治療上皮創傷的方法和組合物的制作方法

治療上皮創傷的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本申請涉及上皮創傷的治療。具體地，本申請涉及基于施用阿片類拮抗劑如納曲酮治療上皮創傷的方法和制劑。
【專利說明】治療上皮創傷的方法和組合物
[0001]相關申請的交叉參考
[0002]本申請要求于2011年7月28日提交的美國臨時申請61/512，577的優先權，其全部引入本文作為參考。
發明領域
[0003]本發明涉及上皮創傷的治療。具體地，本發明涉及基于施用阿片類拮抗劑如納曲酮治療上皮創傷的方法和制劑。
[0004]發明背景
[0005]創傷愈合是一系列精心安排的具有交錯的時間和空間關系的事件，并且包括炎癥期、增殖期和重塑期(remodeling) (Guo et al., Journal DentRes，89:219-229(2010);Shih et al., Wound Repair Regeneration，18:139-153(2010))。在創傷修復中作為主要因素(responsible factors)牽涉的一些過程包括炎癥中的異常、迀移、血管生成、新生血管形成、細胞增殖、肉芽組織和膠原的形成，以及再上皮形成(Usuiet al., Journal of Histochem Cytochemj 56:687-696(2008);Mustoe et al, AmericanJournal of Surgery,187:655-705(2004);Brem et al., Arch Surg，135:627-634(2000))。
[0006]在I型糖尿病中，創傷通常不能進入愈合的正常階段(Boulton et a1., Lancet, 366: 1719-1724(2005) ;Usui e t al., Journal of HistochemCytochem, 56:687-696 (2008))。削弱的創傷愈合是糖尿病主要的并發癥，其可導致慢性虛弱性潰痕(chronic debilitating ulcers)的形成(Guo et al., Journal DentRes, 89:219-229(2010);Boulton et al.，Lancet, 366:1719-1724(2005);0，Loughlin etal., International Journal of Lower Extremity Wounds，9:90-102 (2010))。糖尿病是截肢的首要原因(Boulton et al.，Lancet，366:1719-1724(2005) ;O’Loughlin etal., International Journal of Lower Extremity Wounds，9:90-102 (2010))，占每年下肢截肢患者的50%以上。到2030年世界范圍內糖尿病患者的數量估計將達到3億，預計糖尿病創傷及其并發癥的負擔會同時上升(Boulton et al.，Lancet，366:1719-1724(2005))。盡管持續的醫學護理和患者的自我管理可降低長期并發癥的危險，以及盡管有眾多的敷料產品(dressing product)可用，但是仍未完全有效地預防或治療這些并發癥。
[0007]現已顯示，內源性阿片類，最初研究其作為神經遞質的作用(Akil et al.,AnnRev Neuroscience, 7:223-255(1984))，存在于神經和非神經組織中，并能夠介導除神經調節外的多項功能，包括細胞增殖、血管生成、組織構成(tissue organization)、細胞遷移，以及免疫性(Zagon et al.，Journal of Invest Dermatology, 106:490-497 (1996) ;Zagon et al.，Diabetes,51:3055-3062 (2002) ;Zagon et al.，Journalof Vascular Surgery,37:636-643 (2003) ;Blebea et al., Journal of VascularSurgery, 32:364-373(2000);Zagon et al.，Immunobiology，216:173-183 (2011);Zagon etal., Immunobiology, 216:579-590(2011) ;Wilson et al.,Cell Prolifj 33:63-73 (2000)) 0內源性阿片類包括強 啡肽、腦啡肽、內啡肽、內嗎啡肽和痛敏肽。經典的阿片受體為μ、δ和K受體；非經典阿片受體包括痛敏肽受體和阿片生長因子受體(OGFr)，也稱為ζ受體(Corbett et al.Br.J.Pharmacol.147Suppl 1: S153 - 62 (2006)) ? OGFr 的內源性配體為[Met5]-腦啡肽，也稱為阿片生長因子(OGF)。
[0008]天然阿片類與糖尿病的關系已經受到一些關注。有關糖尿病中循環阿片水平的研究顯示患有I型糖尿病(TlD)的患者具有高血漿[Met5]-腦啡肽水平(Fallucca et al.,Metabolism, 45:1065-1068(1996);Negri et al., Metabolism, 41:460-461(1992);Kolta etal.，Neuropeptides, 21:55-63 (1992))。另據報道在遺傳性肥胖糖尿病(db/db)小鼠的血楽 中，[Met5]-腦啡妝的水平升高(Timmers et al., Diabetes, 35:1143-1151 (1986) ;Greenberg et al.Endocrinology, 116:328-331 (1985))。
[0009]一系列在患有TlD的大鼠中全身和局部應用阿片拮抗劑納曲酮(NTX)的研究報道，眼表上皮除去后的再上皮形成延遲被NTX逆轉并與DNA合成增加有關(Zagon et al.,Diabetes, 51:3055-3062(2002);Klocek et al., Journal of Ocular Pharmacology andTherapeutics, 23:89-102 (2007))。這些數據表明TlD中功能失調的眼部創傷修復是由于阿片肽-阿片受體相互作用增加所致，該作用被NTX中斷。已知OGF能夠抑制人角膜(Zagonet al., Investigative Ophthalmology&Visual Science, 41:73-81 (2000))和大鼠尾部皮膚(Wilson et al., Cell Prolif, 33:63-73 (2000))中的再上皮形成。
[0010]內源性阿片類，以及經典和非經典阿片受體，存在于上皮組織中(Cheng etal., Clin Lab Invest, 158:713-720(2008);Wintzen et al., Exp Dermatol, 10:305-311 (2001);Tominaga Journal of Invest Dermatol,127:2228-2235(2007);Bigliard1-Qi etal., Differentiation, 74:174-185(2006) ;Nissen et al., Experimental Dermatology, 6:222-229 (1997);Wenk et al., Journal of Comp Neurol, 408:567-579(1999);Salemi etal., Biochem Biophys Res Commun, 338:1012-1017(2005);Zagon et al., Cell Tissue Research, 246:561-565(1986);Bigliardi et al., Journal of Invest Dermatol, 111:297-301(1998);Kauser et al., Journal of Invest Dermatol, 120:1073-1080 (2003))。已知OGF能夠調控DNA合成和角質層細胞更新(Wintzen et al., ExpDermatol, 10:305-311 (2001))，然而小鼠中δ阿片受體的缺失改變了皮膚分化并延緩了創傷愈合(Bigliard1-Qi et al., Differentiation, 74:174-185 (2006)) ?
[0011]迫切地需要了解糖尿病和其它創傷愈合延緩的情況中創傷愈合的病理生理學，并將該知識轉變成治療模式以預防或至少減輕急性和慢性創傷愈合并發癥(Usui etal., Journal of Histochem Cytochem, 56:687-696(2008))。

【發明內容】

[0012]在一項實施方案中，本發明涉及治療上皮創傷的方法，其通過向有需要的受試者給藥有效量的阿片拮抗劑。在一項具體實施方案中，所述被給予的阿片拮抗劑為納曲酮。在另一項具體實施方案中，所述被給予的阿片拮抗劑為納洛酮。
[0013]在另一實施方案中，本發明提供用于治療上皮創傷的組合物，其含有有效量的阿片拮抗劑和藥學上可接受的適于局部給藥的載體。在一項具體實施方案中，所述在組合物中提供的阿片拮抗劑為納曲酮。在另一項具體實施方案中，所述被給予的阿片拮抗劑為納洛酮。[0014]附圖簡述
[0015]圖1.經STZ誘導糖尿病的大鼠(DB)或接受鹽水的未處理的大鼠(正常)的體重(A)和葡萄糖水平(B)。A:在STZ注射前(第O周)及其后每周記錄體重。B:在STZ給藥前(第O周)和給藥后第1、4和8周記錄血糖水平。在各時間點數值表示至少5只動物/組的均值土SEM。在#P〈0.01和*#P〈0.001時，與正常組具有顯著差異。
[0016]圖2.經溶解于索倫森磷酸鹽緩沖液(SPB)、DMSO、KY膠(KYJ)或露得清保濕霜(Neutrogena moisturizing cream,MCN)中的 NTX(1CT4M、ICT5M 或 ICT6M)局部治療的大鼠背部基底層的標記指數直方圖；對照大鼠接受相應的媒介物(vehicle)。動物接受3次局部施用NTX。在安樂死前3小時和6小時，動物接受注射BrdU(100mg/kg;1.p.)。對治療(4載體和4濃度/載體)和病況(糖尿病，正常)進行兩因素ANOVA分析。對于病況，無總體效應；治療在P〈0.001有顯著性，F=5.59(15，288)。數據以均值土SEM表示。基于對各載體和病況的單因素ANOVA分析，在*P〈0.05、#P〈0.01和*#P〈0.001時，與媒介物治療的大鼠的各數值有顯著差異。
[0017]圖3.從經露得清保濕霜中的10_5M NTX (MCN+NTX)、僅保濕霜(MCN+媒介物)或無治療處理的正常和糖尿病大鼠背部皮膚獲得的組織學制備物。切片經抗-BrdU抗體染色并經蘇木精復染。注意到在NTX-治療組中BrdU-陽性細胞(箭頭)增加。bl，基底層；印1，表皮；de，真皮。標尺=12 μ m。
[0018]圖4.在正常和糖尿病大鼠的背部表面生成的全層創傷的顯微照片。創傷經溶解于露得清保濕霜中的10_5M NTX (MCN+NTX)或單獨的保濕霜(MCN+媒介物)每天3次治療并于創傷形成后第0、3、5、7和9天拍照。標尺=6mm。
[0019]圖5.6mm創傷形 成后及隨后9天的大鼠皮膚中殘留缺陷(%)的直方圖。A.未接受治療的正常和糖尿病(DB)大鼠。B.經溶解于露得清保濕霜中的10_5M NTX每天治療一次(Ix)或3次(3x) (MCN+NTXIX ；MCN+NTX3x)或者僅接受媒介物(MCN+媒介物Ix ；MCN+媒介物3x)的正常和糖尿病大鼠。C.在經MCN+NTX或MCN+媒介物治療的DB和正常(N)大鼠中，在第8天收縮和再上皮形成對創傷閉合的貢獻。數值以均值土SEM表示。在*P〈0.05、**P〈0.01、***P〈0.001和++P〈0.01時，與正常或MCN+媒介物有顯著差異。
[0020]圖6.6_創傷形成后及隨后9天的大鼠皮膚中殘留缺陷(%)的直方圖。這些組包括經溶解于玉蘭油保濕霜中的10_5M NTX每天治療3次(3x) (MC00+NTX3x)的正常和糖尿病大鼠或者接受僅媒介物(MC00+媒介物3x)、或溶解于KY膠中的10_5M NTX (KYJ+NTX3x)或僅KY膠(KYJ+媒介物3x)的正常和糖尿病大鼠。數值以均值土SEM表示。在*P〈0.05、**Ρ〈0.01、***Ρ 〈0.001時，與各自的媒介物有顯著差異。
[0021]圖7.在6mm全層創傷生成后20天采集的正常和糖尿病大鼠的皮膚的顯微照片。一些創傷經溶解于露得清保濕霜中的10_5M NTX (MCN+NTX)或接受僅媒介物(MCN+媒介物)每天治療3次。切片經蘇木精和伊紅染色。epi,表皮；de,真皮。標尺=12μηι。在創傷形成后20天所測量的上皮厚度(ym)的直方圖。數值以均值土SEM表示。在*#Ρ〈0.001時，與N/MCN+媒介物有顯著差異。
[0022]圖8.在經溶解于露得清保濕霜中的10_5M NTX (MCN+NTX3x)或接受僅媒介物(MCN+媒介物3x)每天局部治療3次后，正常和糖尿病大鼠中創傷相鄰和外周皮膚中基底上皮細胞的標記指數的直方圖；在治療5或10天后采集數據。數值以均值土 SEM表示。在*P〈0.05和**P〈0.01時，與它們各自媒介物有顯著差異。
[0023]圖9.8周齡II型糖尿病(db/db)小鼠和野生型C57B1/6小鼠的體重和血糖水平。小鼠購自Jackson Laboratories并在標準實驗室護理下收容。獲得尾部靜脈血液并通過TrueTrak血糖儀測量葡萄糖水平。數值以均值土SEM表示；n=6_10只小鼠/治療組。使用t檢驗分析數據；在？〈0.001(***)時，與野生型具有顯著差異。
[0024]圖10.在II型糖尿病(db/db)和野生型小鼠背部上形成5_mm圓形全層皮膚創傷后，第3、6、13和15天的殘留缺陷(%)。Db/db小鼠經于保濕霜(媒介物)中的10_5M納曲酮(NTX)或僅媒介物治療；野生型小鼠僅接受媒介物。每天施用3次，持續15天。在各時間點數值表示至少5處創傷/治療組的均值土SEM。在p〈0.01 (++)時，與野生型媒介物數值有顯著差異。在p〈0.05(*)時,與db/db媒介物數值有顯著差異。
[0025]發明詳述
[0026]
【發明者】驚訝的發現局部給予通用的(general)或廣基(broad-based)阿片拮抗劑能夠促進和加速正常和糖尿病受試者中上皮創傷的愈合，并且能夠恢復糖尿病中延緩的創傷愈合速率至正常受試者中的速率。因此，本發明提供用于治療受試者(尤其包括糖尿病受試者)中上皮創傷的治療方法和局部制劑，基于使用納曲酮和其它通用的阿片拮抗劑。
[0027]通用的阿片拮抗劑，如納曲酮(本文也簡寫為“NTX”)和納洛酮，已知為阿片受體的廣基拮抗劑并主要用于處理對藥物(例如，阿片類)、酒精和尼古丁的依賴性。本文確認的阿片拮抗劑對創傷愈合過程的有益作用令人驚訝，尤其鑒于有報道稱納曲酮是皮膚的不良穿透劑(參見，例如 Stinchcomb et al., J.Pharmaceutical Sciences91:2571-2578，2002);Krishman et al., J.Pharmaceutical Sciences99:2724-2731，2010)。
[0028]如本文所公開，在暴露`于NTX的糖尿病動物中觀察到皮膚基底層的DNA合成顯著增加。已知至少一種內源性阿片系統，阿片生長因子-阿片生長因子受體(OGF-OGFr)系統，能夠通過細胞周期蛋白依賴性抑制激酶通路(cyclin dependent inhibitorykinase pathway)強力地調控細胞增殖(Cheng et al., Molecular Biology of theCell, 20:319-327(2009))。已有報道OGF-OGFr軸能夠抑制T細胞和B細胞增殖(Zagon et a1., Immunobiology, 216:173-183(2011) ;Zagon et al., Immunobiology, 216:579-590(201I))、細胞遷移(Zagon et al., American Journal of Physiology, 268: R942-R950 (1995))、角質形成細胞和成纖維細胞的增殖(Zagon et al., Journal of Invest Dermatology, 106:490-497 (1996) ;Zagon et al., Diabetes, 51:3055-3062 (2002);Zagon et al., Journal of Vascular Surgery,37:636-643 (2003) ;Blebea etal., Journal of Vascular Surgery,32:364-373 (2000);Zagon et al.,Immunobiology, 216:173-183 (2011) ;Zagon et al., Immunobiology, 216:579-590 (2011);WiIson et al.,CelI Prolif,33:63-73(2000) ;Zagon et al., InvestigativeOphthalmology&Visual Science, 41:73-81 (2000))以及血管生成(ZAGON et al., Journalof Vascular Surgery, 37:636-643(2003);Blebea et al., Journal of VascularSurgery, 32:364-373 (2000))，所有上述過程均為牽涉糖尿病并發癥的因素。
[0029]有趣的是，患有TlD的患者和患有II型糖尿病(T2D)的小鼠均具有升高的OGF([Met5]-腦啡妝)水平([Met5]-enkephalin) (Fallucca et al., Metabolism, 45:1065-1068(1996);Negri et al., Metabolism, 41:460-461(1992);Kolta et al., Neuropeptides, 21:55-63(1992);Timmers et al., Diabetes, 35:1143-1151(1986);Greenberg et al.Endocrinology, 116:328-331 (1985))，表明糖尿病伴隨著與抑制細胞復制有關的阿片肽的升高。因此，不受限于任何具體的理論，可推斷過度的OGF-OGFr相互作用能延緩創傷閉合，如糖尿病中所發現的。而且，NTX中斷此活性是恢復相關過程至正常狀態的原因，至少是部分原因。
[0030]與延緩創傷愈合相關的狀況包括糖尿病(I型/胰島素依賴型糖尿病，和II型/非胰島素依賴型糖尿病)、肥胖癥、受試者年齡增長、冠狀動脈疾病、外周血管疾病、創傷感染、癌癥和免疫抑制(包括免疫系統損傷和免疫抑制或放射治療)。本文公開內容涵蓋了在存在任何上述狀況的受試者中給予阿片拮抗劑如NTX和納洛酮用于促進創傷愈合。
【發明者】發現甚至在正常受試者中，給予阿片拮抗劑也促進創傷愈合；因此本發明的方法和組合物在需要改善上皮創傷治療的任何情況中是有益的。不受限制地，據信阿片拮抗劑部分地通過與阿片生長因子受體(OGFr)相互作用促進創傷愈合。因此，在一項實施方案中，本文提供的方法和組合物被給予至上皮創傷，其中OGFr存在或表達于所述上皮創傷毗鄰的上皮細胞或形成所述上皮創傷的上皮細胞上。
[0031]本文所呈現的研究確認在TlD和T2D模型動物中改善創傷愈合；因此本文所提供的方法和組合物適于治療患有任何形式糖尿病的受試者中的上皮創傷。
[0032]可使用本文所公開的方法治療的受試者包括任何哺乳動物受試者，尤其是人受試者、狗、貓和馬，其可為糖尿病或非糖尿病受試者。
[0033]根據本公開內容可有效治療的上皮創傷包括涉及表皮(如5種表皮層的任一種:基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層)中細胞和組織的表皮創傷；涉及皮膚真皮中細胞和組織的真皮創傷；以及涉及身體的內部上皮表面(如內部器官和體腔的粘膜上皮(epithelial lining))的創傷`。因此，本發明的方法和組合物可用于治療表面創傷如皮膚磨損、涉及真皮和表皮損傷的創傷，以及內部或表面下創傷，如促進手術操作后切口的閉
入
口 ο
[0034]“治療上皮創傷”意指促進、加速和/或增進創傷閉合、創傷收縮、成熟和重塑、纖維組織形成和肉芽組織形成，和/或再上皮形成。
[0035]“阿片拮抗劑”結合并拮抗阿片受體(阻礙或抑制其信號傳導)。阿片拮抗劑包括納洛芬、左洛啡燒、cyprodime、納曲Π引哚(naltrindole)、諾比那托費米(norbinaltorphimine)、丁丙諾啡(buprinophine)、納曲酮和納洛酮。優選的阿片拮抗劑為對阿片受體有親和性但不激活阿片受體的拮抗劑。優選的阿片拮抗劑的實例包括納曲酮和納洛酮。
[0036]出于本發明的目的，納曲酮和納洛酮，以及其藥學上可接受的鹽(例如，納曲酮鹽酸鹽，和納洛酮鹽酸鹽)或其前藥，均適用于治療上皮創傷。
[0037]納曲酮的IUPAC名稱為17-(環丙基甲基)-4，5 α -環氧-3，14- 二羥基嗎啡喃-6-酮。納曲酮可被描述為取代的羥嗎啡酮，其中叔胺甲基取代基被甲基環丙烷代替。納洛酮也稱為二羥基嗎啡喃-6-酮。
[0038]納曲酮和納洛酮的“前藥”意指以與納曲酮和納洛酮相比無活性或低活性形式給予的藥理學化合物；且其在給藥后在體內轉化為納曲酮或納洛酮。在一些實施方案中，所述前藥以不超過三個酶促步驟轉化為納曲酮或納洛酮。在具體實施方案中，所述前藥以一個或兩個酶促步驟轉化為納曲酮或納洛酮。納曲酮前藥的實例包括鏈長為2-7個碳的直鏈納曲酮-3-烷基酯前藥，如Stinchcomb et al., J.PharmaceuticalSciences91:2571-2578, (2002)中所述，以及酯、碳酸酯和氨基甲酸酯前藥，如Valiveti etal., Pharmaceutical Res.22:981-989 (2005)中所述。上述引文的全部內容引入本文作為參考。
[0039]治療上皮創傷的治療方法包括向需要治療的受試者的上皮區域給藥有效量的納曲酮和/或另一種通用的阿片拮抗劑。例如，治療皮膚創傷包括向受試者的皮膚的創傷區域局部給藥有效量的納曲酮和/或另一種通用的阿片拮抗劑。
[0040]局部給藥包括在創傷區域上或周圍直接施用、敷設或涂布，例如通過使用涂布器，如擦拭物(wipe)、可溶解薄膜、滴管、噴霧器或通過使用創傷敷料如貼片(patch)。
[0041]阿片拮抗劑可與藥學上可接受的載體組合并配制用于方便的局部給藥。如本文所用，藥學上可接受的載體包括溶劑、分散介質、等張劑等。除非任何常規介質、試劑、稀釋劑或載體對接受者或阿片拮抗劑的溶解度或治療有效性有害，否則其使用是適合的。所述載體可為液體、半固體，如糊劑、膠凍劑或乳膏劑，或固體載體。載體的實例包括水、鹽水溶液、醇、糖、凝膠、脂質、脂質體、樹脂、多孔基質、粘合劑、填充劑、包衣、防腐劑等，或其組合。所述阿片拮抗劑可以任何方便地或實用的方式與所述載體組合，例如通過混合、溶解、混懸、乳化、膠囊化、吸收等，并且可制備成適于局部給藥的制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、軟膏劑、凝膠劑、膠凍劑、乳膏劑、敷料、貼劑等。
[0042]在具體實施方案中，所述阿片拮抗劑如納曲酮或納洛酮配制成溶液或混懸液并以液滴的形式局部施用。可使用任何適于局部給藥的溶液，其中阿片拮抗劑(如納曲酮或納洛酮)是可溶的；例如，無菌水、索倫森磷酸鹽緩沖液等。
[0043]在另一項具體的實施方案中，所述阿片拮抗劑在水基膏狀賦形劑中提供，其可作為凝膠劑、乳膏劑或軟膏劑施用于創傷皮膚區域。根據此項實施方案，所述阿片拮抗劑可首先溶解于液體載體(如水或索倫森磷酸鹽緩沖液)中，然后與皮膚乳膏或凝膠產品混合。
[0044]在其它具體實施方案中，阿片拮抗劑混合或摻入貼劑或敷料形式的、適于局部給藥至皮膚的固體載體。在一些實施方案中，所述制劑或皮膚產品被制備成具有如緩釋或改善的穩定性性質。例如，可將含有納曲酮的多聚基質組合物局部施用至皮膚以實現緩釋。
[0045]含有阿片拮抗劑的組合物可包括額外的成分、添加劑或載體，其適用于與上皮創傷上或周圍接觸而無過度的毒性、不相容性、不穩定性、刺激性、變態反應等。在合適的情況下，可向制劑中加入添加劑如溶劑、堿、溶液助劑、混懸劑、增稠劑、乳化劑、穩定劑、緩沖劑、等張調節劑、安撫劑(soothing agents)、防腐劑、矯正劑(corrigents)、調味劑、著色劑、賦形劑、粘合劑、潤滑劑、表面活性劑、吸收促進劑、分散劑、防腐劑、增溶劑等。
[0046]本發明含阿片拮抗劑的制劑或組合物可包括其它用于治療上皮創傷的活性成分和活性藥物，其包括但不限于，抗感染藥、抗生素、抗病毒藥、消炎藥、抗過敏藥(包括抗組胺藥)、血管收縮劑、血管擴張劑、局部麻醉劑、鎮痛藥、降低眼內壓藥、免疫調節劑、抗氧化劑、維生素和礦物質、蛋白酶和肽酶(其降解內源性阿片)等。在具體實施方案中，含阿片拮抗劑制劑也包括胰島素以用于局部給予至糖尿病受試者的創傷皮膚。
[0047]向有需要的受試者以有效量給予本發明含阿片拮抗劑的組合物以治療所述受試者的受傷的上皮組織。用于具 體個體的所述組合物的有效量可取決于創傷的大小和深度、施用制劑的類型、給藥的頻率以及治療持續的時間。根據本發明已發現阿片拮抗劑如納曲酮，其以相對低濃度(例如，至少10_6M、至少10_5M、或至少10_4M至5xlO_4M，或任何落在這些數值范圍內的濃度)溶解于液體中，當通過數種不同的載體(液體或半固體)施用至受傷的上皮區域時，顯著地促進創傷愈合。對于真皮/表皮創傷，優選每日施用，優選每日一至三次施用。施用至創傷區域的制劑中所述阿片拮抗劑的最終濃度，無論液體或半固體，為至少0.003%(w/w)，并至多5-10%(w/w)，且通常在0.1%至5%(w/w)范圍內。
[0048]通過但不限于以下實施例進一步解釋說明本發明。
實施例
[0049]材料和方法
[0050]動物和糖尿病的誘導
[0051]雄性Sprague-Dawley 大鼠(~150g)購自 Charles River Laboratories(Wilmington, MA)，并收容在標準實驗室條件下；水和食物可自由獲取。所有研究遵循賓夕法尼亞州立大學醫學實驗動物護理和使用委員會(Pennsylvania State UniversityCollege of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee)的指南。
[0052]通過連續兩天腹腔內(1.ρ.)注射40mg/kg鏈脲佐菌素(STZ, Sigma, St.Louis, MO)誘導 I 型糖尿病(TlD) (Klocek et al., Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics, 23:89-102(2007) ; Havel et al.，Diabetes, 49:244-252 (2000))。該給藥方案在72-96h內在100%的動物中產生胰島素依賴型糖尿病；血糖水平測量>350mg/dl的大鼠被視為患有糖尿病(DB)。使用 True Track? Smart System 血糖儀(Home Diagnostics, Ft.Lauderdale, FL)在接受STZ之前以及高血糖誘導之后的1、4和`8周監測尾部靜脈的血糖水平。接受注射相同體積的無菌鹽水的對照動物被稱為“正常”。所有大鼠每周稱重。
[0053]材料和方法-實驗1.納曲酮和未受傷的皮膚
[0054]納曲酮的施用
[0055]在注射STZ或鹽水8周后，將正常(n=24)和糖尿病(DB)大鼠(n=24)隨機分組，并全身地(30mg/kg，1.p.或皮下(s.c.)，在0800h)或局部地(每日三次，在0700、1200和 1700h)接受 NTX(Sigma-Aldrich, Indianapolis, IN)。對于局部施用，將 NTX 溶解于索倫森憐酸鹽緩沖液(SPB)、KY 膠(KYJ) (K-Y, Personal Products Company, McNeil-PPC, Inc.，Skillman, NJ)、露得清保濕霜(MCN) (Neutrogena Corporation, Los Angeles, CA)或DMSO(VWR, Philadelphia, PA)中。NTX 以劑量 10-4Μ、1(T5M 或 1(T6M 溶解于無菌水中，并充分地混合至各載體(1:1，ν/ν)中；0.5ml鹽水混合至相應載體中作為各自的媒介物對照。
[0056]在NTX或媒介物治療的前一天，在各大鼠的背部表面剃出一片8x8cm區域并用永久性記號筆畫出4個圓圈(直徑約為20_)以指示隨后局部施用和/或皮膚采集的位置。使用涂布棒，將Iml含有NTX或媒介物的載體放置于劃分的區域內。隨機施用NTX制劑至不同位置。各動物接受3種不同濃度的在相同載體中的NTX以及媒介物，一些大鼠僅接受在載體中的鹽水或未經處理。
[0057]DNA 合成
[0058]為評價經歷DNA合成的細胞,在使用Euthasol (Virbac, Fort Worth, TX)安樂死前3h和6h,大鼠經腹腔內注射(1.p.) 100mg/kg BrdU (Sigma-Aldrich)。將皮膚的適當區域取出，并在10%緩沖的福爾馬林中固定，并且石臘切片(6μηι)經抗-BrdU-POD (Invitrogen,Carlsbad, CA)染色。使用2切片/樣品在4個0.1mm網格中以250X放大率計數上皮基底層中BrdU染色的細胞；對于各載體中各劑量的NTX，分析3個組織樣品。
[0059]材料和方法-實驗II.納曲酮和創傷愈合
[0060]全層皮膚創傷
[0061]在第二組實驗中，正常(n=70)和DB (n=70) Sprague-Dawley大鼠，12-14周齡并在注射STZ8周后，經受創傷形成。在3個獨立地實驗過程中評估8只大鼠/治療方案。剃凈大鼠背部，并用記號筆畫出區域(直徑20_)的輪廓以始終定位創傷。通過1.p.注射氯胺酮(60mg/kg)、賽拉嗪(10mg/kg)和乙酰丙嗪(lmg/kg)麻醉動物，并使用Acupunch (AcudermInc., Fort Lauderdale, FL)在劃分區域的中心制造6mm全層圓形切除的皮膚創傷至脂膜肌(panniculus muscle)水平。標準化每只大鼠的三處創傷從而使制造的第一創傷位于該動物頡骨后部枕骨凹口(occipital notch)后5cm和正中線外lcm。制造的第二創傷位于該動物顱骨后部枕骨凹口后7cm和第一創傷對側正中線外lcm。第三創傷被置于該動物顱骨基部的枕骨凹口后9cm和第一創傷同側正中線外lcm。為最小化晝夜節律的影響,手術在0800-0900h進行。所有創傷未被覆蓋。
[0062]在創傷形成(對于僅每天一次接受藥物的那些大鼠為0800h，而對于每天接受3次施用的那些動物為0800，1200和1600h)后，立即使用選自第一項實驗的劑量和載體，局部給予~0.1ml含有NTX或媒介物的載體；對照大鼠接受含有媒介物的載體，一天一次或一天三次。在正常和DB組中，一些動物受傷但未治療。
[0063]攝影
[0064]通過架設于距表面20厘米的三腳架上的數碼相機捕捉圖片來監測創傷大小；直尺會隨同每處創傷被拍攝。手動限制而非麻醉動物進行攝影。在手術后即刻和在第3、5、
7、9 和 11 天拍攝圖片。使用 Image ProPlus6.2 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD)分析各創傷的區域。在各時間點計算每只大鼠的殘留創傷百分數。在第8天，還根據Pietramaggiori 和同事的方法(Pietramaggiori et al., J Surg Res 160:169-177 (2010))通過測量收縮、再上皮形成以及開放性創傷占最初創傷區域的百分比來量化創傷閉合。收縮的、再上皮化的以及開放性創傷區域的總和被定義為等于最初創傷大小的100%(Yannas
1., Tissue and Organ Regeneration in Adults.New York:Springer, 2001)。
[0065]DNA合成和組織病理學
[0066]在如上所述的創傷形成后第5天和第10天使用BrdU評估細胞增殖。在4個0.1mm網格中以250X放大率計數上皮基底層中標記和未標記細胞的數目，并從該創傷部位邊緣的相鄰區域和0.5mm外周取樣。每天接受3次MCN+媒介物或MCN+NTX的3只正常和3只DB大鼠注射BrdU。
[0067]在創傷形成后的第20天，將一些大鼠安樂死并剪切最初的創傷區域以及涵蓋直徑為20mm圓的該創傷外周的組織并在10%中性緩沖的福爾馬林中固定。處理組織用于石蠟包埋；切片經蘇木精和伊紅染色。使用目鏡測微尺測量覆蓋肉芽組織的上皮的厚度。以250X放大率評估7-8處創傷/治療組的5次測量/切片。
[0068]數據分析
[0069]使用Student’s雙尾t檢驗分析體重和葡萄糖測量。使用方差分析(ANOVA)和隨后利用Newman-Keuls檢驗所做的計劃性比較評估缺陷的面積測量值(例如，殘留創傷、收縮的百分數)、上皮厚度以及DNA標記指數。
[0070]結果
[0071]實驗1.納曲酮和未受傷的皮膚
[0072]在STZ注射72h內所有大鼠為高血糖的，正常和DB動物的血糖水平分別為119±4和569±9mg/dL(圖.1)。從STZ注射后I周開始并且持續貫穿實驗期，DB大鼠的體重比正常組群降低了 8%至28%(圖1)。未向DB組的大鼠提供胰島素。無動物死于高血糖癥。
[0073]相對于正常大鼠的皮膚上皮的基底細胞中BrdU標記指數8.1 + 0.3%，通過1.p.或s.c.途徑全身注射30mg/kg NTX分別使BrdU標記升高了 172%和51%。關于DB動物皮膚中的標記指數8.1±0.5%，1.p.和s.c.注射NTX分別使BrdU摻入增加了 181%和59%。
[0074]在正常和DB大鼠中檢查局部施用溶解于四種不同載體的NTX(10_4M至10_6M)的效果，所述四種不同載體具有不同的性質(例如，吸附、密度)(圖.2)。在正常動物中，局部施用溶解于4種載體任一種的NTX始終從基線水平升高(43-132%)DNA合成。與基線值相t匕，接受SPB中的NTX的動物展現出最低水平的皮膚中BrdU摻入的增加(43-56%)，而經不同劑量的MCN中NTX治療的大鼠展現出一些從基線的最大變化(73-132%)。在DB大鼠中，當在KYJ (103-147%)或MCN(85-89%)中遞送時，局部暴露于所有3種劑量的NTX顯著地使標記指數從基線水平升高。在SPB中遞送至DB大鼠的濃度為10_4和IO-5M的NTX對BrdU摻入無影響。阿片拮抗劑與僅DMSO組合在濃度為10_4和10_5M有效。
[0075]為檢查局部施用NTX是否具有全身分支反應(systemic ramification),—些大鼠經MCN+NTX (10_5M)或MCN+媒介物治療其背部的不同部位。與接受MCN+媒介物的相同動物的創傷的標記指數為8.1 + 0.7%相比，經MCN+NTX治療的皮膚具有標記指數為
18.0±0.9% ;單獨的、未治 療的大鼠的基底上皮具有標記指數為8.2±0.5%。
[0076]粗略地和通過組織學測量檢查皮膚，顯示在接受媒介物或任何劑量的于任何載體中的NTX的正常和DB大鼠中具有相似的外觀。經治療的皮膚的形態與未暴露于任何藥物的動物的皮膚的形態相當(圖3)。
[0077]實驗I1.納曲酮和全層創傷
[0078]基于第一項實驗得到的標記指數數據，選擇在兩種局部遞送系統KYJ和MCN中施加的10_5M NTX用于隨后的實驗以檢查阿片拮抗劑阻斷對全層創傷愈合的影響。正常和DB大鼠表達的體重和葡萄糖模式與圖1中相似。所有大鼠耐受該創傷形成操作而無問題(例如，正常的食物消耗)。
[0079]正常和糖尿病創傷愈合
[0080]使用6mm環鋸，計算的創傷大小為28.3mm2 ;且不包括偏離超過10%的創傷用于分析。正常和DB大鼠中創傷閉合的評估顯示在手術后第5、7和9天，相對于正常大鼠的創傷，DB動物中殘留創傷的面積大24%、44%和132%(圖5A)。
[0081]施用NTX的次數和創傷愈合的效果
[0082]為檢查局部施用NTX對正常和DB大鼠中全層創傷愈合的效果，啟動一項調查以研究每天施用NTX的次數是否是關鍵性的(圖.4，圖.5)。相對于接受MCN+媒介物的動物的創傷，在3天內每天接受單次或3次于MCN中的10_5M NTX方案的正常大鼠中，創傷面積分別減小30%和11%(圖5B)。在第3、5、7和9天，NTX治療的正常動物中創傷大小小于接受MCN+媒介物的組群的創傷，對于每天一次和三次方案，減小范圍分別為31-82%和11-23% ；除第9天每天三次組的數值外，所有數據是統計學上顯著的。與暴露于媒介物的DB大鼠相t匕，經受每天一次施用MCN+NTX的DB動物創傷大小也有減退，但僅在第5和7天分別記錄32%和42%減小。然而，對于DB動物，每天三次給予MCN+NTX始終加速創傷閉合，該組展現的平均殘留創傷比經MCN+媒介物治療的DB大鼠降低了 13%至57%。
[0083]除絕對的創傷閉合外，在第8天分析了 MCN組中的創傷收縮和再上皮形成(兩種有助于愈合的主要機制)(Pietramaggiori et al., Journal of Surgical Research, 160:169-177(2010);Yannas,Tissue and Organ Regeneration in Adults, NewYork: Springer (2001))(圖5C)。接受MCN+媒介物的DB大鼠具有較經MCN+媒介物治療的正常動物大82%的開放性創傷，且創傷收縮率降低了 38% ;然而這兩組間的再上皮形成是相當的。經受MCN+NTX的DB大鼠與被給予MCN+媒介物的正常動物在所有參數(例如，創傷大小和收縮、再上皮形成)上相似，經MCN+NTX治療的DB動物的開放性創傷和創傷收縮的大小為經MCN+媒介物治療的DB動物的一半。
[0084]為檢查NTX對創傷閉合的影響是否依賴于具體類型的保濕霜(即，露得清)，一些動物經于玉蘭油(Oil of Olay) (MC00) (Procter&Gamble, Cincinnati, OH)中的 NTX 治療。與每天三次暴露于MC00+媒介物的正常動物相比，在第5、7和9天，接受于MC00中的10_5MNTX的大鼠具有小24%至65%的殘留創傷(圖6)。在第5、7和9天，經受每天三次MC00+NTX的DB動物具有較接受MC00+媒介物的相應動物小33-80%的創傷。
[0085]為解決NTX的作用是否僅依賴于保濕霜的疑問，正常和DB大鼠接受每天三次于KYJ中的NTX治療(圖6)。相對于經KYJ+媒介物治療的創傷，在第3和5天，接受KYJ+NTX的正常動物中的創傷小10-17%。與接受于KYJ中的媒介物的DB大鼠相比，經受每天三次KYJ+NTX的DB動物在第3、5、7和9天具有小15-65%的創傷。
`[0086]組織病理學
[0087]使用蘇木精/伊紅染色評估手術后20天受傷區域的總體病理學(圖7)。接受媒介物或NTX的正常和DB大鼠的上皮的基本結構似乎是相似的(例如，壞死細胞缺乏)。然而，與正常大鼠中覆蓋在肉芽組織上的上皮寬度為24.6± 1.6 μ m相比，接受媒介物的DB大鼠具有44%減小。相對于接受媒介物的正常動物，經NTX治療的正常動物，以及經受NTX的DB大鼠，在上皮厚度上無區別。
[0088]DNA 合成
[0089]為著手解譯關于DB小鼠中創傷愈合的NTX作用機制，并牢記此前報道的 NTX 革巴向細胞增殖(Zagon et al., Journal of Invest Dermatology, 106:490-497 (1996);Zagon et al.,Diabetes,51:3055-3062(2002);Zagon et al., Journalof Vascular Surgery, 37:636-643(2003);Blebea et al., Journal of VascularSurgery, 32:364-373(2000);Zagon et al., Immunobiology, 216:173-183(2011);Zagon etal.，Immunobiology, 216:579-590(2011);Wilson et al., Cell Prolif, 33:63-73(2000)),在創傷形成后第5和10天評價經受每天三次媒介物或于MCN中的KT5M NTX的正常和DB大鼠的BrdU標記(圖8);評估損傷位點相鄰和外周的皮膚。在DB和正常大鼠二者中，MCN+NTX改變創傷相鄰的皮膚基底上皮中的DNA合成，而不改變外周區域中的DNA合成。在DB大鼠中，在創傷相鄰的皮膚中，在第5和10天，經MCN+NTX治療的大鼠的標記指數分別增加72%和36%。在正常動物中，在第5和10天，與接受媒介物的組群相比，位于正常大鼠的創傷相鄰皮膚中的標記細胞分別增加30%和69%。
[0090]實驗II1.[0091]為研究在II型糖尿病和普通肥胖模型中阿片拮抗劑對創傷愈合的影響，比較野生型和L印rdb(也稱為db/db)突變小鼠間的創傷愈合。糖尿病自發突變純合子型小鼠(Leprdb)在約3至4周齡變成可識別的肥胖。血漿胰島素水平自10至14天起升高并且血糖水平自4至8周起升高。與野生型小鼠相比，這些小鼠顯示延緩的創傷愈合。
[0092]小鼠購自Jackson Laboratories并在標準實驗室護理下收容。獲得8周齡II型糖尿病(db/db)小鼠和野生型C57B1/6小鼠的體重和血糖水平(圖9)。獲得尾部靜脈血液并通過TrueTrak血糖儀測量葡萄糖水平。數值以均值土SEM表示；n=6_10只小鼠/治療組。使用t檢驗分析數據；在？〈0.001(***)時，與野生型具有顯著差異。如圖9所示，8周齡db/db小鼠比野生型C57B1/6小鼠具有顯著更高的體重和血糖水平。
[0093]為研究創傷愈合，在db/db和野生型小鼠的背部形成5mm圓形全層皮膚創傷。Db/db小鼠經于保濕霜(媒介物)中的10_5M納曲酮(NTX)或僅媒介物治療；野生型小鼠僅接受媒介物。每天施用3次，持續15天。如圖10所示，相對于野生型，在創傷形成后第3、6和13天，db/db小鼠顯示顯著更高的殘留缺陷百分數。然而，相對于僅用媒介物治療的db/db小鼠，在第6、13和15天，經NTX治療的db/db小鼠顯示創傷愈合的顯著改善。在p〈0.01 (++)時，與野生型媒介物數值有顯著差異。在p〈0.05(*)時，與db/db媒介物數值有顯著差異。
[0094]這些研究表明，除I型糖尿病外，局部NTX治療改善II型糖尿病的創傷愈合。此外，由于通常db/db小鼠也是肥胖癥模型，因此該研究表明局部阿片拮抗劑不僅對治療糖尿病群體的創傷有益， 而且也對治療正常群體的創傷有益。
[0095]討論
[0096]伴隨良好表征的TlD模型(其中大鼠發展為糖尿病人中觀察到的典型的生理特征，如高血糖癥、體重減輕和不良的創傷愈合)的使用(Zagon et al., Diabetes, 51:3055-3062(2002) ;Klocek et al., Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics, 23:89-102(2007) ; Havel et al.，Diabetes, 49:244-252 (2000))，該研究中一項主要的發現為使用阿片拮抗劑NTX中斷內源性阿片-阿片受體相互作用(interfacing)可增加TlD動物以及正常(非糖尿病)組群中皮膚的基底上皮細胞中DNA合成。NTX對細胞增殖的作用是非毒性的、相對短效，并且不依賴于濃度(在局部施用的100倍范圍內)或給藥途徑(全身或局部)。通過局部遞送給予的NTX局部影響DNA合成，因為含有藥物的載體下方相鄰的細胞而不是遠離NTX施用的基底上皮細胞中的BrdU標記升高。
[0097]因為NTX為純阿片拮抗劑且無直接的生物作用(Blumberg et al., Agonistand Antagonist Actions of Narcotic Analgesic Drugs,110-119(1973);Sawynoket al.,Life Science, 25:1621-1632 (1979))，通過中斷阿片肽-阿片受體相互作用上調DNA合成表明存在于人和動物皮膚上皮中的一種或多種內源性阿片系統(Zagon etal., Journal of Invest Dermatology, 106:490-497 (1996))是完整的并且在與 TlD相關的病生理狀態下具有DNA合成的強烈活性抑制劑作用。盡管一些研究報道稱TlD動物的上皮(例如眼球表面(ocular surface))具有正常水平以下的DNA合成(Zagon et al., Diabetes,51:3055-3062 (2002))，有趣地注意到在糖尿病動物的皮膚中上皮細胞的基底層具有與正常大鼠相當的DNA合成速率，表明至少在糖尿病誘導2個月后，皮膚中細胞復制事件的異常并不明顯。
[0098]基于這些初期的實驗，
【發明者】表征了該藥物對修復TlD和T2D動物中全層皮膚創傷的作用。閉合速率的評估顯示糖尿病動物的創傷的愈合顯著慢于正常動物的創傷的愈合，并且置于這些載體中的局部NTX將創傷閉合速率恢復至與正常動物相當并常超過正常動物的水平。與正常組群相比，患有糖尿病的動物顯著降低了創傷收縮，但接受局部NTX的TlD和T2D動物與正常受試者相當。接受NTX的糖尿病動物中閉合創傷的結構外觀與正常動物相似，表明增加的創傷修復速率并不伴隨異常的形態學事件。盡管每天一次施用NTX足以增加DB大鼠中皮膚創傷閉合的速率，但每天三次施用更好。
[0099]本文證明的NTX成功用于局部遞送提出了該藥是否具有全身反應的疑問。NTX是一種小的親水性分子，其已被暗示不具有達到透皮遞送的治療劑量所需的理化性質(Wermeling et al., Proc Natl Acad Sci USA, 105:2058-2063 (2008)
;Stinchcomb et al., Journal of Pharm Science, 91:2571-2578 (2002)),但已知其可通過被動擴散迅速進入人和動物的細胞(Cheng et al., American Journal ofPhysiology, 297: R844-R852 (2009))。本文呈現的研究揭示NTX具有局部性而不是全身作用，其中僅在遞送位點處的DNA合成改變。而且，
【發明者】采用了非常小濃度的NTX，其無毒性但對創傷修復高度有效。因此，考慮到施用局部NTX用于臨床治療創傷，這些研究顯示其在生物相容性方面是可行的，且無毒性和全身作用。此外，該阿片拮抗劑的局部性作用應當可最小化順應性問題。
[0100]阿片拮抗劑能夠將糖尿病中記錄的皮膚創傷愈合的延緩速率恢復至正常動物的速率的發現與此前關于TlD大鼠中角膜再上皮形成的報道有一些相似處(parallels)(Zagon et al.,Diabetes, `51:3055-3062(2002);Klocek et al., Journal of OcularPharmacology and Therapeutics, 23:89-102 (2007))。這些相似處包括:i)局部和全身 NTX遞送途徑的有效性，?)對NTX的相似濃度(例如，10_5M)的響應，iii)在糖尿病和正常動物二者中NTX-誘導的創傷閉合速率的增加，iv)每天多次施用NTX以達到最佳愈合速率的必要性，和V) DNA合成作為NTX作用的主要靶點。然而，對于NTX對創傷愈合的影響，應當注意糖尿病和正常動物的皮膚和角膜之間的一些區別。首先，角膜創傷愈合局限于眼球表面上皮并且依賴于再上皮形成。相反，全層皮膚創傷修復與上皮和基質相關，并且收縮在修復中起主要作用。其次在角膜中NTX的載體包括抗生素，而在本研究中未使用抗生素，盡管納入抗生素和/或其它額外的組分在本文所述的發明考慮之內。兩項研究均表明在TlD中阿片肽-阿片受體相互作用增加(由于其與DNA合成和創傷愈合相關)，并且證明阻斷此相互作用可逆轉高血糖環境中延緩的皮膚以及角膜創傷的修復。
[0101]本發明的結果證明阿片受體阻斷可逆轉延緩的創傷愈合(如糖尿病中存在的)至正常水平，表明內源性阿片系統促成了延緩的創傷愈合。在本研究中，糖尿病大鼠的葡萄糖水平不僅與人的血糖水平相比格外地高，而且高血糖癥的持續時間持續了 3個月，突出了糖尿病病癥的強度。數據表明即使面對如此未被控制的糖尿病，使用局部NTX也會恢復創傷愈合。該發現提供了證據:NTX作用一定是極其有效的，并且在具有持續高血糖水平的動物中阿片-受體相互作用可被NTX中斷。
[0102]受損的創傷愈合是TlD和T2D中一種主要的并發癥(Guo et al., Journal DentRes, 89:219-229(2010);Boulton et al.，Lancet, 366:1719-1724(2005);0，Loughlin etal., International Journal of Lower Extremity Wounds，9:90-102 (2010); Usui etal.，Journal of Histochem Cytochem，56:687—696 (2008)) ?本文的研究通過確認阿片妝和阿片受體為糖尿病并發癥中的重要因素，闡明了關于糖尿病并發癥的病因學和發病機制的變更。重要的是應理解NTX是一種以遠遠更高的劑量用于治療成癮性(例如，藥物濫用、煙草、賭博)的 FDA 批準的藥物(Kirchmayer et al.，Addiction，97:1241-1249 (2002) ; Swift, American Journal of Health Syst Pharm，64: S12-S22 (2007))。此外，一項正在進行的I期臨床試驗正在評價眼中局部NTX用于治療糖尿病角膜病變的安全性，并且至今的結果表明NTX沒有毒性。在局部施用中使用具有局部作用而沒有全身作用的小劑量NTX消除了任何潛在的不良事件，即使 是對于正在使用阿片類處理疼痛的患者。
【權利要求】
1.一種在受試者中治療上皮創傷的方法，其包括向所述受試者的受傷上皮區域給藥有效量的阿片拮抗劑。
2.權利要求1的方法，其中所述阿片拮抗劑為納曲酮、納洛酮，或它們的前藥或鹽。
3.權利要求2的方法，其中所述阿片拮抗劑在給藥前與藥學上可接受的載體組合以產生制劑。
4.權利要求3的方法，其中所述載體為液體、半固體或固體。
5.權利要求3的方法，其中所述阿片拮抗劑以至少KT6M的濃度與液體載體組合。
6.權利要求5的方法，其中進一步將與液體載體組合的所述阿片拮抗劑摻入至半固體載體中以用于給藥。
7.權利要求3的方法，其中所述制劑以每天至少一次給藥。
8.權利要求1的方法，其中所述受試者為糖尿病受試者。
9.一種用于治療上皮創傷的組合物，其包含有效量的阿片拮抗劑和藥學上可接受的載體。
10.權利要求9的組合物，其中所述阿片拮抗劑為納曲酮、納洛酮，或它們的前藥或鹽。
11.權利要求9的組合物，其中所述組合物被配制成溶液。
12.權利要求10的組合物，其中所述阿片拮抗劑以至少10_6Μ的濃度存在于所述溶液中。
13.權利要求9的組合物，其中所述組合物被配制成乳膏劑或凝膠劑。
14.權利要求9的組合物，其中所述組合物為貼劑或敷料形式。
15.權利要求9的組合物，其包含至少一種用于治療上皮創傷的其它活性成分。
16.權利要求1的方法，其中阿片生長因子受體(OGFr)存在于與所述上皮創傷相鄰的上皮細胞上。
【文檔編號】A61P17/02GK103826635SQ201280045432
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年7月26日 優先權日:2011年7月28日
【發明者】伊恩.S.扎岡, 帕特里西亞.J.麥克勞格林, 喬瑟夫.W.薩桑尼 申請人:伊恩.S.扎岡, 帕特里西亞.J.麥克勞格林, 喬瑟夫.W.薩桑尼