專利名稱：海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及海洋小球藻多糖的ー種用途，尤其是ー種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成藥物中的應用。
背景技術：
目前，惡性腫瘤一癌癥已經成為人類死亡的第一位或第二位原因。腫瘤不論是良性還是惡性，本質上都表現為細胞的異常増殖，在惡性腫瘤中表現為對鄰近正常組織的侵犯及經血管、淋巴管和體腔轉移到身體其它部位，即腫瘤轉移。浸潤和轉移是惡性腫瘤的主要生物學特征，也是腫瘤患者死亡的主要原因。現有研究認為腫瘤的血管生成能力是腫瘤侵襲性的標志，與腫瘤血管新生有關的分子很多，包括血管內皮生長因子(VEGF)、成纖維
細胞生長因子(FGFs)、表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(TOGF)、轉化生長因子3 (TGF P )、白介素 8 (interleukin 8, IL8)等。如文獻I闡述了 Folkman提出的“腫瘤的生長和轉移都依賴于新生血管”的概念k又獻1. Folkman J. Angiogenesis in psoriasis: tnerapeutic implications. JInvest Dermatol 1972, 59 (I) :40.),并指出可以通過抑制腫瘤血管生成抑制腫瘤的生長和轉移。腫瘤的血管生成能力被認為是腫瘤侵襲性的標志，豐富的血管網不僅為腫瘤細胞提供充足的氧氣、營養成分和腫瘤生長因子等，而且也是腫瘤轉移的通道。文獻2闡述了腫瘤血管生成的分子機制(文獻1. Patrick A, Sylvie L,Fr ederic LL, Andreas B. Molecular mechanisms of tumor vascularization.Critical Reviews in Oncology/Hematology 2005; 54: 53 - 61.)。腫瘤細胞能夠產生大量的生長因子，包括VEGF、FGF、TGF等，這些生長因子能夠通過一系列的信號傳導促進血管內皮細胞的遷移、増殖和形成管狀結構，最終形成新的血管。海洋小球藻屬于單細胞綠藻，其含有豐富的蛋白質、維生素、礦物質、食物纖維、核酸及葉綠素等，是維持和促進人體健康所不可缺少的營養素，特別是含有令人注目的生物活性物質糖蛋白、多糖體以及高達13%的核酸等物質，具有增強人體免疫、抑制血糖上升，降低血清膽固醇含量，排除毒素，迅速修復機體的損傷等功能。其中的海洋小球藻多糖是以海洋小球藻為原料，通過酸提法、堿提法、水提法及酶提法的提取物，再經除蛋白、こ醇分級沉淀、柱層析等一系列步驟處理后而得到組分均一的多糖。海洋小球藻多糖經高效陰離子液相色譜對其溶液進行分析，表明組成多糖的單糖有D-巖藻糖、D-鼠李糖、D-2-氨基葡萄糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和幾種未知的單糖。但迄今為止，還沒有關于以海洋小球藻多糖制備抑制腫瘤血管生成藥物的相關報道。
發明內容
本發明首次發現小球藻多糖具有抑制血管內皮細胞的増殖和遷移作用，從而發明了小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應用。本發明的技術解決方案是ー種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應用。所述海洋小球藻多糖在制備抑制血管內皮細胞的増殖和遷移藥物中的應用。本發明的海洋小球藻多糖原料來源豐富，成本低，所提取的海洋小球藻多糖在患處體液中的有效作用濃度為12. 5^200 W g ml—1時，對血管內皮細胞的増殖和遷移有明顯抑制作用，因此，海洋小球藻多糖具有抑制腫瘤血管生成作用，可開發成抑制腫瘤轉移的藥物、保健食品及食品添加劑等。
圖1為不同濃度的海洋小球藻多糖對抑制腫瘤細胞培養液誘導的人臍靜脈內皮細胞遷移的作用示意圖。
具體實施例方式本發明海洋小球藻多糖的具體制備過程為取小球藻干燥藻粉，加入10倍量水，經閃式提取器破碎5 min后，采用索氏提取器提取2次，毎次2h，再經旋轉蒸發器進行濃縮至原體積的1/3，得到水提取液；在水提取液中加入1:1的鹽酸調溶液pH為4-5，4500r/min離心15min,再用5mol/ml的氫氧化鈉調節pH為8. 5-9,4500r/min離心15min,除去蛋白后，再經80%こ醇進行分級沉淀，得小球藻多糖，經苯酚-硫酸法測得糖的含量> 70%。實驗
參照又獻(Ant1-angiogenic activities of chitooligosaccharides, Haige Wu,Liang Yaoj Xuefang Baij Yuguang Duj Bmgcheng Lm, Carbonydrate Polymers, Volume73，Issue I, 4 July 2008, Pages 105-110)，人臍靜脈內皮細胞(ECV304)的培養條件為在完全培養基RPMI1640培養液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100 p g/ml鏈霉素；37°C，通入CO2體積含量為5%的空氣培養。用人結腸癌細胞、肝癌細胞、卵巣癌或乳腺癌細胞等腫瘤細胞培養液作為誘導因子；人結腸癌細胞、肝癌細胞、卵巣或乳腺癌細胞培養液的培養條件為在完全培養基RPMI1640培養液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100 |l g/ml鏈霉素；37°C，通入CO2體積含量為5%的空氣培養。實驗例1:
參照又獻(Ant1-angiogenic activities of chitooligosaccharides, Haige Wu,Ziang Yaoj Xuefang Baij Yuguang Duj Bingcheng Lin, Carbohydrate Polymers, M
(1),2008 :105-110),實驗分為陰性對照組、陽性對照組和處理組(具體加藥情況見表I)。陰性對照組人臍靜脈內皮細胞(ECV304)培養液200 Ii I ；
陽性對照組在180 Iil人臍靜脈內皮細胞(ECV304)培養液中加入20 Ii I上述腫瘤細胞培養液，使其濃度為10% ；
處理組1:在人臍靜脈內皮細胞(ECV304)培養液中加入所提取的海洋小球藻多糖，使其終濃度分別達到12.5きg ml—1、50 Ug ml'lOO pg 11^1 200 Ug ml—1，最終總體積為200 Ii I ；
處理組2 :在人臍靜脈內皮細胞(ECV304)培養液中加入20 p I上述腫瘤細胞培養液后，再分別加入海洋小球藻多糖溶液，使其終濃度分別為12. 5pg mr\50pg ml'lOOpg mr1及200 Pg mr1，最終總體積為200 p I。陰性對照組、陽性對照組、處理組I及處理組2均在5 % CO2的37で培養箱中繼續培養24 h后，加入5mg Hir1MTT試劑20 和200 u I DMS0，用酶標儀檢測各組的細胞增殖狀況，結果如表2。表I
權利要求
1.一種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應用， 其特征在于所述海洋小球藻多糖在制備抑制血管內皮細胞的增殖和遷移藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開一種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應用。海洋小球藻多糖原料來源豐富，成本低，所提取的海洋小球藻多糖在患處體液中的有效作用濃度為12.5~200g·ml-1時，對血管內皮細胞的增殖和遷移有明顯抑制作用，因此，海洋小球藻多糖具有抑制腫瘤血管生成作用，可開發成抑制腫瘤轉移的藥物、保健食品及食品添加劑等。
文檔編號A61P35/04GK103006684SQ20121058071
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月28日 優先權日2012年12月28日
發明者譚成玉, 李偉, 孔亮, 趙小霞, 孟繁桐 申請人:大連海洋大學, 譚成玉