專利名稱：眼內(nèi)灌注液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種眼內(nèi)灌注液及其制備方法，尤其涉及一種氫氣飽和眼內(nèi)灌注液及其制備方法。
背景技術(shù)：
玻璃體切割術(shù)，是眼科常規(guī)手術(shù)之一，用于視網(wǎng)膜脫離、玻璃體積血等多種眼部疾病的治療。在手術(shù)過程中，為平衡眼內(nèi)壓，眼內(nèi)灌注液的使用必不可少。常規(guī)眼內(nèi)灌注液為眼科平衡鹽溶液，該溶液在制備和使用過程中與空氣飽和，含有較高的氧分壓(21. 2kPa)，在手術(shù)過程中，隨著玻璃體組織的去除，其對于視網(wǎng)膜血管氧彌散的阻隔作用消除，同時術(shù)中使用含較高氧分壓的眼內(nèi)灌注液，從而使晶狀體暴露于高氧分壓環(huán)境中，加速晶狀體的 氧化損傷，誘導(dǎo)術(shù)后白內(nèi)障的發(fā)生。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決背景技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種用于玻璃體切割手術(shù)并能有效防止玻璃體切割術(shù)后白內(nèi)障發(fā)生的眼內(nèi)灌注液及其制備方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是本發(fā)明提供了一種眼內(nèi)灌注液，包括醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液，其特殊之處在于所述醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液是氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。一種用于實(shí)現(xiàn)上述的眼內(nèi)灌注液的制備方法，其特殊之處在于所述方法包括以下步驟I)取袋裝的醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液；2)將袋裝平衡鹽溶液中的空氣用無菌針管從灌注液軟袋加藥口處吸出；3)通過無菌針管所在針眼處一次性緩慢通入高純度氫氣直至該灌注液軟袋呈完全膨脹、無法再通入多余氣體狀態(tài)為止；4)無菌密封灌注液軟袋加藥口；5)將步驟3)所得到的液體置于O. 5-0. 6Mpa的高壓環(huán)境中持續(xù)加壓，得到氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。上述步驟3)中高純度氫氣是純度不低于99. 99%的氫氣。上述步驟4)中加壓的時間不低于4小時。上述步驟4)之后還包括6)將步驟5)所得到的氫氣飽和眼內(nèi)灌注液置于4°C避光保存。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明提供了一種眼內(nèi)灌注液及其制備方法，即將傳統(tǒng)的眼科平衡鹽溶液中與空氣飽和替換為與氫氣飽和，氫氣是一種對組織細(xì)胞無毒的氣體，可自由彌散進(jìn)入細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞膜的氫氣與細(xì)胞內(nèi)的有害物質(zhì)羥自由基(0H_)——一種毒性較強(qiáng)的活性氧簇，發(fā)生中和反應(yīng)，直接生成H2O,從而減少該物質(zhì)對于組織細(xì)胞的氧化損傷作用。在玻璃體切割術(shù)中，無論是玻璃體組織在術(shù)中的切除，還是常氧分壓眼內(nèi)灌注液的使用，均使得晶狀體暴露于較高的氧分壓環(huán)境，從而使晶狀體上皮細(xì)胞中活性氧簇含量增加，細(xì)胞發(fā)生氧化損傷，誘發(fā)白內(nèi)障的形成。本發(fā)明中使用高壓暴露的方法，增加氫氣在溶液內(nèi)的溶解度，形成氫氣飽和溶液，大大增加了灌注液內(nèi)的氫氣含量。氫氣隨著灌注液的使用被帶入晶狀體周圍，直接彌散進(jìn)入晶狀體上皮細(xì)胞，同細(xì)胞內(nèi)有害羥自由基發(fā)生反應(yīng)，減輕細(xì)胞氧化損傷，可有效防止玻璃體切割術(shù)后白內(nèi)障的發(fā)生。
圖1是本發(fā)明所涉及的眼內(nèi)灌注液防止玻璃體切割術(shù)后白內(nèi)障發(fā)生機(jī)制示意圖；圖2是氫氣飽和生理鹽水腹腔注射干預(yù)小鼠硒性白內(nèi)障實(shí)驗(yàn)照片；
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1灌注液的制備 本發(fā)明灌注液的制備方法將袋裝平衡鹽溶液中的空氣用針管吸出，通入高純度氫氣(99. 99%)，反復(fù)多次，將液體中飽和空氣用氫氣置換。之后將該液體至于O. 5-0. 6MPa(5-6個大氣壓)的高壓環(huán)境下，持續(xù)加壓4h后和即可獲得氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。該灌注液于4 °C避光保存，室溫下使用。本發(fā)明中，眼科平衡鹽溶液為目前常用的眼科平衡鹽溶液，該灌注液每Iml含如下含量的組分
CaCl2 ■ 2H2O0.48mg
MgCb 1 6H200.3Omg
CH3COONa ■ 3I I2O 3.90mg Cf,H507Na.3 · 2H2O 1.7Omg NaCl6.40mg
KCi0.75mg溶劑為注射用水實(shí)施例2氫氣飽和生理鹽水腹腔注射干預(yù)小鼠硒性白內(nèi)障實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)對象健康清潔級12日齡SD大鼠幼鼠30只，體重15_20g，雌雄兼半。二、實(shí)驗(yàn)試劑氫氣飽和生理鹽水(自制)，亞硒酸鈉(天津化工廠)；S0D測試盒、CAT測試盒、GSH測試盒(南京建成生物工程研究所)。三、實(shí)驗(yàn)儀器前節(jié)分析儀(德國Oculus公司),手術(shù)顯微鏡(日本Olympus公司),分光光度計(美國Backman公司)四、實(shí)驗(yàn)方法
1、模型建立30只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組和氫水治療組，每組10只。硒性白內(nèi)障大鼠模型的制作方法為12日齡SD大鼠幼鼠頸背部皮下注射2mmol/L亞硒酸鈉生理鹽水(20ymol/kg)，隔日I次，連續(xù)5天。正常對照組造模時腹腔注射生理鹽水；模型對照組在誘發(fā)硒性白內(nèi)障模型的同時，每日腹腔注射生理鹽水(5ml/kg)，連續(xù)5天；氫水治療組在誘發(fā)硒性白內(nèi)障的同時，每日腹腔注射氫氣飽和生理鹽水(5ml/kg)，連續(xù)5天。2、晶狀體混濁度觀察分別于造模成功后第1、3、5、7天觀察各組動物晶狀體的混濁程度。在各時間點(diǎn)各組大鼠均采用復(fù)方托吡卡胺滴眼液進(jìn)行雙眼散瞳，裂隙燈顯微鏡下觀察晶狀體混濁情況。3、生化測定法測定晶狀體中SOD、CAT活性以及GSH含量在成功造模后第7天，頸椎脫白法處死各組大鼠，摘除眼球，用生理鹽水漂洗后， 在顯微鏡下從后路剖開眼球，除去眼球壁及玻璃體，取出晶狀體，稱重后加入PBS，冰水浴條件下勻漿，制備組織勻漿，4° C條件下1000r/min離心lOmin，去上清液用生化測定法采用各試劑盒檢測晶狀體中SOD、CAT活性以及GSH含量。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果晶狀體混濁程度正常對照組大鼠在整個實(shí)驗(yàn)過程中晶狀體始終保持透明，模型對照組晶狀體均完全混濁，氫水治療組45%晶狀體完全混濁，55%晶狀體核發(fā)生混濁。同模型對照組相比，氫水治療組晶狀體混濁的發(fā)生發(fā)展相對延緩，混濁程度明顯低于模型對照組(圖2)，其中(a)氫水治療組晶狀體在造模成功后出現(xiàn)輕微程度的混濁；(b)模型對照組晶狀體在造模成功后完全混濁；(c)正常對照組晶狀體透明。 晶狀體SOD、CAT活性及GSH含量檢測模型對照組、氫水治療組與正常對照組相比，晶狀體中S0D、CAT活性以及GSH含量均有所下降，其中模型對照組的酶活性及GSH含量下降同正常對照組相比，其下降具有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.01);而氫水治療組各數(shù)值同正常對照組相比，其下降幅度不具有統(tǒng)計學(xué)意義；同模型對照組相比，氫水治療組晶狀體內(nèi)SOD、CAT活性以及GSH含量明顯增高，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0. 01)(表I)。從實(shí)施例2中，利用氫氣飽和生理鹽水腹腔注射干預(yù)硒性白內(nèi)障模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，氫水能夠較好的保護(hù)晶狀體內(nèi)重要的抗氧化酶SOD和CAT的活性并且維持抗氧化物GSH的含量，從而防止晶狀體發(fā)生氧化損傷，延緩白內(nèi)障的發(fā)生。本發(fā)明在此基礎(chǔ)上，更進(jìn)一步的將氫飽和技術(shù)運(yùn)用于眼部灌注液的制備過程中，使得原本含有較高氧含量的普通眼部灌注液成為含有高濃度氫分子的灌注液，該灌注液既保持了原有眼部灌注液的物理特性，在手術(shù)中起到灌注、平衡眼內(nèi)壓的作用，對眼內(nèi)組織無毒副作用，在內(nèi)眼手術(shù)中，該灌注液內(nèi)的氫離子可自由彌散進(jìn)入細(xì)胞膜，同細(xì)胞內(nèi)有毒活性氧簇一羥自由基(OHO發(fā)生中和反應(yīng)，直接生成H2O,從而減少該物質(zhì)對于組織細(xì)胞的氧化損傷作用，同時可以保護(hù)細(xì)胞內(nèi)重要抗氧化酶的活性并抗氧化物的含量，通過上述作用，有效防止術(shù)后白內(nèi)障的發(fā)生。表I是氫氣飽和生理鹽水干預(yù)小鼠硒性白內(nèi)障晶狀體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性，還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測結(jié)果。
表I各實(shí)驗(yàn)組大鼠晶狀體勻漿中SOD活性、CAT活性、GSH含量比較(i士S )
權(quán)利要求
1.一種眼內(nèi)灌注液，包括醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液，其特征在于所述醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液是氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。
2.一種用于實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1所述的眼內(nèi)灌注液的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟1)取袋裝的醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液；2)將袋裝平衡鹽溶液中的空氣用無菌針管從灌注液軟袋加藥口處吸出；3)通過無菌針管所在針眼處一次性緩慢通入高純度氫氣直至該灌注液軟袋呈完全膨脹、無法再通入多余氣體狀態(tài)為止；4)無菌密封灌注液軟袋加藥口；5)將步驟3)所得到的液體置于O.5-0. 6Mpa的高壓環(huán)境中持續(xù)加壓，得到氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟3)中高純度氫氣是純度不低于 99. 99%的氫氣。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟4)中加壓的時間不低于4小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于所述步驟4)之后還包括6)將步驟5)所得到的氫氣飽和眼內(nèi)灌注液置于4°C避光保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種眼內(nèi)灌注液及其制備方法，該眼內(nèi)灌注液包括醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液，該醫(yī)學(xué)上常用的眼科平衡鹽溶液是氫氣飽和眼內(nèi)灌注液。本發(fā)明提供了一種用于玻璃體切割手術(shù)并能有效防止玻璃體切割術(shù)后白內(nèi)障發(fā)生的眼內(nèi)灌注液及其制備方法。
文檔編號A61P41/00GK103006695SQ20121054584
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者嚴(yán)宏, 馬楠, 楊春瀟 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)