一種龍膽苦苷原料的制備方法
【專利摘要】本發明屬于醫藥【技術領域】，本發明公開了一種龍膽苦苷原料的制備方法，該方法采用秦艽水提取后，大孔樹脂純化，硅膠柱層析，靜置析晶，得到龍膽苦苷原料。該方法得到的龍膽苦苷原料中馬錢酸的含量小于0.5％，該方法得到的龍膽苦苷原料具有更好的安全性。
【專利說明】一種龍膽苦苷原料的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥【技術領域】，具體涉及一種龍膽苦苷原料的制備方法。
【背景技術】
[0002]龍膽苦苷從秦艽等藥材提取精制而成中藥有效成分，國內外有關龍膽苦苷藥效學方面研究較多:1、龍膽苦苷對化學和免疫致小鼠肝損傷的抑制作用，龍膽苦苷對CCl4和脂多糖/芽孢桿菌致小鼠鼠肝炎的影響。小鼠每天一次腹腔注射龍膽苦苷(30~60mg/Kg.d)，能抑制口服CCl4及靜脈注射芽孢桿菌引起的轉氨酶的升高。2、龍膽苦苷對大鼠肝細胞實驗性保護作用的病理觀察，龍膽苦苷在濃度為1.4X KT1~1.4X10_2mg/ml時，能抗0:14致肝損傷，即保肝作用，并呈良好的量效關系。3、增加大鼠膽汁分泌，促進膽囊收縮。4龍膽苦苷對化學和免疫性誘導的肝損傷的抑制作用，采用兩種藥理模型，即
誘導的肝炎。在造模型之前，連續5天給予小鼠龍膽苦苷(30~60mg/kg.d)，明顯抑制出CCl4和誘導的血清中轉氨酶的升高。在另一組實驗中，小鼠在灌注BCG7天給予LPS，血清中谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活力增強，在LPS給藥前，腹腔注射龍膽苦苷(60mg/kg.d)連續5天，血清中谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶水平在4~8h期間明顯降低，給予龍膽苦苷后，明顯抑制血清中TNF的產生，表明龍膽苦苷通過抑制TNF，而抑制肝炎。5龍膽苦苷保肝作用，動物試驗研究表明龍膽苦苷能明顯促進豚鼠肝組織的修復，對豚鼠同種免疫性肝損傷具有明顯的保護作用。龍膽苦苷給藥后，膽紅素分泌量顯著增高，表明具有明顯利膽作用。龍膽苦苷能明顯降低模型小鼠的ALT、AST，且呈良好的量效關系，還能增加肝組織GSH-Px的活力；大鼠口服龍膽苦苷后龍膽苦苷能增加膽汁中總膽紅素、游離膽紅素的濃度。
[0003]總之，秦艽藥材在古代都作為治療黃疸的要藥。主要成分是龍膽苦苷。現代藥理學研究表明它具有保肝利膽抗炎的作用，幾乎無毒，有著扎實的實驗研究。
【發明內容】
[0004]基于上述原因， 申請人:通過科學的試驗，研究確定新的龍膽苦苷原料的制備方法，該方法采用水提取后，大孔樹脂純化，硅膠柱層析，靜置析晶，得到龍膽苦苷原料，該方法得到的龍膽苦苷原料中馬錢酸的含量小于0.5%，該方法得到的龍膽苦苷原料具有更好的安全性。
[0005]本發明所述的馬錢酸為馬錢苷酸、落干酸。
[0006]本發明通過下述方案實現的。
[0007]—種龍膽苦苷原料的制備方法，該方法將秦艽或龍膽草水提取后，大孔樹脂純化，硅膠柱層析，得到龍膽苦苷原料。
[0008]上述所述秦艽提取方法為:取秦艽，加入藥材重量8-10倍量的水，提取3次，每次20-40分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.05-1.10，得到濃縮液。
[0009]上述所述的大孔樹脂純化方法為:取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用2-6倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積5-8倍、濃度為25% -35%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.20-0.25倍，得到浸膏。
[0010]上述所述的硅膠柱層析的方法為:取浸膏，加入浸膏重量0.6-0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 1-3: 1-3的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3-1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。
[0011]上述所述的硅膠柱層析的方法為:取浸膏，加入浸膏重量0.6-0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 2: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3-1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。
[0012]上述所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法得到龍膽苦苷原料制備的藥物制劑。
[0013]上述所述的藥物制劑，其中藥物制劑包括口服制劑。
[0014]上述所述的藥物制劑，其中藥物制劑包括注射制劑。
[0015]本發明發明目的是為了得到一種可用于藥用的龍膽苦苷原料。
[0016]本發明發明目的為了得到一種含有馬錢酸的含量低于0.5%的龍膽苦苷原料。
[0017]本發明制備方法得到的龍膽苦苷原料，具有更好的安全性。
[0018]制備實施例
[0019]實施例1
[0020]取秦艽，加入藥材重量8倍量的水，提取3次，每次40分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.05，得到濃縮液。
[0021]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用2倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積5倍、濃度為35%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.25倍，
得到浸膏。
[0022]取浸膏，加入浸膏重量0.6倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1:1:1的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量99.1 %，馬錢酸含量0.2%。
[0023]實施例2
[0024]取秦艽，加入藥材重量9倍量的水，提取3次，每次30分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.08，得到濃縮液。 [0025]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用4倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積6倍、濃度為30%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.22倍，
得到浸膏。
[0026]取浸膏，加入浸膏重量0.65倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 2: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量99.5%,馬錢酸含量未檢出。
[0027]實施例3
[0028]取秦艽，加入藥材重量10倍量的水，提取3次，每次40分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.10，得到濃縮液。[0029]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用6倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積8倍、濃度為35 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.25倍，
得到浸膏。
[0030]取浸膏，加入浸膏重量0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 3: 3的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量99.0 %，馬錢酸含量0.2%。
[0031]實施例4
[0032]取秦艽，加入藥材重量8倍量的水，提取3次，每次25分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.08，得到濃縮液。
[0033]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用5倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積8倍、濃度為25 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.20倍，
得到浸膏。
[0034]取浸膏，加入浸膏重量0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1:1: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量99.3 %，馬錢酸含量0.1%。
[0035]實施例5
[0036]取秦艽，加入藥材·重量10倍量的水，提取3次，每次35分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.09，得到濃縮液。
[0037]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用5倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積7倍、濃度為35%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.20倍，
得到浸膏。
[0038]取浸膏，加入浸膏重量0.6倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 2: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量99.2 %，馬錢酸含量0.1%。
[0039]實施例6
[0040]取秦艽，加入藥材重量10倍量的水，提取3次，每次25分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C下相對密度為1.05，得到濃縮液。
[0041]取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用6倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積5倍、濃度為35%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.22倍，
得到浸膏。
[0042]取浸膏，加入浸膏重量0.65倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 2: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。檢測原料中龍膽苦苷含量為99.2 %，馬錢酸含量0.1%。
[0043]上述任一實施例得到龍膽苦苷原料制備的藥物制劑。所述的藥物制劑包括口服制劑。所述藥物制劑包括注射制劑。[0044]實施例1 的 LD50 為 2814mg/kg。
[0045]龍膽苦苷原料中龍膽苦苷含量為99.0%，馬錢酸含量0.5%, LD50為2103mg/kg，該原料LD50低于2500mg/kg。
[0046]上述原料按照下述檢測分析方法進行檢測
[0047]1、龍膽苦苷檢測方法[0048]照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。
[0049]色譜條件與系統適用性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(3: 7)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數按龍膽苦苷峰計算，應不低于3000。
[0050]對照品溶液的制備精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加流動相制成每Iml含0.5mg的溶液，即得。
[0051]供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加流動相制成每Iml含0.5mg的溶液，即得。
[0052]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0053]2、馬錢酸檢測方法
[0054]照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。
[0055]色譜條件與系統適用性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%乙酸水(25: 75)為流動相；檢測波長為238nm。
[0056]對照品溶液的制備精密稱取馬錢酸對照品適量，加流動相制成每Iml含0.5mg的溶液，即得。
[0057]供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加流動相制成每Iml含0.5mg的溶液，即得。
[0058]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0059]所述實施例包括但不限于上述。
【權利要求】
1.一種龍膽苦苷原料的制備方法，其特征在于將秦艽水提取后，大孔樹脂純化，硅膠柱層析，靜置析晶，得到龍膽苦苷原料。
2.根據權利要求1所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法，其中秦艽提取方法為:取秦艽，加入藥材重量8-10倍量的水，提取3次，每次20-40分鐘，合并提取液，提取液濃縮，濃縮至60°C相對密度為1.05-1.10，得到濃縮液。
3.根據權利要求1所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法，其中大孔樹脂純化方法為:取濃縮液，過濾，濾液上DlOl型大孔樹脂，用2-6倍柱體積的水洗脫，洗脫液棄去，再用柱體積5-8倍、濃度為25% -35%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，濃縮至藥材量0.20-0.25倍，得到浸膏。
4.根據權利要求1所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法，其中硅膠柱層析的方法為:取浸膏，加入浸膏重量0.6-0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 1-3: 1-3的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3-1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。
5.根據權利要求1所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法，其中硅膠柱層析的方法為:取浸膏，加入浸膏重量0.6-0.7倍的硅膠，混合均勻，上硅膠柱，用體積比為1: 2: 2的乙酸乙酯、乙醇和水的流動相洗脫，洗脫至薄層檢測無龍膽苦苷，收集洗脫液，濃縮至洗脫液體積1/3-1/2，靜置析晶，過濾，濾餅用乙醇洗滌，干燥，得到龍膽苦苷原料。
6.根據權利要求1-5任一項所述的一種龍膽苦苷原料的制備方法得到龍膽苦苷原料制備的藥物制劑。
7.根據權利要求6所述的藥物制劑，其中藥物制劑包括口服制劑。·
8.根據權利要求6所述的藥物制劑，其中藥物制劑包括注射制劑。
【文檔編號】A61P1/16GK103848875SQ201210499853
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年11月30日 優先權日:2012年11月30日
【發明者】朱吉滿, 王禹, 夏瑞雪, 閻文君 申請人:哈爾濱譽衡藥業股份有限公司