L-組氨酸及其衍生物的新用途

L-組氨酸及其衍生物的新用途
【專利摘要】本發明公開了L-組氨酸在減少基于釓的造影劑給藥后釓蓄積入靶器官中的用途，從而防止了其毒性作用。本發明由此還公開了L-組氨酸在預防具有腎功能受損的患者中NSF綜合征中的用途。還公開了成套的試劑盒，通過在給予造影劑前口服給予L-組氨酸可以預防因使用所述試劑盒導致的與來源于GDBCA的游離Gd3+相關的毒性。還公開了預防毒性金屬蓄積的方法，其特征在于給予、優選通過口服途徑給予L-組氨酸。優選將L-組氨酸以包含0.2-20g的單一口服劑量給予。
【專利說明】L-組氨酸及其衍生物的新用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及L-組氨酸和組氨酸衍生物在預防應用造影劑后可能發生的基于釓的造影劑毒性和游離釓(Gd3+)在組織中蓄積中的用途。
【背景技術】
[0002]在最近幾十年中臨床診斷因得益于核磁共振成像(MRI)而已經取得了顯著進步。
[0003]靜脈內注射順磁性造影劑以增強來自水質子的信號，由此能夠識別具有不同含水量的組織。
[0004]已經證實用于造影劑的分子在臨床應用中非常安全，但它們仍然存在一定程度的毒性，認為這是在較小百分比患者中觀察到的不良反應的原因(Membership of theWorking Party, Guidelines Safety in magnetic Resonance units:an update, Anaesthesia，2010，65:766-770)。
[0005]已經提出解釋用作MRI造影劑的順磁性釓配合物毒性的機理之一在于所述配合物自身在體內解離和/代謝成金屬和游離配體。
[0006]經證實游離配體和金屬具有一定程度的毒性，認為它們至少高于其相應的配合物20倍以上，游離配體通過作為生理學陽離子(Ca2+、Zn2+)的螯合劑起作用，而金屬通過金屬轉移(transmetallation)過程取代了那些身體組織所需的離子。
[0007]然而，盡管新近形成的配合物通過泌尿系統排泄，但是金屬典型地蓄積在組織中，由此是配合物解離的適合的指示劑。
[0008]在這方面，已經在動物模型(大鼠)中進一步研究了用于MRI的3種釓配合物 MultiHance?、Omniscan?:和 Gadovist? 的體內穩定性(s.Bussi 等人 Exp.Toxicol.Pathol.2007, 58:323-330)，并且評估了在從螯合的化合物中釋放后釓蓄積的模式且在單一或反復(3-周)給藥后給予乙酸釓(游離形式)后觀察到的結果進行比較。盡管已經證實釓從螯合的化合物中釋放不太可能在單次注射(以為診斷目的推薦的那些的劑量10-倍以上用于本研究的)順磁性造影劑后發生，但是在腎中觀察到了因配合的-Gd導致的最高釓含量，而游離釓主要靶向脾、股骨和腦(由GdAc模擬)。
[0009]認為從GDBCA中釋放的這種等分部分的游離釓是具有腎功能不全的患者發生NSF(腎源性系統性纖維化)原因之一ο NSF(參見:“Gadolinium_based contrastagents (GBCAa)和 the NSF risk: Regulatory update”，2011年 I 月 21 日,http: / / www.fda.gov/downloads/AdvisorvCommittees/CommitteesM eetingMaterials/Drugs/PeripheralandCentralNervousSystemDrug sAdvisorvCommi ttee/UCM241072.pdf)首次是在 1997年的15位透析患者中認識到并且在2000年描述。根據歸因于游離Gd3+觸發的免疫級聯的臨床數據(Canavese等人J.N印hrol.，2008，21:324-336)，這種罕見和高度虛弱性疾病的特征在于與膚色相關的皮膚泛發性變厚和硬化形成紅斑丘疹，其融合成紅斑，成為具有“橘黃色皮膚(peau d’orange)外觀的”堅硬的斑塊。有時還描述了結節。可能發生關節攣縮，其中患者進行性地變成依賴于輪椅。患者通常主訴瘙癢、皮膚灼痛和銳痛。四肢遠端是最常見的所涉及區域(其分布從踝關節至大腿中部并且從腕至中-上臂)，然后是軀干。損害部位典型地是對稱的。值得注意的是實際上從不涉及面部和頸部。
[0010]NSF可以發生在所有年齡組中且對地理區域、種族或性別而言無偏好。迄今為止，對NSF沒有公認的療法。已經建議改善腎功能可以減緩該病發展，而在有些病例中，可能逆轉其過程。在2006年，兩個歐洲團隊分別指出了給予用作核磁共振成像(MRI)的造影劑的釓螯合劑與具有腎衰減的患者中發生NSF之間的關聯性。隨后迅速地進行了大量回顧分析并且證實了這種暫時的關聯性(Broome D R, Eur.J.Radiol.，2008, 66:230-234)。在具有正常腎功能的患者中尚未報道NSF。處于接受GBCA后最高NSF發生風險中的患者是那些具有藥物消除受損的患者，包括具有急性腎損傷(AKI)或慢性嚴重腎疾病的患者(具有腎小球濾過率或 GFR〈30mL/min/L 73m2)。
[0011]將NSF的風險降至最低限度的策略包括使用最低可能性的診斷劑量和給予GBCA前的在先風險-利益分析(Altun E.等人Acad.Radiol, 2009，16:897-905)。盡管游離Gd與NSF之間的直接相關性仍然沒有得到明確的確立，但是金屬轉移可以被視為富有希望的研究起點，其目的在于進一步增加MRI CA領域中的安全性。
[0012]二價離子例如鋅和銅是主要的微量元素且是許多酶的必需成分。Zn2+和Cu2+離子廣泛地分布于動物細胞和血液中。由于其對GDBCA中螯合部分的物理-化學親和力，所以這些離子可以促進金屬轉移反應，隨后在血漿中釋放游離Gd3+。
[0013]本發明和L-組氨酸能夠減少游離釓從GBDCA中釋放及其因在靶器官中蓄積的毒性的新用途可以用這種機理解釋。
[0014]L-組氨酸是氨基酸:已經描述了其在人體受試者中的應用，不過，對不同目的而言，結論有爭議:作為厭食藥，即在Schechter PJ和Prakash J.Am.J.Clin.Nutritionl979, 32:1011-1014中所述；或作為降血膽固醇制劑，在Gerber DA等人J.Am.J.Clin.Nutritionl971, 1382-1383)中所述。盡管在引述的參考文獻中無一觀察到治療效果，但是在給予L-組氨酸達4g/天后，在15-天治療過程中監測的血清參數，包括蛋白質結合的鋅(即白蛋白和α 2-巨球蛋白結合的鋅)、血清和尿鋅水平，未顯示明顯改變。目前它作為食品整合物(food integrator)銷售，且由此其應用因長期應用于于人體受試者而被視為安全的。
[0015]盡管已知富含組氨酸的蛋白質在體內螯合二價金屬離子如Zn2+和Cu2+，但是已經證實這種結合依賴于其高度結構化的三維His-rich Zn-指結構域和在細胞中極其良好的隔室化環境。
[0016]因此，如在本申請中在體內得到證實的，所觀察到的L-組氨酸的用途和治療效果應被視為十分令人意外的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1.在如下濃度的檸檬酸鹽和L-組氨酸的存在下作為Gd(DTPA-BMA) (A組)和Gd(DTPA) (B組)與Cu(II)反應中的時間的函數的吸光度值:0.2 (黑色線，令)、0.4(深灰色，_)、0.6(灰色，▲)和0.8(淺灰色，.)mM([GdL]=2.0mM, [Cu] =0.1mM, [cit]=2.0mM, [His]=0.2-0.4-0.6-0.8mM, [HEPES] =0.01M, pH=7.0，25°C，0.15M NaCl)。
[0018]圖2.作為人造血漿中Gd(DTPA-BMA) (GdL)的解配合反應時間的函數的弛豫值(Relaxivity) ([GdL] =1.0mM, [His]=0.5 或 1.0mM, pH=7.5，37 °C，0.15M NaCl)。人造血漿(?)包含 0.5mM His(B)或 ImM His ( ▲)。
[0019]圖3.在過量Gd (DTPA-BMA) (A組)和過量檸檬酸鹽和Gd (DTPA-BMA) (B組)的存在下的 Cu (Hi s) 2 的 UV 光譜。(Cu (Hi s) 2=0.2mM, Gd (DTPA-BMA) =2.0mM) (A).(Cu (Hi s) 2=0.2mΜ, Gd (DTPA-BMA) =2.0mM,檸檬酸鹽=2.0mM) (B).ρΗ=6.5，25 °C，0.15Μ NaCl。

【發明內容】

[0020]已經令人意外地發現，當一起施用時或在⑶BCA給藥前短暫地，L-組氨酸顯著地減少了游離Gd3+從基于釓的造影劑中釋放和游離Gd3+蓄積入患者體內。
[0021]因此，本發明的第一個方面涉及L-組氨酸或其衍生物在預防施用⑶BCA (基于釓的造影劑)后因釓(Gd3+)蓄積在患者靶器官中導致的病癥中的用途。
[0022]所述靶器官優選自骨、皮膚、血液、血漿和肝。⑶BCA優選自釓弗
塞胺(OptiMark?)、釓雙胺(Omniscan?)、二甲基葡胺三胺五乙酸釓(Magnevist?)、禮塞酸和禮塞酸二鈉(Eovist?)、禮布醇(Gadovist?)、禮
磷維塞(Gadofosfeset) (Ablavar?)、禮貝酸二葡甲胺(Mul t iHance?)、禮特醇
(Gadoteridolo) (ProHance?)、禮特酸(Dotarem?)。與L-組氨共同給藥特別優選
線性離子或非離子螯合劑，例如:釓雙胺、釓弗塞胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓貝酸二葡甲胺和釓塞酸或釓塞酸二鈉。
[0023]所述病癥優選皮膚病，例如NSF(腎源性系統性纖維化)，最優選發生在基于腎功能受損的患者中，例如慢性或急性腎疾病，且腎小球濾過率減少，即進行透析的患者。
[0024]可能影響Gd3+誘導的皮膚病或NSF發生的輔助因素可以在血鈣過多、與磷酸鹽螯合劑(例如司維拉姆HCl)的共同療法、酸中毒、與抗高血壓療法的共同療法和鐵療法中發現。
[0025]本發明的另一個方面涉及用于給予GDBCA的成套試劑盒，其包含具有其中活性成分是L-組氨酸或其衍生物的組合物的第一容器和包含GDBCA的容器，所述試劑盒用于預防因施用GDBCA后釓蓄積導致的病癥的方法中。
[0026]包含L-組氨酸的所述組合物優選口服組合物，其用于L-組氨酸的多或單劑量單位，優選包含0.2-20g L-組氨酸或其衍生物用量作為所述的單一單位劑量。
[0027]發明詳述
[0028] 本發明基于優選口服給予的L-組氨酸對給予基于釓的造影劑(⑶BCA)后游離釓的釋放的作用。
[0029]所謂⑶BCA是指所有基于釓的造影劑且一般用于對比增強的磁共振(CE-MR)。釓是鑭系中的順磁性金屬，其產生大磁場，該磁場增強接近造影劑定位的水質子的弛豫率，由此增加信號強度。
[0030]由于游離Gd3+離子在體內具有毒性，所以在GDBCA中。順磁性離子螯合成穩定的惰性低分子量金屬配合物。[0031]大環Gd螯合物例如釓布醇(GadoVist?， Bayer Shering Pharma AG)、禮特醇(ProHaHCC〇，Bracco)和禮特酸葡甲胺(Gadoterate meglumine)(Dotarem?, Guerbet)比線性Gd3+螯合物例如禮弗塞胺(OptiMark?)、禮雙胺(Gd-DTPA-BMA, QmniScan?:)、二甲基葡胺三胺五乙酸釓(Gd-DTPA，Magnevist?,
Bayer Shering Pharma AG)和禮貝酸二葡甲胺( Mu11 iHance?, Bracco SpA)具有更高
的體內穩定性。基于Gd的CA快速地從血管內腔清除并且通過(主要)腎臟排泄基本上未改變地從人體內消除。
[0032]螯合的配合物一般是穩定的，不過，存在不同的熱穩定性常數。對如下GDBCA描述了熱穩定常數的親和力:釓弗塞胺、釓雙胺(GdDTPA-BMA)、釓布醇、Gd-DTPA、釓磷維塞鈉、釓貝酸二葡甲胺(Gd-BOPTA)、釓塞酸(EOB-DTPA)、釓特醇(HP-D03A)和 Gd-DOTA (CaravanP.等人 Inorg.Chem, 2001:40，2170-2176)。
[0033]提出解釋所述⑶BCA毒性的原因的機理之一在于配合物自身在體內解離和/或代謝成游離金屬(Gd3+)和配體，通過一種稱作金屬轉移的過程進行(Morcos S K等人，EurJ.Radiol.,2008，66:175-179)。這些作者推斷NSF(腎源性系統性纖維化)的發生率與
Gd3+-配合物的穩定性相關，實際上給予線性非離子CA Omni scan?比ProHance? (大
環螯合物)更常見。
[0034]盡管至少從理論上金屬轉移可以以與順磁性金屬/螯合配合物的熱穩定性成反比的方式影響GDBCA，但是這種參數無法充分地表`述影響體內金屬轉移過程的因素(Tweedle等人Magn Reson Imagingl991;9:409-415) ?血液和(因更多的原因)活生物體是復雜的系統，其中存在不同濃度和形式的不同離子和抗衡離子(游離、與蛋白質結合或隔室化)影響體內發生的螯合反應的動力學。實際上，釓配合物的動力學穩定性還受血漿中存在的內源性離子、抗衡離子和其他分子影響。已知檸檬酸鹽(即生理上存在于體內的抗衡離子)與金屬轉移反應中釋放的Gd3+離子形成配合物(G.E.Jackson, S.Wynchank, Μ.ffoudenberg, Magn.Reson.Med., 1990, 16, 57-66; L.Sarka, L.Burai, E.Brucher, Chem.Eur.J.，2000, 6，719-724)，且更詳細地如實驗部分中所述，實際上已經證實其參與金屬轉移反應。
[0035]金屬轉移(其中游離配體可以作為交換那些身體組織中的離子的內源性陽離子(Ca2+、Zn2+等)的螯合物起作用)在體內生成游離配體和順磁性金屬。已經證實兩個種類都具有一定程度的急性毒性，在LD5tl方面至少為其相應配合物的20倍以上。然而，盡管新近形成的配合物由泌尿系統排泄，但是Gd3+蓄積在組織中，其中可充分識別的毒性在皮膚中顯而易見且歸因于觸發對Gd3+的免疫應答。
[0036]已經證實骨作為未螯合禮的天然儲庫起作用(Wedeking P.&Tweedle, Nucl.Med.Biol.，1988，15:395-402)，由此是Gd-配合物解離的中-長時間范圍內的適合的指示劑。
[0037]推斷Zn2+主要可能涉及置換大量釓，因為前者在血液中的濃度相對較高(55-125 μ mol/L) (Vander 等人，Invest Radiol2001; 36:115-122)，而甚至豐度較低的種類可能影響親和力且置換反應動力學如所選擇的血漿模型中所示。[0038]能夠與Gd3+競爭的內源性離子是Cu2+、Ca2+和Zn2+。其中，Cu2+以相對低的濃度存在于血液中(1-10 μ mol/L 和[Cu2+]總身體=18 μ mol/L:G.E.Jackson, S.Wynchank, M.ffoudenberg, Magn.Reson.Med.，1990，16，57-66)，而 Ca2+ 具有對有機配體如 DTPA 和DTPA-BMA的相對低的親和力。認為游離釓從GDBCA中釋放是具有腎衰竭的患者中的NSF (腎源性系統性纖維化)的原因之一(Broome，2008)(即通常是腎，主要的⑶BCA排泄器官)。
[0039]給予本發明的組氨酸(其提供L-組氨酸或其衍生物在預防歸因于⑶BCA(基于釓的造影劑)給藥后患者靶器官中釓(Gd3+)蓄積的病癥中的用途)能夠使體內游離釓從GDBCA中的釋放及其在組織中的蓄積減少，特別是減少釋放和蓄積入骨和皮膚，由此減少與其毒性相關的風險。 [0040]鋅和銅是許多酶功能所需的必需的痕量元素。因此，Zn2+和Cu2+離子廣泛分布于動物細胞和血液中。認為減少二價離子例如Zn2+、Cu2+與Gd3+之間的金屬轉移是減少本發明⑶BCA和L-組氨酸給藥后釓在組織中蓄積的基礎。實際上，經實驗證實在0.2 — 0.8mM檸檬酸鹽的存在下組氨酸濃度增加可以在兩種不同體外測試系統中以濃度依賴性模式減少因Cu2+形成的交換配體的量和與Gd螯合部分DTPA和DTPA-BMA的交換比例。
[0041]已知金屬沉積的毒性作用且一般公認:通過在其CA制劑中添加過量的螯合化合
物部分預防這種情況:實際上，除MultiHanee?和Dotarem?外，所有其他造影劑都包含過量的螯合化合物(在Opt iMark?中達28.4mg/ml)。然而，游離Gd3+在配合物排泄前仍然在體內釋放。
[0042]在這方面，本發明涉及⑶BCA給藥后預先給予L-組氨酸或其衍生物或與之共同給藥，目的在于防止Gd3+釋放和在組織內蓄積，該技術方案解決了因施用⑶BCA后順磁性金屬蓄積導致的毒性問題。
[0043]CA優選自離子或非離子大環和線性Gd螯合劑，例如:釓弗塞胺(Opt iMark?)、?L雙胺(Omniscan?)、二甲基葡胺三胺五乙酸禮(Magnevist?)、禮塞酸和禮塞酸二鈉(Eovist?)、釓布醇(Gadovist?)、釓磷維塞(Ablavar?)、釓貝酸二葡甲胺
(MultiHance?)、釓特醇(ProHance?) 、禮特酸(Dotarem?)。特別優選與L-組氨
酸共同給藥的是線性離子或非離子螯合物，例如:釓雙胺、釓弗塞胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓貝酸二葡甲胺和釓塞酸或釓塞酸二鈉。
[0044]更優選在給予CA 前至少 I 小時、更優選 55’ (min)、50，、45，、40，、35，、30，、25，、20’、15’、10’或5min給予L-組氨酸(或其衍生物)。最終，將L-組氨酸與造影劑一起共同給藥。相對于給予造影劑而言施用組氨酸的最佳時間可以通過計算相對藥代動力學參數更精確地測定，例如在所關注劑量范圍內的Cmax(峰值濃度)、Tmax(達到最大濃度的時間)、&/2λζ (半衰期)或AUC。特別地，Tmax應視為用于測定組氨酸給藥后GBDCA給藥的最佳時間。優選對組氨酸衍生物計算該參數，例如緩釋形式或聚組氨酸復合物，其藥代動力學參數可能不同于L-組氨酸，或者是在關注可選的給藥途徑的情況下。在這些情況中，通過可選途徑或可選地組氨酸形式單一給藥后達到L-組氨酸峰值水平(Tmax)所需的時間能夠更好地適合于GBDCA的給藥時間。[0045]通過口服途徑，可以評估以鹽形式(HCl)給予的L-組氨酸在口服給藥后30_45min達到峰值水平(Sitton N G, Ann Rheum Dis, 1988,47:48-52)。
[0046]由于已經報道在人體內口服給予L-組氨酸達4_6g/天、持續幾天既不會提供重要的不良反應，也不會提供最低程度的不適感，所以其以最高為克的劑量應用對本發明而言也是可預計的，優選在接近給予GBDCA前的時間過程中的單一口服給藥中。
[0047]在人體內眾所周知的吸收動力學和高劑量耐受性的口服給藥的可能性代表了在GBDCA誘導的病癥中使用L-組氨酸的預防療法的重要優勢，所誘導的嚴重毒性作用到目前為止僅是偶有報道。實際上，一般而言，這對既不干擾患者全身健康、也不會誘發不適感的預防療法而言極其重要。
[0048]在這方面，應提及，盡管還可以胃腸外給予組氨酸，但是優選的給藥在⑶BCA給藥前通過OS進行，以便不會使患者面對彼此在短時間期限內的兩次注射而不是使用一次造影劑。實際上，這可能增加患者的不適感。
[0049]相反，L-組氨酸口服給藥可以在GBDCA給藥前不早于60min或優選45 — 15min或優選25-40min通過液體溶液進行，所述液體溶液包含10 — 200mg/kg患者的劑量范圍的L-組氨酸或其衍生物、任選地與用于水化療法的液體鹽水一起或任選地將其混入用于水化療法的液體鹽水。
[0050]最常用的水化混合物為與水或水溶液混合的粉末。預混合的溶液也是商購的，通常將其溶于0.5-1L水，以產生包含(以mmol/L計)Na75-90、K20、C165-80和任選地包含檸檬酸鹽5-15和葡萄糖80-120的溶液。可以恰好在添加水之前將組氨酸或其衍生物加入到水化混合物中。
[0051]作為可替代選擇，將組氨酸作為固體組合物即片劑形式與水或水化混合物一起給藥。
[0052]一般認為基于實驗觀察結果(S.Bussi等人，2007)的游離Gd蓄積的靶器官是肝、脾、骨和腦。根據本發明，在給予L-組氨酸后骨(股骨)和皮膚中觀察到了游離Gd3+沉積具有統計學顯著性的減少。這些器官實際上是在組氨酸或其衍生物的存在下Gd3+從GBDCA中的總體釋放減少的代表。特別地，Gd3+蓄積在骨內可以被視為全部現象的代表，其中測量值不受存在于血漿中的Gd3+級分影響，Gd從血漿中極為快速地被清除，這歸因于骨組織中的罕有或沒有血管化。皮膚由此代表了可能在腎功能受損病癥中導致NSF的Gd3+沉積的靶器官。
[0053]在L-組氨酸的存在下GcT從GBDCA中釋放程度較低，這根據體外使用DTPA和DTPA-BMA的血漿模型中的動力學實驗數據已得以證實，正如在實驗部分中更好地詳細描述的。
[0054]因此，本發明涉及L-組氨酸或其衍生物在預防GBDCA給藥后金屬蓄積、特別是Gd3+蓄積中的仍然未公開的用途；因此，本發明涉及L-組氨酸和其衍生物在用于治療性預防釓在靶器官中沉積和由此預防這種蓄積的毒性作用、特別是在骨、脾和皮膚中的毒性作用的制劑中的用途。
[0055]由于公認金屬、特別是游離Gd3+蓄積為在具有腎功能受損的患者中的NSF的可能的原因，所以本發明還提供了用于目的在于預防在具有腎功能受損的患者中因GDBCA給藥后Gd蓄積導致的病癥的方法中的L-組氨酸。[0056]所述病癥優選是皮膚病，例如NSF (腎源性系統性纖維化)，最優選發生在腎功能受損的患者中，例如慢性或急性腎疾病，且腎小球濾過率減少，即在進行透析的患者中。
[0057]可能影響Gd3+誘導的皮膚病發生的輔助因素可以在血鈣過多、與磷酸鹽螯合劑(例如司維拉姆HCl)的共同療法、酸中毒、與抗高血壓療法的共同療法和鐵療法中發現。
[0058]特別地，在大鼠中進行的動物研究已經證實的單一口服L-組氨酸預治療(在給予
Omni Scan?前以4.38mmol/kg的劑量給藥)能夠顯著地降低骨(股骨)和皮膚中的Gd3+水平，正如作為nmol/克新鮮組織所測定的。
[0059]特別地，在Omn is can?紿藥前30min給予L-組氨酸誘導股骨(約減少40% (作
為nmol/g新鮮組織和％ID))和皮膚中Gd3+含量發生統計學顯著性的減少。該數據也通過骨水平的％注射劑量得到證實。從文獻中已知骨和皮膚是這樣的器官，其中游離釓沉積更頻繁地發生(Bussi, 2007; Wedeking, 1988)。
[0060]組氨酸優選是L-組氨酸，其作為一水合和無水形式的二鹽酸鹽或一鹽酸鹽的粉末給藥，優選將其溶于水溶液。本發明還提供了作為聚-組氨酸復合物或任意緩釋或控釋形式的L-組氨酸。控釋形式可以包含US2002/0004072中所述的那些形式。
[0061]當口服給予L-組氨酸時,優選在GBDCA給藥前不早于60min或優選45 — 15min或優選40min-25min以10 — 200mg/kg患者的劑量任選地與用于水化療法的液體鹽水一起或任選地將其混入用于水化療法的液體鹽水給藥。
[0062]盡管因為更方便且通常可充分耐受而優選口服給藥，但是可以通過任意其他途徑即胃腸外給予L-組氨酸。
[0063]根據臨床前模型中的數據`和在人體內的充分建立的安全性，可以以最多達200mg/kg/天給予L-組氨酸。因此,如上述對人體應用所述,單一劑量單位包含0.2-20g用量的L-組氨酸或鹽衍生物。
[0064]包含L-組氨酸或其衍生物的用于預防因⑶BCA給藥導致的金屬(Gd3+)在靶器官中蓄積的組合物包含在本發明的優選實施方案中。特別優選的組合物是液體或固體口服組合物，其中組氨酸或其衍生物以0.2-20g L-組氨酸鹽酸鹽/單位劑量的量與常用稀釋劑(例如纖維素及其衍生物、聚甲基丙烯酸酯類、淀粉及其衍生物、碳酸鈣或磷酸鈣、藻酸鹽和衍生物)、崩解劑(例如交聯羧甲基纖維素鈉)、潤滑劑、賦形劑、穩定劑、矯味劑和一價陽離子鹽整合物一起存在(作為一般性綜述參見:“The handbook of pharmaceuticalexcipients，，第 4版，2003，Pharmaceutical Press,編輯Raimond C.Rowe, Paul J.Sheskey,Paul J.Weller)。
[0065]根據優選的實施方案，本發明還涉及用于GDBCA給藥的成套試劑盒，包含具有其中活性成分是L-組氨酸或其衍生物的組合物的容器和包含GDBCA的容器。
[0066]CA優選選自離子或非離子大環和線性Gd螯合劑，例如:釓弗塞
胺(OptiMark?)、釓雙胺(Omn is can?)、二甲基葡胺三胺五乙酸釓
(Magnevist?)、禮塞酸和禮塞酸二鈉(Eovist?)、禮布醇(Gadovist?)、禮磷
維塞(Gadofosfeset) (Ablavar?)、禮貝酸二葡甲胺(MultiHance?)、禮特醇(ProHance?)、禮特酸(Dotarem?)。特別優選與L-組氨酸一起共同給藥的是線性離
子或非離子螯合物，例如:釓雙胺、釓弗塞胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓貝酸二葡甲胺和釓塞酸或釓塞酸二鈉，且任選地、但優選地存在于預裝注射器中。
[0067]組氨酸或優選L-組氨酸是方便給藥或在給藥前溶解的粉末或片劑形式。包含L-組氨酸的方便使用或在給藥當時制備的液體組合物是目前所公開的應用中可接受的。
[0068]本發明的另一個實施方案涉及:用于預防釓蓄積入患者組織的毒性作用的治療方法，其中所述組織優選自:骨、皮膚、脾和血液；和/或預防可能在GBDCA給藥后在受試者中、優選在具有腎功能受損的受試者中發生的NSF，該方法主要由在GDBCA給藥前不早于60’優選以單一單位口服劑量給予L-組氨酸或其衍生物組成。
[0069]從而，本發明還包含診斷方法，該方法主要由下列步驟組成:優選以單一單位口服劑量給予L-組氨酸或其衍生物，隨后在I小時期限內、甚至更優選在55min、50min、45min、40min、35min、30min、25min、20min 和 15min 內給予 GBDCA。更優選時間范圍包含45 — 15min乃至更優選40 — 20mino GBDCA優選選自離子或非離子大環和線性Gd螯合
劑，例如:禮弗寒胺(OptiMark?)、釓雙胺(Omniscan?)、二甲基葡胺三胺五乙酸釓(Magnevist?)、釓塞酸或釓塞酸二鈉(Eovist?)、釓布醇(Gadovist?)、釓
磷維塞(Gadofosfeset) (Ablavar?)、禮貝酸二葡甲胺(MultiHance?)、禮特醇
(ProHance?)、釓特酸(Dotarem?)。特別優選與L_組氨酸一起共同給藥的是線性離
子或非離子螯合物，例如:釓雙胺、釓弗塞胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓貝酸二葡甲胺和釓塞酸或釓塞酸二鈉。
[0070]單位劑量可以包含L-組氨酸或鹽和衍生物，以包含0.2 — 20g L-組氨酸的劑量
給予組氨酸。
[0071]下列實施本發明的實施例是示例性的且決不限定本發明的范圍。
具體實施方案
[0072]實驗部分
[0073]實施例1.血漿中的L-組氨酸水平的測定
[0074]校準曲線和質量對照樣品的制備
[0075]將精確稱量的L-組氨酸二鹽酸鹽粉末的等分試樣精確稱入5和IOmL容量瓶。用MilliQ-水溶解該粉末。制備標準溶液，得到CAL樣品和CQ樣品。標準儲備溶液范圍在
3.46 - 343μ g/mL。將全部標準溶液貯存在黑暗中+4°C下:在這些條件下，將它們視為穩定達I個月。
[0076]通過使用3.46,34.3,68.6、173和343 μ g/mL濃度的標準溶液制備CAL樣品并且使用14.3、67.1、143和268 μ g/mL濃度的標準溶液制備QC樣品。
[0077]通過混合10 μ L組氨酸標準溶液與90 μ L空白大鼠血漿制備CAL和QC樣品。
[0078]向這些樣品中加入20 μ L三氯乙酸(16%w/v)，以沉淀血漿蛋白。將試管渦旋幾秒鐘并且在室溫以2000g離心IOmin ;向90 μ L澄清的上清液中加入45 μ L碳酸鈉浸潰溶液(200mM)和90 μ L衍生溶液(4mg/mL，丹磺酰氯)。將試管渦旋幾秒鐘并且在60°C在攪拌下溫育30分鐘。加入5微升鹽酸甲胺,冷卻15分鐘后,將10微升樣品注入HPLC儀器。
[0079]通過將10 μ L Mill1-Q水加入到90 μ L未稀釋血漿或90 μ L適當地用空白血漿稀釋的血漿(如果樣品體積不足)制備測試血漿樣品(S)。向這些樣品中加入20 μ L三氟乙酸(16%w/v)以沉淀血漿蛋白。將試管渦旋幾秒鐘并且在室溫以2000g離心IOmin ;向90 μ L澄清的上清液中加入45 μ L碳酸鈉浸潰溶液(200mM)和90 μ L衍生溶液(4mg/mL，丹磺酰氯)。將試管渦旋幾秒鐘并且在60°C在攪拌下溫育30分鐘。加入5微升鹽酸甲胺，冷卻15分鐘后，將10微升樣品注入HPLC儀器。將在本研究過程中采集的全部血漿樣品貯存在-20°C至分析為止。
[0080]HPLC分析結果顯示能夠使用加權直線回歸制備3.46 — 343 μ g/mL范圍內的組氨酸校準曲線。校準曲線的優度和色譜系統的性能符合確定的可接受性標準。
[0081]組氨酸CAL標準品的返回計算濃度(CV%)的精確度(precision)在10.4 μ g/mL為
1.19%,在 41.3 μ g/mL 為 1.25%,在 75.6 μ g/mL 為 2.40%,在 180 μ g/mL 為 2.81%,在 350 μ g/mL 為 2.29%ο
[0082]組氨酸CAL標準品的返回計算濃度(ACC%)的準確度(accuracy)在10.4 μ g/mL為-L 52%,在 41.3 μ g/mL 為-3.25%,在 75.6 μ g/mL 為 0.34%,在 180 μ g/mL 為-L 57%,在350 μ g/mL 為-3.20%。
[0083]相關系數值為0.9993。
[0084]CAL和QC樣品中的組氨酸含量是內源性組氨酸(空白血漿采集物中的濃度)和添加的組氨酸(校準標準品)的結果。
[0085]組氨酸QC的返回計算濃度的精確度在全部樣品中為85% - 115%并且認為是可接受的。
[0086]組氨酸QC的返回計算濃度的準確度對全部樣品而言均〈15%。
[0087]測試樣品的精確度始終是可接受的。
[0088]實施例2.組氨酸給藥實驗設計和藥代動力學研究
[0089]動物
[0090]-種類和品系:CD(SD) IGS BR大鼠
[0091]-動物性別:雄性
[0092]-治療時的體重和年齡:306_376g(10-14周齡)
[0093]-供應商:CharlesRiver Laboratories, Calco (LC),意大利
[0094]根據實驗動物的國家和國際法律(L.D.116/92;C.D.EEC86/609;C.R.2007/526/EC)進行涉及動物的全部操作。已知無經驗證的非動物供選方案滿足本研究的目的。
[0095]大鼠用于測定給予3種不同組氨酸劑量后的藥代動力學參數(100、500和1000mg/kg,每組3只動物)。
[0096]3只動物用于校準曲線所用的空白血漿樣品采集。
[0097]統計學分析
[0098]通過非參數方法、使用計算機程序WIN-N0NLIN4.0.1分析作為注射后時間C (t)函數的組氨酸血漿濃度。就測試濃度而言，使用來自每個時間點3只動物的平均血漿濃度進行非隔室分析(除所示的以外)。就Cmax (峰值血衆濃度)和相應的tmax(以Cmax存在的藥物在血漿中的時間)而言，報道了測定值。通過對在分布圖末期中目視評價的那些數據點進行對數線性回歸評估末期消除速率常數(λ Z)。至少3種濃度用于評估λ Ζ。將末端消除半衰期(tZ λ Ζ，藥物衰減至其原始血楽;值一半所需的時間)計算為1^/2 λ Z=ln2/λ Z0使用對數梯形方法根據測定的數據計算血漿濃度-時間曲線下至最終測定的血漿濃度的面積(AUC (O — t))。通過AUC (O--) =AUC (O — t) +ct/ λ ζ評估從O —無窮大的血漿濃度-時間曲線下的總面積(AUC(0 —⑴))，其中ct是最終定量的時間點處的預測濃度。AUC定義了藥物接觸(暴露)程度。
[0099]組氨酸在大鼠血漿中的基礎值為4.60 一 8.39 μ g/mL。
[0100]分別在100、500、1000mg/kg 口服給藥后 30min、lh 和 30min(tmax)得到 9.0,20.9
和36.0 μ g/mL的Cmax值。與末端消除期t λ ζ相關的半衰期值對在3個不同劑量治療的動物而言分別為51、47和13分鐘(參見表Α)。這些值啟示對最高劑量而言從血漿中的消除稍快。
[0101]AUC(0 — OO )值分別為0.55、0.63和0.39h*mg/mL。這些值相似，表示在不同劑量下的全身接觸類似。此外，它們在單一口服給予100mg/kg組氨酸后在健康志愿者中測定了這些值的 AUC(0 — 00 )值范圍(0.477h*mg/mL) (Sitton N G, Ann RheumDis, 1988，47:48-52)。
[0102]對3種劑量而言，總血漿清除值分別為180、790和2562mL/h/kg。清除值隨劑量的增加而增加。
[0103]表A:藥代動力學值
[0104]
【權利要求】
1.L-組氨酸或其衍生物在預防與施用GDBCA (基于釓的造影劑)后釓(Gd3+)在患者靶器官內蓄積相關的病癥中的用途。
2.權利要求1的用途，其中所述L-組氨酸衍生物選自:L-組氨酸二鹽酸鹽、L-組氨酸一鹽酸鹽一水合物。
3.權利要求1-2任一項的用途，其中所述靶器官選自:骨、皮膚、血液、血漿和肝。
4.權利要求1-2任一項的用途，其中所述GDBCA是離子或非離子大環或線性Gd螯合劑，其選自:釓弗塞胺、釓雙胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓塞酸或釓塞酸二鈉、釓布醇、釓磷維塞(Gadofosfeset)、禮貝酸二葡甲胺、禮特醇(Gadoteridolo)、禮特酸。
5.權利要求4的用途，其中所述⑶BCA選自:釓雙胺、釓弗塞胺、二甲基葡胺三胺五乙酸釓、釓貝酸二葡甲胺和釓塞酸或釓塞酸二鈉。
6.權利要求1-5任一項的用途,其中所述病癥是皮膚病。
7.權利要求1-5任一項的用途，其中所述病癥是NSF(腎源性系統性纖維化)。
8.權利要求1-7任一項的用途，其中在所述患者中，腎功能受損。
9.組合物，包含L-組氨酸或其衍生物，其用于預防與GDBCA(基于釓的造影劑)給藥后釓(Gd3+)在患者靶器官內蓄積相關的病癥的方法中。
10.權利要求9的組合物，其中劑量單位包含0.2-20g/L-組氨酸。
11.用于施用⑶BCA的成套試劑盒，包含具有其中活性成分是L-組氨酸或其衍生物的組合物的第一容器和包含GDB`CA的容器，所述試劑盒用于預防因施用GDBCA后釓蓄積導致的病癥的方法中。
12.權利要求11的成套試劑盒，其中所述GDBCA如權利要求4或5任一項中所定義的進行選擇。
13.權利要求11-12任一項的成套試劑盒，其中⑶BCA包含在預裝注射器中。
14.權利要求11-13任一項的成套試劑盒，其中所述組合物是包含多個或單一劑量單位的L-組氨酸的口服組合物。
15.權利要求11-14任一項的成套試劑盒，其中所述單一單位劑量包含0.2-20g L-組氨酸或其衍生物。
16.L-組氨酸或其衍生物，其作為粉末、固體或液體組合物用于MRI成像方法中，所述MRI成像方法中將基于釓的造影劑(⑶BCA)給予患者。
17.權利要求16的L-組氨酸，其中基于釓的造影劑如權利要求4或5任一項中所定義的進行選擇。
【文檔編號】A61P13/12GK103717220SQ201280038043
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2012年7月24日 優先權日:2011年8月2日
【發明者】B·若爾特, E·布呂歇爾, F·尤吉里, A·梅奧希, S·比西 申請人:伯拉考成像股份公司