天南星提取物及其用于創傷-愈合作用的用途

天南星提取物及其用于創傷-愈合作用的用途
【專利摘要】本發明提供天南星的水和醇提取物、從天南星分離的化合物(比如3-O-(9,12-十八碳二烯酰基)-甘油基-β-D-吡喃半乳糖苷、N-(β-D-呋喃核糖-1-基)-苯丙氨酸、和腺苷)、包含前述成分的藥物組合物、以及其用于促進創傷愈合的用途。在一個實施方案中，所述藥物組合物為局部劑型，比如乳膏劑、軟膏劑、泡沫劑、洗劑、硬膏劑、凝膠劑和乳劑。
【專利說明】天南星提取物及其用于創傷-愈合作用的用途
[0001] 相關專利申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2011年10月18日提交的美國臨時申請系列號No. 61/627, 772的優 先權，將其全部內容通過引用并入本文。

【背景技術】
[0003] 天南星（Rhizoma arisaematis，RA)是一種天南星科的多年生草本植物，原產自北 美洲和亞洲。在中醫學（TCM)中，RA被認為具有苦、辛和溫的特性，常用于治療各種病癥， 包括咳嗽、肌肉痙攣和癲癇。
[0004] 創傷愈合是一種復雜的過程，涉及炎癥、細胞增殖、組織肉芽形成、上皮再生和組 織再生，并且其由角質形成細胞、成纖維細胞、內皮細胞和免疫細胞介導。創傷修復開始于 損傷部位的血流增加和血管通透性增加。血液組分滲入創傷中，形成由血小板和細胞外基 質（ECM)組成的止血栓子。中性粒細胞還作出非特異性但高度有效的破壞性吞噬應答。新 到達的單核細胞和淋巴細胞也介導抗原-特異性免疫應答，其釋放額外的促炎細胞因子。
[0005] 內皮細胞在創傷愈合過程中炎癥性應答的初始階段期間也被活化。除此之外，內 皮細胞還表達將循環白細胞附著于炎癥細胞的粘附分子。免疫細胞的細胞附著于炎癥部位 周圍內皮細胞襯里的血管，防止免疫細胞掃過（swept past)組織損傷部位；這是免疫細胞 隨后遷移到周圍炎癥組織中的一個關鍵步驟。
[0006] 內皮細胞也降解現有的血管基底膜，并引發成纖維細胞在創傷區域中的遷移和增 殖。增殖的成纖維細胞沿著纖維蛋白凝塊遷移到創傷床，并引發稱為基質的細胞外基質的 形成。一旦基質產生，成纖維細胞產生膠原蛋白、蛋白多糖、纖連蛋白和葡糖胺聚糖，導致在 創傷床周圍形成新的細胞外基質；新形成的細胞外基質對于其它細胞的遷移是有用的。
[0007] 與此同時，創傷愈合過程期間形成的肉芽組織覆蓋創傷床。另外，角質形成細胞從 創傷邊緣遷移和增殖，接著成纖維細胞在創傷近端增殖。膠原纖維在表面上再生，包含在肌 成纖維細胞中的肌動蛋白將創傷邊緣拉近，從而減小了創傷的尺寸。
[0008] 在創傷愈合期間，角質形成細胞、成纖維細胞和內皮細胞彼此相互依賴地起作用。 角質形成細胞遷移和增殖在表皮細胞再生中很重要，表皮細胞再生得到細胞外基質形成的 促進。新細胞外基質的合成也由成纖維細胞的增殖所介導，成纖維細胞的增殖促進角質形 成細胞的增殖。內皮細胞參與血管生成，其對于向增殖的角質形成細胞和成纖維細胞提供 細胞因子、氧和營養物是關鍵的。內皮細胞也在整個創傷愈合過程中提供免疫保護。
[0009] 促進內皮細胞、角質形成細胞和/或成纖維細胞的遷移和/或增殖的治療劑可用 于促進創傷愈合，包括急性和慢性創傷（例如，糖尿病性創傷）的愈合。
[0010] 目前，(貝卡普明），一種重組人血小板衍生生長因 子-ΒΒ (rhTOGF-BB)，是FDA批準用于治療慢性創傷（特別是糖尿病性足部潰瘍）的唯一生 長因子。需要開發用于創傷愈合的另外的治療劑。


【發明內容】

[0011] 在多個實施方案中，本發明提供天南星（RA)的水和醇提取物、天南星醇提取 物的水溶性部位、從天南星分離的化合物（比如，3-0-(9, 12-十八碳二烯酰基）-甘油 基-β -D-吡喃半乳糖苷、N- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸、和腺苷），包含前述成分 的藥物組合物、以及其用于促進創傷愈合的用途。在某些實施方案中，藥物組合物為局部劑 型，比如乳膏劑、軟膏劑、泡沫劑、洗劑、硬膏劑、凝膠或乳劑。
[0012] 在一個特定實施方案中，本發明提供一種用于促進受試者中創傷愈合的方法，其 中所述方法包括向受試者的創傷區域局部施用治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物包 含天南星的水溶性提取物和/或一種或多種從天南星分離的化合物或其鹽，其中所述方法 促進創傷閉合和/或愈合。
[0013] 在另一個實施方案中，本發明提供可以從天南星分離的新化合物Ν- ( β -D-呋喃 核糖_1_基）_苯丙氨酸。
[0014] 在某些實施方案中，本發明的天南星提取物和/或從RA分離的化合物可用于促 進創傷愈合，包括皮膚創傷、切除傷、撕裂傷、燒傷、擦傷、刺傷或貫通傷、外科創傷、挫傷、血 腫、擠壓傷和潰瘍，比如糖尿病足部潰瘍。
[0015] 附圖簡要說明
[0016] 圖1Α表示天南星（RA)的水提取物在體外閉合成年人角質形成細胞的擦傷創傷。 圖1Β表示治療后創傷床寬度的定量分析。
[0017] 圖2表示RA的粗提取物⑴和水提取部位（WA)誘導人成年成纖維細胞中I型膠 原蛋白的產生。
[0018] 圖3表示RA的粗提取物（Τ)和水提取部位（WA)不會引起人新生角質形成細胞的 細胞死亡。
[0019] 圖4表示如通過ΜΤΤ (3-[4, 5-二甲基噻唑-2-基]-2, 5-二苯基四唑鎗溴化物） 代謝活性表明的天南星的WA部位的增殖作用。
[0020] 圖5表示RA的水提取部位的亞部分（sub-fraction) RA-WA1和RA-WA2閉合成年 人角質形成細胞的體外擦傷創傷。
[0021] 圖6A表示在第2天WA部位和RA-WA1對創傷閉合的作用。圖6B表示在4和40mg/ kg的RA-WA1的劑量下，為期8天的創傷閉合的作用。
[0022] 圖6C表示40mg/kg的RA-WA1或水的創傷愈合作用。分別用RA-WA1和水局部處 理小鼠的一個創傷，而其它創傷保持未處理。在第8天采集圖像。
[0023] 圖7表示RA-WA部位和分離的化合物的HPLC圖譜。在254nm下檢測UV吸光度。
[0024] 圖8A表示化合物G192-C07的分離流程圖。圖8B表示從天南星分離的 3-0-(9, 12-十八碳二烯酰基）-甘油基-β-D-吡喃半乳糖苷（化合物G192-C07)在體外閉 合成年人角質形成細胞的擦傷創傷。
[0025] 發明詳述
[0026] 在多個實施方案中，本發明提供天南星（RA)的水和醇提取物、天南星醇提取 物的水溶性部位、從天南星分離的化合物（比如，3-0_(9, 12-十八碳二烯酰基）_甘油 基-β -D-吡喃半乳糖苷、Ν- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸、和腺苷）、包含前述成分 的藥物組合物、以及其用于促進創傷愈合的用途。在某些實施方案中，藥物組合物為局部劑 型，比如乳膏劑、軟膏劑、泡沫劑、洗劑、硬膏劑、凝膠或乳劑。
[0027] 天南星的種類包括一把傘南星（Arisaema erubescens)、異葉天南星（Arisaema heterophyllum)和東北天南星（Arisaema amurense)。在一個實施方案中，本發明提供東北 天南星提取物和從東北天南星分離的生物活性化學成分（比如，3-0-(9, 12-十八碳二烯酰 基）-甘油基-β -D-吡喃半乳糖苷、N- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸、和腺苷），及其 用于促進創傷愈合的用途。
[0028] 在某些實施方案中，本發明提供一把傘天南星和/或異葉天南星的提取物和由其 分離的生物活性化學成分（比如3-0-(9, 12-十八碳二烯酰基）_甘油基-β -D-吡喃半乳 糖苷、Ν- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸、和腺苷），及其用于促進創傷愈合的用途。
[0029] 在一個實施方案中，天南星提取物和/或從RA分離的化合物可用于促進角質形成 細胞的增殖和/或遷移、和/或成纖維細胞生成膠原蛋白。
[0030] 在某些實施方案中，本發明的天南星提取物和/或從RA分離的化合物可用于促 進創傷愈合，包括皮膚創傷、切除傷、撕裂傷、燒傷、擦傷、刺傷或貫通傷、外科創傷、挫傷、血 腫、擠壓傷和潰瘍，比如糖尿病足部潰瘍。
[0031] 化合物
[0032] 在一個實施方案中，本發明提供Ν_( β -D-呋喃核糖-1-基）_苯丙氨酸或其鹽。 Ν- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸化合物具有下列結構：

【權利要求】
1. 一種用于促進受試者中創傷愈合的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的 組合物，該組合物包含水溶性天南星（Rhizoma arisaematis)提取物和/或一種或多種 選自由3-0-(9, 12-十八碳二烯酰基）-甘油基-β -D-吡喃半乳糖苷、Ν-( β -D-呋喃核 糖-1-基）-苯丙氨酸、腺苷、及其任意鹽組成的組中的分離的化合物。
2. 根據權利要求1的方法，其中所述組合物包含天南星根的水溶性提取物。
3. 根據權利要求1的方法，其中所述組合物包含一種或多種選自由3-0-(9, 12-十八碳 二烯酰基）-甘油基-β -D-吡喃半乳糖苷、Ν- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸、腺苷、 及其任意鹽組成的組中的分離的化合物。
4. 根據權利要求3的方法，其中所述組合物包含分離的化合物3-0-(9, 12-十八碳二烯 酰基）_甘油基-β -D-吡喃半乳糖苷或其鹽，和分離的化合物腺苷或其鹽。
5. 根據權利要求1的方法，其中所述組合物局部施用至創傷區域。
6. 根據權利要求1的方法，其中所述受試者具有皮膚創傷、切除傷、撕裂傷、燒傷、擦 傷、貫通傷、外科創傷、擠壓傷或潰瘍。
7. 根據權利要求6的方法，其中所述受試者患有糖尿病性潰瘍。
8. 根據權利要求5的方法，其中所述組合物配制成創傷敷料、乳膏劑、軟膏劑、泡沫劑、 洗劑、硬膏劑、凝膠劑、乳劑、水凝膠或皮膚貼劑。
9. 一種用于促進受試者中創傷愈合的方法，包括向受試者施用治療有效量的包含于溶 劑中的天南星提取物的組合物，所述溶劑包含至少70%(ν/ν)的選自下列的醇：乙醇、甲醇、 正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、或其混合物。
10. 根據權利要求9的方法，其中所述受試者患有潰瘍，并且將所述組合物局部施用至 潰瘍。
11. 根據權利要求10的方法，其中所述受試者患有糖尿病性潰瘍。
12. 根據權利要求10的方法，其中所述組合物配制成創傷敷料、乳膏劑、軟膏劑、泡沫 齊?、洗劑、硬膏劑、凝膠劑、乳劑、水凝膠或皮膚貼劑。
13. -種用于促進成纖維細胞產生膠原蛋白的方法，其中所述方法包括向所述成纖維 細胞施用有效量的包含水溶性天南星提取物的組合物。
14. 根據權利要求13的方法，其中所述成纖維細胞位于受試者中。
15. 根據權利要求14的方法，其中所述受試者具有創傷，并且將所述組合物局部施用 至該創傷區域。
16. -種用于促進角質形成細胞的遷移和/或增殖的方法，其中所述方法包括向所述 角質形成細胞施用有效量的組合物，該組合物包含天南星的水溶性提取物和/或分離的化 合物3-〇_ (9, 12-十八碳二烯醜基）-甘油基-β -D-批喃半乳糖苷或其鹽。
17. 根據權利要求16的方法，其中所述角質形成細胞位于受試者中。
18. 根據權利要求17的方法，其中所述受試者具有創傷，并且將所述組合物局部施用 至該創傷區域。
19. 根據權利要求16的方法，其中所述組合物包含分離的化合物3-0-(9, 12-十八碳二 烯酰基）-甘油基-β -D-吡喃半乳糖苷或其鹽。
20. -種分離的化合物，其為Ν- ( β -D-呋喃核糖-1-基）-苯丙氨酸或其鹽。
【文檔編號】A61P17/02GK104053447SQ201280051048
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2012年10月18日 優先權日:2011年10月18日
【發明者】葉玉如, 葉翠芬, 郭圣君, 伍儒邦 申請人:香港科技大學