一種膠陀螺二氯甲烷提取物、提取方法及用途

一種膠陀螺二氯甲烷提取物、提取方法及用途
【專利摘要】本發明提供了一種膠陀螺二氯甲烷提取物、提取方法及用途。本發明的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的：1）將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及2）將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。本發明還提供了一種膠陀螺的提取方法以及所述的膠陀螺提取物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途。本發明的膠陀螺提取物具有更優秀的治療銀屑病的效果，解決了現有膠陀螺提取物治療銀屑病療效不確切的問題，具有更好的成為臨床用藥的前景。
【專利說明】一種膠陀螺二氯甲烷提取物、提取方法及用途
【技術領域】
[0001]本發明屬于制藥領域，具體而言，涉及一種膠陀螺提取物及其用途和膠陀螺的提取方法。
【背景技術】
[0002]銀屑病(Psoriasis)，又稱牛皮癬，是一種常見的慢性皮膚病，其特征是出現大小不等的丘疹、紅斑，表面覆蓋著銀白色鱗屑，邊界清楚，好發于頭皮、四肢伸側及背部。男性多于女性。春冬季節容易復發或加重，而夏秋季多緩解。
[0003]銀屑病發病原因比較復雜，病因尚未明確。近年來多數學者認為，與遺傳、感染、代謝障礙、免疫功能障礙、內分泌失調有關。現時已變得愈來愈普遍，特別是已發展的城市。銀屑病并不是一種傳染病，但因為銀屑病患者的皮膚問題，往往給患者帶來極大的身心痛苦和經濟負擔。[0004]西醫治療銀屑病主要是消除癥狀，避免進一步惡化，無法根治。副作用較大。因銀屑病的病理變化是表皮細胞增殖，所以以往都注重使用能抑制細胞增殖的抗癌藥物，50年代起用白血寧，稍后用氨甲蝶呤(METH0TREX0TE)，70年代起用乙亞胺、乙雙嗎啉等，但這些藥物副作用大，且停藥后容易復發，再發時病情往往較重，治療也較頑固，如白血寧容易引起白細胞下降，甚至粒性白細胞缺乏，也可引起肝硬化及肝癌。氨甲蝶呤對肝臟的毒性更大；因使用乙亞胺和乙雙嗎啉，近年來全國各地區己有數十例導致白血病的報告。而中醫傳統療法治療銀屑病由于治療效果不能量化，也不是很理想。
[0005]中國專利文獻CN03128560.0和CN01118726.3中記載了一種膠陀螺或其菌絲體的提取物用于治療銀屑病，該藥有一定療效，目前并未生產和上市，需要進行進一步的研究。
[0006]膠陀螺為民間習用藥材，當地居民有食用的習慣，有清熱解毒，活血化瘀，抗炎止癢，鎮靜安神的功效，用于牛皮癬、白癜風、神經性皮炎等病癥。膠陀螺未被列入《中國藥典》，中醫文獻古籍也無記載，因此，是一個有待充分開發和利用的藥用資源。
[0007]雖然中國專利文獻CN03128560.0 (“膠陀螺或其菌絲體的藥物應用”)中報道過膠陀螺用于治療銀屑病的用途，但是在該文獻中所公開的方法為95%乙醇回流提取，膠陀螺95%乙醇提取物療效還不夠好，并且療效不確切，目前還未被用于臨床治療銀屑病。因此目前還需要開發療效更好的提取物，為患者提供更好的更確切治療效果。而現有技術中除了膠陀螺95%乙醇提取物以外，目前還沒有膠陀螺的其它提取物及提取方法的公開文獻報道。

【發明內容】

[0008]為解決上述現有技術中存在的問題，本發明提供了一種膠陀螺提取物及其用途、膠陀螺的提取方法。
[0009]具體而言，本發明提供:
[0010](I) 一種膠陀螺提取物，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的:[0011]I)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及
[0012]2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物；
[0013]其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取；
[0014]其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。
[0015](2)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，所述的乙醇水溶液為60-95% (v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0016](3)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (2-10);更優選為1:5。
[0017](4)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。
[0018]( 5 )根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。
[0019](6)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位:g:ml:ml)為1: (1-3): (1-3);更優選為1:1:1。
[0020](7)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
[0021](8)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為 1: (1-3);更優選為 1:1。
[0022](9)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。
[0023](10)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。
[0024](11)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。
[0025]( 12)根據(I)所述的膠陀螺提取物，其中，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的:將膠陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
[0026](13) 一種膠陀螺的提取方法，其包括:
[0027]I)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及
[0028]2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到膠陀螺提取物；[0029]其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取；
[0030]其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。
[0031](14)根據(13)所述的方法，其中，所述的乙醇水溶液為60-95% (v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0032](15)根據(13)所述的方法，其中，在步驟I)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (2-10);更優選為1:5。
[0033](16)根據(13)所述的方法，其中，在步驟I)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。[0034](17)根據(13)所述的方法，其中，在步驟I)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。
[0035](18)根據(13)所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位:g:ml:ml)為 1: (1-3): (1-3);更優選為 1:1:1。
[0036](19)根據(13)所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
[0037](20)根據(13)所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (1-3);更優選為1:1。
[0038](21)根據(13)所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。
[0039](22)根據(13)所述的方法，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。
[0040](23)根據(13)所述的方法，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。
[0041](24)根據(13)所述的方法，其中，所述的方法包括:將膠陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
[0042](25)根據(I) - (12)中任意一項所述的膠陀螺提取物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途。
[0043]本發明的膠陀螺提取物與現有技術相比具有以下優點和積極效果:
[0044]本發明解決了現有膠陀螺提取物治療銀屑病療效不確切的問題，提供了一種新的膠陀螺提取物及膠陀螺提取方法，本發明的新的膠陀螺提取物具有更優秀的治療銀屑病的效果，具有更好的成為臨床用藥的前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0045]圖1為正常對照組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；[0046]圖2為陽性藥組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0047]圖3為17-B大劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0048]圖4為17-B小劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0049]圖5為17-C大劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0050]圖6為17-C小劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0051]圖7為17-E大劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0052]圖8為17-E小劑量組對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響的病理結果圖；
[0053]圖9為陽性對照藥對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0054]圖10為17-B大劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0055]圖11為17-B小劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0056]圖12為17-C大劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0057]圖13為17-C小劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0058]圖14為17-E大劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0059]圖15為17-E小劑量組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0060]圖16為模型組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖；
[0061]圖17為正常對照組對小鼠陰道有絲分裂指數的影響的病理結果圖。
【具體實施方式】
[0062]以下通過【具體實施方式】的描述并參照附圖對本發明作進一步說明，但這并非是對本發明的限制，本領域技術人員根據本發明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發明的基本思想，均在本發明的范圍之內。
[0063]膠陀螺一般為膠陀螺科真菌膠陀螺Bulgaria inquinans (Pers.) Fr.的干燥子實體，夏秋季節采收，烘干，原產地長白山林區，常見當地居民連續多次或一次過量食用膠陀螺后，經陽光曝曬，顏面等身體暴露部位出現紅腫，尤以口唇為重。故又稱膠陀螺為“豬嘴蘑”或“拱嘴蘑”。本發明中針對膠陀螺所進行的提取包括對膠陀螺或其菌絲體進行的提取。
[0064]本發明人在現有技術的膠陀螺95%乙醇提取物的基礎上，通過大量的實驗篩選研究，例如采用了多種溶劑進行提取或萃取，最終發現了新的膠陀螺提取物及提取方法，本發明人還通過藥效學試驗，研究膠陀螺提取物的療效。其中，藥效學試驗使用動物模型進行。
[0065]本發明的目的在于提供一種新的膠陀螺提取物及其用途、膠陀螺的提取方法。
[0066]具體而言，本發明首先提供了一種膠陀螺提取物，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的:
[0067]1)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及
[0068]2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物；
[0069]其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取；
[0070]其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。[0071 ] 優選的是，在步驟1)中，所述的膠陀螺在進行提取前是經過粉碎的，粉碎后的粒徑范圍可根據實際情況進行確定，例如優選為本領域常用的適宜提取的粒徑。
[0072]優選的是，所述的乙醇水溶液為60-95% (v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0073]優選的是，在步驟1)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1:(2-10);更優選為1:5。
[0074]優選的是，在步驟I)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。回流提取、冷浸提取、熱浸提取的溫度、次數和時間等可根據實際情況進行確定。
[0075]優選的是，在步驟I)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。所述的提取的時間優選為1-2小時/每次。
[0076]優選的是，在步驟1)中，濃縮提取液至相對密度為1-2 (更優選為1.3)的稠膏，再進行干燥。
[0077]優選的是，在步驟2)中，所述的乙醇提取物在進行萃取或提取前是經過粉碎的，粉碎后的粒徑范圍可根據實際情況進行確定，例如優選為本領域常用的適宜萃取或提取的粒徑。
[0078]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位(BP,乙醇提取物的重量(g):水的體積(ml):每次萃取所用的二氯甲烷的體積(ml)的比例)為I: (1-3): (1-3);更優選為 1:1:1。
[0079]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
[0080]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (1-3);更優選為1:1。
[0081]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。回流提取的溫度、次數和時間等可根據實際情況進行確定。
[0082]優選的是，在步驟1)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。減壓濃縮的溫度、壓力和時間可根據實際情況進行確定。
[0083]優選的是，在步驟1)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。冷凍干燥的溫度和時間、減壓干燥的溫度、壓力和時間可根據實際情況進行確定。
[0084]優選的是，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的:將膠陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
[0085]本發明第二方面提供了一種膠陀螺的提取方法，其包括:
[0086]1)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及
[0087]2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到膠陀螺提取物；
[0088]其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取；
[0089]其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。
[0090]優選的是，在步驟I)中，所述的膠陀螺在進行提取前是經過粉碎的，粉碎后的粒徑范圍可根據實際情況進行確定，例如優選為本領域常用的適宜提取的粒徑。
[0091]優選的是，所述的乙醇水溶液為60-95% (v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0092]優選的是，在步驟I)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1:(2-10);更優選為1:5。[0093]優選的是，在步驟I)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。回流提取、冷浸提取、熱浸提取的溫度、次數和時間等可根據實際情況進行確定。
[0094]優選的是，在步驟I)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。所述的提取的時間優選為1-2小時/每次。
[0095]優選的是，在步驟I)中，濃縮提取液至相對密度為1-2 (更優選為1.3)的稠膏，再進行干燥。
[0096]優選的是，在步驟2)中，所述的乙醇提取物在進行萃取或提取前是經過粉碎的，粉碎后的粒徑范圍可根據實際情況進行確定，例如優選為本領域常用的適宜萃取或提取的粒徑。
[0097]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位為I: (1-3): (1-3);更優選為 1:1:1。
[0098]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
[0099]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (1-3);更優選為1:1。
[0100]優選的是，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。回流提取的溫度、次數和時間等可根據實際情況進行確定。
[0101]優選的是，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。減壓濃縮的溫度、壓力和時間可根據實際情況進行確定。
[0102]優選的是，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。冷凍干燥的溫度和時間、減壓干燥的溫度、壓力和時間可根據實際情況進行確定。
[0103]優選的是，本發明的方法包括:將膠陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
[0104]本發明第三方面提供了上述的膠陀螺提取物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途。
[0105]本發明的一種具體實施方案為:
[0106]一種膠陀螺提取物，該提取物由以下方法制得:膠陀螺藥材用乙醇提取得到乙醇提取物，乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷萃取，合并有機萃取液濃縮，干燥，即得。
[0107]優選的是，所述乙醇提取可以為回流提取、冷浸提取、熱浸提取等，優選回流提取。
[0108]優選的是，所述干燥為冷凍干燥。
[0109]優選的是，所述濃縮為減壓濃縮。
[0110]優選的是，所述的乙醇為60-95%的乙醇。更優選為95%的乙醇。
[0111]優選的是，所述的萃取的次數為1-3次。更優選為3次。
[0112]優選的是，該提取物由以下方法制得:膠陀螺用95%乙醇回流提取；稱取膠陀螺乙醇提取物，與水混合，用二氯甲烷萃取3次，合并有機萃取液濃縮，冷凍干燥，得到二氯甲烷層萃取物。
[0113]本發明的另一種具體實施方案為:
[0114]一種膠陀螺的提取方法，其特征在于，膠陀螺藥材用乙醇回流提取得到乙醇提取物，乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷萃取，合并有機萃取液濃縮，干燥，即得。
[0115]優選的，所述干燥為冷凍干燥。
[0116]優選的，所述濃縮為減壓濃縮。
[0117]優選的，所述的乙醇為60-95%乙醇。優選95%乙醇。
[0118]優選的，所述的萃取的次數為1-3次。優選3次。
[0119]優選的，膠陀螺用95%乙醇回流提取；稱取膠陀螺乙醇提取物，與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，合并有機萃取液濃縮，冷凍干燥，得到二氯甲烷層萃取物。
[0120]以下通過例子的方式進一步解釋或說明本
【發明內容】
，但這些實施例不應被理解為對本發明保護范圍的限制。
[0121]實施例1
[0122]稱取膠陀螺10kg，用50L的95%乙醇回流三次，回流時間分別為2.0,1.5,1.5小時，之后將所得到的提取液濃縮至相對密度為1.3的稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺的乙醇提取物，重量500g。
[0123]稱取膠陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸餾水中，以500ml 二氯甲烷萃取3次，合并有機萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到二氯甲烷萃取物(褐色膏狀):27.lg。
[0124]實施例2
[0125]稱取膠陀螺10kg，用50L的95%乙醇回流三次，回流時間分別為2.0,1.5,1.5小時，之后將所得到的提取液濃縮至相對密度為1.3的稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺的乙醇提取物，重量500g。
[0126]稱取膠陀螺的乙醇提取物500g，以500ml 二氯甲烷熱回流提取3次，合并有機液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到二氯甲烷提取物(褐色膏狀):26.7g。
[0127]實施例3
[0128] 稱取膠陀螺20kg，用60L的70%乙醇回流三次，回流時間分別為1.5,1.5,1.5小時，之后將所得到的提取液濃縮至相對密度為I的稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺的乙醇提取物，重量800g。[0129]稱取膠陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸餾水中，以1000ml 二氯甲烷萃取I次，對有機萃取液減壓濃縮，冷凍干燥，得到二氯甲烷萃取物(褐色膏狀):22.3g。
[0130]實施例4
[0131]稱取膠陀螺20kg，用40L的60%乙醇熱浸提取I次，時間為2小時，之后將所得到的提取液濃縮至相對密度為2的稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺的乙醇提取物，重量700g。
[0132]稱取膠陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸餾水中，以600ml 二氯甲烷萃取2次，合并有機萃取液，常壓濃縮，減壓干燥，得到二氯甲烷萃取物(褐色膏狀):30.5g。
[0133]實施例5
[0134]稱取膠陀螺20kg，用200L的80%乙醇冷浸提取3次，時間分別為1.5、1.5、I小時，之后將所得到的提取液濃縮至相對密度為1.5的稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺的乙醇提取物，重量1200g。
[0135]稱取膠陀螺乙醇提取物500g，溶于500ml蒸餾水中，以500ml 二氯甲烷萃取3次，合并有機萃取液，減壓濃縮并干燥，得到二氯甲烷萃取物(褐色膏狀):29.Sg。
[0136]試驗例1:膠陀螺不同提取物對銀屑病小鼠藥效學試驗
[0137]以下將對膠陀螺五個不同提取物(正己烷、二氯甲烷、正丁醇、水層、95%乙醇粗提物，分別稱為17-A、17-B、17-C、17-D和17-E)抗銀屑病藥效學作用進行篩選，從而為上述提取物臨床治療銀屑病提供更充分的藥理學依據。
[0138]1.材料與方法
[0139]1.1實驗動物
[0140]取體重18_22g健康昆明種小鼠130只(北京大學醫學部實驗動物科學部提供)，雌雄兼用，用于鼠尾鱗片模型實驗；
[0141]取體重18_22g健康昆明種小鼠140只(北京大學醫學部實驗動物科學部提供)，雌性，用于陰道上皮模型實驗。
[0142]1.2 藥物
[0143]己烯雌酚注射液，天津金耀氨基酸有限公司生產，批號0805261。
[0144]阿維A膠囊，重慶華邦制藥股份有限公司生產，批號0902030。
[0145]秋水仙堿片，昆明制藥集團股份有限公司生產，090818-01。
[0146]膠陀螺的正己烷、二氯甲烷、正丁醇、水層、95%乙醇粗提物由方正醫藥研究院有限公司提供。提取方法如下:膠陀螺40kg，5倍量95%乙醇回流三次，回流時間分別為2.0、
1.5、1.5小時，回收乙醇，濃縮提取液至相對密度1.3稠膏，減壓干燥，即得膠陀螺95%乙醇提取物，重量2000g。
[0147]稱取500g膠陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸餾水中，以500ml正己烷萃取三次，合并有機萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，即得膠陀螺的正己烷提取物，重量59.2g，為柏油狀物質；
[0148]稱取500g膠陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸餾水中，以500ml 二氯甲烷萃取三次，合并有機萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，即得膠陀螺的二氯甲烷提取物，重量27.lg，為褐色膏狀物質；
[0149]稱取500g膠陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸餾水中，以500ml水飽和正丁醇
萃取三次，合并有機萃取液濃縮，減壓濃縮，冷凍干燥，即得膠陀螺的正丁醇提取物，重量53.6g,為深褐色硬膏狀物質；
[0150]將上述經二氯甲烷萃取后剩余的水相減壓濃縮，冷凍干燥，即得膠陀螺的水層提取物，重量134.lg，為褐色硬膏狀物質；
[0151]1.3實驗方法
[0152]可參照(例如)以下文獻中所公開的試驗方法進行:“王學軍，陶以成，劉長發.丹槐銀屑濃縮丸對小鼠銀屑病模型的病理實驗研究，中國中醫急癥，2010，19(1): 104-05”。
[0153]1.3.1膠陀螺不同提取物對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響:
[0154]將小鼠隨機分成正常對照組、溶劑組、陽性對照藥阿維A組和17-A、17-B、17_C、17-D和17-E各大、小劑量組共13組。各組小鼠每天分別灌胃給予生理鹽水、阿維A或不同劑量的膠陀螺提取物，給藥容積0.2ml/10g體重，每天I次，連續21天。于第22天脫椎處死小鼠，在距尾根2cm處取鼠尾表皮，以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，在光鏡下觀察每個小鼠的尾部鱗片。凡鱗片表皮有連續成行的顆粒細胞者，稱為有顆粒層形成的鱗片，顆粒細胞為表皮中扁平或菱形細胞所組成，胞漿內充滿粗大深嗜堿性、HE染色呈深蘭色透明的角質顆粒。計數鼠尾表皮100個鱗片中有顆粒層形成數。
[0155]1.3.2膠陀螺不同提取物對雌激素期小鼠陰道上皮細胞有絲分裂的影響:
[0156]將小鼠隨機分成正常對照組、溶劑對照組、模型組、陽性對照藥阿維A組和17-A、17-BU7-CU7-D和17-E各大、小劑量組共14組。除正常對照組及溶劑對照組外，其余各組小鼠腹腔注射己烯雌酚 (0.2mg/只)，每天I次，連續3天，使小鼠處于動情期；3天后隔天腹腔注射己烯雌酚(0.2mg/只)，至實驗第12天為止。正常對照組小鼠腹腔注射等容量生理鹽水，溶劑對照組腹腔注射等容量1%CMC (羧甲基纖維素)。各組小鼠從第4天起開始灌胃分別給予阿維A或不同劑量的膠陀螺提取物，給藥容積0.2ml/10g體重，每天I次，連續8天。第12天上午8-9時所有小鼠均ig秋水仙堿4mg/kg,6小時后脫椎處死所有小鼠,取小鼠陰道組織用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，在光鏡下觀察每100個小鼠陰道基底細胞的有絲分裂數。分組比較，進行統計學處理。
[0157]1.3.3劑量計算及配藥方案:(下文中的“生藥”指膠陀螺)
[0158](I) 17-A，正己烷(提取物與生藥比1:162)[小劑量:15mg/kg，大劑量:75mg/kg]。
[0159]人用劑量:5g生藥,一日3次,計每日15g生藥。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0160]小鼠劑量換算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0161]按生藥劑量換算為提取物量:2.275g/162=0.014g/kg,5X0.014g/kg=0.07g/kg。
[0162]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.075 X 5=0.38%。
[0163](2) 17-B，二氯甲烷(提取物與生藥比1:354)[小劑量:6.6mg/kg，大劑量:33mg/kg]。
[0164]人用劑量:5g生藥,一日3次,計每日15g生藥。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0165]小鼠劑量換算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0166]按生藥劑量換算為提取物量:2.275g/345=6.6mg/kg, 5X6.6mg/kg=33mg/kg。
[0167]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.033 X 5=0.17%。
[0168](3) 17-C，正丁醇(提取物與生藥比1:179)[小劑量:13mg/kg，大劑量:65mg/kg]。
[0169]人用劑量:5g生藥,一日3次,計每日15g生藥。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0170]小鼠劑量換算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。[0171]按生藥劑量換算為提取物量:2.275g/179=13mg/kg，5X13mg/kg=63mg/kg。
[0172]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.065 X 5=0.33%。
[0173](4) 17-D，水層(提取物與生藥比1:72)[小劑量:32mg/kg，大劑量:160mg/kg]。
[0174]人用劑量:5g生藥,一日3次,計每日15g生藥。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0175]小鼠劑量換算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0176]按生藥劑量換算為提取物量:2.275g/72=32mg/kg, 5 X 32mg/kg=160mg/kg。
[0177]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.160 X 5=0.80%。
[0178](5) 17-E, 95%乙醇粗提物(提取物與生藥比1:19.2)[小劑量:0.12g/kg，大劑量:
0.6g/kg] 。
[0179]人用劑量:5g生藥,一日3次,計每日15g生藥。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0180]小鼠劑量換算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0181]按生藥劑量換算為提取物量'2.275g/19.2=0.12g/kg,5X0.12g/kg=0.6g/kg。
[0182]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.6 X 5=3%。
[0183](6)阿維A:人用劑量50mg/天/人，即0.83mg/kg,換算為小鼠劑量,7.7mg/kg,定為 10mg/kg。計算需要量:10mg/kg + 5=2mg/ 只 X 10 只=20mg/ 天 X 30 天=600mg,規格:10mg*30 粒。
[0184]配藥:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.07 X 5=0.35%。
[0185]2.結果
[0186]2.1膠陀螺不同提取物對小鼠尾部鱗片表皮角化的影響
[0187]2.1.1膠陀螺不同提取物對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層細胞增生作用的影響
[0188]檢驗指標:主要觀察鼠尾上皮在應用膠陀螺不同提取物后組織病理學的變化，以藥物能促進鼠有連續成行的顆粒層細胞形成作為療效指標。
[0189]表1膠陀螺不同提取物對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層細胞增生作用的影響(Mean土SD)
[0190]
【權利要求】
1.一種膠陀螺提取物，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的: . 1)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及 . 2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物； 其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取； 其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。
2.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，所述的乙醇水溶液為60-95%(v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
3.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (2-10);更優選為1:5。
4.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。
5.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。
6.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位:g:ml:ml)為1: (1-3): (1-3);更優選為1:1:1。
7.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
8.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為 1: (1-3);更優選為 1:1。
9.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。
10.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。
11.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。
12.根據權利要求1所述的膠陀螺提取物，其中，所述的膠陀螺提取物是通過以下方法制備得到的:將膠陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
13.一種膠陀螺的提取方法，其包括: .1)將膠陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，濃縮提取液并干燥，從而得到乙醇提取物；以及 . 2)將所述的乙醇提取物進行萃取或回流提取，濃縮所得有機萃取液或提取液并干燥，從而得到膠陀螺提取物； 其中，在步驟2)中，所述的萃取包括:先將所述的乙醇提取物與水混合，再用二氯甲烷進行萃取； 其中，在步驟2)中，所述的回流提取包括:將所述的乙醇提取物用二氯甲烷進行回流提取。
14.根據權利要求13所述的方法，其中，所述的乙醇水溶液為60-95%(v/v)的乙醇水溶液；優選為95% (v/v)的乙醇水溶液。
15.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟I)中，所述的膠陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (2-10);更優選為1:5。
16.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟1)中，所述的提取選自回流提取、冷浸提取、熱浸提取中的一種；優選為回流提取。
17.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟1)中，所述提取為回流提取，所述的回流提取的次數為1-3次；優選為3次。
18.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的二氯甲烷的重量:體積:體積的比例(單位:g:ml:ml)為 1: (1-3): (1-3);更優選為 1:1:1。
19.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行萃取時，用所述的二氯甲烷進行萃取的次數為1-3次；優選為3次。
20.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的二氯甲烷的重量:體積比(單位:g:ml)為1: (1-3);更優選為1:1。
21.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟2)中，當將所述的乙醇提取物進行回流提取時，所述的回流提取的次數為1-3次，優選為3次。
22.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的濃縮為減壓濃縮。
23.根據權利要求13所述的方法，其中，在步驟I)和/或步驟2)中，所述的干燥為冷凍干燥或減壓干燥。
24.根據權利要求13所述的方法，其中，所述的方法包括:將膠陀螺用95%(v/v)的乙醇回流提取3次，濃縮提取液，減壓干燥，從而得到乙醇提取物；以及將所述的乙醇提取物先與水混合，再用二氯甲烷萃取3次，濃縮有機萃取液，冷凍干燥，從而得到所述的膠陀螺提取物。
25.根據權利要求1-12中任意一項所述的膠陀螺提取物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途。
【文檔編號】A61K36/06GK103893218SQ201210581324
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年12月27日 優先權日:2012年12月27日
【發明者】易崇勤, 鄒明琛, 郭欲曉, 李育巧 申請人:北大方正集團有限公司, 方正醫藥研究院有限公司, 北大國際醫院集團有限公司