體細胞毒性劑綴合物治療抗egfr療法的腫瘤的方法

利用egfr抗體細胞毒性劑綴合物治療抗egfr療法的腫瘤的方法
【專利摘要】本發明涉及EGFR抗體免疫綴合物在抑制已發展了EGFR和/或ALK抗性機制的腫瘤細胞的生長中是有效的鑒定。還公開了給具有抗性腫瘤細胞的患者施用EGFR抗體免疫綴合物的方法。
【專利說明】利用EGFR抗體細胞毒性劑綴合物治療抗EGFR療法的腫瘤 的方法
[0001] 發明描述 發明領域
[0002] 本發明涉及EGFR抗體免疫綴合物在抑制已發生EGFR抗性機制的腫瘤細胞的生長 中是有效的鑒定。
[0003] 發明背景
[0004] 表皮生長因子受體（EGFR ;ErbB-l ;HER1)是細胞外蛋白質配體的表皮生長因子 (EGF)家族的細胞表面受體（Herbst RS. Int J Radiat Oncol Bio Phys59:21 (2004))。EGFR 是受體的ErbB家族的成員，是4個密切相關的受體酪氨酸激酶：EGFR、HER2/c-neu (ErbB2)、 HER3(ErbB-3)和HER4(ErbB-4)的亞家族。EGFR活化通過其特異性配體例如表皮生長因 子（EGF)和轉化生長因子-a (TGFa)的結合觸發。當配體結合時，EGFR經歷從無活性 的單體形式至活性同二聚體的轉化。此外，EGFR可與ErbB受體家族的另一個成員例如 HER2和HER3配對，以產生活性異二聚體。EGFR二聚化刺激其固有細胞內蛋白酪氨酸激 酶活性，所述活性導致存在于羧基端中的幾個酪氨酸殘基的自身磷酸化（Downward J.等 人，Nature311:483 (1984))。自身磷酸化隨后引發下游信號轉導級聯，主要地MAPK、Akt和 JNK途徑，從而導致DNA合成和細胞增殖。
[0005] EGFR是重要的癌基因。導致組成型活化的EGFR過表達和突變與許多癌癥 (包括肺癌、結直腸癌、頭頸癌和多形性膠質母細胞瘤）相關（Zhang H.等人，J Clin Investll7:2051 (2007))。該發現導致針對EGFR的抗癌治療劑的開發。兩種小分子酪氨酸 激酶抑制劑（TKI)埃羅替尼（Tarceva)和吉非替尼（Iressa)已被批準用于非小細胞肺癌 (NSCLC)和胰腺癌。此外，兩種抗EGFR拮抗性單克隆抗體西妥昔單抗（艾比特思）和帕尼 單抗（Vectibix)已被批準用于頭頸鱗狀細胞癌（SCCHN)和結直腸癌（CRC)。
[0006] 兩種EGFR激酶抑制劑埃羅替尼和吉非替尼例外地作為擁有具有L858R和/或外 顯子19缺失EGFR突變的腺癌組織學的NSCLC的單一試劑療法是有效的（Lynch TJ等人，N EnglJMed350:2129(2004)，PaezJG·等人Science304:1497(2004))。具有這些敏感化EGFR 突變的患者對于這些EGFR激酶抑制劑顯示?70 %的反應率，這超過對于常規化學療法的 反應率。然而，盡管存在顯著的初始反應，但這些癌癥最終發展抗激酶抑制劑的抗性。一般 而言，抗EGFR療法的抗性機制可分成3個主要種類：（l)EGFR突變例如EGFRvIII和T790M 突變，⑵導致EGFR下游途徑活化的突變例如PIK3CA、RAS和PTEN的突變，和（3)補償途徑 例如MET和IGF1R途徑的活化。抗EGFR靶向療法的抗性的各種機制的發現對下一代EGFR 療法提出新的挑戰。
[0007] 兩種EGFR拮抗性抗體西妥昔單抗和帕尼單抗通過配體結合的阻斷抑制EGFR信 號轉導（Gill 等人，J Biol Chem, 259:7755-7760(1984)，Goldstein 等人，Clin Cancer Res, 1:1311-1318 (1995)，Prewett 等人，Clin Cancer Res, 4:2957-2966 (1998))。西妥昔單 抗治療改善了對化學療法不起反應的結直腸癌患者的總體存活率和無進展存活率，并且保 持了其生活質量。然而，西妥昔單抗治療對于具有在密碼子12和13中頻繁發現的KRAS突 變的結直腸癌患者無臨床益處（Karapetis C等人，N Engl J Med359:1757 (2008))。類似地， 在SCCHN中，EGFR抗體在具有EGFR的外顯子2-7缺失突變（EGFRvIII)的癌癥中不太有效 (SokJ.等人Clin Cancer Resl2:5064 (2006))。因此，存在對于可克服抗EGFR靶向療法的 抗性的常見機制的新型癌癥治療的需要。
[0008] 發明概述
[0009] 本發明涉及EGFR抗體免疫綴合物在抑制對抗-EGFR療法具有抗性的腫瘤細胞的 生長中是有效的鑒定。在特定實施方案中，EGFR抗體免疫綴合物在抑制也具有間變性淋巴 瘤激酶（ALK)抑制劑抗性的腫瘤細胞的生長中是有效的。
[0010] 因此，在一個實施方案中，本發明提供了抑制抗EGFR療法或難以用EGFR療法治愈 的表達EGFR的腫瘤細胞的生長的方法，包括將所述腫瘤細胞與有效量的EGFR抗體免疫綴 合物接觸。在一個實施方案中，對細胞具有抗性的EGFR療法選自：埃羅替尼、吉非替尼、拉 帕替尼、BIB2992、西妥昔單抗、帕尼單抗、扎魯木單抗、奈昔木單抗和尼妥珠單抗。在另一 個實施方案中，腫瘤細胞的至少一個：（1)包含EGFR編碼基因的一個或多個突變；(2)包含 PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因的一個或多個突變；（3)具有活化的MET或IGF1R途徑；(4) 具有間充質組織學或經歷上皮-間充質轉化；或（5)具有ERBB2基因擴增或增加的HER2蛋 白的產生。在另一個實施方案中，EGFR突變包含EGFRvIII或T790M突變。在另一個實施 方案中，至少一個腫瘤細胞具有例如通過PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因的突變引起的活化 的EGFR下游途徑。在另一個實施方案中，至少一個腫瘤細胞具有活化的替代途徑例如：MET 或IGF1R途徑。在一個實施方案中，MET活化由MET基因擴增和/或MET配體表達引起。
[0011] 在某些實施方案中，EGFR抗體免疫綴合物在抑制也具有間變性淋巴瘤激酶（ALK) 抑制劑抗性的抗EGFR/EGFR難治性腫瘤細胞的生長中是有效的。在一個實施方案中，腫瘤 細胞的至少一個包含EML4-ALK易位。在另一個實施方案中，腫瘤細胞是非小細胞肺腫瘤。
[0012] 本發明還提供了治療患者的癌癥的方法，包括施用有效量的EGFR抗體免疫綴合 物以抑制所述患者的腫瘤細胞的生長，其中腫瘤細胞的至少一個：（1)包含EGFR編碼基因 的一個或多個突變；（2)包含PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因中的一個或多個突變；（3)具有 活化的MET或IGF1R途徑；(4)具有間充質組織學或經歷上皮-間充質轉化；或（5)具有 ERBB2基因擴增或增加的HER2蛋白的產生。在一個實施方案中，MET活化由MET基因擴增 引起。
[0013] 本發明還提供了治療患者的癌癥的方法，包括（a)鑒定來自所述患者的癌細胞， 所述細胞（1)包含EGFR編碼基因的一個或多個突變；（2)包含PIK3CA、RAS或PTEN編碼基 因中的一個或多個突變；（3)具有活化的MET或IGF1R途徑；或（4)具有間充質組織學或已 經歷上皮-間充質轉化；或（5)具有ERBB2基因擴增或增加的HER2蛋白的產生；和（b)給 所述患者施用有效量的EGFR抗體免疫綴合物。在一個實施方案中，MET活化由MET基因擴 增引起。在一個實施方案中，癌癥是鱗狀細胞癌、肺癌、頭頸癌或EGFR陽性癌。
[0014] 在一個實施方案中，患者先前已遭受EGFR療法的失敗或正在遭受EGFR療法的失 敗。在另一個實施方案中，療法包括施用EGFR抗體或EGFR激酶抑制劑。在另一個實施方 案中，EGFR抗體為西妥昔單抗或帕尼單抗。在另一個實施方案中，EGFR激酶抑制劑為埃羅 替尼或吉非替尼。
[0015] 在某些實施方案中，EGFR抗體免疫綴合物在治療患者的癌癥中是有效的，所述患 者包含一個或多個ALK抑制劑抗性腫瘤細胞。在一個實施方案中，腫瘤細胞的至少一個包 含EML4-ALK易位。在另一個實施方案中，腫瘤細胞是非小細胞肺癌。
[0016] 在一個實施方案中，抗體免疫綴合物具有式（A)-(L)-(C)，其中：(A)是特異性結 合EGFR的抗體或其抗原結合片段；(L)是接頭；和（C)是細胞毒性劑；并且其中所述接頭 (L)將㈧連接于（C)。在另一個實施方案中，EGFR抗體包含SEQ ID NO: 1的重鏈可變區和 SEQ ID N0:2或3的輕鏈可變區。在另一個實施方案中，接頭選自可切割接頭、不可切割接 頭、親水接頭和基于二羧酸的接頭。在另一個實施方案中，接頭是不可切割接頭。在另一個 實施方案中，接頭選自4-(2-吡啶基二硫代）戊酸N-琥珀酰亞胺基酯（SPP) ;4_(2-吡啶 基二硫代）丁酸N-琥珀酰亞胺基酯（STOB)或4-(2-吡啶基二硫代）-2-磺基丁酸N-琥珀 酰亞胺基酯（磺基-STOB) ;4-(馬來酰亞胺甲基）環己烷羧酸N-琥珀酰亞胺基酯（SMCC); 4_(馬來酰亞胺甲基）環己烷羧酸N-磺基琥珀酰亞胺基酯（磺基SMCC) ;N-琥珀酰亞胺 基-4-(碘乙酰基）-氨基苯甲酸酯（SIAB) ;N-琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰氨 基）-四甘醇]酯（NHS-PEG4-馬來酰亞胺）；Ν-(β -馬來酰亞胺丙基氧基）琥珀酰亞胺 酯（BMPS);和γ-馬來酰亞胺丁酸Ν-琥珀酰亞胺酯（GMBS)。在另一個實施方案中，細胞 毒性劑選自類美登素、類美登素類似物、多柔比星、修飾多柔比星、苯二氮雜萆、紫杉燒、 CC-1065、CC-1065類似物、多卡米星、多卡米星類似物、加利車霉素、多拉司他汀、多拉司他 汀類似物、auristatin、托馬霉素衍生物和來普霉素衍生物或試劑的前體藥物。在另一個 實施方案中，細胞毒性劑為類美登素。在另一個實施方案中，細胞毒性劑為N(2'）_去乙酰 基-N (2'）- (3-巰基-1-氧代丙基）-美登素（DM1)或N (2'）-去乙酰基-N2- (4-巰基-4-甲 基-1-氧代戊基）_美登素（DM4)。在另一個實施方案中，EGFR抗體免疫綴合物包含含有 SEQ ID NO: 1的重鏈可變區和SEQ ID N0:2或3的輕鏈可變區的抗體；接頭SMCC和類美登素 DM1。
[0017] 在一個實施方案中，將抗體免疫綴合物與至少一種另外的抗腫瘤試劑一起施用。 在另一個實施方案中，將EGFR抗體免疫綴合物與抗腫瘤劑同時施用。在另一個實施方案 中，以任意時間順序施用所述EGFR抗體免疫綴合物和抗腫瘤劑。在另一個實施方案中，所 述患者是人。
[0018] 在某些實施方案中，治療包括本發明的EGFR免疫綴合物和至少一種另外的靶向 療法的組合施用。有用的靶向療法的種類包括但不限于例如（1)HER2抑制劑，（2)EGFR抑制 劑（例如，酪氨酸激酶抑制劑或靶向抗-EGFR抗體），（3)BRAF抑制劑，（4) ALK抑制劑，（5) 激素受體抑制劑，（6)mT0R抑制劑，（7) VEGF抑制劑或（8)癌癥疫苗。酪氨酸激酶抑制劑對 于EGFR可以是特異性的或可以是多特異性的并且可抑制除EGFR外或除了 EGFR以外的一 種或多種激酶的活性。
[0019] 附圖概述
[0020] 圖1是描述huEGFR-7R裸露抗體和huEGFR-7R-SMCC-DMl綴合物抗具有L858R和 T790M EGFR突變的NCI-H1975NSCLC腫瘤細胞的細胞毒性活性的線圖。
[0021] 圖2是描述在50ng/mL肝細胞生長因子（HGF)存在或不存在的情況下埃羅替尼抗 HCC827NSCLC細胞系的細胞毒性活性的線圖。
[0022] 圖3是描述在50ng/mL HGF不存在（A)或存在（B)的情況下西妥昔單抗、huEGFR-7R 裸露抗體和huEGFR-7R-SMCC-DMl綴合物抗HCC827NSCLC細胞系的細胞毒性活性的線圖。
[0023] 圖 4 是描述 huEGFR-7R 裸露抗體和 huEGFR-7R-SMCC-DMl 綴合物抗 NCI-H226 ( - 個間充質NSCLC細胞系）的細胞毒性活性的線圖。
[0024] 圖5描述抗埃羅替尼HCC827NSCLC細胞系的表征。（A)是描述埃羅替尼抗HCC827 細胞系和抗埃羅替尼HCC827-ER細胞系的細胞毒性活性的線圖。（B)是親代HCC827細胞系 和抗埃羅替尼HCC827-ER細胞系的組織學圖像。（C)是親代HCC827細胞系和抗埃羅替尼 HCC827-ER細胞系的Western印跡分析。
[0025] 圖6顯示描述EGFR、HER3和MET在親代HCC827細胞系和抗埃羅替尼HCC827-ER 細胞系上的表達的流式細胞術圖直方圖。
[0026] 圖7是描述埃羅替尼抗親代HCC827細胞系、抗埃羅替尼HCC827-ER和 HCC827-ER-E4細胞系的細胞毒性活性的線圖。
[0027] 圖8顯示在以指定的劑量進行16小時的埃羅替尼處理后親代HCC827細胞系和抗 埃羅替尼HCC827-ER-E4細胞系的Western印跡分析。
[0028] 圖9是描述西妥昔單抗、huEGFR-7R裸露抗體和huEGFR-7R-SMCC-DMl綴合物抗親 代HCC827細胞系和抗埃羅替尼HCC827-ER-E4細胞系的細胞毒性活性的線圖。
[0029] 圖10是描述huEGFR-7R-SMCC-DMl綴合物抗具有G12V KRAS突變的SW620結直腸 腺癌細胞系的細胞毒性活性的線圖。
[0030] 圖11是描述西妥昔單抗、huEGFR-7R裸露抗體和huEGFR-7R-SMCC-DMl綴合物抗 具有H1047R PIK3CA突變的Detroit562頭頸鱗狀細胞癌（SCCHN)細胞系的細胞毒性活性的 線圖。
[0031] 圖 12 顯示 huEGFR-7R 抗體、huEGFR-7R-SMCC-DMl 綴合物、chKTI-SMCC-DMl 綴 合物、西妥昔單抗和埃羅替尼抗親代HCC827細胞（A)、抗埃羅替尼HCC827ER細胞（B)和 HCC827EPR細胞（C)的細胞毒性活性。
[0032] 圖13顯示克里唑替尼和埃羅替尼（A);以及huEGFR-7R抗體、huEGFR-7R-SMCC-DMl 綴合物、chKTI-SMCC-DMl綴合物和西妥昔單抗⑶抗具有EML4-ALK基因易位的 H2228NSCLC腺癌細胞系的細胞毒性活性。
[0033] 發明詳述
[0034] 本發明涉及EGFR抗體綴合物在治療對EGFR療法（包括未綴合EGFR抗體和/或 ALK抑制劑）具有抗性的腫瘤細胞中是有用的發現。具體地，顯示了具有抑制由EGFR途徑 驅動的腫瘤細胞生長同時對表達EGFR的正常細胞例如皮膚角質細胞具有有限作用的包含 EGFR抗體的抗體藥物綴合物有效地抗EGFR療法抗性腫瘤。重要地，與其它EGFR抑制劑相 似的單獨的EGFR抗體組分在抗對EGFR靶向療法具有抗性的腫瘤細胞中是無效的。然而， 當偶聯至類美登素有效負載時，綴合物令人驚訝地顯示強勁的抗對EGFR抑制劑具有不同 抗性機制的腫瘤細胞的活性。
[0035] I.定義
[0036] 為了有利于理解本發明，下面定義了許多術語和短語。
[0037] 〃表皮生長因子受體〃或〃EGFR"是酪氨酸激酶細胞表面受體。術語〃可溶性 EGFR〃或〃sEGFR〃是指包含EGFR的細胞外配體結合結構域的EGFR的部分。更具體地， sEGFR包含成熟 EGFR 的氨基酸 1-619 (Ullrich 等人，Human Epidermal Growth Factor cDNA Sequence and Aberrant Expression of the Amplified Gene in A-431Epidermoid Carcinoma Cells，Nature，第309卷，418-25 (1986))。如本文中所用，〃表皮生長因子受體〃或〃EGFR〃 意欲不僅包括野生型或全長EGFR而且還包括EGFR的所有突變形式，其一些形式在下文中 進行描述。
[0038] "EGFRvIII"意指其中外顯子2至7已被缺失從而導致EGFR的細胞外結構域中267 個氨基酸框內缺失的EGFR的變體。EGFRvIII也稱為III型突變體、S-EGFR、EGFRde2-7 和 Λ EGFR，并且描述于美國專利 No. 6, 455, 498、6, 127, 126、5, 981，725、5, 814, 317、 5, 710, 010、5, 401，828 和 5, 212, 290 中。
[0039] 〃缺失的EGFR變體〃意指其中一部分細胞外結構域失去以便EGFR信號轉導變得 至少部分不依賴于配體的EGFR的缺失變體。
[0040] "ALK抑制劑〃意指作用于具有間變性淋巴瘤激酶（ALK)的變異例如EML4-ALK易 位的腫瘤的抗癌藥物。EML4-ALK易位導致EML4-ALK陽性癌癥。EML4-ALK陽性癌癥是指其細 胞包含DNA的特征性異常構型的原發性惡性腫瘤，其中棘皮動物微管結合蛋白-樣4(EML4) 基因融合至ALK基因。該異常基因融合導致在許多情況下似乎促進和維持癌細胞的惡性行 為的蛋白（EML4-ALK)產生。
[0041] 術語〃K-ras突變體〃是指相較于野生型K-ras包含至少一個氨基酸突變的K-ras 蛋白（或指編碼這樣的K-ras蛋白的核苷酸序列）。K-ras突變體可包括但不限于等位基因 變體、剪接變體、置換變體、缺失變體和插入變體。術語"K-ras突變〃是指相較于野生型序 列K-ras蛋白的序列（或編碼這樣的K-ras蛋白的核苷酸）中至少一個氨基酸突變。術語 "K-ras突變體腫瘤〃或〃包含（或包括）K-ras突變的腫瘤〃在本文中可互換使用并且是 指其中可在蛋白質或核苷酸水平上檢測到K-ras突變的腫瘤細胞的群體。如本文中所用， 術語〃包含（或包括）K-ras突變的癌癥〃是指可在蛋白質或核苷酸水平上檢測到K-ras突 變的癌細胞群體。K-ras以及EGFR突變可通過本領域技術人員已知的技術和方法來檢測， 所述技術和方法包括但不限于基于PCR的測定（例如，聚合酶鏈式反應-限制性片段長度 多態性（PCR-RFLP)測定、聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態性（PCR-SSCP)測定、實時PCR測 定、PCR測序、突變體等位基因特異性PCR擴增（MASA)測定）、直接測序、引物延伸反應、電 泳、寡核苷酸連接測定、雜交測定、TaqMan測定、SNP基因分型測定、高分辨率解鏈測定和微 陣列分析。
[0042] 術語〃激活突變〃是指導致導致蛋白質例如K-ras的組成型激活和信號轉導途徑 的組成型活化的突變。在一些實施方案中，包含激活突變的K-ras蛋白啟動幾個途徑的組 成型活性，包括但不限于MAP激酶級聯和PI3激酶級聯。在一些實施方案中，通過K-ras突 變體和信號轉導途徑的組成型活性顯著地促成了惡性表型的幾個方面，包括細胞增殖的失 調、受損的分化、減少的細胞凋亡和延長的細胞存活率。
[0043] 短語〃EGFR介導的癌癥〃是指特征在于其中EGFR被異常激活至高于正常對應上 皮組織中的水平的上皮腫瘤的癌癥。這些更高水平的EGFR活性有利于許多類型的癌癥的 腫瘤生長。這樣的癌癥包括但不限于非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、頭頸癌、前列腺癌和 多形性膠質細胞瘤。EGFR的異常活化因受體的過表達、基因擴增、激活突變、受體配體的過 表達和/或EGFR活性的調節劑的丟失而造成。
[0044] 術語〃抗體〃意指免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子通過免疫球蛋白分子的 可變區內的至少一個抗原識別位點識別靶例如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、月旨 質或上述物質的組合并且特異性結合所述靶。如本文中所用，術語〃抗體〃包括完整的多克 隆抗體、完整的單克隆抗體、抗體片段（例如Fab、Fab'、F (ab'）2和Fv片段）、單鏈Fv (scFv) 突變體、從至少兩個完整抗體產生的多特異性抗體例如雙特異性抗體、嵌合抗體、人源化抗 體、人抗體、包含抗體的抗原決定部分的融合蛋白和包含抗原識別部位的任何其它修飾免 疫球蛋白分子，只要抗體顯示期望的生物活性即可。抗體可以是5個主要種類的免疫球蛋 白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM(基于它們的分別稱為α、δ、ε、Y和μ的重鏈恒定結構域 的身份）或其亞類（同種型）（例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)的任一種。免 疫球蛋白的不同種類具有不同的公知的亞單位結構和三維構型。抗體可以是裸露的或綴合 至其它分子例如毒素、放射性同位素等。
[0045] 〃阻斷〃抗體或〃拮抗劑〃抗體是抑制或減小其結合的抗原例如EGFR的生物活 性的抗體。在一些實施方案中，阻斷抗體或拮抗劑抗體大體上或完全抑制抗原的生物活性。 生物活性可減少 10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
[0046] 如本文中所用，關于抗體的短語〃抑制EGFR活化的能力〃意欲指其對EGFR的結 合導致人EGFR激活和當受體被激活時發生的人EGFR的生物活性的抑制。測量EGFR生物 活性的一個或多個指標，如使用細胞增殖測定、細胞凋亡測定、受體結合測定、受體磷酸化 測定來測定的，或小鼠腫瘤模型可評估抗體抑制EGFR激活的能力。
[0047] 術語〃抗-EGFR抗體〃或〃結合EGFR的抗體〃是指能夠以充足的親和力結合EGFR 以便抗體在靶向EGFR中用作診斷劑和/或治療劑的抗體。幾種抗-EGFR抗體在本領域是 已知的。例如，西妥昔單抗（Ab225)和528Ab描述于美國專利No. 4, 943,533(將其通過引 用并入本文）中。
[0048] 抗-EGFR抗體對無關、非EGFR蛋白的結合的程度可低于抗體對EGFR抗體的結合 的約10%，如例如通過放射免疫測定（RIA)測量的。在某些實施方案中，結合EGFR的抗體 具有彡1 μ M、彡ΙΟΟηΜ、彡10nM、彡InM或彡0. InM的解離常數（Kd)。在其它實施方案中，抗 體以約ΙΟΟηΜ至約0. InM、約10nM至約0. InM或約InM至約0. InM的解離常數結合EGFR。
[0049] 術語〃抗體片段〃是指完整抗體的部分并且是指完整抗體的抗原決定可變區。抗 體片段的實例包括但不限于Fab、Fab'、F (ab'）2和Fv片段、線性抗體、單鏈抗體和從抗體片 段形成的多特異性抗體。
[0050] "單克隆抗體"是指參與單個抗原決定簇或表位的高度特異性識別和結合的均一 抗體群體。這與通常包括抗不同抗原決定簇的不同抗體的多克隆抗體相反。術語"單克隆抗 體"包括完整和全長單克隆抗體以及抗體片段（例如Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv)、單鏈（scFv) 突變體、包含抗體部分的融合蛋白和包含抗原識別部位的任何其它修飾免疫球蛋白分子。 此外，"單克隆抗體"是指以許多方式制造的這樣的抗體，所述方式包括但不限于雜交瘤、噬 菌體選擇、重組表達和轉基因動物。
[0051] 術語〃人源化抗體〃是指作為包含最少非人（例如，鼠）序列的特異性免疫 球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段的非人（例如，鼠）抗體的形式。通常地，人源化 抗體是其中來自互補決定區（CDR)的殘基被來自非人物種（例如小鼠、大鼠、倉鼠） 的CDR的殘基替代的人免疫球蛋白，其具有期望的特異性、親和力和能力（Jones等 人，1986,Nature, 321:522-525 ;Riechmann 等人，1988,Nature, 332:323-327 ;Verhoeyen 等人，1988, Science, 239:1534-1536)。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv構架區（FR)殘 基用來自非人物種的抗體中的對應殘基來替代，所述人免疫球蛋白具有期望的特異性、親 和力和能力。人源化抗體還可通過Fv構架區中和/或替代的非人殘基內的其它殘基的置 換來進一步修飾，以改良和最優化抗體特異性、親和力和/或能力。一般而言，人源化抗體 可包含大體上全部的至少一個，通常2或3個含有全部或大體上全部的對應于非人免疫球 蛋白的CDR區的可變結構域，其中全部或大體上全部FR區是人免疫球蛋白共有序列的FR 區。人源化抗體還可包含至少一部分免疫球蛋白恒定區或結構域（Fc)，通常人免疫球蛋白 的恒定區或結構域。用于產生人源化抗體的方法的實例描述于美國專利5, 225, 539中。
[0052] 抗體的"可變區"是指單獨的或組合的抗體輕鏈的可變區和/或抗體重鏈的可變 區。重鏈和輕鏈的可變區各自由通過3個也稱為高變區的互補決定區（CDR)連接的4個構 架區（FR)組成。每一條鏈中的⑶R通過FR與來自另一條鏈的⑶R緊密地保持在一起，促 成抗體的抗原結合部位的形成。存在至少兩種用于確定CDR的技術：（1)基于跨物種序列 可變性的方法（即，Kabat 等人 Sequences of Proteins of Immunological Interest，（第 5 版，1991，National Institutes of Health, Bethesda Md.));和（2)基于抗原-抗體復合 物的晶體學研究的方法（Al-lazikani 等人（1997) J. Molec. Biol. 273:927-948))。此外，這 兩種方法的組合有時在本領域中用于確定CDR。
[0053] 當提及可變結構域中的殘基時，通常使用Kabat編號系統（輕鏈的大致殘基1-107 和重鏈的大致殘基 1-113)(例如，Kabat 等人，Sequences of Immunological Interest.第 5 版· Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) 〇
[0054] 術語"人抗體"意指由由人產生的抗體或具有對應于使用本領域已知的任何技術 制備的由人產生的抗體的氨基酸序列的抗體。該人抗體的定義包括完整或全長抗體、其片 段和/或包含至少一個人重鏈和/或輕鏈多肽的抗體，例如，包含鼠輕鏈和人重鏈多肽的抗 體。
[0055] 術語"嵌合抗體"是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列來源于兩個或更多個物 種的抗體。通常地，輕鏈和重鏈的可變區對應于源自哺乳動物的一個物種（例如，小鼠、大 鼠、兔等）的具有期望的特異性、親和力和能力的抗體的可變區，然而恒定區與來源于另一 物種（通常人）的抗體的序列同源以避免引發該物種的免疫反應。
[0056] 術語〃表位〃或〃抗原決定簇〃在本文中可互換使用，并且是指能夠被特定抗體 識別和特異性結合的抗原的那部分。當抗原是多肽時，表位可從連續氨基酸和通過蛋白質 的三級折疊緊靠在一起的非連續氨基酸形成。從連續氨基酸形成的表位通常在蛋白質變性 后得到保留，然而通過三級折疊形成的表位通常在蛋白質變性后失去。表位通常在獨特的 空間構象中包括至少3個，更常見地至少5個或8-10個氨基酸。
[0057] 〃結合親和力〃通常是指分子（例如，抗體）的單個結合部位與其結合伴侶（例 如，抗原）之間的非共價相互作用的總和的強度。除非另有所指，否則，如本文中所用，"結 合親和力"是指反映結合對（例如，抗體和抗原）的成員之間的1:1相互作用的固有結合 親和力。分子X對于其伴侶Υ的親和力通常可利用解離常數（Kd)來表示。親和力可通過 本領域已知的常用方法（包括本文中描述的那些方法）來測量。低親和力抗體通常緩慢地 結合抗原，并且傾向于容易解離，然而高親和力抗體通常更快地結合抗原并且傾向于保持 更長久的結合。多種測量結合親和力的方法在本領域中是已知的，其任一種可用于本發明 的目的。在下文中描述了特定的說明性實施方案。
[0058] "或更好"，當在本文中用于指結合親和力時，是指分子與其結合伴侶之間更強的 結合。"或更好"，當在本文中指更強結合時，利用更小的Kd數值來表示。例如，具有"0. 6nM 或更好〃的對抗原的親和力的抗體，抗體對于抗原的親和力〈〇· 6nM，即0· 59ηΜ、0· 58nM、 0. 57nM等或小于0. 6nM的任意值。
[0059] 〃特異性結合"，其通常意指抗體通過其抗原結合結構域結合表位，以及結合使得 抗原結合結構域與表位之間的一定互補性成為必需。根據該定義，當抗體通過其抗原結合 結構域比其結合隨機的無關表位更容易地結合特定表位時，抗體被認為"特異性結合"該表 位。術語"特異性"在本文中用于定量相對親和力，特定抗體藉以相對親和力結合特定表 位。例如，抗體"A〃可被認為具有比抗體"B"更高的對于給定表位的特異性，或抗體"A"可 被認為以比其對于相關表位"D"更高的特異性結合表位"C"。
[0060] "優先結合〃，其意指抗體比其對無關的、相似的、同源的或類似的表位的結合更 容易地特異性結合表位。因此，"優選結合"給定的表位的抗體更可能地結合該表位（相比 于對相關表位），即使這樣的抗體可與相關表位交叉反應。
[0061] 抗體被認為"競爭性抑制"參照抗體對給定表位的結合，如果其優先結合該表位 至其在一定程度上阻斷參照抗體對表位的結合的程度的話。競爭性抑制可通過本領域已知 的任何方法例如競爭性ELISA測定來測定。抗體可被認為競爭性抑制參照抗體對給定的表 位的結合至少90%，至少80%，至少70%，至少60 %或至少50%。
[0062] 如本文中所用，短語〃大體上相似〃或〃大體上相同〃表示兩個數值（通常一個 與本發明的抗體相關，另一個與參照/比較抗體相關）之間充分高的相似程度，以便本領域 技術人員可認為在通過所述值（例如，Kd值）測量的生物特征的上下文中兩個值之間的差 異很小或無生物和/或統計顯著性。所述兩個值之間的差異作為參照/比較抗體的值的函 數可小于約50%，小于約40%，小于約30%，小于約20%或小于約10%。兩個"大體上相 似的結合親和力"之間的差異作為參照/比較抗體的值的函數通常小于約10%。
[0063] 如本文中所用，〃不依賴于配體的結合〃表示EGFR結合劑在與EGFR相互作用的 配體不存在的情況下結合人EGFR上的表位的能力。
[0064] "分離的"多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物是以在自然界中未發現的形 式存在的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物。分離的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細 胞或組合物包括已被純化至它們不再以其中它們在自然界中被發現的形式存在的程度的 那些多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物。在一些實施方案中，分離的抗體、多核苷 酸、載體、細胞或組合物是大體上純的。
[0065] 如本文中所用，〃大體上純的〃是指為至少50 %的純（S卩，不含污染物）、至少90 % 的純、至少95 %的純、至少98 %的純或至少99 %的純的材料。
[0066] 如本文中所用，術語〃免疫綴合物〃或〃綴合物〃是指連接至細胞結合劑（即， 抗-EGFR抗體或其片段）并且通過通式：C-L-A定義的化合物或其衍生物，其中C =細胞毒 素 ，L =接頭，以及A =細胞結合劑或抗-EGFR抗體或抗體片段。免疫綴合物還可通過以反 向順序表不的通式：A-L-C來定義。
[0067] 〃接頭〃是能夠將化合物，通常地藥物例如類美登素以穩定的共價方式連接至細 胞結合劑例如抗-EGFR抗體或其片段的任何化學部分。接頭可在化合物或抗體在其下保持 活性的條件下對酸誘導的切割、光誘導的切割、肽酶誘導的切割、酯酶誘導的切割和二硫鍵 切割敏感或對這些切割大體上具有抗性。適當的接頭在本領域是公知的，包括例如二硫基、 硫醚基、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團和酯酶不穩定基團。接頭還包括帶 電荷的接頭及其親水形式，如本文中描述的和本領域已知的。
[0068] 術語〃癌癥〃和〃癌性的〃是指或描述其中一群細胞的特征在于不受調節的細胞 生長的哺乳動物的生理狀況。癌癥的實例包括但不限于腺癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白 血病。〃腫瘤〃和〃贅生物〃是指一個或多個因過度細胞生長或增殖引起的良性（非癌性 的）或惡性（癌性的）包括癌前期病變的細胞。可被治療和/或預防的"癌癥"或"致瘤 性〃疾病的實例包括腹部、骨、乳腺、消化系統、肝、胰腺、腹膜、內分泌腺（腎上腺、甲狀旁 腺、垂體、睪丸、卵巢、胸腺、甲狀腺）、眼、頭和頸、神經系統（中樞和周圍神經系統）、淋巴系 統、骨盆、皮膚、軟組織、脾、胸部和泌尿生殖系統中的腫瘤。
[0069] 術語〃癌細胞"、"腫瘤細胞〃及語法等同物是指來源于腫瘤或癌前期病變的細胞 (包括非致瘤性細胞）的總群體，其包括大塊的腫瘤細胞群體和致瘤性干細胞（癌癥干細 胞）。如本文中所用，當"腫瘤細胞"僅指不存在更新和分化（以將這些腫瘤細胞與癌癥干 細胞相區分）的能力的那些腫瘤細胞時，術語"腫瘤細胞"被術語"非致瘤性"修飾。
[0070] 術語〃受試者〃是指將為特定處理的接受者的任何動物（例如，哺乳動物），包括 但不限于人、非人靈長類動物、嚙齒類動物等。通常地，術語〃受試者〃和〃患者〃在本文 中指人受試者時可互換使用。
[0071] "與一種或多種其它治療劑組合地"施用包括同時（一起）施用和以任意順序連續 施用。
[0072] 術語〃藥物制劑〃是指以這樣的形式如允許活性成分的生物活性是有效的形式存 在的并且不包含對制劑被施用至的受試者具有不可接受的毒性的另外的組分的制劑。制劑 可以是無菌的。
[0073] 本文中公開的抗體的〃有效量〃是足以進行特別地提及的目的的量。〃有效量〃 可憑經驗和以與所述目的相關的常規方式來測定。
[0074] 術語〃治療有效量〃是指有效地"治療"受試者或哺乳動物的疾病或障礙的抗體或 其它藥物的量。在癌癥的情況下，藥物的治療有效量可減少癌細胞的數目；減小腫瘤尺寸； 抑制（即，減慢至一定程度或停止）癌細胞至周圍組織的浸潤；抑制（即，減慢至一定程度 或停止）腫瘤轉移；抑制（至一定程度）腫瘤生長；和/或使與癌癥相關的癥狀的一個或多 個減輕至一定程度。參見本文中的"治療"的定義。至藥物可阻止生長和/或殺死現有癌 細胞的程度，其可以是細胞生長抑制性的和/或細胞毒性的。"預防有效量"是指在劑量上 和進行必需的時間上有效地實現期望的預防結果的量。通常地但非必需地，由于在疾病之 前或早期階段在受試者中使用預防劑量，因此預防有效量將低于治療有效量。
[0075] 單詞〃標記〃，當在本文中使用時，是指被直接或間接地綴合至抗體以產生"標記 的"抗體的可檢測化合物或組合物。標記可以本身可檢測的（例如放射性同位素標記或熒 光標記）或，在酶標記的情況下，可催化為可檢測的底物化合物或組合物的化學改變。
[0076] "化學治療劑"是用于治療癌癥（無論作用機制如何）的化合物。
[0077] 術語例如〃治療〃或〃醫療〃或〃醫治〃或〃減輕〃或"緩和"是指治愈、減慢、 減輕診斷的病理狀況或障礙的癥狀和/或停止其進展的治療措施。因此，需要治療的那些 受試者包括已患有障礙的那些受試者，易于具有障礙的那些受試者；和將要預防其障礙的 那些受試者。在某些實施方案中，如果患者顯示下列的一項或多項則按照本發明的方法成 功地"治療"受試者的癌癥：癌細胞數目的減少或完全不存在；腫瘤尺寸的減小；癌細胞至 周圍器官的浸潤（包括，例如癌癥至軟組織和骨的擴散）的抑制或不存在；腫瘤轉移的抑制 或不存在；腫瘤生長的抑制或不存在；與特定癌癥相關的一個或多個癥狀的減輕；減少的 發病率和死亡率；生活質量的改善；腫瘤的致瘤性、致瘤頻率或致瘤能力的減小；腫瘤中癌 癥干細胞的數目或頻率的減少；致瘤細胞至非致瘤狀態的分化；或作用的一些組合。
[0078] 如本文中所用，短語〃大體上無反應的〃是指在治療劑施用后顯示穩定生長或增 加的生長的腫瘤或癌癥。短語可以指在施用治療劑后顯示穩定的疾病或進行性疾病的患 者。當提及對利用治療劑的治療具有抗性的腫瘤或癌癥時，可使用該短語。如本文中所用， 短語〃對EGFR抑制劑大體上無反應〃是指在施用EGFR抑制劑后顯示穩定生長或增加的生 長的腫瘤或癌癥。在一些實施方案中，給需要治療的患者施用EGFR抑制劑，對EGFR抑制劑 "大體上無反應"包括：無癌細胞的數目或持續生長的減少；無腫瘤尺寸的減小；腫瘤尺寸 的增加；無癌細胞至周圍器官的浸潤（包括例如癌癥至軟組織和骨的擴散）的抑制，或所述 浸潤的繼續；無腫瘤轉移的抑制或腫瘤轉移的繼續；無腫瘤生長的抑制，或轉移的繼續；無 或幾乎無與特定腫瘤相關的一個或多個癥狀的減輕；無或幾乎無腫瘤的致瘤性、致瘤頻率 或致瘤能力的減小；無或幾乎無腫瘤中癌癥干細胞的數目或頻率的減少；或作用的一些組 合。
[0079] 如本文中所用，對于療法是"難治療性"的疾病是最初無反應的，隨時間過去變得 無反應的（例如，在3個月內（S卩，可在治療時或治療的3個月內觀察到疾病進展））或在 中斷治療后不久復發的疾病。在一些實施方案中，對療法是"難治性的"癌癥是其中癌癥對 治療不起反應的癌癥。
[0080] 如本文中所用，"抗"療法的疾病是對療法無反應的疾病。在一個實施方案中，癌癥 可在治療開始時具有抗性或其可在治療過程中變得具有抗性。在某些實施方案中，"難治 性〃癌癥也稱為〃抗性〃癌癥。
[0081] 如本公開內容和權利要求中使用的，除非上下文另外明確地指出，否則〃一個/種 (a) 〃、〃一個/種（an) 〃和〃該（the) 〃包括復數形式。
[0082] 應理解無論何處在本文中用語言"包含"描述實施方案，還提供了按照"由……組 成"和/或"基本上由……組成"描述的另外的類似實施方案。
[0083] 術語〃和/或〃，如在短語例如"A和/或B"中所用，意欲包括"A和B〃、〃A或B"、 "A〃和〃B"。同樣地，如短語例如"A、B和/或C"中所用，術語〃和/或〃意欲包括下列實 施方案的每一個：A、B和C ;A、B或C ;A或C ;A或B ;B或C ;A和C ;A和B ;B和C ;A(單獨 的）；B (單獨的）和C (單獨的）。
[0084] II. EGFR 抗體
[0085] 特異性結合EGFR(即，"EGFR抗體〃）的抗體或其抗原結合片段可用于產生 在本發明中有用的EGFR免疫綴合物。本發明包括任何類型的EGFR抗體或其EGFR 結合片段、部分或其它抗原結合形式的用途。這些包括例如但不限于各種形式的抗 體及其片段，例如多克隆或單克隆抗體或其抗原結合片段；嵌合的、靈長類動物源 化的、人源化的、全長人抗體或其抗原結合片段；或抗體的表位結合片段例如單鏈、 Fv、sFv、scFv、Fab、Fab，和 F(ab，）2(Parham,J.Immunol. 131:2895-2902 (1983); Spring 等人,J.Immunol. 113:470-478(1974) ；Nisonoff 等人,Arch. Biochem. Biophys. 89:230-244(1960))。
[0086] 用于產生EGFR免疫綴合物的特別有用的EGFR抗體描述于共同待決的美國申請公 布No. 2012/0156217中。一個這樣的抗體huEGFR-7R是包含SEQ ID NO: 1的重鏈可變區和 SEQ ID N0:2或3的輕鏈可變區的人源化抗體。
[0087]
【權利要求】
1. 一種抑制表達表皮生長因子受體（EGFR)的腫瘤細胞的生長的方法，所述腫瘤細胞 抗EGFR療法或難以被EGFR療法治愈，所述方法包括將所述腫瘤細胞與有效量的EGFR抗體 免疫綴合物接觸。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述療法包括施用EGFR抗體或EGFR激酶抑制劑。
3. 根據權利要求1或2所述的方法，其中所述細胞對其具有抗性的EGFR療法選自：埃 羅替尼、吉非替尼、拉帕替尼、BIB2992、西妥昔單抗、帕尼單抗、扎魯木單抗、奈昔木單抗和 尼妥珠單抗。
4. 根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述腫瘤細胞的至少一個：（1)包含 EGFR編碼基因的一個或多個突變；（2)包含PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因中的一個或多個 突變；（3)具有活化的MET或IGF1R途徑；（4)具有間充質組織學或已經歷上皮-間充質轉 化；或（5)具有ERBB2基因擴增或增加的HER2蛋白的產生。
5. 根據權利要求4所述的方法，其中所述突變的EGFR基因包含EGFRvIII或T790M突 變。
6. 根據權利要求4所述的方法，其中所述至少一個腫瘤細胞包含PIK3CA、RAS或PTEN 編碼基因中的一個或多個突變。
7. 根據權利要求4所述的方法，其中所述MET或IGF1R途徑被活化。
8. -種治療患者的癌癥的方法，包括施用有效量的EGFR抗體免疫綴合物以抑制所述 患者的腫瘤細胞的生長，其中所述腫瘤細胞的至少一個：（1)包含EGFR編碼基因的一個或 多個突變；（2)包含PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因中的一個或多個突變；（3)具有活化的MET 或IGF1R途徑；（4)具有間充質組織學或已經歷上皮-間充質轉化；或（5)具有ERBB2基因 擴增或增加的HER2蛋白的產生。
9. 一種治療患者的癌癥的方法，包括： (a) 鑒定來自所述患者的腫瘤細胞，所述腫瘤細胞⑴包含EGFR編碼基因的一個或多 個突變；（2)包含PIK3CA、RAS或PTEN編碼基因中的一個或多個突變；（3)具有活化的MET 或IGF1R途徑；或（4)具有間充質組織學或已經歷上皮-間充質轉化；和 (b) 給所述患者施用有效量的EGFR抗體免疫綴合物。
10. 根據權利要求8或9所述的方法，其中所述癌癥是鱗狀細胞癌、肺癌、頭頸癌或 EGFR陽性癌。
11. 根據權利要求1-4或7-9所述的方法，其中所述MET活化由MET基因擴增引起。
12. 根據權利要求8-11中任一項所述的方法，其中所述患者先前已遭受EGFR療法的失 敗或正在遭受EGFR療法的失敗。
13. 根據權利要求12所述的方法，其中所述療法包括施用EGFR抗體或EGFR激酶抑制 劑。
14. 根據權利要求13所述的方法，其中所述EGFR抗體是西妥昔單抗或帕尼單抗。
15. 根據權利要求13所述的方法，其中所述EGFR激酶抑制劑是埃羅替尼或吉非替尼。
16. -種用于治療患者的癌癥的方法，包括施用有效量的EGFR抗體免疫綴合物來抑 制所述患者的腫瘤細胞的生長，其中所述腫瘤細胞的至少一個對包括間變性淋巴瘤激酶 (ALK)抑制劑具有抗性的療法。
17. -種治療患者的癌癥的方法，包括： (a) 鑒定對至少一種ALK抑制劑具有抗性的來自所述患者的腫瘤細胞；和 (b) 給所述患者施用有效量的EGFR抗體免疫綴合物。
18. 根據權利要求16或17所述的方法，其中所述腫瘤細胞的至少一個包含EML4-ALK 易位。
19. 根據權利要求16-18中任一項所述的方法，其中所述癌癥是非小細胞肺癌。
20. 根據權利要求16-19中任一項所述的方法，其中所述ALK抑制劑是克里唑替尼。
21. 根據權利要求1-20中任一項所述的方法，其中所述免疫綴合物具有式 (A) -(L) -(C)，其中： (A)為特異性結合EGFR的抗體或其抗原結合片段； (U為接頭；和 (c) 為細胞毒性劑；和 其中所述接頭（L)將（A)連接至（C)。
22. 根據權利要求21所述的方法，其中所述EGFR抗體包含SEQ ID NO: 1的重鏈可變區 和SEQ ID N0:2或3的輕鏈可變區。
23. 根據權利要求22所述的方法，其中所述接頭選自可切割接頭、不可切割接頭、親水 接頭和基于二羧酸的接頭。
24. 根據權利要求23所述的方法，其中所述接頭是不可切割接頭。
25. 根據權利要求21所述的方法，其中所述接頭選自：4-(2-吡啶基二硫代）戊酸N-琥 珀酰亞胺基酯映?）；4-(2-吡啶基二硫代）丁酸^琥珀酰亞胺基酯（31^)或4-(2-吡啶 基二硫代）-2_磺基丁酸N-琥珀酰亞胺基酯（磺基-STOB) ;4-(馬來酰亞胺甲基）環己烷 羧酸N-琥珀酰亞胺基酯（SMCC) ;4-(馬來酰亞胺甲基）環己烷羧酸N-磺基琥珀酰亞胺基 酯（磺基SMCC) ;N-琥珀酰亞胺基-4-(碘乙酰基）-氨基苯甲酸酯（SIAB) ;N-琥珀酰亞胺 基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰氨基）-四甘醇]酯（NHS-PEG4-馬來酰亞胺）；Ν- ( β -馬來酰 亞胺丙基氧基）琥珀酰亞胺酯（BMPS);和γ-馬來酰亞胺丁酸Ν-琥珀酰亞胺酯（GMBS)。
26. 根據權利要求21所述的方法，其中所述細胞毒性劑選自類美登素、類美登素類似 物、多柔比星、修飾多柔比星、苯二氮雜?、紫杉烷、CC-1065、CC-1065類似物、多卡米星、多 卡米星類似物、加利車霉素、多拉司他汀、多拉司他汀類似物、auristatin、托馬霉素衍生物 和來普霉素衍生物或試劑的前體藥物。
27. 根據權利要求26所述的方法，其中所述細胞毒性劑是類美登素。
28. 根據權利要求27所述的方法，其中所述細胞毒性劑是N (2'）-去乙酰 基-N (2'）- (3-巰基-1-氧丙基）-美登素（DM1)或N (2'）-去乙酰基-N2-(4-巰基-4-甲 基_1_氧代戊基）_美登素（DM4)。
29. 根據權利要求1-28中任一項所述的方法，其中所述EGFR抗體免疫綴合物包含含有 SEQ ID NO: 1的重鏈可變區和SEQ ID NO: 2或3的輕鏈可變區的抗體；接頭SMCC和類美登素 DM1。
30. 根據權利要求1-29中任一項所述的方法，其中將EGFR抗體免疫綴合物與抗腫瘤劑 一起施用。
31. 根據權利要求30所述的方法，其中將EGFR抗體免疫綴合物與抗腫瘤劑同時施用。
32. 根據權利要求30所述的方法，其中以任意時間順序施用所述EGFR抗體免疫綴合物 和抗腫瘤劑。
33.根據權利要求8-32中任一項所述的方法，其中所述患者是人。
【文檔編號】A61K38/00GK104066481SQ201280056769
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2012年11月21日 優先權日:2011年11月21日
【發明者】尤利婭托·塞蒂亞迪, 彼得·U·帕克, 托馬斯·齊騰登 申請人:伊繆諾金公司