蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途
【專利摘要】本發明涉及醫藥領域，公開了蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途。
【專利說明】蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥領域，特別涉及蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]白血病是一類造血干細胞異常的惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發育的不同階段，在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。該病居年輕人惡性疾病中的首位，病因至今仍不完全清楚，病毒可能是主要的致病因子，但還有許多因素如放射、化學毒物或藥物、遺傳素質等可能是致病的輔因子。根據增生細胞類型，可分為粒細胞性、淋巴細胞性和單核細胞性三類。
[0003]近年研究表明，抗瘧疾藥物青蒿素及其衍生物具有顯著的抗腫瘤作用，其藥理學作用研究受到廣泛關注。蒿甲醚為青蒿素的主要衍生物之一，抗瘧疾作用優于青蒿素。近年來越來越多的實驗證明:青蒿素類藥物有更廣泛的藥理作用，尤其重要的是它不僅可以選擇性抑制和/或殺滅多種腫瘤細胞，而且不良反應極少，甚至不產生耐藥性。青蒿素類藥物的抗腫瘤作用已經得到多方面的證實，其主要的作用機制有以下幾個方面:
[0004]1、鐵離子介導的細胞損傷:惡性腫瘤細胞中Fe含量要比正常細胞大得多，青蒿素類藥物可以通過鐵離子介導形成內過氧化橋，并產生活性氧離子(ROS)和以碳為核心的自由基，后者使細胞發生巨大的分子損傷和細胞死亡；
[0005]2、細胞周期阻滯:青蒿琥酯可以使Kaposi’s肉瘤細胞周期時間明顯縮短，二氫青蒿素可以使人乳腺癌MCF-7細胞阻滯在G0+G1期；
[0006]3、誘導細胞凋亡: 青蒿琥酯可以誘導Kaposi’s肉瘤細胞發生凋亡，并呈現出劑量依賴性，而并不能誘導正常細胞發生凋亡。青蒿素可以誘導人紅白血病K562細胞跨膜電位下降而發生凋亡；
[0007]4、抗血管生成作用:青蒿素類藥物可以通過抑制VEGF和KDR / flk_l的表達從而阻止腫瘤新生血管的形成；
[0008]5、青蒿素類藥物可以調節腫瘤相關基因的表達，從而實現抗腫瘤的活性；
[0009]6、其它，如青蒿琥酯還具有對抗多藥耐藥的能力；青蒿素可以抑制星形細胞瘤T67細胞中的核因子NF-K B的合成。不僅如此，蒿甲醚可以引起嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞的線粒體損傷，線粒體腫脹、嵴斷裂、減少、消失，并抑制線粒體呼吸鏈復合酶I和IV的活性，從而導致細胞死亡。
【發明內容】
[0010]本發明的目的是提供蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途。
[0011 ] 作為優選，所述藥物為蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑。
[0012]本發明中所述蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑由蒿甲醚和水溶性環糊精衍生物組成，蒿甲醚和水溶性環糊精衍生物重量比為1:30~70。所述的水溶性環糊精衍生物包括各種取代度的α環糊精衍生物、β環糊精衍生物、Y環糊精衍生物等中的一種或幾種。其中所述的-β環糊精衍生物包括甲基-β -環糊精、羥丙基-β -環糊精、硫醚基-β -環糊精，磺丁基醚-β -環糊精中的一種或幾種聯用。
[0013]制備方法如下:采用0°C~10°C的低溫粉碎機，對蒿甲醚進行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C _90°C的水溶性環糊精衍生物水溶液中，攪拌，使溶解，繼而按注射液常規工藝處理或再凍干后即得成品。
[0014]本發明蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑的制備采用低溫((Tc~10°C )微粉化粉碎技術，避免常規粉碎技術由于局部溫度過高，導致蒿甲醚降解。把蒿甲醚分成不同的粒徑組進行試驗，結果顯示相同溫度下，隨著粒徑的增大，青蒿素類衍生物的溶解速度變慢。粒徑大于315gm以上時，配藥溫度為70°C~90°C。所述的蒿甲醚微粉藥物粒徑在0.5 μ m_0 μ m范圍內，最佳的粒徑為1.0 μ m~10 μ m。配藥時溫度的增加對蒿甲醚溶解有利，最優的配藥溫度為5(TC~60°C，可以減少藥物的分解、氧化等。
[0015]本申請發明人通過大量實驗證實，蒿甲醚粉針劑高劑量100mg/kg每周給藥5次，連續給藥3周共15次，對K562裸鼠移植瘤模型有及其顯著的生長抑制作用，給藥3周后抑制率可以達到68%~80% (Ρ〈0.01);中劑量60mg/kg連續給藥3周，分別給藥15和21次，抑制率可達到31%和56% (P>0.05和P〈0.01);低劑量40mg/kg連續給藥3周，給藥15次未見明顯抑制作用，給藥21次，抑制率55% (P〈0.01)。且蒿甲醚的劑量為100mg/kg、60mg/kg和40mg/kg三個劑量,每周給藥5天,休息兩天,連續給藥3周,共給藥15次,未見動物因藥物累積毒性發生死亡。
[0016]以上結果表明，蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑在100mg/kg和60mg/kg兩個劑量下對K562裸鼠移植瘤模型有明顯的生長抑制作用，抑制率可以達到60-80% (Ρ〈0.01)。表明蒿甲醚對白血病有明顯的治療作用，抑制率接近環磷酰胺陽性對照組，是一種很有潛力的新的抗腫瘤藥物。·【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1為預試驗給藥后第4周各組荷瘤動物腫瘤大小；
[0018]圖2為預試驗給藥后第4周各組動物腫瘤大小；
[0019]圖3為正式試驗一給藥后第4周各組荷瘤動物腫瘤大小；
[0020]圖4為正式試驗一給藥后第4周各組動物腫瘤大小；
[0021]圖5為正式試驗二給藥后第4周各組荷瘤動物腫瘤大小；
[0022]圖6為正式試驗二給藥后第4周各組動物腫瘤大小。
【具體實施方式】
[0023]本發明公開了蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0024]為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。
[0025]實施例:蒿甲醚對白血病的治療作用
[0026]發明人觀察了不同劑量蒿甲醚對K562裸鼠移植瘤的治療作用。結果表明蒿甲醚100mg/kg與60mg/kg劑量給藥15次,可以顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤生長；40mg/kg劑量給藥21次，也對腫瘤生長產生明顯的抑制作用。試驗結果表明蒿甲醚可以抑制人白血病K562裸鼠移植瘤的生長，具有明顯的抗腫瘤作用。
[0027]1.研究目的:在裸鼠體內建立K562裸鼠移植瘤模型，觀察蒿甲醚在體內對裸鼠移植瘤模型的生長抑制作用。
[0028]2.試驗材料:
[0029]2.1受試藥物:蒿甲醚粉針劑，批號:20090903。制備方法:采用(TC~10°C的低溫粉碎機，對蒿甲醚進行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C -90°C的水溶性環糊精衍生物水溶液中，攪拌，使溶解，繼而按注射液常規工藝處理或再凍干后即得成品；其中蒿甲醚和水溶性環糊精衍生物重量比為1: 30~70。
[0030]2.2 對照品:
[0031 ] 2.2.1陰性對照:以20%的賦形劑水溶液作為陰性對照。
[0032]2.2.2陽性對照:環磷酰胺(上海聯華制藥廠)，批號:10022321。
[0033]2.3溶媒:20%的賦形劑水溶液。
[0034]2.4K562細胞:原代K562細胞來源于紅白血病患者骨髓，血液學研究所從國外引進，由病理細胞庫保存、傳代；RPMI1640培養液(含10%胎牛血清)培養。
[0035]2.5試驗設備:
[0036]2.5.1細胞培養常規設備；
[0037]2.5.2銫源照射裝置:加拿大N0RD10N公司；
[0038]2.5.3111級(SPF級)實驗動物室。
[0039]2.6實驗動物:Balb/c裸鼠，年齡4飛周齡，體重:17~20g，性別:雌雄各半。中國醫學科學院實驗動物研究所，實驗動物質量合格證號=SCXK (京)2005-0013。
[0040]2.7環境條件及飼養管理:裸鼠實驗在醫科院血研所實驗動物室SPF條件下進行。實驗動物設施許可證號:SYXK (津)2009-0002。飼料:鼠用飼料經高壓滅菌，由北京維通利華科技有限公司制造，執行標準:GB14924.2-2001 ;批號:20090110。飲水:滅菌反滲透純化水。墊料:杉木和柏木混合小刨花過篩除粉塵，經高壓滅菌`后使用。飼養:雌雄分籠飼養，每籠5只，據動物耗食情況投放飼料，自由飲水。籠具清潔后用高壓滅菌進行消毒，每周2次更換籠具和墊料；實驗室每周用過氧乙酸和新潔爾滅交替消毒2次。
[0041]3.試驗方法
[0042]3.1 預試驗:
[0043]3.1.1原代K562細胞皮下接種經3.0Gy全身照射后的Balb/c裸鼠，接種后4周左右，取生長的瘤塊再次移植給正常裸鼠，反復2~3代，建立高致瘤性的K562細胞株。
[0044]3.1.2裸鼠經3.0Gy全身照射后，皮下接種K562細胞。接種I周后，將肉眼可見腫瘤生長的裸鼠分為以下4組，每組6只裸鼠。每周給藥7次，連續給藥3周，共給藥21次。
[0045]模型對照組:腹腔注射20%的賦形劑溶液0.2ml/只。
[0046]高劑量組:腹腔注射蒿甲醚150mg/kg。[0047]中劑量組:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。
[0048]低劑量組:腹腔注射蒿甲醚50mg/kg。
[0049]3.2正式試驗一
[0050]裸鼠經3.0Gy全身照射后，皮下接種K562細胞。接種I周后，將肉眼可見腫瘤生長的裸鼠分為以下5組，每組6只裸鼠。每周給藥5次，連續給藥3周，共給藥15次。
[0051 ]模型對照組:腹腔注射20%的賦形劑溶液0.2ml/只。
[0052]陽性對照組:腹腔注射環磷酰胺10mg/kg。
[0053]高劑量組:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。
[0054]中劑量組:腹腔注射蒿甲醚60mg/kg。
[0055]低劑量組:腹腔注射蒿甲醚40mg/kg。
[0056]3.3正式試驗二
[0057]裸鼠經3.0Gy全身照射后，皮下接種K562細胞。接種I周后，將肉眼可見腫瘤生長的裸鼠分為以下5組，每組6只裸鼠。
[0058]模型對照組:腹腔注射20%的賦形劑溶液0.2ml/只。每周給藥7次，連續給藥3周，共給藥21次。
[0059]陽性對照組:腹腔注射環磷酰胺10mg/kg。每周給藥7次,連續給藥3周，共給藥21次。
[0060]高劑量組:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。每周給藥5次,連續給藥3周，共給藥15次。
[0061]中劑量組:腹腔注射蒿甲醚60mg/kg。每周給藥7次,連續給藥3周,共給藥21次。
[0062]低劑量組:腹腔注射蒿甲醚40mg/kg。每周給藥7次,連續給藥3周,共給藥21次。
[0063]4.試驗結果
[0064]4.1預實驗結果見表1-3及圖1-2
[0065]表1給藥后不同時 間各組動物腫瘤體積的動態觀察(單位:_3)
[0066]
【權利要求】
1.蒿甲醚在制備治療白血病的藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物為蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑。
3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑由蒿甲醚和水溶性環糊精衍生物組成，蒿甲醚和水溶性環糊精衍生物重量比為1:30~70。
4.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述的水溶性環糊精衍生物包括各種取代度的α環糊精衍生物、β環糊精衍生物、Y環糊精衍生物等中的一種或幾種。
5.根據權利要求4所述的用途，其特征在于，其中所述β環糊精衍生物包括甲基-β -環糊精、羥丙基-β -環糊精、硫醚基-β -環糊精，磺丁基醚-β -環糊精中的一種或幾種聯用。
6.根據權利要求3-5任一項所述的用途，其特征在于，所述蒿甲醚的注射液或凍干粉針劑的制備方法為:采用0°c~10°C的低溫粉碎機，對蒿甲醚進行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C -90°c的水溶性環糊精衍生物水溶液中，攪拌，使溶解，繼而按注射液常規工藝處理或再凍干后即得 成品。
【文檔編號】A61K31/357GK103845322SQ201210499332
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年11月29日 優先權日:2012年11月29日
【發明者】王敏, 趙鈞銘, 田征, 陳云建, 劉一丹, 楊兆祥, 楊旭娟, 朱澤 申請人:昆明制藥集團股份有限公司